本发明属于冻疮防治领域，具体地，涉及一种中药组合物及其在治疗冻疮的药物中的应用。
背景技术：
现代医学对寒冷引起冻疮的机制尚未完全明确，可能与皮肤血管对寒冷过敏有关，也可能与自主神经功能紊乱及遗传因素有关。寒冷暴露时，正常人可引起皮肤血管收缩，继之血管出现扩张，以维持血流灌注。冻疮病人则出现较粗的皮肤小动脉持久性痉挛收缩，较细的浅表血管持久性扩张，产生血液淤滞，局部组织缺氧，导致组织细胞受到损害。如持续时间过长，细胞内外环境改变，血浆渗入组织间隙而引起水肿而发病。中医理论认为，冻疮乃皮肤肌肉受严寒侵袭，气血运行不畅致气血凝滞而成；平素气血衰弱或疲劳过度，暴热着冻，暴冻着热也会使本病生成。故中医临床治疗以化瘀消肿，温经散寒，活血止痛为主。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种中药组合物及其在治疗冻疮的药物中的应用，以解决上述技术问题中的至少一个。
根据本发明的一个方面，提供一种中药组合物，包括以下重量配比的原料药：两面针0.5～1.5份、徐长卿0.5～1份、九里香0.8～1.2份、红花0.6～1.8份、当归0.8～1.8份、野菊花0.3～0.8份、半枝莲0.3～0.7份、白花蛇舌草0.3～0.5份、樟油100～200份、冰片1.8～3份、薄荷脑22～30份、桉油25～50份；该中药组合物能够用于治疗冻疮。
优选地，还包括以下重量配比的原料药：辛夷0.8～1.5份、水芙蓉0.6～1.4份、卷柏0.6～1.2份、金不换0.5～1.5份、千里光0.8～1.2份、大头陈0.8～1.4份、当归0.6～1.2份、鹅不食草0.6～1.2份、三七0.7～1.5份、肿节风0.8～1.3份、鸡骨香0.7～1.6份、砂仁0.3～0.8份、独活0.3～0.8份、羌活0.3～0.8份、姜皮0.2～0.6份、陈皮0.2～0.6份、香附0.3～0.9份、山白芷0.3～0.9份、桂枝0.2～1份、小罗伞0.2～1份、蔓荆子0.2～1份、桔梗0.4～0.6份、紫珠叶0.4～0.6份、地胆草0.4～0.6份、细辛0.4～0.6份、五指柑0.35～0.7份、肉豆蔻0.25～0.6份、木防己0.2～0.8份、三叉苦0.2～0.8份、山银花0.2～0.8份、救必应0.1～0.6份、白半枫荷0.15～0.8份、荜澄茄0.3～0.7份、麻黄0.3～0.7份、地稔0.3～0.7份、防风0.3～0.7份、半枝莲0.2～0.65份、铁包金0.3～0.75份、柴胡0.36～0.68份、飞天蠄蟧0.24～0.73份、鸡骨草0.2～0.7份、荆芥0.2～0.7份、虎杖0.2～0.7份、钩藤0.2～0.7份、一枝黄花0.3～0.7份、白花灯笼0.3～0.7份、人字草0.1～0.5份、金线风0.2～0.3份、石仙桃0.2～0.3份、五月艾0.2～0.3份、皂角刺0.2～0.3份、木香0.1～0.4份、山芝麻0.15～0.35份、益母草0.15～0.35份、紫苏叶0.1～0.5份、倒扣草0.1～0.5份、侧柏叶0.2～0.4份、金耳环0.1～0.35份、一朵云0.1～0.35份、重楼0.2～0.3份、鱼腥草0.15～0.45份、吊黄0.15～0.45、樟脑10～40份、水杨酸甲酯200～280份、松节油75～100份、薄荷素油200～280份、丁香罗勒油7～20份、樟油120～180份、八角茴香油15～40份、肉桂油15～35份。
