一种治疗早期老年痴呆的组合物的制作方法

本申请涉及中药组合物及其制备方法，具体涉及治疗老年痴呆的中药组合物及其制备方法。
背景技术：
：老年痴呆又名阿尔茨海默(alzheimer’sdisease，ad)，患病率与年龄密切相关，65岁以上患病率4-7％，85岁以上患病率20-30％；第六次人口普查数据显示，我国65岁以上人口有六千多万，占我国人口数量的近百分之九，随着我国人口老龄化的加剧，我国将成为ad的高危国家。ad是一种以进行性认知障碍和记忆力损害为主的中枢神经系统退行性疾病，其发病原因尚不十分明确，90％以上的病例是散发性的。ad的发病机理可能与以下几个方面有关：aβ毒性说、tau蛋白异常修饰说、神经细胞凋亡说以及自由基损伤、神经递质退化、脑能量代谢异常、细胞骨架改变、炎症反应、基因突变等。其组织病理学特征主要表现为神经细胞间的老年斑(senileplaques，sps)和神经细胞内神经纤维缠结(neurofibrillarytangles，nfts)的形成，以及大脑弥漫性萎缩、脑室扩大、选择性神经元丢失和突触的溃变等。其中老年斑和神经纤维缠结的形成是ad最典型的两种病理学特征，二者都是由于蛋白质的异常聚集而产生的。老年斑是由β-app异常裂解而形成的β-ap构成，而神经纤维缠结的主要成分是成对螺旋纤维(pairedhelicalfilaments，phfs)。近年来对于phfs的分子组成以及其形成机制方面的研究已经取得了很大的进展，目前认为phfs是由于微管相关蛋白tau的异常过度磷酸化所导致形成的，tau蛋白分子的聚集是形成phfs的前提。过度磷酸化的tau蛋白不仅自身与微管蛋白的结合能力下降，而且这种异常的tau蛋白还与微管蛋白竞争性地结合正常的微管结合蛋白，包括tau、map1、map2等，从而使微管解聚，微管系统的解聚影响了轴浆的运输，进而造成神经元的变性，最终引起痴呆的发生。pp2b是迄今为止发现的唯一一种依赖于ca2+和钙调素(calmodulin，cam)的蛋白磷酸酶，又名钙调磷酸酶(calcineurin，cn)。证据显示，在ad中tau蛋白的过度磷酸化状态是由于减少的蛋白磷酸酶活性。从ad患者脑中得到的phf-tau蛋白能被pp2b去磷酸化，这些磷酸酶恢复了tau蛋白促微管组装的功能。许多研究已经证实，cn有能力对ad异常过度磷酸化的phf-tau蛋白脱磷酸化。此外，体外研究也证实减少的cn活性可以引起tau蛋白的过磷酸化，这表明cn活性在ad中tau蛋白的异常过度磷酸化中扮演了角色。本发明从数百种天然药物中以钙调蛋白磷酸酶(cn)为靶酶进行筛选，在传统中医药理论的指导下确定用药组方，随后进行了细胞和动物水平的药理实验，本发明得到的中药组合物对治疗老年痴呆具有显著效果，尤其是早期老年痴呆，本发明提供的中药组合物能够逆转tau蛋白的过度磷酸化，从而达到治疗ad的效果。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种治疗ad的组合物，按重量百分比由下列组分组成，人参：黄芪：冬虫夏草为2-5：2-5:0.5-2。优选的，各组分重量百分比为，人参：黄芪：冬虫夏草为2：2:1。更优选的，各组分重量百分比为，人参：黄芪：冬虫夏草为5：5:1。进一步，人参可替换为人参茎叶。药材中人参一般是指人参的根部，本申请中人参可由人参茎叶替换，从而降低成本。一种含人参、黄芪和冬虫夏草的组合物，采用下述方法制备：1)取2-5份人参或人参茎叶、2-5份黄芪用乙醇渗漉提取，获得渗漉液，回收乙醇，得到人参黄芪浸膏，干燥后研碎，获得人参黄芪粉；2)将0.5-2份冬虫夏草粉碎，获得冬虫夏草细粉；3)将人参黄芪粉和冬虫夏草细粉加适量淀粉混匀，得到混合物；4)将混合物真空干燥，粉碎，过筛，获得药粉，用乙醇制软材，真空干燥整粒，形成材料颗粒。