含有核酸复合物的皮肤渗透载体及其用途的制作方法

本发明涉及一种能够将生物活性核酸引入到细胞中的含有核酸复合物的皮肤渗透载体以及包含该皮肤渗透载体的用于诊断、预防或治疗疾病的组合物，更具体地，涉及一种包含其中生物活性核酸和载体肽核酸彼此互补结合的核酸复合物并具有皮肤渗透能力和皮肤保持能力的皮肤渗透载体，以及包含其的用于诊断、预防或治疗疾病的组合物。
背景技术：
：与传统药物不同，核酸药物抑制靶标特异性信使rna(mrna)的表达，因此有可能解决无法用靶向蛋白质的常规药物治疗疾病的研究领域(koler.等人，naturerev.drugdiscov.2012；11；125-140.，wilsonc.等人，curr.opin.chem.bio.2006；10：607-614.)。尽管基于寡核酸的基因表达调节具有极好的效果和许多用途，在基于核酸的治疗试剂的开发中仍有许多障碍需要克服。例如，寡核酸可被核酸酶等破坏，并且由于寡核酸的电性(电荷)和尺寸，这些寡核酸不可能通过被动扩散穿过细胞膜。为克服这些问题，不断努力通过修饰核酸以确保生物稳定性。修饰的人工核酸，使提高其对靶标核酸的亲和力而不会损失生物活性变成可能。肽核酸(pna)，一类修饰的人工核酸，是在其中引入了(2-氨基乙基)-甘氨酸肽骨架的人工核酸，并且具有与rna和dna强力结合的特性，其各自具有与之互补的核苷酸序列。具体地，所述肽核酸对核酸酶有抵抗力，并且具有高生物稳定性，已进行了基于各种寡核酸的治疗试剂的研究。然而，所述肽核酸具有难以导入细胞的缺点，因为其是电中性的(joergensenm.等人，oligonucleotides2011，21；29-37)。寡核酸的细胞膜通透性非常低，具体地dna或rna是带负电荷的。出于此原因，这些寡核酸不能穿过细胞膜的疏水性磷脂双层，因此很难通过简单扩散将其递送到细胞中。诸如逆转录病毒或aav(腺相关病毒)的病毒载体的使用使之有可能将寡核酸导入到细胞中，但是会有例如计划外的免疫活性和致癌基因的可能重组之类的风险(coutol.b.等人，curr.opin.pharmacol.2010，5；534-542.)。出于此原因，基于具有低细胞毒性和低免疫活性的非病毒寡核酸的核酸载体的开发越来越重要。因此，已开发了使用阳离子脂质、脂质体、稳定核酸脂质颗粒(snalp)、聚合物和细胞渗透肽的核酸导入技术(zhid.等人，bioconjug.chem.2013，24；487-519.，buyensk.等人，j.controlrelease，2012，158；362-70.，rossi，j.j.等人，genether.2006，13：583-584.，yousefia.等人，j.controlrelease，2013，170；209-18.，trabulos.等人，curr.pharm.des.2013，19；2895-923.)。这些核酸递送技术具有通过直接结合的功能性部分，包括复合物形成步骤，并且存在于脂质体结构的内含体逃逸效率、体内毒性等相关的问题。因此，需要改进寡核酸导入功能并克服与生产过程和副作用相关的问题。同时，皮肤是人体内表面积最大的器官，并且是使用合适方法可有效递送药物的途径。因此，通过皮肤施用生理活性试剂(如治疗药物)，通常称为透皮递送，因其诸如相对简单的给药方案的特性而受到大量关注。在结构上，皮肤由两个主要部分组成：相对薄的外层(表皮或表皮层)，以及相对厚的内层(真皮或真皮层)。具体地，表皮的外层(角质层)由充满了角蛋白的扁平死细胞组成。所述角质层的扁平死细胞之间充满脂质，其形成负责皮肤的天然屏障性质的层状相。角质层是皮肤的最外层，用作天然屏障，并且例如治疗试剂物的外来物质的皮肤通透性非常低，这使得难以递送具有高分子量和本质上亲水的物质。为克服在治疗药物向皮肤的递送中皮肤屏障对外来物质的防御机制，已尝试研究了各种皮肤渗透方法。然而，人们认为很难通过化学品的特性递送药物而不会在物理上损害或刺激皮肤。