银松素的用途及制备方法与流程

本发明涉及银松素用于神经抑制的药物的用途及制备方法，具体涉及银松素(反-3,5-二羟基二苯乙烯)在抗精神病药领域的应用。

背景技术：

银松素(pinosylvin)是一种自然反式1,2-二苯乙烯的衍生物,出现在松树和桉树的木材纸浆及茶叶油和草本药物中,是一种芪。

由于银松素类衍生物分子结构和性质十分相似，在实验中提纯非常困难，目前对银松素尚无广泛的药理研究，但二苯乙烯衍生物通过非泌尿途径消除在体内被广泛地葡萄糖醛酸化，因而具有良好的抗氧化作用，有大量研究支持。二苯乙烯其它衍生物如白藜芦醇等已进行了较为广泛的药理研究，是各类抗氧化产品研究开发的热点。银松素对于很多种菌类有十分有效的抗菌活性，当树木受到真菌感染时，树木就分泌银松素作为一种植物抗毒素，因此，银松素对动物的抗氧化、抗菌作用研究开发前景广阔。

但是，迄今为止有关银松素的其他更加高效和确切的作用靶点、机制等尚未被发现，经研究发现银松素对神经活动具有一定的抑制作用。经过进一步的研究发现，银松素在斑马鱼体内对斑马鱼的神经发育具有良好的干预效果，不同浓度下银松素对斑马鱼的神经发育呈现抑制作用。

临床上已使用的抗精神病药有9大类、40余种，其中常用的有吩噻嗪类、硫杂蒽类、丁酰苯类、苯甲酰胺类和二苯氧氮平类。主要用于治疗精神分裂症和预防精神分裂症的复发，还用于治疗其它精神病性精神障碍。

技术实现要素：

本发明要解决的技术问题是提供一种银松素的用途及制备方法，经研究发现，银松素具有强烈的阻断神经信号转导系激活的作用，银松素晶体可以与神经元发生专一性结合，并发生强大的神经抑制作用。

为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种银松素的用途，所述银松素的化学式如(i)，所述银松素用于制备抑制神经活动的药物；

其中，所述银松素属于无色针晶，m.p.153～155℃；ei-msm/z:212(m+)

其中，所述银松素用于制备抗精神病药物。

优选的，所述银松素用于制备抑制神经活跃的药物时，有效剂量的范围在0.01ug/ml-10ug/ml。

其中，所述银松素可制成医疗上可接受的口服制剂、注射剂、颗粒剂、丸剂、胶囊剂、散剂、缓释、控释制剂、靶向制剂及其它给药途径的制剂。

本发明还提供一种银松素的制备方法，制备反应式为：

所述制备方法包括如下步骤：

(1)

将1-(2-(3,5-二甲氧基苯基)乙炔基)苯0.1～0.4mmol、23.8～95.6mg，双(1,5-环辛二烯)氯化铱(i)二聚体0.001～0.01mmol、0.84～8.4mg，1,2-双(二苯基膦)乙烷0.02～0.08mmol、7.95～31.8mg，在氮气保护下加入到15ml耐压管，再加入etoh2～8mmol、116～464ml和thf1.5ml，将反应液加温至120℃，搅拌反应24h，待反应完毕，冷却至室温，加入10ml乙酸乙酯稀释；

反应混合液用饱和食盐水洗涤3次，有机相乙酸乙酯萃取，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩粗产物柱层析纯化，得白色产物e-1,2-双(4-甲氧基苯基)乙烯基)苯；

(2)将e-1,2-双(4-甲氧基苯基)乙烯基)苯0.1～0.4mmol、24～96mg在氮气保护下加入6ml无水二氯甲烷溶解，–20℃下搅拌并缓慢滴加三溴化硼0.67～2.68mmol、0.17～0.68mg，30％溶解于无水二氯甲烷中；

混合液在氮气保护下搅拌，并缓慢升至室温，反应4～5h，反应完毕后加入10ml水，二氯甲烷萃取3次，再用食盐水洗涤，然后无水硫酸钠干燥，减压浓缩粗产物柱层析纯化，得二苯乙烯衍生物银松素。

本发明还提供一种银松素抑制神经的实验方法，包括如下步骤：

(1)选择空白对照组为斑马鱼e3培养液，另一对照组为抗抑郁药物硫酸苯乙肼，采用e3培养液稀释，斑马鱼培养液e3稀释配制不同浓度的银松素，收集转基因斑马鱼系tg(hb9：gfp)胚胎，在显微镜下筛选胚胎以除去形态异常的个体，将约10个健康胚胎加入含有e3溶液中的96孔板的孔中；

(2)在6hpf时，去除e3培养液，加入200μl含有不同浓度的待筛选化合物稀释液，复孔实验；在6hpf时，挑出死去的胚胎；

(3)在55hpf时，将斑马鱼用e3/0.16mg/mltricaine/1％1-phenyl-2-thiourea麻醉后，包埋到0.8％的低熔点琼脂糖里面，使用共聚焦成像观察胚胎，观察实验结果，得到：正常对照组斑马鱼神经生长状态图、低剂量银松素处理过的斑马鱼胚胎神经生长状态图、中剂量银松素处理过的斑马鱼胚胎神经生长状态图、高剂量银松素处理过的斑马鱼胚胎神经生长状态图、低剂量、硫酸苯乙肼药品处理过的斑马鱼胚胎神经生长状态图、中剂量硫酸苯乙肼药品处理过的斑马鱼胚胎神经生长状态图、高剂量硫酸苯乙肼药品处理过的斑马鱼胚胎神经生长状态图，结果显示银松素对神经发育有明显抑制作用。

