专利名称：抗动脉粥样硬化血栓形成的化合物在制备用于治疗血管障碍的药物中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及血栓烷-前列腺素(TP)受体的特异性拮抗剂在制备用于在先前患有脑血管意外(CVA)的患者中治疗血管障碍，特别是用于在先前患有脑缺血意外(CIA)或短暂性缺血发作(TIA)的患者中减少脑血管和心血管事件的药物中的用途。
背景技术：
血栓烷A2(TXA2)为花生四烯酸的不稳定代谢物，在许多心血管障碍的发病机理中涉及到它。
TXA2和其它的花生四烯酸代谢物如内过氧化物(PGG2/PGH2)、HETE和异构前列腺素(isoprostanes)是被称为TP受体(血栓烷-前列腺素-内过氧化物)的共同受体的配体。它们与TP受体的结合带来有害的作用血小板活化和凝集、内皮功能异常、血管收缩和细胞增生。
动脉粥样硬化是一种慢性炎症疾病，造成炎症反应的有害活性剂为以氧化形式在内皮下积聚的LDL胆固醇。在动脉粥样硬化的过程中在几个水平上涉及炎症1)内皮和单淋巴细胞募集的活化；2)促炎细胞因子的局部和全身性生成；3)造成纤维帽蛋白质的降解和斑块的去稳定化的细胞外基质蛋白酶(金属蛋白酶)的生成；4)斑块细胞凋亡的诱导和促凝血性脂核的形成。
所形成的动脉粥样硬化斑在局部炎症和氧化应激的刺激下可破裂，引起血小板在表面的凝聚，从而导致阻塞。斑上血栓形成的出现被称为“动脉粥样硬化血栓形成”。
破裂主要(但不仅仅)涉及拥有大的脂核(占斑块总体积的40％以上)和富含巨噬细胞而平滑肌细胞含量很少的纤维帽的斑块。它是由于纤维帽经受的血液动力学应激和控制它对抗破裂的内固性之间存在不平衡的结果。
在近来的对于动脉粥样硬化的治疗策略中，针对斑块中的炎症似乎是重要的。动脉粥样硬化斑的稳定化需要降低它的炎症组分以有利于它的纤维组分。
近来，以预防与心血管和神经血管系统中血栓烷A2的大量生成有关的现象为目的，进行了大量的研究。在这些拮抗剂中，那些在专利说明书EP648 741中描述的拮抗剂已被证实是TP受体的强大的和选择性的拮抗剂，其通过口服途径施用是有活性的，并拥有长的作用时间。
更具体地，以外消旋形式或以旋光纯异构体形式以及其可药用盐形式存在的式(I)的3-{6-[(4-氯苯基磺酰基)氨基]-2-甲基-5，6，7，8-四氢萘-1-基}丙酸 是一种特异性的TP受体拮抗剂，已发现其具有强大的抗动脉粥样硬化血栓形成作用。
式(I)化合物通过阻滞由血栓烷A2和其它的TP受体配体诱导的血小板聚集起作用，而不管它们的来源如何(血小板或血小板外)。它还通过抑制由血栓烷A2诱导的血管收缩和通过对抗血管壁的内皮功能异常、增生和炎症而进一步起作用。
式(I)化合物相应地具有抗血小板凝集、抗血栓形成、抗炎、抗增生和抗血管收缩的性质。
它在动脉粥样硬化症中的有益作用可能是由于抑制单核细胞/巨噬细胞浸润进入斑块的结果，这可能是通过抑制血管粘着分子的表达而实现的。由于这些炎症细胞影响着斑块的稳定性，在长的时间段内降低单核细胞募集入血管壁可稳定斑块。除此之外，该化合物的抗血栓形成作用还可降低血管炎症以及通过血小板粘附于内皮而控制的内皮活化，并可降低血小板、内皮、平滑肌细胞和单核细胞之间的促凝血和促氧化相互作用，该相互作用在本质上是炎症性的。
在欧洲专利说明书EP 0 648 741中，已经描述了3-{6-[(4-氯苯基磺酰基)氨基]-2-甲基-5，6，7，8-四氢萘-1-基}丙酸，它的盐和它的旋光异构体、其制备和其在治疗学上的用途。
发明内容
本申请人现已令人惊奇地发现，以光学活性异构体形式和盐形式存在的式(I)化合物，优选构型(R)和钠盐形式，具有有价值的性质，使得它可用于在患有先前的脑血管意外的患者中治疗血管障碍，特别是在患有先前的CIA或TIA的患者中降低脑血管和心血管事件的发生。
令人惊奇地，优选以钠盐形式存在的(R)构型的式(I)化合物的作用与其它的抗血小板凝集剂有所不同的确，在低剂量时，阿司匹林并不具有直接的抗动脉粥样硬化或抗动脉粥样硬化的作用。它并不抑制新血管内膜的形成和炎症细胞在血管壁的聚积。对于氯吡格雷来说，也没有提出其在人类中的血管作用。作为氯吡格雷的靶的P2Y12受体在内皮细胞中并不存在。