进一步，将材料颗粒加适量辅料，混匀，灌装成胶囊；灭菌，入库保存。优选的，辅料可选自填充剂、崩解剂、或润滑剂等。填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。优选的，取2份人参或人参茎叶、2份黄芪用乙醇渗漉提取，获得渗漉液，回收乙醇，得到人参黄芪浸膏，干燥后研碎，获得人参黄芪粉；将1份冬虫夏草粉碎，获得冬虫夏草细粉。一种含人参、黄芪、莲子心和冬虫夏草的组合物，按重量百分比，人参：黄芪：莲子心：冬虫夏草为2-5：2-5:0.5-2：0.5-2。优选的，人参：黄芪：莲子心：冬虫夏草为2：2:1：1。优选的，人参：黄芪：莲子心：冬虫夏草为5：5:1：1。进一步，人参可替换为人参茎叶。一种含人参、黄芪、莲子心和冬虫夏草的组合物，采用下述方法制备：1)取2-5份人参或人参茎叶、2-5份黄芪用乙醇渗漉提取，获得渗漉液，回收乙醇，得到人参黄芪浸膏，干燥后研碎，获得人参黄芪粉；2)将0.5-2份、0.5-2份羌活冬虫夏草粉碎，获得冬虫夏草莲子心细粉；3)将人参黄芪粉和冬虫夏草莲子心细粉加适量淀粉混匀，得到混合物；4)将混合物真空干燥，粉碎，过筛，获得药粉，用乙醇制软材，真空干燥整粒，形成材料颗粒。一种含人参、黄芪、金银花和冬虫夏草的组合物，按重量百分比，人参：黄芪：金银花：冬虫夏草为2-5：2-5:0.5-2：0.5-2。优选的，人参：黄芪：金银花：冬虫夏草为2：2:1：1。优选的，人参：黄芪：金银花：冬虫夏草为5：5:1：1。进一步，人参可替换为人参茎叶。一种含人参、黄芪、金银花和冬虫夏草的组合物，采用下述方法制备：1)取2-5份人参或人参茎叶、2-5份黄芪、0.5-2份金银花用乙醇渗漉提取，获得渗漉液，回收乙醇，得到人参黄芪金银花浸膏，干燥后研碎，获得人参黄芪金银花粉；2)将0.5-2份冬虫夏草粉碎，获得冬虫夏草细粉；3)将人参黄芪金银花粉和冬虫夏草细粉加适量淀粉混匀，得到混合物；4)将混合物真空干燥，粉碎，过筛，获得药粉，用乙醇制软材，真空干燥整粒，形成材料颗粒。本发明的目的在于提供上述组合物所述的组合物在制备改善免疫功能药物或保健品中的应用。进一步，组合物促进脾细胞的增殖，从而能改善人体免疫功能。上述组合物在制备治疗或改善老年痴呆药物或保健品中的应用。本发明的组合物制成药学上可接受的制剂或者作为有效活性物质基础制备药物组合物。本发明的组合物，是单位剂量的药物制剂形式，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋等。本发明的组合物其中的有效组分，其在制剂中所占重量百分比可以是0.1-99.9％，其余为药物可接受的载体。本发明的组合物，通过将上述有效组分和药物可接受的载体混合制备得到。本发明的组合物，其药物制剂形式可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。本发明的制剂，优选的是口服剂型，如：胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等。本发明的组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。本发明的优点：可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。