优选地，包括以下重量配比的原料药：两面针1份、徐长卿1份、九里香1份、红花1份、当归1份、野菊花0.5份、半枝莲0.5份、白花蛇舌草0.43份、樟油150份、冰片2.5份、薄荷脑27.5份、桉油40份、辛夷1份、水芙蓉1份、卷柏1份、金不换1份、千里光1份、大头陈1份、当归1份、鹅不食草1份、三七1份、肿节风1份、鸡骨香1份、砂仁0.55份、独活0.55份、羌活0.55份、姜皮0.55份、陈皮0.55份、香附0.5份、山白芷0.5份、桂枝0.5份、小罗伞0.5份、蔓荆子0.5份、桔梗0.5份、紫珠叶0.5份、地胆草0.5份、细辛0.5份、五指柑0.5份、肉豆蔻0.5份、木防己0.5份、三叉苦0.5份、山银花0.5份、救必应0.5份、白半枫荷0.5份、荜澄茄0.5份、麻黄0.5份、地稔0.5份、防风0.5份、半枝莲0.5份、铁包金0.5份、柴胡0.5份、飞天蠄蟧0.5份、鸡骨草0.5份、荆芥0.5份、虎杖0.5份、钩藤0.5份、一枝黄花0.45份、白花灯笼0.43份、人字草0.25份、金线风0.25份、石仙桃0.25份、五月艾0.25份、皂角刺0.25份、木香0.25份、山芝麻0.25份、益母草0.25份、紫苏叶0.25份、倒扣草0.25份、侧柏叶0.25份、金耳环0.25份、一朵云0.25份、重楼0.25份、鱼腥草0.25份、吊黄0.25份、樟脑30份、水杨酸甲酯250份、松节油95份、薄荷素油250份、丁香罗勒油15份、樟油150份、八角茴香油20份、肉桂油20份。
优选地，该中药组合物通过以下步骤制得：a.按重量配比称取：两面针、徐长卿、九里香、红花、当归、野菊花、半枝莲、白花蛇舌草、樟油、辛夷、水芙蓉、卷柏、金不换、千里光、大头陈、当归、鹅不食草、三七、肿节风、鸡骨香、砂仁、独活、羌活、姜皮、陈皮、香附、山白芷、桂枝、小罗伞、蔓荆子、桔梗、紫珠叶、地胆草、细辛、五指柑、肉豆蔻、木防己、三叉苦、山银花、救必应、白半枫荷、荜澄茄、麻黄、地稔、防风、半枝莲、铁包金、柴胡、飞天蠄蟧、鸡骨草、荆芥、虎杖、钩藤、一枝黄花、白花灯笼、人字草、金线风、石仙桃、五月艾、皂角刺、木香、山芝麻、益母草、紫苏、倒扣草、侧柏叶、金耳环、一朵云、重楼、鱼腥草、吊黄，研磨成粉后混合；b.按体积比量取：加入2～4倍的茶油，浸渍，过滤，保留滤液；c.按重量配比称取樟脑、水杨酸甲酯、松节油、薄荷素油、丁香罗勒油、樟油、八角茴香油、肉桂油、冰片、薄荷脑、桉油，并将其加入步骤b所得滤液中，搅拌，静置，过滤，得到药液。
优选地，步骤b中的浸渍时间为10-30天，浸渍温度为40-60℃，步骤c中的静置时间为24小时以上。
优选地，步骤b中的浸渍时间为15天，浸渍温度为50℃，步骤c中的静置时间为5天。
根据本发明的另一个方面，提供一种治疗冻疮的药物，由上述中药组合物和茶油配制而成。
本发明提供的中药组合物应用在治疗冻疮的药物中：
(1)可明显减轻冻伤组织红肿的炎症反应，防止水泡产生和组织坏死，能够明显的减轻冻疮肿胀和抑制肉芽组织增生，对预防和治疗轻度冻疮具有确切的疗效。
(2)具有较好的抗感染作用，能够在一定程度上抑制体外的金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌等引起皮肤感染的常见病原菌和条件致病菌。
(3)能够提高患者的痛阈值，由此减少患者的应激组织由于冻疮患处疼痛而作出应激反应。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。
实施例1
本实施例的治疗冻疮的药物按照下述步骤制得：
