本发明属于保健品和/或功能食品领域，具体涉及一种助孕组合物及其制备方法。
背景技术：
：由于女性因素而导致的不孕不育症称为女性不育症，女性不育症是一种发病率较高且较难治愈的病症。国内外目前研究资料表明：不孕不育症在育龄期夫妇中的发病率约为15％-20％，根据世界卫生组织统计：全球大约有600-8000万对夫妇患有不同程度的不育症，其中由女性因素导致的不育约占所有不育夫妇的50％。女性生殖能力随年龄的增大呈下降趋势，一年内怀孕的概率在20岁时可达到90％，而在40岁左右仅为36.4％。中国人口基数大，且近年来二孩政策的开放，有生育诉求的高龄夫妇越来越多，不育症的发病率近年来也呈上升趋势。女性不育的病因多种多样，最直接的表现为内分泌紊乱，卵巢功能早衰，卵细胞质量下降。cn103316238a公开了一种治疗宫寒不孕的中药，由以下重量份的药材组成：王不留行12份、肉桂12份、乌梅10份、川芎14份、小茴香10份、桂花6份、玫瑰花8份、猪殃殃10份、水莎草12份、百蕊草13份、看麦娘14份、益母草12份、牛西西12份、白芍12份，临床试验证明，本发明能够安全有效治疗宫寒不孕。cn106860717a公开了一种治疗不孕不育的药物，按照重量份的原料包括：小茴香3-8份、元胡5-10份、没药3-8份、当归5-10份、川芎5-10份、肉桂8-15份、五灵脂1-3份、益母草3-8份、香附3-8份、酸枣仁8-15份、茯神1-3份、党参1-3份、山茱萸5-10份、黄芩3-8份、荆芥1-5份、连翘8-15份，该发明对身体不适等亚健康原因导致的不孕不育有显效。现有技术中，改善和治疗女性不孕的组合物多集中在对宫寒、亚健康等问题的改善，而对卵细胞质量问题引起的不孕症的针对性较差，而目前对改善卵细胞质量治疗不孕的研究较少，cn107927790a公开了一种组合物，包括海藻糖和左旋肉碱，该发明虽然可以提高卵细胞质量，但该发明的功能单一，且治疗效果并不显著，无法有效提高女性的生育能力。技术实现要素：本发明提供了一种助孕组合物，该组合物安全可靠，无毒副作用，能有效调节女性内分泌紊乱，改善卵巢功能，提高卵细胞质量，提高女性生育能力。为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种助孕组合物，包括以下重量份的原料：黑豆2-6份，乌鸡蛋白粉5-13份，松花粉1-7份、左旋肉碱1-6份、生姜4-9份和当归2-8份。优选地，所述的助孕组合物，包括以下重量份的原料：黑豆3-6份，乌鸡蛋白粉6-13份，松花粉2-7份、左旋肉碱2-6份、生姜5-9份和当归4-8份。在一些优选的实施方案中，所述的助孕组合物，还包括以下重量份的原料：富锌富硒全蛋粉5-10份、枸杞1-5份、山药2-7份、莲子2-6份、桂圆3-8份、肉桂1-5份和红枣5-15份；优选地，所述的肉桂和富锌富硒全蛋粉的质量比为1:3。在一些优选的实施方案中，所述的助孕组合物，还包括以下重量份的原料：果蔬粉8-15份、益母草1-8份、海藻糖1-5份、葛根1-6份、艾叶2-8份和维生素0.001-0.005份；优选地，所述的海藻糖和艾叶的质量比为1:2。在一些优选的实施方案中，所述的助孕组合物，还包括以下重量份的原料：蜂蜜5-10份、菊粉3-8份、鱼胶原蛋白肽2-7份、玛咖1-5份和微量元素0.0001-0.0005份；优选地，所述菊粉与鱼胶原蛋白肽的质量比为1.5:1。优选地，所述的维生素为维生素c、维生素e、叶酸、维生素b1、维生素b2、维生素b6、维生素b12、烟酸和泛酸中的一种或多种。优选地，所述的微量元素为铁盐、铜盐和钼盐中的一种或多种。