一种预防和治疗动脉粥样硬化的物质的应用及制备方法与流程

本发明属于生物医药领域，具体的说本发明涉及橡胶树种子脂溶性物质在预防和治疗动脉粥样硬化中的应用及制备方法。
背景技术：
：动脉粥样硬化(atherosclerosis，as)是一种复杂的多因素疾病，内皮细胞损伤、炎症机制在动脉粥样硬化的发生和发展中起着极为重要作用。目前认为，as包括多个病理过程，是由血管壁的损伤、内皮细胞功能受损，局部功能障碍，内皮下基质与胶原暴露，血小板粘附聚集，产生单核细胞趋化因子和黏附分子，凝血和抗凝血系统失衡，血栓形成及炎症反应、血管平滑细胞活化，迁移，增殖及细胞外基质生成等共同所致。本病主要累及中型的肌弾力型动脉，以主动脉、冠状动脉及脑动脉，导致管腔狭窄、变脆，稳定性下降，引起相应脏器缺血，梗死等严重后果。随着生活水平提高和生活方式的改变，冠心病和缺血性脑卒中的发生率在逐渐上升，由此导致的严重不良心脑血管疾病的发生风险明显增加，并呈年轻化趋势。严重影响人类的健康和社会劳动生产力，给千千万万的家庭乃至社会带来沉重的经济负担，这一切严重不良事件背后的推手就是动脉粥样硬化。目前大量研究表明他汀类药物存在多效性作用，成为当前最有效的治疗as的药物之一。他汀是一种3-羟基-3甲基戊二酰辅酶a还原酶抑制剂，通过抑制胆固醇的合成而降低血脂水平，起到抗动脉粥样硬化的作用。然而他汀类药物长期应用可产生明显不良反应，尤其是肝功能损害，这一定程度上限制了该类药物的临床长期应用。药物有很大的副作用，不能长期使用，面对动脉粥样硬化的巨大发病率和患者的不断增加，继续开发更有效、且无副作用的药物来减少患者病痛，同时减少因药物副作用带来的其他身体损害就变得很迫切。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种脂溶性物质在防治动脉粥样硬化中的应用该物质为橡胶树的种子的脂溶性物质，可以应用到药品、保健食品、食品中，用于预治动脉粥样硬化。动脉粥样硬化患者每日通过服用或者食用添加了该物质的药品、保健食品、食品即可获得良好的预防和治疗效果。为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：橡胶树种子脂溶性部分，该橡胶树种子脂溶性物质由下述方法中任一种制备而得：机械挤压法：以新鲜橡胶树种子为原料，烘干脱壳之后，得种仁，种仁物料在挤压之前加热到80-100℃，然后经过静态的液压挤压，或者动态的螺旋挤压，挤出液态物质为橡胶树种子脂溶性部分；溶剂浸出法：以新鲜橡胶树种子为原料，烘干脱壳之后，得种仁，将种仁进行膨化、造粒或者轧胚的与处理之后，放入密封的浸出容器，加入溶剂，所选的溶剂为6号抽提溶剂油、沸点范围30-90℃的石油醚、正己烷、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇中的一种，或者其中几种的混合物，在低于溶剂沸点的温度条件与常压下，对物料与溶剂进行搅拌与混合，或者进行超声波处理，让物料与溶剂充分接触，之后静置沉淀，沥出溶剂，然后在高于溶剂沸点的温度与真空条件下，让溶剂挥发，留下来的液态物质为橡胶树种子脂溶性部分；超临界萃取：以新鲜橡胶树种子为原料，烘干脱壳之后，得种仁，将种仁进行膨化、造粒或者轧胚处理之后，放入密封耐压的超临界萃取容器，加入溶剂二氧化碳，在超过溶剂临界温度与临界压力的条件下，对物料与溶剂进行搅拌与混合，或者进行超声波处理，让物料与溶剂充分接触。