为了克服该困难的材料的各种预期优点，仍需开发。根据该需求，已报告了许多关于用于有效递送高分子量药物的皮肤渗透媒介物如脂质体、纳米颗粒或肽配体的研究[lademann等人，2007(eurjpharmbiopharm.2007may；66(2)：159-64.)，chen等人，2006a(jpharmacolexpther.2006nov；319(2)：765-75.)，chen等人，2006b(natbiotechnol.2006apr；24(4)：455-60.)]。尽管这些研究的商业化步骤的开发成本不断增长，但要递送的药物的有效性和稳定性仍无法保证。因此，需要开发具有皮肤渗透功能和体内有效性的材料。为了用于皮肤表面的治疗材料的有效性，需要大量努力以克服使这些材料穿过表皮和真皮的技术困难。对此，本发明人发现，包含与经修饰以大体上带正电荷的载体肽核酸互补结合的生物活性核酸的核酸复合物具有令人惊讶地提高的细胞通透性，并且使用所述核酸复合物可非常高效调节靶标基因的表达。基于此发现，本发明人提交了针对具有低细胞毒性、允许生物活性核酸渗透入细胞中的能力以及提高的调节基因表达的能力的新型结构的专利申请(pct/kr2017/008636)。本发明人对增强上述结构的皮肤渗透和细胞内递送的载体和治疗药物进行了深入研究，因此发现了上述核酸复合物，其中生物活性核酸和经修饰为大体上带正电荷的载体肽核酸彼此互补结合，具有非常有效地穿过皮肤(优选角质层和/或表皮)的性质，因此该核酸复合物可用作皮肤渗透载体，从而完成本发明。在该
背景技术：
部分中公开的上述信息仅用于增强对本发明背景的理解。因此，其可能不包含形成在本发明所述领域中已知的常规技术。技术实现要素：本发明的一个目的是提供一种包含具有新型结构的核酸复合物的皮肤渗透载体，其能够通过皮肤施用生物活性核酸和/或治疗药物。本发明的另一目的是提供包含该皮肤渗透载体的用于诊断、预防或治疗疾病的组合物。为实现上述目的，本发明提供了一种皮肤渗透载体，其包含具有以下结构式(1)的结构的核酸复合物：结构式(1)[a≡c(+)]其中，a代表具有能够与靶标基因结合的序列或靶标基因序列的生物活性核酸；c代表能够与所述生物活性核酸结合的载体肽核酸；‘≡’代表所述生物活性核酸和所述载体肽核酸之间的互补结合；a所代表的所述生物活性核酸大体上为带负电荷或为中性；c(+)表示所述载体肽核酸大体上带正电荷；和所述载体肽核酸包含一个或多个经修饰的肽核酸单体，以使得该载体肽核酸大体上带正电荷。本发明还提供了一种包含皮肤渗透载体的用于诊断疾病的组合物，和一种包含皮肤渗透载体的用于预防或治疗疾病的组合物。本发明还提供了一种用于预防或治疗疾病的方法，包括施用皮肤渗透载体的步骤。本发明还提供了皮肤渗透载体用于预防或治疗疾病的用途。本发明还提供了皮肤渗透载体用于制备预防或治疗疾病的药物的用途。附图说明图1a至1e示意性地显示了皮肤渗透载体中的生物活性核酸和载体肽核酸彼此结合。(a)其中生物活性核酸和载体肽核酸彼此逆平行结合的结构；(b)其中生物活性核酸和载体肽核酸彼此平行结合的结构；(c)其中治疗药物结合到皮肤渗透载体的结构；(d)其中用于促进内含体逃逸的材料(m)结合到皮肤渗透载体的结构；(e)其中促进内含体逃逸的材料(m)和治疗药物均结合到皮肤渗透载体的结构。图2说明了皮肤的角质层、表皮和真皮。图3(a)显示了单个sirna和双链体sirna的透皮递送能力，并且说明了仅sirna不能从表皮递送到真皮，图3(b)显示了核酸复合物的透皮递送能力，并且说明了核酸复合物能从表皮递送到真皮，并且在24小时之后递送到真皮。图4a至4l显示了测试cy3标记的sirna的透皮能力的结果。