我们已经令人惊奇地证实了式(I)化合物在动物模型(钠负载的SHR-SP大鼠)中的次级保护性质。令人惊奇地，这些性质似乎与化合物的引起氧化应激降低作用有关。在许多出版物中已经证实了在脑病理学中氧化应激的重要性(Margaill I，Plotkine M，Lerouet D，Free Radical Biology &Medicine，2005，39，429-443；Crack PJ，Taylor JM，Free Radical Biology &Medicine，2005，38，1433-1444)。在脑血管病理学中式(I)化合物对氧化应激的作用的发现提示它在如本发明所述的研究中的可能用途。
SHR-SP大鼠代表着原发性高血压的比较明确的实验模型。这些大鼠形成了严重的自发性高血压，这迅速地导致了脑损伤的形成。它们对富盐饮食高度敏感，富盐饮食可导致恶性肾硬化的产生(Griffin KA，ChurchillPC，Picken，Webb RC，Kurtz TW，Bidani AK，Am.J.Hypertens.，2001，14(4 Pt 1)311-20)，导致动脉压和氧化应激的升高(Park JB，Touyz RM，Chen X，Schiffrin EL，Am.J.Hypertens.，2002，15(1 Pt1)78-84；ManningRD，Meng S，Tien N，Acta Physiol.Scand.，2003，179243-250)并加重了血管损伤和心脏肥大(Kyselovic J，Morel N，Wibo M，Godfraind T，J.Hypertens.，1998，16(10)1515-22)。此外，SHR-SP大鼠是可自发产生复杂性脑血管障碍的唯一动物模型(Volpe M，Russo R，Veccione C，Savoia C，Piras O，Gigante B，Lindpaintner K，Rubattu S，J.Hypertens.，1998，16S31-S35；Guerrini U，Sironi L，Tremoli E，Cimino M，Pollo B，Calvio AM，Paoletti R，Asdente M，Stroke，2002，33(3)825-30)。通过ESR(电子自旋共振)光谱进行的SHR-SP大鼠脑分析表明与血压正常的WKY大鼠相比氧化应激的水平升高了(Miyazaki H，Shoji H，Lee MC，Redox Rep.，2002，260-2657)。有人提出氧化应激的升高可能导致血脑屏障的破坏(Kim-Mitsuyama S，Yamamoto E，Tanaka T，Zhan Y，Izumi Y，Izumiya Y，Ioroi T，Wanibuchi H，Iwao H，Stroke，2005，361077-1082)，其是由过氧化作用和DNA及蛋白质损伤导致的细胞脂质膜的损伤引起的。这些脑的障碍经常与导致动物死亡的脑血管意外发生之前的临床行为体征(昏睡或挑衅、惊厥、肢体瘫痪)有关。
在急性脑意外的预防中，钠负载的SHR-SP大鼠模型似乎是评价式(I)化合物的一个良好的靶。的确，选择10至15周之间的治疗期提供了脑发作的复发事件的极好的模型。在10周之前，大鼠已经经历了非致命的脑发作(例如昏睡、惊厥)，作为结果，我们可以分析是否式(I)化合物可预防或延缓继发的脑意外的发生。
在这一方面，该大鼠模型类似于人的情况，更具体地，类似于在本专利申请说明书中描述的研究的情况，在该情况中，患者已经有了第一次脑意外，且研究涉及用式(I)的化合物进行治疗以预防有生命危险的第二次事件(脑或心血管)的作用。
相应地，本发明涉及以光学活性异构体形式并优选以盐形式存在的式(I)化合物在制备用于在患有先前的脑血管意外的患者中治疗血管障碍，特别是在患有先前的CIA或TIA的患者中降低脑血管和心血管事件的发生的药物组合物中的用途。
在式(I)化合物的加成盐中，可以提到但不仅限于与可药用碱的加成盐，例如钠盐、钾盐、叔丁胺盐、二乙胺盐等。
优选地，使用的盐是钠盐。
在根据本发明的组合物中，式(I)化合物优选具有绝对构型(R)。
将以适用于口服、肠胃外、经皮、鼻腔、直肠和经舌的途径施用的形式提供药物组合物，特别是可注射的制剂、片剂、舌下片、glossettes、明胶胶囊、胶囊、锭剂、栓剂、乳膏、软膏、皮肤凝胶等形式。