(1)称取以下原料药：两面针1g、徐长卿1g、九里香1g、红花1g、当归1g、野菊花0.5g、半枝莲0.5g、白花蛇舌草0.43g、樟油150g、辛夷1g、水芙蓉1g、卷柏1g、金不换1g、千里光1g、大头陈1g、当归1g、鹅不食草1g、三七1g、肿节风1g、鸡骨香1g、砂仁0.55g、独活0.55g、羌活0.55g、姜皮0.55g、陈皮0.55g、香附0.5g、山白芷0.5g、桂枝0.5g、小罗伞0.5g、蔓荆子0.5g、桔梗0.5g、紫珠叶0.5g、地胆草0.5g、细辛0.5g、五指柑0.5g、肉豆蔻0.5g、木防己0.5g、三叉苦0.5g、山银花0.5g、救必应0.5g、白半枫荷0.5g、荜澄茄0.5g、麻黄0.5g、地稔0.5g、防风0.5g、半枝莲0.5g、铁包金0.5g、柴胡0.5g、飞天蠄蟧0.5g、鸡骨草0.5g、荆芥0.5g、虎杖0.5g、钩藤0.5g、一枝黄花0.45g、白花灯笼0.43g、人字草0.25g、金线风0.25g、石仙桃0.25g、五月艾0.25g、皂角刺0.25g、木香0.25g、山芝麻0.25g、益母草0.25g、紫苏叶0.25g、倒扣草0.25g、侧柏叶0.25g、金耳环0.25g、一朵云0.25g、重楼0.25g、鱼腥草0.25g、吊黄0.25g。
(2)将步骤(1)称取的原料药粉碎成粗粉后混合。
(3)加入2～4倍的茶油，于50℃下浸渍15天，过滤，保留滤液。
(4)称取以下原料药：樟脑30g、水杨酸甲酯250g、松节油95g、薄荷素油250g、丁香罗勒油15g、樟油150g、八角茴香油20g、肉桂油20g、冰片2.5g、薄荷脑27.5g、桉油40g。
(5)将步骤(4)的原料药加入步骤(3)所得滤液中，搅拌均匀，静置5天，过滤，得到药液。
(6)向步骤(5)的药液中加入茶油配制成1000ml，得到产品。
实施例2
本实施例的治疗冻疮的药物按照下述步骤制得：
(1)称取以下原料药：两面针1g、徐长卿1g、九里香1g、红花1g、当归1g、野菊花0.5g、半枝莲0.5g、白花蛇舌草0.43g、樟油150g、辛夷1g、水芙蓉1g、卷柏1g、金不换1g、千里光1g、大头陈1g、当归1g、鹅不食草1g、三七1g、肿节风1g、鸡骨香1g、砂仁0.55g、独活0.55g、羌活0.55g、姜皮0.55g、陈皮0.55g、香附0.5g、山白芷0.5g、桂枝0.5g、小罗伞0.5g、蔓荆子0.5g、桔梗0.5g、紫珠叶0.5g、地胆草0.5g、细辛0.5g、五指柑0.5g、肉豆蔻0.5g、木防己0.5g、三叉苦0.5g、山银花0.5g、救必应0.5g、白半枫荷0.5g、荜澄茄0.5g、麻黄0.5g、地稔0.5g、防风0.5g、半枝莲0.5g、铁包金0.5g、柴胡0.5g、飞天蠄蟧0.5g、鸡骨草0.5g、荆芥0.5g、虎杖0.5g、钩藤0.5g、一枝黄花0.45g、白花灯笼0.43g、人字草0.25g、金线风0.25g、石仙桃0.25g、五月艾0.25g、皂角刺0.25g、木香0.25g、山芝麻0.25g、益母草0.25g、紫苏叶0.25g、倒扣草0.25g、侧柏叶0.25g、金耳环0.25g、一朵云0.25g、重楼0.25g、鱼腥草0.25g、吊黄0.25g。
(2)将步骤(1)称取的原料药粉碎成粗粉后混合。
(3)加入2～4倍的茶油，于45℃浸渍20天，过滤，保留滤液。
(4)称取以下原料药：樟脑30g、水杨酸甲酯250g、松节油95g、薄荷素油250g、丁香罗勒油15g、樟油150g、八角茴香油20g、肉桂油20g、冰片2.5g、薄荷脑27.5g、桉油40g。
(5)将步骤(4)的原料药加入到步骤(3)所得滤液中，搅拌均匀，静置4天，过滤，得到药液。
(6)向步骤(5)的药液中加入茶油配制成1000ml，得到产品。
