恩波吡维胺及其药物组合在制备用于治疗骨性关节炎的药物中的应用的制作方法

本发明涉及药物治疗学领域，具体涉及恩波吡维胺及其药物组合在制备用于骨性关节炎的药物中的应用。

背景技术：

骨性关节炎(osteoarthritis，oa)是最常见的一类关节炎，其发病人数比风湿性关节炎高出十倍以上，全球约有2.5亿人患有骨性关节炎。据统计，在美国，2011年大概有96万骨性关节炎病人进行住院治疗，而这些病人的花费总计达到140亿美元，成为美国住院病人花费高居第二位的疾病。

骨性关节炎的主要病理改变为软骨组织的慢性退行性病变，软骨组织的磨损在骨性关节炎的病人关节处是非常明显的损伤，软骨磨损后导致关节运动障碍、疼痛、僵硬以及关节畸形等症状，最终患者只有进行关节置换术。目前，针对骨性关节炎的治疗还是对症治疗为主，在早中期主要为改变生活运动习惯及关节周围肌肉锻炼；到了后期则主要是针对疼痛进行对症治疗，服用非甾体消炎镇痛类药物，或者关节腔内注射玻璃酸钠。目前，所有针对骨性关节炎的这些药物治疗均不能阻止骨性关节炎的病程，最终病人还是会承受极大的痛苦和经济负担。因此针对骨性关节炎的病理改变，寻找新的能够逆转骨性关节炎的病理改变，减少关节软骨损伤的药物，将极大减轻病人痛苦和减轻社会负担。

恩波吡维胺(pyrviniumembonate)是一类抗寄生虫的药物，具有杀灭蛲虫的作用，系氰胺染料类化合物，抗蛲虫作用显著，但对鞭虫、钩虫作用较弱。能干扰虫体的呼吸酶系统，抑制氧摄取，使需氧呼吸抑制，糖的无氧酵解增加，是在临床上为抗蛲虫的首选药物。目前也有很多研究发现，恩波吡维胺具有抗肿瘤的作用，包括结肠癌、肺癌、乳腺癌以及血液肿瘤等。例如，cn201710330430.3号专利揭露扑蛲灵在制备抗结核分枝杆菌药物中的新用途；cn201810424905.x号专利揭露扑蛲灵在制备广谱抗冠状病毒药物中的应用，但到目前为止，没有研究发现恩波吡维胺对骨性关节炎有治疗作用。

技术实现要素：

本发明目的在于提供恩波吡维胺及其药物组合在制备用于骨性关节炎的药物中的用途。

本发明为恩波吡维胺在制备用于骨性关节炎的药物中的用途。

本发明为恩波吡维胺能够改善疼痛及/或逆转软骨组织磨损。

包括恩波吡维胺的药物组合在制备用于治疗骨性关节炎的药物中的用途。

本发明为恩波吡维胺在制备用于与改善疼痛及/或逆转软骨组织磨损相关疾病的药物中的用途。

本发明为包括恩波吡维胺的药物组合在制备用于与改善疼痛及/或逆转软骨组织磨损相关疾病的药物中的用途。

本发明为一种用于治疗骨性关节炎的药物，其具有恩波吡维胺。

本发明为一种用于改善疼痛的药物，其具有恩波吡维胺。

本发明为一种用于逆转软骨组织磨损的药物，其具有恩波吡维胺。

本发明提供通过恩波吡维胺注射治疗后的内侧半月板韧带切除术的骨性关节炎模型小鼠的潜伏期相对于骨性关节炎模型小鼠的潜伏期出现明显的缩短，结果表明恩波吡维胺能够明显的改善骨性关节炎小鼠的疼痛症状，进而表明恩波吡维胺具有治疗骨性关节炎的作用；经过恩波吡维胺注射后的骨性关节炎模型小鼠的膝关节软骨未出现明显的磨损，结果表明恩波吡维胺能够明显的逆转骨性关节炎小鼠的膝关节软骨磨损，结果表明恩波吡维胺具有治疗骨性关节炎的作用。

附图说明

图1为热板实验检测，表明恩波吡维胺显著缩短骨性关节炎模型小鼠的潜伏期；c为假手术组；dmm-v为膝关节内侧半月板韧带切除术后的骨性关节炎模型溶剂组；dmm-恩波吡维胺-2mm为膝关节内侧半月板韧带切除术后的骨性关节炎模型恩波吡维胺(2mm浓度)给药组，其中**，p<0.01；