我们使用东莨菪碱所致小鼠记忆获得性障碍模型，之后用本申请药物组合物处理小鼠，利用跳台等实验观察老鼠学习记忆能力。结果证明，本申请药物组合物能够维持神经细胞正常功能，明显改善小鼠的学习记忆能力(p<0.01)。另外用碳粒廓清实验，观察各个给药组对正常小鼠碳粒廓清的吞噬指数k和吞噬系数α的影响。结果证明本申请药物组合物能显著提高t细胞的细胞毒性作用和巨噬细胞的吞噬能力，对正常小鼠的非特异性免疫系统有显著增强作用。本申请药物组合物能显著提高tcell的细胞毒性作用和巨噬细胞的吞噬能力，并能维持神经细胞的正常功能，减缓神经细胞凋亡，不仅具有提高学习记忆及防治老年性痴呆的作用，而且能提高患者的免疫功能，与同类产品相比，具有疗效确切、标本兼治、毒性低、副作用小的优点。本申请药物组合物具有调节免疫功能、提高学习记忆和抗疲劳的作用。对老年性痴呆、脑疲劳综合症和机体免疫功能不全及免疫功能低下具有显著的治疗和保健作用。附图说明图1是以钙调蛋白磷酸酶为靶酶的药物筛选的原理图图2是以钙调蛋白磷酸酶为靶酶药物筛选中药物浓度及各试管的设置图图3是计算药物对酶的激活率的计算公式图4是本申请产品生产工艺简图具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条件实施检测。实施例1以钙调蛋白磷酸酶为靶酶药物筛选的分子模型的建立钙调蛋白磷酸酶是典型的丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶，也是唯一依赖钙、钙调素的蛋白磷酸酶，又名蛋白磷酸酶2b(pp2b)。我们实验室在对cn的长期研究的基础上建立了一套稳定的表达、提取纯化和酶活力测定的方法，因此利用现代分子生物学技术建立以cn为靶酶的药物筛选分子模型的基本条件已经具备，为了降低药物筛选的劳动强度，提高药物筛选的安全性和可靠性，结合cn的酶学特点及药物与靶酶结合的相关性质，通过对比多次的p-npp和rii的测活结果，发现直接作用于cn的小分子物质，以p-npp为底物测得的结果和以rii为底物测得的结果在作用趋势上是相符合的，确定以p-npp为底物，进行药物筛选，其设计思路见图1所示。该分子模型主要是通过测定cn对底物水解的产物的量以达到考察cn每活力的变化而评价药物对靶酶的作用效果的，因此酶活力的测定的准确程度成为该分子模型的关键，尽管已有实验显示直接作用于cn的小分子物质，以p-npp为底物测得的结果和以rii为底物测得的结果在作用趋势上是相符合的但为了保证药物筛选结果的可靠性与准确性，对筛选出的小分子化合物仍设计rii验证实验，为进一步研究提供更全面的实验依据。药物的提取方法：药物筛选实验必须包括两个关键因素，一是合适的筛选模型，另一个是充足的药物筛选对象，由于天然药物所含的化学成分种类较多，每一个天然药物就相当于一个小型的化合物库，加之传统的天然药物具有良好的临床应用基础，因此，我们主要选用天然药物作为筛选对象，进行药物的筛选试验。一般情况下，传统的天然药物中常见的成分有有机酸、生物碱、黄酮、香豆素、蒽酮类、皂苷、多糖、蛋白质、甾体、萜类、酚酸及其它等成分。它们常见的初步提取方法如下：有机酸，是植物中含羧基的一类成分，除少数外一般以有机酸盐的形式存在于大多数植物中。除少数极性过小如脂肪酸或极性过大等有机酸外，提取时通常是在酸性条件下以乙酸乙酯萃取以富集有机酸，若需要进一步纯化，则应将此乙酸乙酯提取物以碱水萃取，分取水层后将水层酸化，然后再以乙酸乙酯萃取，从而除去一些中性化合物如一些苷类等。生物碱，是除蛋白质外一类含氮的非有机氨类成分，广泛存在于小檗科，防己科，龙胆科，豆科等植物中，为植物中广泛分布的成分之一。