之后静置沉淀，沥出溶剂，然后在室温条件下，减小压力，让溶剂挥发，留下来的液态物质为橡胶树种子脂溶性部分。本发明同时提供了含有治疗有效量的所述的橡胶树种子脂溶性物质和药学上可接受的载体的药物组合物。以及，保健食品，由所述的橡胶树种子脂溶性物质和保健食品常用载体所组成。食品，由所述的橡胶树种子脂溶性物质和食品常用载体所组成。本发明还提供所述的橡胶树种子脂溶性物质的制备在预防和治疗动脉粥样硬化的药物中的应用。如所述的应用，其中所述的橡胶树种子脂溶性物质作为唯一活性成分。本发明此外还提供了所述的橡胶树种子脂溶性物质的制备在治疗和预防动脉粥样硬化的保健食品中的应用。以及，所述的橡胶树种子脂溶性物质的制备在预防和治疗动脉粥样硬化的食品中的应用。如所述的应用，其中所述的橡胶树种子脂溶性物质作为唯一活性成分。与现有的用于预防和治疗动脉粥样硬化的药物相比，本发明具有以下优点：1、为患有动脉粥样硬化患者提供一种全新的物质；2、无副作用，可以供患有动脉粥样硬化患者长期使用；3、安全性好，可供未患动脉粥样硬化的常人服用，有预防动脉粥样硬化的功效。附图说明（图1是本发明的具体实施方式中实施例1的实验结果统计图表，具体指说明书[0019]中所述的图1；图2是本发明具体实施方式中实施例2的实验结果统计图表，具体指说明书[0027]中所述的图2；图3是本发明的具体实施方式中实施例3的实验结果统计图表，具体指说明书[0035]中所述的图3；图4是本发明的具体实施方式中实施例4的实验结果统计图表，具体指说明书[0039]中所述的图4.）具体实施方式：实施例1以100kg新鲜橡胶树种子为原料，烘干脱壳之后，制备种仁40kg。种仁物料在热到80-100℃，然后经过静态的挤压，压力为50mpa，挤出12kg液态物质即为本发明的物质橡胶树种子脂溶性部分。1、实验动物：健康纯种新西兰雄性大白兔48只，周龄为4-6周，体重(2.24±0.87)kg.2、实验方法2.1、分组：室温15℃~20℃，按需饮水，适应性喂养１周，稳定血脂水平和代谢状况，排除饮食异常者按照随机数字表法将大白兔随机分为五组：空白对照组(n=8)喂食普通饲料100g，早晚各50g；高脂组(n＝10)喂食高脂饮食(1%胆固醇＋5%猪油＋10%蛋黄粉＋84%普通饲料100g，早晚各50g;模型组(n＝10)、本发明物质低剂量组(n＝10)、本发明物质高剂量组（n=10），阳性对照组（辛伐他汀组）(n＝10)同高脂组喂养。模型组、本发明物质低剂量组、本发明物质高剂量组、阳性对照组进行右侧颈动脉球囊损伤术，空白对照组同时进行假手术，４周末称重取耳缘静脉测定血脂水平和血清炎症因子，除空白对照组和模型组外，其他组分别给予：根据受试物人体推荐量为5g/日，按成人60kg体重计，相当于每日每公斤体重推荐低剂量为83.3mg，小鼠灌胃量是人体每日推荐低剂量83.3mg/kg的30倍，则本发明物质低剂量组2.5g/kg，本发明物质高剂量组15g/kg，阳性对照组(辛伐他汀)5mg/kg继续喂养8周，12周末称重取耳缘静脉测定血脂水平和血清炎症因子。研究期间及时移除死亡动物。