实施例3防治冻疮实验
试验动物：新西兰大耳兔，雌雄兼用，体重2.5～3.0kg，购自广州中医药大学实验动物中心，合格证号：scxk(粤)2008-0020，粤监证字2008a006。
试验仪器：perimed激光多谱勒血流仪，瑞典百灵威医疗仪器有限公司。
统计方法：结果以x±s表示，采用spss11统计软件进行组间t检验。
试验试剂：实施例1制得的治疗冻疮的药物；云南白药酊(国药准字z53021238，批号：20080108，云南白药集团股份有限公司)；茶油，广东罗浮山国药股份有限公司提供。
试验组设置：
高剂量组：0.4ml实施例1制得的治疗冻疮的药物；
中剂量组：取茶油与0.2ml实施例1制得的治疗冻疮的药物配至0.4ml；
低剂量组：取茶油与0.1ml实施例1制得的治疗冻疮的药物配至0.4ml；
云南白药酊组：取茶油与0.2ml云南白药酊配至0.4ml；
对照组：0.4ml茶油；
实验建模：
取实验兔30只，体重2.5～3.0kg，随机分为对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组和云南白药酊组5组，将实验兔右耳尖起7cm处的区域内剪毛，将实验兔右耳浸泡于冷冻槽中，冻结的兔耳瞬间变白。再继续冷冻70秒，取出以20℃温水清洗兔耳，干棉球拭干，让其复温，兔耳开始发红发热。在建模时按照实验组设置以涂抹的方式开始预防给药，连续给药7天。记录兔耳造模部位的变化情况，停药后的实验结果如表1所示。给药结束后，取冻疮模型的实验兔，用戊巴比妥钠耳缘静脉注射麻醉，仰位固定于兔台，剪去耳根部毛，用耳托固定左耳，采用perimed激光多谱勒血流仪记录家兔耳廓微循环的血流速度，以判断微循环的改善情况，结果如表2所示。
表1各试验组对家兔轻度耳冻疮的影响(n＝6)
表2各试验组对轻度耳冻疮家兔耳微循环血流量的影响(n＝6，
注：与对照组比较*p<0.05**p<0.01
结果表明，高剂量组、中剂量组和云南白药酊组局部给药，可以明显减轻冻伤组织红肿的炎症反应，防止水泡产生和组织坏死，对兔耳轻度冻伤有预防和治疗作用。给药后，与对照组相比，高剂量组、中剂量组、低剂量组和云南白药酊组空白组均有增强家兔耳廓微动脉血流速度的趋势，且呈剂量依赖，但与对照组比较，差异无显著性意义(p＞0.05)。
实施例4抗炎实验
试验动物：km小鼠，雌雄兼用，体重18～22g，购自广州中医药大学实验动物中心(合格证号：scxk(粤)2008-0020，粤监证字2008a003)；sd大鼠，购自广州中医药大学实验动物中心(合格证号：scxk(粤)2008-0020，粤监证字2008a002)。
试验仪器：202-1型电热恒温干燥箱，上海泸越实验仪器有限公司。
统计方法：结果以
试验试剂：实施例1制得的治疗冻疮的药物；吲哚美辛搽剂(进口药品注册证号h20050406，批号：cbd7e，兴和株式会社)；茶油，广东罗浮山国药股份有限公司提供。
1.对二甲苯致小鼠肿胀的影响
试验组设置：
高剂量组：0.2ml实施例1制得的治疗冻疮的药物；
中剂量组：取茶油与0.1ml实施例1制得的治疗冻疮的药物配至0.2ml；
低剂量组：取茶油与0.05ml实施例1制得的治疗冻疮的药物配至0.2ml；
吲哚美辛组：取吲哚美辛0.2ml；
对照组：0.2ml茶油；
实验建模：
取km小鼠60只，体重18～22g，雌雄兼用，随机分为对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组和吲哚美辛组，每组12只。将小鼠腹部部分剃毛做给药部位，按照实验组设置以涂抹的方式给药，给药3天，末次给药30分钟后用100％二甲苯0.1ml涂抹小鼠右耳的两侧致炎，左耳不涂做对照，涂药后20分钟将小鼠处死，剪下两耳，用直径为0.8mm的打孔器切下两耳圆形耳片，立即称重，计算耳肿胀率。