一般情况下除季铵盐外游离生物碱溶于氯仿等极性小的有机试剂，生物碱盐则溶于水甲醇等极性大的溶剂，提取时我们可以在碱性条件下以氯仿提取总生物碱，若需纯化，则可以将含此粗总生物碱的氯仿溶液以水萃取，去掉氯仿层后，将水层调成碱性再以氯仿萃取，以去除极性小的中性成分如甾体，萜类等。在实验研究中，我们通常以一定浓度的乙醇提取小分子化合物，而水提取高分子化合物，并对筛选的到中草药根据其所含化合物的类型产用上述相应的方法进行系统分离后以对cn每活力的影响为依据确定激活部位，从而对激活部位进行进一步的分离以筛选到激活成分。药物筛选酶活力的实验方法：1.以p-npp为底物1.1溶液的配制贮备液的配制：测活液母液的配制(1×)：取1mtris-hcl(ph7.4，30℃)5ml，加入0.25mdtt200μl，加ddh2o至90ml后，用1mhcl调ph值至7.4(30℃)，然后依次加入0.5mmncl2100μl，b.s.a10mg，1mcacl2100μl，用ddh2o定容为100ml备用。使用时加入dtt、cam、p-npp至终浓度分别为2mm、2μm及20mm。另外当所使用的酶为原核表达的cna时，还要加入cnb至终浓度为2μm。终止液：0.5mna2co320mmedta靶酶稀释液：药液的配置：取药物或药物的提取物适量，精密称定，以适量水溶解，除另有规定外，制成1mg/ml的溶液作为药物母液，取此母液适量分别按1→5的稀释度依次稀释三个浓度梯度，所得稀释液和母液一同放置备用。2、以p-npp为底物药物筛选酶活力的测定方法：取cn以靶酶稀释液稀释成6-7umol/l的酶溶液，放置备用。取洁净的试管若干，置冰浴上，向每一支试管中分别加入某一浓度的药液10ul，酶溶液10ul于冰浴中孵育5分钟，分别依次加入测活液180ul，混匀，置30℃的水浴中反应20min，取出，立即加入终止液1800μl，于720型分光光度计上测定od值，各药物浓度设三个平行管并设三个平行酶对照管(以10ul水代替10μl药液)。药物浓度及各试管的设置如图2所示。分别设置药物对照(以10μl酶稀释液代替10μl酶)和空白对照(10μl酶稀释液+10μl水)。按图3所列公式计算药物对酶的相对抑制率或激活率。公式中od药+酶表示酶和药作用后所水解底物在410nm处的吸收光度值，od药对照表示药物对照在410nm处的吸收光度值，od酶表示相同量的酶所水解的底物在410nm处的吸收光度值。取适度稀释的酶液20l，加测活液180μl，于30℃保温孵育20min后，加1.8ml终止液，于分光光度计上测定410nm处光吸收值。并设空白对照(以20μl酶稀释液代替酶液)。酶活力单位为每分钟每毫克酶催化水解p-npp的nmol数。通过上述模型筛选出治疗老年痴呆的基本药材：厚朴、南沙参、何首乌、白芥子、钩藤、旱莲草、锁阳、川续断、积实芦荟、地骨皮、黄芪、薄荷、大枣、人参、蛇床子、鸡血藤、大血藤、罗布麻、决明子、百合、金银花、萹蓄、龙胆、冬虫夏草、侧柏叶、牛蒡子、莲子心、野菊花、藿香、白首乌、苦谏皮、忍冬藤、羌活、五加皮、千年健、络石藤、老鹳草、合欢花、绿原酸、没食子酸。其中，侧柏叶、川续断、冬虫夏草、钩藤、黄芪、藿香、金银花、决明子、莲子心、芦荟、羌活、人参、锁阳、五加皮、积实等，上述药材在提高cn酶活性方面效果突出。实施例2治疗老年痴呆的组合物及其制备方法2.1组合物1及其制备方法按重量百分比由下列组分组成为人参或人参茎叶：黄芪：冬虫夏草＝2-5：2-5:0.5-2。按重量百分比由下列组分组成为人参或人参茎叶：黄芪：冬虫夏草＝2：2:1。