根据本发明的药物组合物包含一种或多种选自稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、吸收剂、着色剂、甜味剂等的赋形剂或载体。
使用的剂量不根据患者的性别、年龄或体重、障碍的性质或任何相关的治疗而变化。
使用式(I)化合物的(R)异构体的钠盐进行研究。
在根据本发明的组合物中，对于式(I)化合物的(R)异构体的钠盐而言，活性成分的量为5至100mg。优选地，式(I)化合物的(R)异构体的钠盐的日剂量为30mg每天。
图1显示了与载体相比，用式(I)化合物的(R)异构体的钠盐进行处理对动物存活率的影响。
图2显示了与载体相比，用式(I)化合物的(R)异构体的钠盐进行处理对动物心脏肥大的影响。
图3显示了与载体相比，用式(I)化合物的(R)异构体的钠盐进行处理对动物氧化应激的影响。
图4显示了与载体相比，用式(I)化合物的(R)异构体的钠盐进行处理对动物急性炎症的影响。
具体实施例方式
临床前资料式(I)化合物(R)异构体的钠盐的抗血栓形成作用在颈动脉血栓形成的多种模型中得到证实，体内血管电解作用(狗)、机械损伤(豚鼠)和电刺激(大鼠)，在体外(ex vivo)通过玻璃毛细管的颈动脉-颈动脉动脉旁路式(I)化合物的(R)异构体的钠盐以剂量依赖的方式延长了阻塞时间。
在实验模型中探索性研究了式(I)化合物的(R)异构体的钠盐的抗增生、抗动脉粥样硬化和抗炎作用它显著地降低了动脉粥样硬化损伤的表面积，血管壁的厚度和内膜/中膜比值而没有降低血清胆固醇的水平。它也抑制了巨噬细胞浸润进入血管壁和粘着分子特别是标志物如内皮素、ICAM和VCAM的表达。
动物模型钠负载的SHR-SP大鼠材料和方法动物的监察将在它们的饮用水中含有1％NaCl的10周龄雄性SHR-SP大鼠(Charles River)随机分成两组，并用含有式(I)化合物的(R)异构体的钠盐(30mg/kg/天)的饲料或不含该化合物的饲料进行处理。
在第一个研究中，通过计算在开始治疗后每天的动物存活百分数确定每组的存活。
在第二个研究中，将10至15周龄之间的大鼠监察5周，然后处死以定量氧化应激的尿标志物(8-OH-dG)和反映急性炎症的血浆标志物(T-激肽原(thiostain)，在大鼠中其是CRP的等同物)并确定心脏肥大。
生理学参数在监察的最后24小时，将动物置于单个的代谢笼中并在无菌试管(200μl的2mM EDTA)中收集尿液。测量尿液并通过ELISA测定(Oxis，Bioxytech)定量8-羟基-2’-脱氧鸟苷(8-OH-dG)的生成。
通过腹膜注射戊巴比妥钠(50mg/kg，Ceva laboratories)将大鼠麻醉。从颈动脉取血样(将样品置于5000IU/ml的肝素中)以通过ELISA测定(LifeDiagnostics)测量T-激肽原的生成。将心脏切除，擦干并称重，通过将每只动物的心脏干重与体重相除实现测量的标准化，通过这一方法确定心脏的肥大。
统计将结果以均值±S.E.M.报告。如果Student's t检验的P＜0.05则认为差别是显著的。动物的存活在Kaplan-Meier图上表示，在log-rank检验后P＜0.05则认为是显著的。
结果1)动物的存活百分数(图1)计算两组大鼠的动物存活百分数。对于载体组，一半的大鼠在开始监察后57天死亡，而在用式(I)的化合物的(R)异构体的钠盐进行处理的组，一半的大鼠在处理的99天后死亡。
该结果表明式(I)化合物的(R)异构体的钠盐可预防动物濒临死亡并因而提高了存活百分数。
2)心脏肥大(图2)在载体组的大鼠中心脏的质量有很大的增加，这一点可从该器官的大小的增加或肥大中得到反映。当将这些动物用式(I)化合物的(R)异构体的钠盐进行处理时，心脏的肥大较不显著。
该结果表明式(I)化合物的(R)异构体的钠盐可减慢心脏肥大的速度。
3)氧化应激(图3)载体组的大鼠呈现出氧化应激，其可通过尿标志物如8-OH-dG而确定。与载体组的动物相比，接受式(I)化合物的(R)异构体的钠盐组的动物在24小时内出现在尿中的8-OH-dG的总量得到降低。
这一结果表明式(I)化合物的(R)异构体的钠盐可以降低氧化应激的水平。