表3各试验组对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(n＝12；
注：与空白组比较*p<0.05**p<0.01
结果如表3所示，与对照组相比，低、中、高剂量组和吲哚美辛组km小鼠的肿胀率均有减轻，其中高剂量组和中剂量组的作用最强(p<0.01)，说明实施例1制得的治疗冻疮的药物对二甲苯所致小鼠耳肿胀有明显的抑制作用。
2.对大鼠棉球肉芽肿的影响
试验组设置：
高剂量组：0.4ml实施例1制得的治疗冻疮的药物；
中剂量组：取茶油与0.2ml实施例1制得的治疗冻疮的药物配至0.4ml；
低剂量组：取茶油与0.1ml实施例1制得的治疗冻疮的药物配至0.4ml；
吲哚美辛组：取吲哚美辛0.4ml；
对照组：0.4ml茶油；
实验建模：
选sd大鼠50只，体重180～220g，雌雄兼用，用3.5％水合氯醛麻醉后，于无菌条件下，在其背部切开小口，用眼科镊将重量为10mg的灭菌棉球从小切口植入皮下，随即缝合皮肤，用碘液、青霉素和氯霉素消毒后常规饲养备用。手术次日取造模成功大鼠50只，随机分为对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组和吲哚美辛组，每组10只。将大鼠腹部部分剃毛做给药部位，在手术次日开始，按照实验组设置以涂抹的方式给药，连续15天。15天后处死大鼠，打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，放烘箱中60℃烘干12小时至恒重，称干重，减去棉球原重量即得肉芽肿的重量。
表4各试验组对大鼠棉球肉芽肿引起的慢性炎症的影响(n＝10；
注：与模型组比较*p<0.05**p<0.01
结果如表4所示，与对照组比较，高剂量组、中剂量组、低剂量组和吲哚美辛组均可降低棉球肉芽肿的干重。其中高剂量组、中剂量组的作用最强(p<0.01)，说明实施例1制得的治疗冻疮的药物有明显抑制肉芽组织增生的作用。
实施例5抑菌实验
1.体外抑菌
试验菌种：金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌，这4种菌为有代表性的引起皮肤感染的常见病原菌和条件致病菌，菌种均来自北京卫生部生物制品研究所。
试验试剂：实施例1制得的治疗冻疮的药物。
试验方法：
(1)菌液制备将不同菌株新鲜培养物(菌落)制成菌液，浓度相当于0.5麦氏比浊管。
(2)药液制备取实施例1制得的治疗冻疮的药物，每1ml药液加0.4吐温80助溶，再用营养肉汤配置成0.2g/ml使用。
(3)试验组设置取灭菌试管10支，第1管无菌操作加入2mllm—h培养液作为对照管，第2～9管无菌操作加入1ml菌液，第2管再加入1ml药液，混合，然后从第2管中取混合液1ml加入第3管，第4～9管依次倍比稀释，第10管加入2ml菌液作为阳性管，35℃培养24～48h，观察实施例1制得的治疗冻疮的药物对4种致病菌的抑菌作用。
表5实施例1的治疗冻疮的药物体外抑菌试验结果
根据表5所示结果，实施例1的治疗冻疮的药物对金黄色葡萄球菌最低抑菌浓度为0.00625g/ml、对乙型溶血性链球菌最低抑菌浓度为0.00151g/ml、对大肠杆菌最低抑菌浓度为0.00625g/ml、对绿脓杆菌最低抑菌浓度为0.2g/ml。说明实施例1的治疗冻疮的药物对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌等4种菌有一定的抑制作用。