按重量百分比由下列组分组成为人参或人参茎叶：黄芪：冬虫夏草＝5：5:1。制备方法：1)按重量百分比取2-5份人参或人参茎叶、2-5份黄芪用70％乙醇渗漉提取，获得渗漉液，回收乙醇，得到参芪浸膏，干燥后研碎，获得参芪粉；2)将0.5-1份冬虫夏草粉碎，获得冬虫夏草细粉；3)将参芪粉和冬虫夏草细粉加适量淀粉混匀，得到混合物；4)将混合物真空干燥，粉碎，过100目筛，获得药粉，85％乙醇制软材，真空干燥整粒，形成材料颗粒；5)加适量硬脂酸镁混匀，灌装成胶囊；6)灭菌，检验，包装入库。质量标准：每粒胶囊含参芪浸膏不少于0.14g、冬虫夏草细粉不少于0.14g。质量标准：每粒胶囊人参皂苷rg1(c42h72o14)和人参皂苷re(c48h82o18)的总量不得少于2.25％。2.2组合物2及其制备方法按重量百分比由下列组分组成：人参：黄芪：冬虫夏草：莲子心＝2-5：2-5:0.5-2：0.5-2。按重量百分比由下列组分组成：人参：黄芪：冬虫夏草：莲子心＝2：2:1：1。按重量百分比由下列组分组成：人参：黄芪：冬虫夏草：莲子心＝5：5:1：1。制备方法：1)按重量百分比取2-5份人参或人参茎叶、2-5份黄芪用70％乙醇渗漉提取，获得渗漉液，回收乙醇，得到参芪浸膏，干燥后研碎，获得参芪粉；2)将0.5-1份冬虫夏草、0.5-1份莲子心粉碎，获得冬虫夏草莲子心细粉；3)将参芪羌粉和冬虫夏草莲子心细粉加适量淀粉混匀，得到混合物；4)将混合物真空干燥，粉碎，过100目筛，获得药粉，85％乙醇制软材，真空干燥整粒，形成材料颗粒；5)加适量硬脂酸镁混匀，灌装成胶囊；6)灭菌，检验，包装入库。质量标准：每粒胶囊含参芪浸膏不少于0.14g、冬虫夏草莲子心不少于0.14g。质量标准：每粒胶囊人参皂苷rg1(c42h72o14)和人参皂苷re(c48h82o18)的总量不得少于2.25％。2.3组合物3及其制备方法按重量百分比由下列组分组成：人参：黄芪：金银花：冬虫夏草＝2-5：2-5:0.5-2：0.5-2。按重量百分比由下列组分组成：人参：黄芪：金银花：冬虫夏草＝2：2:1：1。按重量百分比由下列组分组成：人参：黄芪：金银花：冬虫夏草＝5：5:1：1。制备方法：1)按重量百分比取2-5份人参或人参茎叶、2-5份黄芪、0.5-2份金银花用70％乙醇渗漉提取，获得渗漉液，回收乙醇，得到参芪金浸膏，干燥后研碎，获得参芪金粉；2)将0.5-2份冬虫夏草粉碎，获得冬虫夏草细粉；3)将参芪金粉和冬虫夏草细粉加适量淀粉混匀，得到混合物；4)将混合物真空干燥，粉碎，过100目筛，获得药粉，85％乙醇制软材，真空干燥整粒，形成材料颗粒；5)加适量硬脂酸镁混匀，灌装成胶囊；6)灭菌，检验，包装入库。质量标准：每粒胶囊含参芪金浸膏不少于0.14g、冬虫夏草不少于0.14g。质量标准：每粒胶囊人参皂苷rg1(c42h72o14)和人参皂苷re(c48h82o18)的总量不得少于2.25％。实施例3药物有效成分对小鼠脾细胞增殖的影响按实验室常规制备单个脾细胞悬液，台盼蓝排斥试验检测细胞存活率在95％以上，调整细胞密度为3×106个/ml，加入到96孔细胞板中。药物有效成分用含10％小牛血清的rpmi1640培养液溶解。设一个对照组(100μl细胞悬液+100μlrpmi1640)及四个加药组(100μl细胞悬液+100μl药物有效成分)，使药物的终浓度分别为30μg/ml、100μg/ml、300μg/ml、500μg/ml。组合物1为人参或人参茎叶：黄芪：冬虫夏草＝2：2:1制备而成；组合物2为人参或人参茎叶：黄芪：冬虫夏草：莲子心＝2：2:1:1制备而成；组合物3为人参或人参茎叶：黄芪：冬虫夏草：金银花＝2：2:1：1制备而成。