2.2、造模：实验兔于术前12h禁食，不禁水，用3%戊巴比妥钠(0.5-1ml/kg)经耳缘静脉麻醉，待麻醉平稳后，仰面固定，颈部备皮，常规消毒铺巾，行颈正中切口，长度约4-5cm，暴露至甲状软骨上方水平，并分别游离右颈总动脉(cca)、右颈内动脉(ica)以及右颈外动脉(eca)于eca远心端，距离ica、eca分叉约２cm使用丝线结扎，动脉夹临时夹闭ica及cca，将eca结扎线提起，使用眼科剪于eca结扎处下游剪出约1mm的切口，送入球囊，注入生理盐水至球囊内，维持４atm压力，松开cca处动脉夹，送入球囊至10cm左右，增加球囊内压力至8-12atm，缓慢回拉球囊至剪口处，回抽球囊内液体保持４atm压力，再次将球囊送达深处，重复上述操作３次，退出球囊，结扎eca剪口下游，松开ica及cca处动脉夹，观察血管搏动及伤口情况，如有出血点结扎止血。生理盐水、安尔碘清洗术野，腿部肌肉注射庆大霉素４万单位预防感染，逐层缝合切口。空白对照组行假手术，不插入球囊，其余步骤同上。2.3、检测指标：血脂、炎症指标的检测实验动物喂养4周末，耳缘静脉采集静脉血4ml，血样静置30min，药物干预８周后，即处死前，再次耳缘静脉采集静脉血４ml，血样静置30min，应用selectra－e全自动生化仪进行检测。应用elisa法检测白细胞介素6(il－6)、单核细胞趋化蛋白—1(mcp－1)以及过氧化物酶增殖物激活受体γ(pparγ)。2.4、统计学方法：实验数据用spss19.0统计软件进行统计学分析，计量资料以均数±标准差(x±s)表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，同一受试对象前后比较采用配对t检验，以p＜0.05为差异有统计学意义。3、实验结果与分析:实验结果见图1。注：a为p<0.05，同一时期与正常组比较，b为p<0.05，同一时期与模型组比较，c为p>0.05，同一时期与阳性对照组比较，d为p<0.05同一时期与4周末水平比较。由图1可知，模型组il-6、mcp-1水平12周较4周末明显升高（p<0.05），阳性对照组，本发明物质低剂量组和本发明物质高剂量组较模型组il-6、mcp-1水平4周末和12周末明显降低（p<0.05），本发明物质高剂量组与阳性对照组比较降低程度更明显（p<0.05）。实施例2机械挤压法制备橡胶树种子脂溶性部分，所选方法为螺旋挤压法。以100kg新鲜橡胶树种子为原料，烘干脱壳之后，制备种仁40kg。种仁物料在热到80-100℃，然后经过动态的螺旋挤压，螺旋挤压时间为45秒左右，挤出15kg液态物质即为本发明的物质橡胶树种子脂溶性部分。1、实验动物：健康比格犬20只，雄性，体重在15-20kg之间，由中国科学院昆明动物研究所提供。2、实验方法2.1、分组：将比格犬随机编号进行分组，分为假手术a组、假手术b组、本发明物质低剂量组、本发明物质高剂量组、共4组，每组5只。实验期间在昆明动物研究院进行喂养，每只比格犬单独圈养，日粮为体重的4%，正常饮水，高脂饲料配制:基础饲料84.0%；牛油6.0％；花生油6.0％；牛胆盐1.0％；胆固醇3%。所有实验比格犬均在造模术前24小时及术后3天喂食阿司匹林肠溶片300mg/d，之后改为阿司匹林肠溶片100mg/d，直至实验终点。在造模过程中给予肝素钠抗凝。根据受试物人体推荐量为5g/日，按成人60kg体重计，相当于每日每公斤体重推荐低剂量为83.3mg，采食量为体重的1/5，则本发明物质低剂量组添加量为12.5g/kg（相当于人体推荐摄入低剂量的30倍），本发明物质高剂量组添加量为75g/kg，假手术b组一开始就添加本发明物质75g/kg一同喂养，假手术a组只进行高脂饲料喂养，直至实验终点。