本发明还提供了一种助孕组合物的制备方法，包括以下步骤：(1)将除乌鸡蛋白粉、松花粉、富锌富硒全蛋粉、果蔬粉、蜂蜜、菊粉、鱼胶原蛋白肽、维生素和微量元素之外的所有原料，按照原料配方的用量混合后，冷冻干燥、粉碎成粉，得到混合物a；(2)将得到的混合物a用乙醇溶液提取，合并滤液后经过滤、减压浓缩得到浸膏b，所述的混合物a和乙醇的质量比为1:(4-7)；(3)将得到的浸膏b经过干燥、粉碎、过筛后得到混合物c；(4)将步骤(3)得到的混合物c与配方剩余的原料充分混合，得到所述助孕组合物。步骤(2)中所述的提取的条件为：在60-70℃下提取3次，每次提取时间为3小时，所述的乙醇溶液为体积分数为60-80％的乙醇水溶液。步骤(3)中所述的过筛为过80目筛。本发明所述的助孕组合物可以制备为粉剂、片剂、丸剂，也可以作为底方添加在其他产品中。本发明还提供了所述的助孕组合物在制备保健品和/或功能食品中的应用。本发明的有益效果为：(1)本发明提供的助孕组合物，无毒副作用，配方中的原料互相作用，组方科学合理，调补五脏，发挥整体调节的优势，具有调节内分泌紊乱，改善卵巢功能，提高卵细胞质量，提高女性生育能力的作用。(2)本发明提供的助孕组合物可以改善备孕期女性体质，具有滋阴补血、提高免疫力的作用，同时可以清除体内自由基的功效，改善皮肤弹性，预防孕期妊娠斑和妊娠纹的形成。具体实施方式为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面对本发明的技术方案做进一步详述。当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属
技术领域：
的普通技术人员通常理解的相同意义。如无特殊说明，本发明所采用的原料均为普通市售产品。基础实施例一种助孕组合物，包括以下重量份的原料：黑豆2-6份，乌鸡蛋白粉5-13份，松花粉1-7份、左旋肉碱1-6份、生姜4-9份和当归2-8份。优选地，所述的助孕组合物，包括以下重量份的原料：黑豆3-6份，乌鸡蛋白粉6-13份，松花粉2-7份、左旋肉碱2-6份、生姜5-9份和当归4-8份。在一些优选的实施方案中，所述的助孕组合物，还包括以下重量份的原料：富锌富硒全蛋粉5-10份、枸杞1-5份、山药2-7份、莲子2-6份、桂圆3-8份、肉桂1-5份和红枣5-15份；优选地，所述的肉桂和富锌富硒全蛋粉的质量比为1:3。在一些优选的实施方案中，所述的助孕组合物，还包括以下重量份的原料：果蔬粉8-15份、益母草1-8份、海藻糖1-5份、葛根1-6份、艾叶2-8份和维生素0.001-0.005份；优选地，所述的海藻糖和艾叶的质量比为1:2。在一些优选的实施方案中，所述的助孕组合物，还包括以下重量份的原料：蜂蜜5-10份、菊粉3-8份、鱼胶原蛋白肽2-7份、玛咖1-5份和微量元素0.0001-0.0005份；优选地，所述菊粉与鱼胶原蛋白肽的质量比为1.5:1。优选地，所述的维生素为维生素c、维生素e、叶酸、维生素b1、维生素b2、维生素b6、维生素b12、烟酸和泛酸中的一种或多种。优选地，所述的微量元素为铁盐、铜盐和钼盐中的一种或多种。本发明所述的助孕组合物可以制备为粉剂、片剂、丸剂，也可以作为底方添加在其他产品中。本发明还提供了所述的助孕组合物在制备保健品和/或功能食品中的应用。表1-4为本实施例具体的原料组分表，其中，表中的“-”表示该项内容不存在。本实施例采用的乌鸡蛋白粉中蛋白质含量为85％；富锌富硒全蛋粉的制备方法为：将富硒鸡蛋和富锌鸡蛋的蛋液和蛋壳，按照本领域常规技术手段制成水分含量低于4.0％的全蛋粉，其中，富硒鸡蛋的硒含量大于0.2mg/kg，富锌鸡蛋的锌含量大于0.822mg/kg，富锌鸡蛋和富硒鸡蛋的质量比为2:1；松花粉为市售的普通破壁松花粉；鱼胶原蛋白肽中蛋白质的含量为97.5％；果蔬粉为葡萄、苹果、柠檬、甜椒、西红柿和胡萝卜按照本领域的常规技术手段制备的粉剂，所述葡萄、苹果、柠檬、甜椒、西红柿和胡萝卜的质量比为0.5:1:0.2:1:1:2；菊粉的果聚糖含量为90％；维生素为维生素e；微量元素为葡萄糖酸亚铁。