2.体内抑菌
试验菌种：大肠杆菌，菌种来自北京卫生部生物制品研究所。
试验动物：km小鼠，雌雄各半，体重18～22g，购自广州中医药大学实验动物中心(合格证号：scxk(粤)2008-0020，粤监证字2008a003)。
试验试剂：实施例1制得的治疗冻疮的药物。
试验组设置：
高剂量组：0.2ml实施例1制得的治疗冻疮的药物；
中剂量组：取茶油与0.1ml实施例1制得的治疗冻疮的药物配至0.2ml；
低剂量组：取茶油与0.05ml实施例1制得的治疗冻疮的药物配至0.2ml；
云南白药酊组：取云南白药酊0.2ml；
对照组：0.2ml茶油；
实验建模
取km小鼠100只，体重18～22g，雌雄兼用，随机分为5组，对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组和云南白药酊组，每组20只。每只小鼠腹腔注射大肠杆菌菌悬液0.5ml。将小鼠腹部部分剃毛做给药部位。于接种菌液前3天和感染后4天，按照实验组设置以涂抹的方式给药，共给药7天。各组小鼠正常饲养，记录各组动物死亡情况，以动物的死亡率来评价药物的疗效。
表6各试验组对大肠杆菌感染小鼠的治疗作用
注：与空白组比较*p<0.05**p<0.01
表6结果表明，高剂量组、中剂量组对大肠杆菌感染小鼠具有较好的抗感染作用，且呈现一定的量效关系。
实施例6活血实验
试验动物：km小鼠，雌雄各半，体重18～22g，购自广州中医药大学实验动物中心(合格证号：scxk(粤)2008-0020，粤监证字2008a003)。
试验仪器：perimed激光多谱勒血流仪，瑞典百灵威医疗仪器有限公司。
统计方法：结果以
试验试剂：实施例1制得的治疗冻疮的药物；云南白药酊，国药准字z53021238，批号：20080108，云南白药集团股份有限公司；茶油，广东罗浮山国药股份有限公司。
试验组设置：
高剂量组：0.2ml实施例1制得的治疗冻疮的药物；
中剂量组：取茶油与0.1ml实施例1制得的治疗冻疮的药物配至0.2ml；
低剂量组：取茶油与0.05ml实施例1制得的治疗冻疮的药物配至0.2ml；
云南白药酊组：取云南白药酊0.2ml；
对照组：0.2ml茶油；
实验建模
取km小鼠60只，体重18～22g，雌雄兼用，随机分为对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组和云南白药酊组，每组12只。将小鼠腹部部分剃毛做给药部位，按照实验组设置以涂抹的方式给药，给药3天，末次给药后每鼠左耳用胶布贴拔鼠毛，60分钟后进行实验。实验时先用5％的水合氯醛腹腔进行麻醉后用耳托固定左耳，采用perimed激光多谱勒血流仪记录小鼠耳廓微循环的血流速度，以判断微循环的改善情况。
表7各试验组对小鼠耳廓微循环的影响(n＝12；
注：与空白组比较*p<0.05**p<0.01
结果如表7所示，实施例1的治疗冻疮的药物各剂量组和云南白药酊组均有增强小鼠耳廓微动脉血流速度的趋势，且呈剂量依赖，说明有增强小鼠耳廓血循环的作用。但同对照组比较无显著差异。
实施例7镇痛实验
试验动物：km小鼠，60只，雌雄各半，75只雌性，体重18～22g，均购自广州中医药大学实验动物中心(合格证号：scxk(粤)2008-0020，粤监证字2008a003)。
试验仪器：智能热板仪rb-200，成都泰盟科技有限公司。