图2表明恩波吡维胺能够明显的逆转骨性关节炎小鼠的膝关节软骨磨损；c为假手术组；dmm为膝关节内侧半月板韧带切除术后的骨性关节炎模型溶剂组；dmm-恩波吡维胺-2mm为膝关节内侧半月板韧带切除术后的骨性关节炎模型恩波吡维胺(2mm浓度)给药组；

图3表明恩波吡维胺能够明显的逆转骨性关节炎模型小鼠的骨性关节炎评分值；c为假手术组；dmm为膝关节内侧半月板韧带切除术后的骨性关节炎模型溶剂组；dmm-恩波吡维胺-2mm为膝关节内侧半月板韧带切除术后的骨性关节炎模型恩波吡维胺(2mm浓度)给药组。**，p<0.01。

具体实施方式

下面结合具体实施例对该发明作进一步说明，但该等实施例不应解释为限制本发明创造思路。

本发明在于提供恩波吡维胺及其药物组合在制备用于骨性关节炎的药物中的用途。

本发明为恩波吡维胺在制备用于骨性关节炎的药物中的用途。

本发明为恩波吡维胺能够改善疼痛及/或逆转软骨组织磨损。

包括恩波吡维胺的药物组合在制备用于治疗骨性关节炎的药物中的用途。

本发明为恩波吡维胺在制备用于与改善疼痛及/或逆转软骨组织磨损相关疾病的药物中的用途。

本发明为包括恩波吡维胺的药物组合在制备用于与改善疼痛及/或逆转软骨组织磨损相关疾病的药物中的用途。

本发明为一种用于治疗骨性关节炎的药物，其具有恩波吡维胺。

本发明为一种用于改善疼痛的药物，其具有恩波吡维胺。

本发明为一种用于逆转软骨组织磨损的药物，其具有恩波吡维胺。

试验实施例1：恩波吡维胺(pyrviniumembonate)明显增加内侧半月板不稳定(destabilizationofthemedicalmeniscus，dmm)的骨性关节炎模型小鼠的疼痛敏感性。

本发明通过对小鼠膝关节内侧半月板韧带切除术诱导小鼠的内侧半月板不稳定(dmm)，产生骨性关节炎的症状，包括疼痛敏感性变化和软骨磨损等病理改变，从而模拟骨性关节炎的疾病模型。采用此模型，给予恩波吡维胺进行治疗，随后通过热板实验检测恩波吡维胺对骨性关节炎小鼠的疼痛敏感性。结果表明恩波吡维胺够明显的增加骨性关节炎小鼠的疼痛敏感性。

1、实验原理

小鼠膝关节的内侧半月板韧带切除术导致小鼠的膝关节半月板不稳定，从而诱导小鼠骨性关节炎。骨性关节炎的一个重要临床特征就是由于关节软骨磨损后导致关节疼痛、关节肿胀和活动受限。所以同样在小鼠的骨性关节炎模型中，小鼠的疼痛敏感性会下降，而增加骨性关节炎小鼠的疼痛敏感性被认为对骨性关节炎具有治疗作用。因此，本实验对c57小鼠进行内侧半月板韧带切除术，诱导小鼠骨性关节炎，并在膝关节处皮下注射给予恩波吡维胺进行治疗，然后通过热板实验检测骨性关节炎小鼠的疼痛敏感性，进而评价恩波吡维胺对骨性关节炎的治疗作用。

2、实验材料和方法

实验动物：30只野生型小鼠(c57bl/6j)(购于上海灵畅实验动物有限公司)，20只进行膝关节内侧半月板韧带切除术，10只进行假手术(暴露髌骨沟，不行内侧半月板韧带切除术)。

骨性关节炎模型：右腿膝盖处的内侧，切开2cm的切口；生理盐水清洗后，沿髌骨肌腱切开肌肉和滑膜组织；钝器造成髌骨外侧移位，暴露髌骨沟；用眼科剪切断连接内侧半月板与胫骨的韧带；然后，依次分层缝合肌肉和皮肤组织。骨性关节炎假手术：仅暴露髌骨沟，不切断韧带，随即缝合肌肉和皮肤。20只小鼠进行骨性关节炎造模，10只小鼠进行假手术。

将手术后的小鼠随机分为两组，于手术后第15天开始分别在膝关节处，皮下注射恩波吡维胺(2mm浓度)20μl，或者等量的溶剂(1％吐温80，溶于生理盐水)；假手术组的小鼠与手术组同一时间，注射等量的溶剂(1％吐温80，溶于生理盐水)。每两天一次，注射7次。最后一次注射后，第二天进行热板实验，检测小鼠的疼痛敏感性。实验方法如下，小鼠于实验环境适应30分钟，将小鼠置于55℃的热板上，记录小鼠初次出现如舔足底、跳动等行为的时间，每只小鼠进行3次实验，然后进行统计学分析。