表1实施例1-5的原料组分(重量份)表表2实施例6-10的原料组分(重量份)表表3实施例11-15的原料组分(重量份)表表4实施例16-20的原料组分(重量份)表上述实施例1-20的助孕组合物的制备方法，包括以下步骤：(1))将除乌鸡蛋白粉、松花粉、富锌富硒全蛋粉、果蔬粉、蜂蜜、菊粉、鱼胶原蛋白肽、维生素和微量元素之外的所有原料，按照原料配方的用量混合后，冷冻干燥、粉碎成粉，得到混合物a；(2)将得到的混合物a用体积分数为66％的乙醇水溶液在65℃下提取提取3次，每次3小时，合并滤液后经过滤、减压浓缩得到浸膏b，所述的混合物a和乙醇的质量比为1:5；(3)将得到的浸膏b经过干燥、粉碎、过80目筛后得到混合物c；(4)将步骤(3)得到的混合物c与配方剩余的原料充分混合，粉碎，过80目筛，得到所述助孕组合物。对比例1基础配方同实施例4，与实施例4的不同之处为，配方中不含乌鸡蛋白粉；制备方法同实施例4。对比例2基础配方同实施例4，与实施例4的不同之处为，配方中不含松花粉；制备方法同实施例4。对比例3基础配方同实施例8，与实施例8的不同之处为，配方中不含富锌富硒全蛋粉；制备方法同实施例8。对比例4基础配方同实施例8，与实施例8的不同之处为，配方中不含肉桂；制备方法同实施例8。对比例5基础配方同实施例15，与实施例15的不同之处为，配方中不含海藻糖；制备方法同实施例15。对比例6基础配方同实施例15，与实施例15的不同之处为，配方中不含艾叶；制备方法同实施例15。对比例7基础配方同实施例19，与实施例19的不同之处为，配方中不含鱼胶原蛋白肽；制备方法同实施例19。实验例1对卵细胞的影响实验动物：出生后8周的雌性cd-1小鼠将小鼠随机分成8组，每组10只，分别为对照组、实施例1-5组和对比例1-2组。实施例1-5组分别给予本发明实施例1-5的组合物，对比例1-2组给予对比例1-2制备的组合物，按照20mg/kg的给药量，每日灌胃1次，对照组给予等量的蒸馏水，连续给药30天后，使用促超排药物促超排，将小鼠安乐死后收集卵细胞，评估卵细胞的质量和数量，并使用体外受精实验评估其形成囊胚的能力。实验结果：表5本发明对卵细胞的影响组别卵细胞退化率％囊胚率％对照组32.656.8实施例1组17.2*91.2*实施例2组17.4*90.5*实施例3组16.8*92.3*实施例4组14.8**96.8**实施例5组15.2**94.2**对比例1组20.775.6对比例2组19.980.2注：与对照组相比，*p＜0.05具有显著性差异；**p＜0.01具有极显著性差异。由表5可知，本发明的实施例1-5均能改善卵细胞的质量，同时发现，当组合物中乌鸡蛋白粉和松花粉的质量比为2:1时，可以显著改善卵细胞的质量。实施例2对卵巢早衰的影响实验动物：sd大鼠，体重200-280g，雌性。造模；造模前7天进行连续阴道涂片，以观察大鼠的动情周期，选择动情周期正常的120只sd大鼠，按体重随机将大鼠分为对照组(20只)和模型组(100只)。对照组腹腔注射生理盐水，共2次，间隔11天；造模组腹腔注射环磷酰胺溶液，共2次，90mg/kg(第1次)，50mg/kg(第2次)，间隔11天；每日进行阴道涂片，观察动情周期变化；当模型组雌鼠动情周期紊乱、动情间期延长、无动情周期或动情期，表示大鼠卵巢早衰造模成功，激素水平改变作为辅助参考指标。实验分组：空白对照组、模型对照组、实施例6-10组及对比例3-4组。