2.2、造模：本发明物质高剂量组和本发明物质低剂量组进行右侧颈动脉球囊损伤术，进行造模。假手术组造模：动物麻醉过程与狭窄模型组相同。手术方式如下：首先，消毒手术区域；其次，暴露、游离右侧颈总动脉；最后，右侧颈总动脉游离后随即逐层缝合伤口。手术完毕后，将比格犬送入饲养房中独立圈养；术后3天给予青霉素160万u肌肉注射1次/d及消毒伤口以预防感染；每天观察记录动物情况，本发明物质高剂量组，本发明物质低剂量组给予高脂饮食喂养2月后，分别进行彩超检查。本发明物质高低剂量组分别进行灌胃给药，持续灌胃4周，灌胃期间进行正常饲料喂养，正常饮水。假手术a、b组一直喂养3个月。喂养结束后再次进行彩超检查。3、实验结果与分析表2实验前后彩超检验斑块情况组别n实验前有无斑块造模后有无斑块3月后斑块是否改善假手术a组5无有否假手术b组5无有是本发明物质低剂量组5无有是本发明物质高剂量组5无有是实验前后各组imt值的变化情况见图2。注：*表示与假手术a组比较p<0.05；**表示不同时期同组比较p<0.05。由表2和图3可知，造模成功后各组颈动脉内均有斑块形成，在给药4周后本发明物质高低剂量组和假手术b组斑块均有明显改善。由表3可知，假手术b组2个月时imt值和3个月时imt值与假手术a组比较有显著差异p<0.05，说明本发明物质有一定的预防动脉粥样硬化的效果；本发明物质低剂量组不同时期比较无显著差异性，本发明物质高剂量组造模后与给药后比较imt值显著降低p<0.05，说明本发明物质有治疗动脉粥样硬化的效果。实施例3溶剂萃取法制备橡胶树种子脂溶性部分，萃取所选的溶剂为6号溶剂。以100kg新鲜橡胶树种子为原料，烘干脱壳之后，制备种仁40kg。然后将种仁进行膨化处理之后，放入密封的浸出容器，加入2倍重量的溶剂。在55℃（低于溶剂沸点）条件与常压下，对物料与溶剂进行搅拌与混合，让物料与溶剂充分接触。之后静置沉淀，沥出溶剂，然后在120℃（高于溶剂沸点温度）与100pa真空条件下，让溶剂挥发，留下来18kg液态物质即为本发明的物质橡胶树种子脂溶性部分。1、实验动物：spf级健康大鼠，由中国科学院昆明动物研究所提供，生产许可证号：scxk（滇）k2016-0005。40只，每组8只，分5组，体重200~220g。2、实验方法2.1、造模与分组：实验大鼠喂食高脂饲料（3%胆固醇、0.5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%猪油、81.3%基础饲料）每天100g，早晚各50g，喂养4周。同时在喂食开始是一次性腹腔注射维生素d³60万iu/kg，构建as模型大鼠。4周末将as模型大鼠随机分组灌胃给药。根据受试物人体推荐量为5g/日，按成人60kg体重计，相当于每日每公斤体重推荐量为83.3mg，本发明物质灌胃量是人体推荐摄入量的30倍，则本发明物质低剂量组给药2.5g/kg，本发明物质高级量组给药15g/kg，a物质（亚麻籽油）高剂量（40mg/kg）bw，b物质（紫苏油）高剂量（40mg/kg）bw，c物质（玉米胚芽油）高剂量（40mg/kg）bw。2.2、检测指标：连续灌胃40天，之后分别对as模型大鼠进行tg、hdl-c、tc进行检测分析，评估抗as效果。