3、实验结果

结果如图1所示，进行了内侧半月板韧带切除术后的骨性关节炎模型小鼠的潜伏期相比于假手术组小鼠的潜伏期明显延长，具有统计学意义；而经过恩波吡维胺(2mm浓度)注射治疗后的内侧半月板韧带切除术的骨性关节炎模型小鼠的潜伏期相对于骨性关节炎模型小鼠的潜伏期出现明显的缩短，结果表明恩波吡维胺能够明显的改善骨性关节炎小鼠的疼痛症状，进而表明恩波吡维胺具有治疗骨性关节炎的作用。

试验实施例2：恩波吡维胺明显改善内侧半月板韧带切除术导致内侧半月板不稳定(destabilizationofthemedicalmeniscus，dmm)的骨性关节炎模型小鼠的软骨组织磨损。

本发明通过对小鼠膝关节内侧半月板韧带切除术诱导小鼠的骨性关节炎模型，然后给予恩波吡维胺进行治疗，随后将小鼠膝关节采用多聚甲醛固定、脱钙后进行石蜡切片，并采用番红固绿染色，在显微镜下观察膝关节软骨组织形态，参照文献进行骨性关节炎评分(oascore)(pritzkerkp,etal.2006)，并进行统计学分析。

1、实验原理

小鼠膝关节的膝关节内侧半月板韧带切除术导致小鼠的膝关节半月板不稳定(destabilizationofthemedicalmeniscus，dmm)，从而诱导小鼠骨性关节炎。骨性关节炎临床重要病理特征之一为关节软骨磨损，所以骨性关节炎小鼠的关节软骨磨损程度为评价骨性关节炎的重要指标之一，逆转骨性关节炎小鼠的软骨磨损程度为骨性关节炎疗效的重要指征。因此，本实验对c57小鼠进行膝关节内侧半月板韧带切除术，诱导小鼠骨性关节炎，并给予恩波吡维胺进行治疗，然后检测其对骨性关节炎小鼠的关节软骨损伤的改善作用。

2、实验材料和方法

实验动物：30只野生型小鼠(c57bl/6j)(购于上海灵畅实验动物有限公司)，20只进行膝关节内侧半月板韧带切除术，10只进行假手术(暴露髌骨沟，不行膝关节内侧半月板韧带切除术)。

骨性关节炎模型：右腿膝盖处的内侧，切开2cm的切口；生理盐水清洗后，沿髌骨肌腱切开肌肉和滑膜组织；钝器造成髌骨外侧移位，暴露髌骨沟；用眼科剪切断连接内侧半月板与胫骨的韧带；然后，依次分层缝合肌肉和皮肤组织。骨性关节炎假手术：仅暴露髌骨沟，不切断韧带，随即缝合肌肉和皮肤。20只小鼠进行骨性关节炎造模，10只小鼠进行假手术。

将手术后的小鼠随机分为两组，于手术后第15周开始分别在膝关节处，皮下注射恩波吡维胺(2mm浓度)20μl，或者等量的溶剂(1％吐温80，溶于生理盐水)；假手术组的小鼠与手术组同一时间，注射等量的溶剂(1％吐温80，溶于生理盐水)。每两天一次，注射7次。最后一次注射后，第二天小鼠进行热板实验结束后，采用二氧化碳窒息致死，随后取小鼠右侧后肢膝关节(进行手术的关节)固定于多聚甲醛中，进行脱钙后，然后进行石蜡切片，并对小鼠膝关节组织进行番红固绿染色，在显微镜下观察膝关节软骨组织形态，进行骨性关节炎评分(oascore)，并进行统计学分析。

3、实验结果

结果如图2所示，进行了膝关节内侧半月板韧带切除术后的骨性关节炎模型小鼠的膝关节软骨出现明显的磨损，而经过恩波吡维胺(2mm浓度)注射后的骨性关节炎模型小鼠的膝关节软骨未出现明显的磨损，结果表明恩波吡维胺能够明显的逆转骨性关节炎小鼠的膝关节软骨磨损，进一步表明恩波吡维胺具有治疗骨性关节炎的作用。

后续对各组小鼠膝关节的进行骨性关节炎评分，结果显示，行了膝关节内侧半月板韧带切除术后的骨性关节炎模型小鼠的评分出现明显的增高，而恩波吡维胺能明显逆转的骨性关节炎模型小鼠的评分，均具有统计学意义，如图3所示，进一步表明恩波吡维胺具有治疗骨性关节炎的作用。

以上仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其它相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。