试验方法：选取80只造模成功的大鼠，按体重随机分为8组，每组10只，实施例6-10组分别给予本发明实施例6-10的组合物，对比例3-4组给予对比例3-4制备的组合物，每组大鼠的给药量为0.5g/kg，模型对照组和空白对照组给予等体积的生理盐水，每日灌胃一次，连续给药30天，于末次给药次日，检测各试验组大鼠血清卵泡刺激素(fsh)和黄体生成素(lh)的含量。试验结果：表6检测各组试验大鼠血清fsh和lh的含量组别lh(miu/ml)fsh(miu/ml)空白对照组2.87±0.343.10±0.55模型对照组3.15±0.50#3.40±0.79#实施例6组2.65±0.23*2.73±0.47*实施例7组2.74±0.38*2.83±0.80*实施例8组2.15±0.26**2.45±0.62**实施例9组2.69±0.43*2.75±0.67*实施例10组2.29±0.32**2.56±0.58**对比例3组2.95±0.363.16±0.71对比例4组2.90±0.343.20±0.58*注：与空白对照组相比，#p＜0.05，具有显著性差异；与模型对照组相比，*p＜0.05，具有显著性差异；**p＜0.01，具有极显著性差异。由表6可知，与空白对照组相比，模型对照组大鼠血清lh和fsh具有显著性差异，表明模型对照组造模成功。同时从表6中可以发现，本发明可以有效降低大鼠血清lh和fsh，表明本发明可以有效改善并治疗卵巢早衰，恢复卵巢功能。当组合物中富锌富硒全蛋粉的质量比为3:1时，效果较佳。实验例3体内总抗氧化作用实验动物：昆明种小鼠，雌鼠，体重18-22g。实验分组：对照组、实施例11-20组及对比例5-8组。实验方法：将小鼠按体重随机分为15组，每组10只，实施例11-20组分别给予本发明实施例11-20的组合物，对比例5-8组给予对比例5-8制备的组合物，每组小鼠的给药量为0.1g/kg，对照组给予等体积的生理盐水，每日灌胃一次，连续灌胃30天后，每组小鼠拔眼球取血并脱臼处死，3500r/min离心15分钟后分离血清，置于-20℃保存代用，测定血清中的总抗氧化能力(t-aoc)。实验结果：表7总抗氧化作用(t-aoc)实验数据注：与对照组相比，*p＜0.05具有显著性差异；**p＜0.01具有极显著性差异。从表7的实验结果可以看出，对照组的小鼠的t-aoc为13.5u/ml，而喂食了本发明提供的助孕组合物的小鼠的t-aoc为21.2-29.9u/ml，因此，本发明提供的助孕组合物具有抗氧化的作用，可以清除体内自由基的功效，改善皮肤弹性，预防孕期妊娠斑和妊娠纹的形成。实验例4增强免疫力检测依据：卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)。实验动物：昆明种小鼠，雌性，体重为18-22g。本组合物人体推荐量为每人每日50ml(0.83ml/kg)，小鼠实验用剂量设置低、正常、高3个剂量水平，即每日4.15、8.30和24.90ml/kg(分别相当于人体推荐量的5、10、30倍)，同时设置阴性对照组，将实验小鼠按照体重随机分成2批，每批4组，每组10只。各称取5.25ml、10.50ml和31.25ml上述实施例19和对比例7制备的助孕组合物，分别加纯水至50ml，分别配成0.11ml/ml、0.21ml/ml和0.63ml/ml浓度溶液，灌胃体积为0.2ml/10g体重，每天灌胃1次，阴性对照组给予等体积的纯水，连续30d。4.1细胞免疫功能1、cona诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验(mtt法)无菌取脾，制成细胞悬液。将每一份脾细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，一孔加75μlcona液(相当于7.5μg/ml)，另一孔作为对照，置5％co2，37℃co2孵箱中培养72h。