2.3、统计学分析：采用spss19.0软件进行数据分析，所有实验结果用表示，采用t检验，p<0.05具有统计学意义。3、实验结果与分析各组血清tc、tg、hdl-c浓度实验前后变化见图3。由图3可知，实验前各组动物血清tc的检测值无显著性差异（p>0.05）与高剂量abc物质组相比，本发明物质低、高剂量组对大鼠血清tc均有降低，高剂量组有显著差异（p<0.05）。实验前各组动物血清tg的检测值均无显著差异，与其他组相比，本发明物质低、高剂量组对大鼠血清tg均有降低，高剂量组有显著差异（p<0.05）。实验前各组动物血清hdl-c的检测值均无显著差异，与其它组相比本发明物质低、高剂量组对大鼠血清hdl-c均有升高，高剂量组有显著差异（p<0.05）。结果表明，橡胶树种子脂溶性部分的不皂化物可以有效降低大鼠血脂、甘油三脂和有效提高大鼠高密度脂蛋白胆固醇，可以有效的预防和治疗动脉粥样硬化。实施例4超临界萃取法制备橡胶树种子脂溶性部分，所选的溶剂为二氧化碳。以100kg新鲜橡胶树种子为原料，烘干脱壳之后，制备种仁40kg。将种仁进行造粒处理之后，放入密封耐压的超临界萃取容器，加入溶剂，溶剂质量为物料质量的2倍。在35℃，10mpa（超过溶剂的临界温度与临界压力）的条件下，对物料与溶剂进行搅拌与混合，让物料与溶剂充分接触。之后静置沉淀，沥出溶剂，然后在25℃室温条件下，减小压力至常压（0.1mpa），让溶剂挥发，留下来18kg液态物质即为本发明的物质橡胶树种子脂溶性部分。现与某医院合作，抽取100名颈动脉粥样硬化患者（cas）（颈动脉粥样硬化的程度可直接反应全身动脉粥样硬化的程度），将100名患者随机分为两组，本发明物质组和对照组（紫苏籽油的脂溶性部分），服用12个月，进行双盲实验。年龄和性别不是影响cas的影响因素，采用彩色多普勒超声在实验前后分别先进行检测，在实验期间随时记录患者身体状况，如有不适则立即停止实验。彩色多普勒超声检查颈动脉可清晰显示颈动脉管壁结构，清楚显示管腔的狭窄程度，检出斑块和血栓，鉴别软硬斑，能够较准确的判断颈动脉硬化的改变，提供劲动脉硬化的厚度，特征及位置信息等，且重复性好，无创伤性，是一种费用低，诊断价值显著的无创伤性诊断方法。服用本发明物质组服用量为5g/日，紫苏籽油的脂溶性部分服用量为5g/日，观察颈动脉斑块的情况，及颈动脉内膜中层厚度（imt）的改善情况。两组imt测值比较情况见图4。注：imt<1.0mm时表示正常；imt在1.0-1.2mm之间表示内膜增厚；imt在1.2-1.4mm之间表示有斑块形成；imt>1.4mm表示颈动脉狭窄。由图4可知，在实验前各案例组imt值均在1.2-1.4mm之间，表示有斑块形成，是典型的动脉粥样硬化患者。在服用本发明物质后与对照组比较imt值有显著改善。且在服用期间没有发现有其他不适症状产生。服用本发明物质组患者明显感觉身体变得越来越好。实施例5：按实施例1-4中的方法制得本发明的橡胶树种子脂溶性部分，按该部分与赋形剂重量比1:1或1:2的比例加入赋形剂，制粒压片。片剂可以作为药品，保健食品或者食品。实施例6：按实施例1-4中的方法制得本发明的橡胶树种子脂溶性部分，按该部分，包裹在软胶囊囊材中，按常规胶囊制剂方法制成软胶囊。软胶囊可以作为药品，保健食品或者食品。实施例7：按实施例1-4中的方法制得本发明的橡胶树种子脂溶性部分，以该部分，加上乳化剂、渗透压调节剂和水，经过高压均质乳化，得到注射用乳剂。