4)急性炎症(图4)T-激肽原是在炎症急性阶段产生的蛋白质。该蛋白质在载体组大鼠的血浆中显著增加。当用式(I)化合物的(R)异构体的钠盐处理动物时，血浆中T-激肽原的量较低。
该结果表明式(I)化合物的(R)异构体的钠盐可减慢急性炎症的确立。
临床资料还在缺血性CVA的高危患者中评价了式(I)化合物的(R)异构体的钠盐的体外(ex vivo)抗血栓形成活性，在给药10天后式(I)化合物优于阿司匹林的优越性在灌注室模型的主要参数中得到证实(血栓的总表面积和密集表面积，％粘着)。在本研究中，式(I)化合物的(R)异构体的钠盐对于被测定的炎症标志物(sVCAM、sPAI-1、sP-选择蛋白、凝血调节蛋白)也有作用。
给具有高的心血管风险和异常充血试验且正用阿司匹林治疗的动脉粥样硬化患者单次或慢性施用式(I)的化合物的外周血管运动反应研究证实了式(I)化合物在通过激发的充血试验(桡动脉的生理刺激)评价的内皮依赖性血管舒张中优于安慰剂。该优越性无论何种剂量，无论是单次施用或重复施用(15天)均可观察到，该血管舒张作用是在施用药物后约2小时评价的。结论(R)异构体形式的式(I)化合物、优选钠盐形式，具有抗血小板凝集、抗血栓形成、抗炎、抗增生和抗血管收缩的性质，因此可作为抗动脉粥样硬化血栓形成剂在动脉粥样硬化血栓形成疾病中、特别是在具有先前的脑缺血意外的患者中用于心血管意外的次级预防。
权利要求
1.旋光异构体或其可药用盐形式的式(I)的3-{6-[(4-氯苯基磺酰基)氨基]-2-甲基-5，6，7，8-四氢萘-1-基}丙酸在制备用于在患有先前的脑血管意外的患者中治疗血管障碍的药物中的用途
2.根据权利要求1的旋光异构体或其可药用盐形式的式(I)的3-{6-[(4-氯苯基磺酰基)氨基]-2-甲基-5，6，7，8-四氢萘-1-基}丙酸的用途，用于制备用于在患有先前的脑意外的患者中降低脑血管和心血管事件的药物。
3.根据权利要求1或2的旋光异构体或其可药用盐形式的式(I)的3-{6-[(4-氯苯基磺酰基)氨基]-2-甲基-5，6，7，8-四氢萘-1-基}丙酸的用途，用于制备用于在患有先前的脑缺血意外的患者中降低脑血管和心血管事件的药物。
4.根据权利要求1或2的旋光异构体或其可药用盐形式的式(I)的3-{6-[(4-氯苯基磺酰基)氨基]-2-甲基-5，6，7，8-四氢萘-1-基}丙酸的用途，用于制备用于在患有先前的短暂性缺血发作的患者中降低脑血管和心血管事件的药物。
5.根据权利要求1至4中任何一项的式(I)的3-{6-[(4-氯苯基磺酰基)氨基]-2-甲基-5，6，7，8-四氢萘-1-基}丙酸的用途，其特征在于式(I)化合物以构型(R)的旋光异构体形式和以钠盐的形式存在。
6.根据权利要求1至5中任何一项的用途，其特征在于式(I)化合物的(R)异构体以钠盐的形式提供。
7.根据权利要求1至6中任何一项的药物组合物，用于制备在患有先前的脑血管意外的患者中治疗血管障碍的药物。
8.根据权利要求7的药物组合物，其特征在于式(I)的3-{6-[(4-氯苯基磺酰基)氨基]-2-甲基-5，6，7，8-四氢萘-1-基}丙酸以构型(R)的旋光异构体形式存在。
9.根据权利要求7或8的药物组合物，其特征在于构型(R)的式(I)的3-{6-[(4-氯苯基磺酰基)氨基]-2-甲基-5，6，7，8-四氢萘-1-基}丙酸以钠盐形式存在。
10.根据权利要求7至9中任何一项的药物组合物，其特征在于式(I)化合物的(R)异构体的钠盐的量为5至100mg。
11.根据权利要求7至10中任何一项的药物组合物，其特征在于式(I)化合物的(R)异构体的钠盐的量为30mg每天。
全文摘要
本发明涉及抗动脉粥样硬化血栓形成的化合物在制备用于治疗血管障碍的药物中的用途。本发明尤其涉及TP受体的特异性拮抗剂在制备用于在先前患有脑血管意外的患者中治疗血管障碍，特别是用于在先前患有脑缺血意外(CIA)或短暂性缺血发作(TIA)的患者中减少脑血管和心血管事件的药物中的用途。
文档编号A61P9/10GK101049292SQ20071009107
公开日2007年10月10日 申请日期2007年4月6日 优先权日2006年4月7日
发明者M-D·弗拉塔奇, 科尔杜 A·德, L·勒龙, T·韦伯朗, A·吕潘, G·拉维埃勒 申请人:瑟维尔实验室