一种蜂蜜提取物及其制备方法和应用与流程

本发明涉及提取物的制备及应用领域，具体涉及一种蜂蜜提取物及其制备方法和应用。

背景技术：

蜂蜜是蜜蜂将采集的植物花蜜，混以蜜蜂唾液腺的分泌物，经过充分酿造而贮藏在巢脾内的甜物质。其中糖类成分占70％以上，水分占16％-25％，蛋白质平均含量为0.16％。蜂蜜不仅是一种营养价值高的保健食品，而且具有多种生物学活性，如抗氧化、解毒、消炎、抗癌、保护创面、促进细胞再生等。

技术实现要素：

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处而提供一种蜂蜜提取物及其制备方法和应用。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种蜂蜜提取物的制备方法，所述方法包括以下步骤：

(1)用水、乙醇、乙酸乙酯的混合溶液溶解蜂蜜，所述混合溶液与蜂蜜的质量比为80-100：5-15，水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为70-80：5-15：1-5；

(2)固液分离去除不溶物，得到上清液a；

(3)取上清液a倒入反相萃取柱上样，用步骤(1)中所述混合液体积5％-10％的超纯水洗涤，收集在上样过程中和所述超纯水洗涤过程中的流出液b；

(4)用乙酸-乙醇溶解洗脱，收集洗脱液c；所述乙酸-乙醇的体积比为3-7：90-100；

(5)将所述流出液b过阳离子树脂柱，用2-5％的nacl溶液洗脱，收集洗脱液d；

(6)将所述洗脱液c和洗脱液d混合后40℃以下浓缩至干燥，得到所述的蜂蜜提取物。

优选地，步骤(1)中所述水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为70-80：8-12：1-5。

优选地，步骤(1)中所述水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为70-80：8-12：2-3。

优选地，步骤(1)中所述水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为75：8-12：2-3。

优选地，步骤(1)中所述水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为75：10：3。

优选地，步骤(4)中所述乙酸-乙醇的体积比为4-5：100。

优选地，步骤(5)中用2-5％的nacl溶液洗脱。

优选地，所述反相萃取柱为strata-x反相萃取柱、pharma反相萃取柱、hlb反相萃取柱、brp反相萃取柱、strata-x-a反相萃取柱。

优选地，所述反相萃取柱为hlb反相萃取柱、brp反相萃取柱、strata-x-a反相萃取柱。

本发明还提供一种上述任一所述蜂蜜提取物的制备方法制备得到的蜂蜜提取物。

本发明还提供一种上述任一所述蜂蜜提取物的制备方法制备得到的蜂蜜提取物在护肤品和营养粉中的应用。

本发明还提供一种护肤品，所述护肤品包含占所述护肤品重量1-5％的上述所述的蜂蜜提取物。

本发明还提供一种冲泡营养粉，所述营养品包含占所述营养品重量2-8％的上述所述的蜂蜜提取物，所述营养粉的冲泡温度为35-40℃。

本发明的有益效果在于：本发明提供了一种蜂蜜提取物及其制备方法和应用，本发明的制备方法结合水、乙醇、乙酸乙酯溶解蜂蜜后，通过反相萃取柱、阳离子树脂柱进行提取，使得制备得到的蜂蜜提取物的多酚含量、黄酮含量和氨基酸含量较高，本发明的制备的蜂蜜提取物具有很好的dpph·自由基抗氧化能力，且提取物中的氨基酸在应用于护肤品中可以提供皮肤修复的养分，而且本发明的提取物也可以用于营养品。

附图说明

图1为本发明实施例的蜂蜜提取物的检测结果对比图。

图2为本发明实施例的蜂蜜提取物的检测结果对比图。

图3为本发明实施例的蜂蜜提取物的检测结果对比图。

图4为本发明实施例的蜂蜜提取物的检测结果对比图。

具体实施方式

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，所述方法包括以下步骤：

(1)用水、乙醇、乙酸乙酯的混合溶液溶解蜂蜜，所述混合溶液与蜂蜜的质量比为100：10，水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为75：10：3；

(2)固液分离去除不溶物，得到上清液a；

(3)取上清液倒入反相萃取柱上样，用步骤(1)中所述混合液体积8％的超纯水洗涤，收集在上样过程中和所述超纯水洗涤过程中的流出液b，所述反相萃取柱为strata-x-a反相萃取柱；