本发明的上述技术方案的有益效果如下：本发明根据对银松素的研究发现，银松素具有强烈的阻断神经信号转导系激活的作用，进一步的实验证明银松素晶体可以与神经元发生专一性结合，并发生强大的神经抑制作用。

附图说明

图1为本发明实施例一中化合物二的氢谱谱图；

图2为本发明实施例一中化合物二的碳谱谱图；

图3为本发明实施例一中银松素的氢谱谱图；

图4为本发明实施例一中银松素的碳谱谱图；

图5为本发明实施例二中斑马鱼胚胎神经生长状态图。

具体实施方式

为使本发明要解决的技术问题、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图及具体实施例进行详细描述。

实施例1

本发明提供了一种银松素的制备方法，制备反应式为：

将1-(2-(3,5-二甲氧基苯基)乙炔基)苯0.2mmol、47.6mg，双(1,5-环辛二烯)氯化铱(i)二聚体0.005mmol，4.2mg，1,2-双(二苯基膦)乙烷0.04mmol、15.9mg，在氮气保护下加入到15ml耐压管，再加入etoh4mmol、232ml和thf1.5ml，反应液在120℃下搅拌24h，待反应完毕，冷却至室温，加入10ml乙酸乙酯稀释。

反应混合液饱和食盐水洗涤3次，有机相乙酸乙酯萃取，有机相无水硫酸钠干燥，减压浓缩粗产物柱层析纯化(乙酸乙酯/石油醚＝1/4)，得e-1,2-双(4-甲氧基苯基)乙烯基)苯，白色固体38mg，收率80％。

1hnmr(400mhz，cdcl3):δ7.51-7.49(m,2h),7.37-7.33(m,2h),7.28-7.24(m,1h),7.09(d,j＝16.4hz,1h),7.03(d,j＝16.4hz,1h),6.7(d,j＝2.4hz,2h),6.40(t,j＝2.0hz,1h),3.82(s,6h)；如图1所示。

13cnmr(100mhz,(cd3)2co):δ161.1,139.5,137.3,129.3,128.8,128.8,127.9,126.7,104.7,100.1,55.5；如图2所示。

将e-1-(2-(3,5-二甲氧基苯基)乙烯基)苯，0.2mmol、48mg，在氮气保护下加入6ml无水二氯甲烷溶解，–20℃下搅拌并缓慢滴加三溴化硼0.34g、1.34mmol，30％溶解于无水二氯甲烷中。混合液在氮气保护下搅拌，并缓慢升至室温，反应4～5h，反应完毕加入10ml水，二氯甲烷萃取3次，再用食盐水洗涤，然后无水硫酸钠干燥。减压浓缩粗产物柱层析纯化(正己烷/丙酮＝6/4)，得银松素，白色固体35mg，收率83％。

1hnmr(400mhz,(cd3)2co):δ7.57(d,j＝7.2hz,2h),7.35(t,j＝7.2hz,2h),7.25(t,j＝7.2hz,1h),7.10(s,2h),6.60(d,j＝2.0hz,2h),6.32(t,j＝2.4hz,1h)；如图3所示。

13cnmr(100mhz,(cd3)2co):δ159.6,140.4,138.4,129.8,129.5,129.2,128.3,127.3,105.9,103.1；如图4所示。

实施例2

本发明还提供一种利用实施例1所述的制备方法制备的银松素的用途，用于制备抗精神病药物，下面通过具体的实验过程验证银松素及其晶体对神经活动的抑制作用。

本实验中空白对照组为斑马鱼e3培养液，另一对照组为抗抑郁药物硫酸苯乙肼，采用e3培养液稀释(1g/ml、0.1g/ml、0.01g/ml)，斑马鱼培养液e3稀释配制不同浓度的银松素(1g/ml、0.1g/ml、0.01g/ml，注：不溶的话加少许dmso，不超过0.5％)。收集转基因斑马鱼系tg(hb9：gfp)胚胎，在显微镜下筛选胚胎以除去形态异常的个体。将约10个健康胚胎加入含有e3溶液中的96孔板的孔中。

在6hpf时，去除e3培养液，加入200μl含有不同浓度的待筛选化合物稀释液，复孔实验。在6hpf时，挑出死去的胚胎。在55hpf时，将斑马鱼用e3/0.16mg/mltricaine/1％1-phenyl-2-thiourea麻醉后，包埋到0.8％的低熔点琼脂糖里面，使用共聚焦成像观察胚胎。观察结果见附图5，图5(a)为正常对照组斑马鱼神经生长状态图；图5(b)为低剂量(0.01g/ml)银松素处理过的斑马鱼胚胎神经生长状态图；图5(c)为中剂量(0.1g/ml)银松素处理过的斑马鱼胚胎神经生长状态图；图5(d)为高剂量(1g/ml)银松素处理过的斑马鱼胚胎神经生长状态图；图5(e)为低剂量(0.01g/ml)硫酸苯乙肼药品处理过的斑马鱼胚胎神经生长状态图；图5(f)为中剂量(0.1g/ml)硫酸苯乙肼药品处理过的斑马鱼胚胎神经生长状态图；图5(g)为高剂量(1g/ml)硫酸苯乙肼药品处理过的斑马鱼胚胎神经生长状态图，结果显示银松素对神经发育有明显抑制作用。

以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明所述原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。