培养结束前4h，每孔轻轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的rpmi1640培养液，同时加入mtt(5mg/ml)50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，超声震荡(2秒)，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔分装3孔作为平行样，用酶联免疫检测仪，以570nm波长测定光密度值。用加cona孔的光密度值减去不加cona孔的光密度值代表淋巴细胞的增殖能力，受试样品组的光密度差值显著高于对照组的光密度差值，可判定该项实验结果阳性。2、迟发型变态反应(dth)灌胃第26天，给小鼠腹腔注射2％绵羊红细胞(srbc)0.2ml用于致敏，于免疫后第4天，右耳均匀涂抹1％dnfb溶液20μl攻击，左耳作对照，注射后于24h处死小鼠，取左右相同大小耳片称重，其重量之差作为肿胀度。以肿胀度来表示dth的程度。受试样品组的差值显著高于对照组的差值，可判定该项实验结果阳性。同时取小鼠的胸腺及脾脏称重，计算脏器/体重比值。4.2体液免疫功能1、抗体生成细胞检测(jerne改良玻片法)于灌胃的第26天给每只小鼠腹腔注射0.2ml的2％(v/v)压积srbc，将srbc免疫4-5天后的小鼠颈椎脱臼处死，无菌取脾脏，以完全培养基rpmi1640制备成5×106个细胞/ml的脾细胞悬液。并制作琼脂糖玻片，将其放入37℃、5％的co2培养箱中孵育1h，然后每孔加入500μl以完全培养基稀释的补体(v/v，1：10)，继续孵育2h，计数每张琼脂薄层玻片上形成的溶血空斑数，用空斑数/106脾细胞来表示抗体生成细胞数。2、半数溶血值(hc50)的测定将压积srbc用生理盐水配成2％(v/v)的细胞悬液，每只鼠腹腔注射0.2ml进行免疫。4d后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。取血清用sa缓冲液稀释200倍。将稀释后的血清1ml置试管内，依次加入0.5ml的10％(v/v)srbc，补体1ml(用sa液按1:8稀释)。另设不加血清的对照管(以sa缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温20min后，冰浴终止反应。2000r/min离心10min。取上清液1ml，加都氏试剂3ml，同时取0.25ml的10％(v/v)srbc加都氏试剂至4ml，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(hc50)表示，按下列公式计算：受试样品组的hc50显著高于对照组的hc50，可判定该项实验结果阳性。4.3单核-巨噬细胞功能1、小鼠碳廓清实验从小鼠尾静脉注入稀释的印度墨汁，按每10g体重0.1ml计算。待墨汁注入，立即计时。注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μl，并立即将其加到2ml的1％na2co3溶液中，测od600nm脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，称重。以吞噬指数表示小鼠碳廓清的能力。k＝(lgod2min-1god10min)/(10min-2min)受试样品组的吞噬指数显著高于对照组的吞噬指数，可判定该项实验结果阳性。