统计方法：结果以
试验试剂：实施例1制得的治疗冻疮的药物；云南白药酊(国药准字z53021238，批号：20080108，云南白药集团股份有限公司)。茶油，广东罗浮山国药股份有限公司。
试验组设置：
高剂量组：0.2ml实施例1制得的治疗冻疮的药物；
中剂量组：取茶油与0.1ml实施例1制得的治疗冻疮的药物配至0.2ml；
低剂量组：取茶油与0.05ml实施例1制得的治疗冻疮的药物配至0.2ml；
云南白药酊组：取云南白药酊0.2ml；
对照组：0.2ml茶油；
实验建模
1.扭体法
取km小鼠60只，体重18～22g，雌雄兼用，随机分为对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组和云南白药酊组，每组12只。将小鼠腹部部分剃毛做给药部位，按照实验组设置以涂抹的方式给药，给药7天。于末次给药60分钟后腹腔注射0.8％醋酸溶液0.2ml/只，观察10分钟内每只小鼠第一次因疼痛引起扭体的时间(扭体潜伏期)和扭体次数。
表8各试验组对醋酸致小鼠疼痛扭体的影响(n＝12；
注：与空白组比较*p<0.05**p<0.01
表8的结果表明，与对照组相比，实施例1的治疗冻疮的药物各剂量组和云南白药酊组小鼠扭体数均有减少，扭体潜伏期延长，其中罗高剂量的作用最强(p<0.01)，说明实施例1的治疗冻疮的药物对醋酸致小鼠疼痛扭体有明显的镇痛作用。
2.热板法
取km小鼠若干，体重18～22g，雌性。将热板测痛仪接通电源，温度调节至55℃。将雌性km小鼠依次放人仪器内，小鼠从放在热板上至出现舔后足所需时间作为该鼠的痛阈值。凡舔后足时间少于5秒或多于30秒或跳跃者弃之不用，筛选合格小鼠75只。随机分为对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组和云南白药酊组，每组15只。将小鼠腹部部分剃毛做给药部位，按照实验组设置以涂抹的方式给药，给药3天。末次给药后30分钟开始测各鼠痛阈值，如给药后痛阈值超过60秒，则停止测试而按60秒计。
表9各试验组小鼠痛阈值的影响(n＝15；
注：与空白组比较*p<0.05**p<0.01
表9结果表明，实施例1的治疗冻疮的药物各剂量组和云南白药组均能延长小鼠痛阈值，其中实施例1的治疗冻疮的药物高剂量和云南白药组的作用最强(p<0.01)，说明有明显的镇痛作用。
根据实施例3～7的试验结果，实施例1的治疗冻疮的药物可明显减轻冻伤组织红肿的炎症反应，防止水泡产生和组织坏死，还有增强试验兔耳廓微动脉血流速度的趋势，对兔耳轻度冻伤有预防和治疗作用；可明显降低二甲苯致小鼠耳肿胀的肿胀率和大鼠棉球肉芽肿的重量，具有明显的减轻小鼠耳肿胀和抑制大鼠肉芽组织增生的作用；在体外对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌有一定的抑制作用，对体内大肠杆菌感染小鼠具有较好的抗感染作用；有增强小鼠耳廓微动脉血流速度的趋势，可促进增强小鼠耳廓微循环；能延长对醋酸致小鼠疼痛扭体反应的扭体潜伏期、减少扭体次数，增加热板法小鼠的痛阈值。试验结果表明实施例1的治疗冻疮的药物对预防和治疗轻度冻疮具有确切的疗效。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解，技术人员阅读本申请说明书后依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者等同替换，但这些修改或变更均未脱离本发明申请待批权利要求保护范围之内。