一种具有抗乳腺癌作用的铁皮石斛提取物及其制备方法与流程

本发明涉及一种具有抗乳腺癌作用的铁皮石斛提取物及其制备方法。

背景技术：

铁皮石斛(dendrobiumcatenatum)为兰科(orchidaceae)石斛属(dendrobium)植物，是常用名贵中药材，现代药理研究发现铁皮石斛主要活性成分有多糖、酚酸类、联苄类、黄酮类、菲类、氨基酸类、微量元素等，具有增强机体免疫力、抗氧化、降血糖、抗肿瘤等作用。据2018年全球肿瘤统计分析结果显示，在全球已确诊的女性癌症病例中，乳腺癌约占1/4，鉴于乳腺癌是女性的第一“杀手”，抗乳腺癌药物的开发因此也是抗肿瘤领域研发的热点。抗肿瘤天然活性成分的提取及分离制备是抗癌药物研发的基础问题也是关键问题。如何高效的分离纯化铁皮石斛中具有抗乳腺癌作用的活性成分具有重要的医学意义和广阔的应用前景。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种具有抗乳腺癌作用的铁皮石斛提取物及其制备方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：一种具有抗乳腺癌作用的铁皮石斛提取物制备方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

1)对铁皮石斛茎进行干燥处理，剪成2-3cm的小段；

2)将步骤1)中的铁皮石斛段加水浸泡过夜，采用加热回流的方法提取两次，每次2小时，将两次提取物混合得提取液；

3)将步骤2)中的提取液减压浓缩至膏状，得到提取物浸膏；

4)将步骤3)中的提取物浸膏与水混合，得到浸膏水溶液；

5)将步骤4)中的浸膏水溶液用水饱和的乙酸乙酯进行3次萃取，将萃取液减压浓缩得到乙酸乙酯萃取液；

6)将步骤5)中的乙酸乙酯萃取液进行硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱得到第一流份；

7)将步骤6)中的第一流份再次进行硅胶柱色谱分离，用环己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱，得到第二流份；

8)将步骤7)中的第二流份经反相色谱柱进行色谱分离，用甲醇-水进行梯度洗脱，并经高效液相色谱仪分离纯化，得到具有抗乳腺癌作用的铁皮石斛提取物。

作为优选方案，所述步骤8)中所用反相色谱柱为ods柱。

一种具有抗乳腺癌作用的铁皮石斛提取物，是采用上述制备方法制备而成。

本发明优点在于：本发明所述方法制备得到的铁皮石斛提取物具有抗乳腺癌作用，其能下调乳腺癌细胞中磷酸化的lrp6和胞质β-连环蛋白，抑制wnt/β-连环蛋白信号传导，抑制乳腺癌细胞的活力和迁移能力。

附图说明

图1是铁皮石斛提取物抑制乳腺癌细胞中wnt/β-catenin信号传导途径的实验示意图。

图2是铁皮石斛提取物抑制乳腺癌细胞活性的实验示意图。

图3是铁皮石斛提取物抑制乳腺癌细胞迁移能力的实验示意图。

具体实施方式

下面用具体实施例说明本发明，并不是对本发明的限制。

实施例1

一种具有抗乳腺癌作用的铁皮石斛提取物制备方法，具体包括以下步骤：

1)对铁皮石斛茎进行干燥处理，剪成2-3cm的小段；

2)将步骤1)中的铁皮石斛段加水浸泡过夜，采用加热回流的方法提取两次，每次2小时，将两次提取物混合得到提取液；

3)将步骤2)中的提取液减压浓缩至膏状，得到提取物浸膏；

4)将步骤3)中的提取物浸膏与水混合，得到浸膏水溶液；

5)将步骤4)中的浸膏水溶液用等体积水饱和的乙酸乙酯进行3次萃取，将萃取液减压浓缩得到乙酸乙酯萃取液；

6)将步骤5)中的乙酸乙酯萃取液进行硅胶柱色谱分离，用二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱得到第一流份；

7)将步骤6)中的第一流份再次进行硅胶柱色谱分离，用环己烷-乙酸乙酯进行梯度洗脱，得到第二流份；

8)将步骤7)中的第二流份经ods柱进行色谱分离，用甲醇-水进行梯度洗脱，并经高效液相色谱仪分离纯化，得到具有抗乳腺癌作用的铁皮石斛提取物。

一种具有抗乳腺癌作用的铁皮石斛提取物，是采用上述制备方法制备而成。

本发明优点在于：本发明所述方法制备得到的铁皮石斛提取物具有抗乳腺癌作用，其能通过下调乳腺癌细胞中磷酸化的lrp6和胞质β-连环蛋白来抑制wnt/β-连环蛋白信号传导，如图1所示本发明所述铁皮石斛提取物量的增加可抑制乳腺癌细胞中的wnt/β-catenin信号传导途径，图2所示本发明所述铁皮石斛提取物量的增加可抑制乳腺癌细胞的活性，如图3所示本发明所述铁皮石斛提取物量的增加可抑制乳腺癌细胞的迁移能力，图中dca2573表示本发明所述铁皮石斛提取物，cellviability表示细胞活性，mda-mb-231表示人乳腺癌细胞，mda-mb-468表示人乳腺癌细胞，mcf10a表示人正常乳腺上皮细胞。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。