实施例8：按实施例1-4中的方法制得本发明的橡胶树种子脂溶性部分，按该部分，再按下述方法制成片剂：片剂：橡胶树种子脂溶性部分100mg淀粉适量玉米浆适量硬脂酸镁适量制备方法：将橡胶树种子脂溶性部分与助剂混合，过筛，在合适的容器中均匀混合，把得到的混合物制粒压片。实施例9：按实施例1-4中的方法制得本发明的橡胶树种子脂溶性部分，按该部分，再按下述方法制成软胶囊剂：软胶囊剂：橡胶树种子脂溶性部分1000mg明胶适量甘油适量水适量制备方法：将明胶、甘油放入蒸馏水中浸泡使明胶膨胀、软化，然后搅拌混合均匀，得到囊材胶液。取出配制好的囊材胶液，涂在平坦的板表面上，使厚薄均匀，然后用90℃左右的温度加热，使表面水分蒸发，成为有一定韧性、有一定弹性的软胶片。最后用压丸模具或者自动旋转轧囊机，将橡胶树种子脂溶性部分（1000mg）装入软胶囊皮中，生产出软胶囊。实施例10：按实施例1-4中的方法制得本发明的橡胶树种子脂溶性部分，按该部分，再按下述方法制成注射乳剂：注射乳剂：橡胶树种子脂溶性部分200g卵磷脂适量甘油适量氯化钠适量水适量制备方法：按照配方，将橡胶树种子脂溶性部分，卵磷脂，甘油混合，加水至1000ml，加适量氯化钠调整渗透压，高压均质乳化，121℃灭菌，降至室温，即得到注射乳剂。实施例11：片剂：按实施例1-4中的方法制得本发明的橡胶树种子脂溶性部分10mg，乳糖180mg，淀粉55mg，硬脂酸镁5mg；制备方法：将按实施例1-4中的方法制得本发明的橡胶树种子脂溶性部分、乳糖和淀粉混合，用水均匀湿润，把湿润后的混合物过筛并干燥，再过筛，加入硬脂酸镁，然后将混合物压片，每片重250mg，本发明的橡胶树种子脂溶性部分含量为10mg。实施例12：胶囊剂：按实施例1-4中的方法制得本发明的橡胶树种子脂溶性部分2000g，明胶1000g，甘油500g，水1000g。制备方法：将明胶1000g、甘油500g，放入1000g水中浸泡使明胶膨胀、软化，然后搅拌混合均匀，得到囊材胶液。取出配制好的囊材胶液，涂在平坦的板表面上，使厚薄均匀，然后用90℃左右的温度加热，使表面水分蒸发，成为有一定韧性、有一定弹性的软胶片。最后用压丸模具或者自动旋转轧囊机，将橡胶树种子脂溶性部分1000mg装入软胶囊皮中，制得软胶囊。每粒软胶囊重1.4g,本发明的橡胶树种子脂溶性部分含量为1000mg。实施例13：注射乳剂：按实施例1-4中的方法制得本发明的橡胶树种子脂溶性部分200g，甘油25g，卵磷脂12g，水1000g，氯化钠1g。制备方法：精确称量按实施例1-4中的方法制得本发明的橡胶树种子脂溶性部分200g、甘油25g、卵磷脂12g，混合，加水至1000ml,添加氯化钠，将渗透压调整至350mosm/kgh2o。高压均质乳化得到乳浊液，121℃灭菌，降至室温，在无菌条件下灌装到250ml的无菌玻璃瓶中封装。每瓶注射乳剂规格为250ml,本发明的橡胶树种子脂溶性部分含量为50g。实施例14：食品：按实施例1-4中的方法制得本发明的橡胶树种子脂溶性部分，按该部分与普通食用油调和，直接成为食品（食用油）。制备方法：10kg按实施例1-4中的方法制得本发明的橡胶树种子脂溶性部分，添加到10kg棕榈油中，得到20kg调和食用油。将调和食用油灌装成500g的玻璃瓶，本发明的橡胶树种子脂溶性部分含量为250g。当前第1页12