(4)用甲酸-乙醇溶解洗脱，收集洗脱液c；所述乙酸-乙醇的体积比为5：100；

(5)将所述流出液b过阳离子树脂柱，用3％的nacl溶液洗脱，收集洗脱液d；

(6)将所述洗脱液c和洗脱液d混合后40℃以下浓缩至干燥，得到所述的蜂蜜提取物。

实施例2

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为75：5：3。

实施例3

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为75：8：3。

实施例4

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为75：12：3。

实施例5

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为75：15：3。

实施例6

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为75：10：1。

实施例7

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为75：10：2。

实施例8

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为75：10：4。

实施例9

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为75：10：5。

实施例10

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：所述乙酸-乙醇的体积比为3：100。

实施例11

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：所述乙酸-乙醇的体积比为4：100。

实施例12

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：所述乙酸-乙醇的体积比为6：100。

实施例13

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：所述乙酸-乙醇的体积比为7：100。

实施例14

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：

所述反相萃取柱为strata-x反相萃取柱。

实施例15

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：

所述反相萃取柱为pharma反相萃取柱。

实施例16

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：

所述反相萃取柱为hlb反相萃取柱。

实施例17

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本实施例与实施例1的唯一区别为：

所述反相萃取柱为brp反相萃取柱。

对比例1

作为本发明对比例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本对比例与实施例1的唯一区别为：水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为75：10：0。

对比例2

作为本发明对比例的一种蜂蜜提取物的制备方法，本对比例与实施例1的唯一区别为：水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为75：0：3。

对比例3

作为本发明实施例的一种蜂蜜提取物的制备方法，所述方法包括以下步骤：

(1)用水、乙醇、乙酸乙酯的混合溶液溶解蜂蜜，所述混合溶液与蜂蜜的质量比为100：10，水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为75：10：3；

(2)固液分离去除不溶物，得到上清液a；

(3)取上清液倒入反相萃取柱上样，用步骤(1)中所述混合液体积8％的超纯水洗涤，收集在上样过程中和所述超纯水洗涤过程中的流出液b，所述反相萃取柱为strata-x-a反相萃取柱；

(4)用甲酸-乙醇溶解洗脱，收集洗脱液c；所述乙酸-乙醇的体积比为5：100；

(5)将所述洗脱液c混合后40℃以下浓缩至干燥，得到所述的蜂蜜提取物。

实施例18

一种护肤品，所述护肤品包含占所述护肤品重量3％的实施例1所述的蜂蜜提取物。

实施例19

一种冲泡营养粉，所述营养品包含占所述营养品重量5％的实施例1所述的蜂蜜提取物，所述营养粉的冲泡温度为35-40℃。

实施例20

对实施例1-17、对比1-3制备得到的蜂蜜提取物进行检测。

检测方法：

1、多酚含量的测定：加入folin-ciocalteu试剂1ml，混匀放置5-6min，加质量分数为10％na2co³溶液2ml摇匀，置于30℃水浴下反应2h，冷却后用蒸馏水定容。以45％乙醇溶液作空白，在760nm波长测吸光度，每个样品重复3次取平均值。样品中的总酚含量以1g提取物的总酚含量相当于没食子酸的量表示(gallicacidequivalentsgae，mg/g)，以没食子酸作为标准品。

2、氨基酸含量(mg/g)的测定：称取0.1g样品提取物溶于10ml蒸馏水，加入邻苯二甲酸氢钾缓冲液、茚三酮溶液各3ml，摇匀后置于沸水中显色20min，冷却10min，用提取溶剂定容至刻度后摇匀，以相应溶剂为蒸馏水溶剂，于最大吸收波长570nm处测定吸光度，以精氨酸作为标准品。

3、蜂蜜提取物中总黄酮含量的测定：采用aici3法，以芸香苷作为对照建立总黄酮标准曲线，以芸香苷的相对含量表示(mg/g)。

4、dpph·自由基抗氧化能力测定：向3ml吸光度值为1.5的dpph·甲醇溶液中加入一定量的红石榴提取物水溶液(空白对照用等量蒸馏水代替)，总体积用蒸馏水补充至4ml用力摇匀后于室温下放置30min，再用光径1cm比色皿中测定dpph·混合溶液在517nm处吸光值(a517)，用2.5ml甲醇与0.5ml试样混合液调仪器零点，以扣除试样本身颜色的影响。

自由基清除率(％)＝(a0-a样)·a0-1×100

式中a0：空白对照的吸光值；a样：试验样品的吸光值。每种试样加入一系列的量，以作出曲线方程求出达到50％清除率时所需样品的浓度(即ic50)，用ic50来比较不同样品对dpph·自由基清除能力的大小。

结果如表1所示：

表1实施例1-17、对比1-3制备得到的蜂蜜提取物的检测结果

由实施例1-5的结果可知，如图1所示，所述水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为70-80：8-12：1-5时，制备得到的蜂蜜提取物的结果较好。

由实施例1、实施例6-9的结果可知，如图2所示，所述水、乙醇、乙酸乙酯的体积比为70-80：8-12：2-3时，制备得到的蜂蜜提取物的结果较好。

由实施例1、实施例10-13的结果可知，如图3所示，步骤(4)中所述乙酸-乙醇的体积比为4-5：100时，制备得到的蜂蜜提取物的结果较好。

由实施例1、实施例14-17的结果可知，如图4所示，所述反相萃取柱为hlb反相萃取柱、brp反相萃取柱、strata-x-a反相萃取柱。制备得到的蜂蜜提取物的结果较好。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。