37℃，在5％的co2的培养箱中培养72h。每孔加入10μlmtt(5mg/ml)，继续培养4h。3000rpm，离心10min，弃上清，加入150μldmso溶解沉淀，吹吸均匀。细胞板在酶标仪model680上读取吸光度(a)值，检测波长570nm，参考波长630nm。刺激指数si＝加药组od值/对照组od值。药物有效成分对小鼠脾细胞增殖的影响实施例4药物有效成分对小鼠学习记忆及改善免疫功能的促进作用1、药物有效成分对小鼠学习记忆的改善-跳台法将小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、及给药组(给药组1：人参茎叶：黄芪：冬虫夏草＝2：2:1；给药组2：人参茎叶：黄芪：冬虫夏草＝5：5:1)。各组小鼠每天灌胃给药1次，空白对照组及模型组给予等容量的生理盐水，连续7天。给药的药物浓度以中国药典建议的每天给药量为准。东莨菪碱所致记忆获得性障碍模型末次给药后1小时，除空白对照组外，各组小鼠均分别腹腔注射氢溴酸东莨菪碱1.5mg/kg，空白对照组腹腔注射等容量生理盐水。30min后使用跳台法如下：训练时先将跳台仪与可调变压器相连，电压控制在36v。与训练前1小时给中药，训练前10分钟模型组与给药组小鼠分别腹腔注射东莨菪碱1.5mg/kg，空白对照组腹腔注射等容量的生理盐水。每批实验各组分别有1只小鼠给药，平行操作，10分钟后再给第2只小鼠注射，以此类推。训练时将第一批的5只小鼠分别放进跳台仪的5个格子内，先适应环境3分钟，然后通电，小鼠受电击后，多数跳上平台，逃避电击，训练5分钟。24小时后重新测试。测试时，将小鼠放在平台上，记录小鼠第一次跳下时间(跳下时以小鼠双足同时接触铜栅为触电，视为错误反应)，记为触电潜伏期，并记录5min内的跳下次数，即为错误次数，作为记忆指标如下。药物对东莨菪碱所致记忆获得性障碍的影响分组只数潜伏期(秒)错误次数正常对照组10251.08±18.070.67±0.26模型对照组1074.55±16.491.82±0.18给药组111182.64±37.14*0.91±0.34*给药组211180.14±28.11*0.95±0.29**p<0.012、药物有效成分对小鼠免疫功能的促进作用：碳粒廓清实验方法：取印度墨汁1瓶，反复振摇至均匀，用1％明胶液稀释4倍供用。各给药组(给药组1：人参茎叶：黄芪：冬虫夏草＝2：2:1；给药组2：人参茎叶：黄芪：冬虫夏草＝5：5:1)给予wfc，对照组给生理盐水，末次给药后24小时，于小鼠尾静脉注入稀释的印度墨汁0.1ml/10g体重，于注入墨汁后1分钟以及12分钟用特制取血吸管从小鼠眼眶后静脉丛取血20ul，立即吹入0.1％碳酸钠液2ml中，吸管于该液中吸入、吹出数次以充分洗出吸管壁附着之血液，取血完毕后以20ul正常小鼠血溶于2ml0.1％碳酸钠液调零，于分光光度计675nm处比色，按下式计算吞噬指数k及吞噬系数a：k＝(lgc1-lgc2)/(t1-t2)a＝w×k1/3/wls药物对正常小鼠的碳粒廓清的影响分组只数吞噬指数k吞噬系数α正常对照组100.0206±0.00153.66±0.15给药组1110.0288±0.00294.39±0.26*给药组2110.0267±0.00214.18±0.23**p<0.01实施例5药物的急性毒性试验本申请用组合物1做过小鼠急毒实验。每只小鼠用正常剂量的几十-上百倍。小鼠无一例死亡。没有找到小鼠的半数致死量。说明药物毒性极低。当前第1页12