2、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(滴片法)给每只小鼠腹腔注射2％(v/v)压积srbc0.2ml激活腹腔巨噬细胞，5d后处死小鼠，腹腔注射加小牛血清hank’s液4ml/鼠，轻轻按揉腹部20次，吸取腹腔洗液与等量的1％鸡红细胞混匀。吸取1ml混合液，滴片，37℃孵育20min，冲洗，固定，giemsa液染色，镜检，计数吞噬率和吞噬指数(吞噬率为每100个巨噬细胞中吞噬鸡红细胞的巨噬细胞所占的百分率；吞噬指数为平均每个巨噬细胞吞噬鸡红细胞的个数)。4.4nk细胞活性测定1、乳酸脱氢酶(ldh)测定法无菌取脾，制成单个细胞悬液作为效应细胞。取靶细胞和效应细胞各100μl(效靶比50:1)，加入u型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2.5％triton各100μl；上述各项均设三个复孔，于37℃、5％co2培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μl置平底96孔培养板中，同时加入ldh基质液100μl，反应3min，每孔加入1mol/l的hcl30μl，在酶标仪490nm处测定光密度值(od)。受试样品组的nk细胞活性显著高于对照组的nk细胞活性，即可判定该项实验结果阳性。实验结果：实施例19的实验结果如表8.1和8.2所示。表8.1样品对小鼠细胞及体液免疫功能的影响注：对照组相比，*p<0.05，具有显著性差异；**p<0.01，具有极显著性差异。由表8.1可见，低、中剂量组的淋巴细胞增殖能力和耳廓肿胀度增重高于对照组，具有显著性差异(p<0.05)，高剂量组的淋巴细胞增殖能力和耳廓肿胀度增重高于对照组，具有极显著性差异(p<0.01)；中、高剂量组的半数溶血值高于对照组，具有显著性差异(p<0.05)。表8.2样品对小鼠单核—巨噬细胞与nk细胞活性测定结果注：对照组相比，*p<0.05，具有显著性差异；**p<0.01，具有极显著性差异。由表8.2可见，中剂量组的nk细胞活性高于对照组，具有显著性差异(p<0.05)，高剂量组的nk细胞活性高于对照组，具有极显著性差异(p<0.01)。对比例7的免疫功能评价实验结果如表9.1和表9.2所示。表9.1样品对小鼠细胞及体液免疫功能的影响注：对照组相比，*p<0.05，具有显著性差异。由表9.1可见，中、高剂量组的淋巴细胞增殖能力和耳廓肿胀度增重高于对照组，具有显著性差异(p<0.05)。表9.2样品对小鼠单核—巨噬细胞与nk细胞活性测定结果注：*p<0.05，表示与对照组相比具有显著性差异。由表9.2可见，高剂量组的nk细胞活性高于对照组，具有显著性差异(p<0.05)。本申请中均采用正常动物实验。在细胞免疫功能、体液免疫功能、单核－巨噬细胞功能及nk细胞活性四个方面测定中，任两个方面试验结果为阳性，可以判定该受试样品具有增强免疫力作用。其中细胞免疫功能测定项目中两个实验的结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果为阳性，判定细胞免疫功能试验结果阳性。体液免疫功能测定项目中两个实验的结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果为阳性，判定体液免疫功能试验结果阳性。单核—巨噬细胞功能测定项目中两个实验的结果均为阳性，或任一实验的两个剂量组结果为阳性，判定单核—巨噬细胞功能试验结果阳性。nk细胞活性测定实验的一个以上剂量结果阳性，判定nk细胞活性结果阳性。因此，本实施例19具有增强免疫力的效果，同时，通过对比例7可以发现，菊粉和鱼胶原蛋白肽协同作用，可以显著提高组合物的斑数溶血值和nk细胞活性，从而发挥更好的免疫作用。当前第1页12