(a)在用复合物处理裸鼠背部1小时之后的核酸复合物的透皮递送能力，其中复合物包含具有不同电荷并且长度与其互补载体肽核酸相同的生物活性核酸；(b)在用复合物处理裸鼠背部1小时之后的核酸复合物的透皮递送能力，其中复合物包含具有不同电荷并且长度比其互补载体肽核酸相同的更长的生物活性核酸；(c)在用复合物处理裸鼠背部3小时之后的核酸复合物的透皮递送能力，其中复合物包含具有不同电荷并且长度与其互补载体肽核酸相同的生物活性核酸；(d)在用复合物处理裸鼠背部3小时之后的核酸复合物的透皮递送能力，其中复合物包含具有不同电荷并且长度比其互补载体肽核酸相同的更长的生物活性核酸；(e)在用复合物处理裸鼠背部24小时之后的核酸复合物的透皮递送能力，其中复合物包含具有不同电荷并且长度与其互补载体肽核酸相同的生物活性核酸；(f)在用复合物处理裸鼠背部24小时之后的核酸复合物的透皮递送能力，其中复合物包含具有不同电荷并且长度比其互补载体肽核酸相同的更长的生物活性核酸；(g)在用不同复合物处理裸鼠背部1小时之后的核酸复合物的透皮递送能力，其中具有不同电荷的载体肽核酸结合到大体上带负电荷的生物活性核酸；(h)在用不同复合物处理裸鼠背部3小时之后的核酸复合物的透皮递送能力，其中具有不同电荷的载体肽核酸结合到大体上带负电荷的生物活性核酸；(i)在用不同复合物处理裸鼠背部24小时之后的核酸复合物的透皮递送能力，其中具有不同电荷的载体肽核酸结合到大体上带负电荷的生物活性核酸；(j)在用不同复合物处理裸鼠背部1小时之后的核酸复合物的透皮递送能力，其中具有不同长度的载体肽核酸结合到大体上带负电荷的生物活性核酸；(k)在用不同复合物处理裸鼠背部3小时之后的透皮递送能力，其中具有不同长度的载体肽核酸结合到大体上带负电荷的生物活性核酸；(l)在用不同复合物处理裸鼠背部24小时之后的核酸复合物的透皮递送能力，其中具有不同长度的载体肽核酸结合到大体上带负电荷的生物活性核酸。图5a至5c显示了包含低分子量物质复合物的透皮递送能力。(a)在用包含低分子量物质的核酸复合物处理0小时之后的透皮递送能力；(b)在用包含低分子量物质的核酸复合物处理3小时之后的透皮递送能力；(c)在用包含低分子量物质的核酸复合物处理24小时之后的透皮递送能力。图6a至6f显示了在体外实验和动物实验中靶向ifi16基因的核酸复合物对皮肤疾病银屑病的治疗效果。(a)il-17a诱导的人角质细胞中的细胞活力，(b)靶标基因及其下游基因在il-17a诱导的人角质细胞中的表达，(c)显示了咪喹莫特诱导的银屑病动物模型中小鼠耳部的银屑病表型减少的图像；(d)显示了咪喹莫特诱导的银屑病动物模型中小鼠耳部厚度减少和动物模型中靶标基因的表达减少的视图；(e)显示了在咪喹莫特诱导的银屑病动物模型中小鼠耳部组织的表皮厚度因咪喹莫特增加而因核酸复合物减少的h&e染色图像；(f)显示在咪喹莫特诱导的银屑病动物模型中小鼠耳部组织中的银屑病标记物(cd3和cd11c)的表达因咪喹莫特增加而因核酸复合物减少的免疫染色图像。图7a和7b显示了靶向tgfβr2基因的核酸复合物在转移性皮肤黑素瘤细胞中的细胞转移抑制作用(靶向tgfβr2的pna的抗转移作用的体外机制研究)。(a)靶标基因及其下游基因在tgfβ-2诱导的转移性皮肤黑素瘤细胞中的表达；(b)在tgfβ-2诱导的转移性皮肤黑素瘤细胞中的细胞迁移能力。图8a至8j显示了靶向tlr2基因的核酸复合物在模拟特应性皮炎的细胞模型和特应性皮炎诱导的动物模型中的治疗作用。(a)dncb诱导的人角质细胞中的细胞活力变化；(b)靶标基因及其下游基因在dncb诱导的人角质细胞中的表达；(c)显示nc/nga小鼠的特应性皮炎表型因核酸复合物而减少的图像；(d)显示了在患有屋尘螨提取液诱导的特异性皮炎的nc/nga小鼠中ige和tarc的血清浓度因核酸复合物而减少的视图；(e)显示了患有dncb诱导的特应性皮炎的balb/c小鼠的特应性皮炎表型因核酸复合物而减少的视图；(f)显示了在患有dncb诱导的特应性皮炎的balb/c小鼠中ige和tarc的血清浓度因核酸复合物而减少的视图；(g)显示了在患有屋尘螨提取液诱导的特异性皮炎的nc/nga小鼠中表皮厚度因核酸复合物而减少的视图；(h)显示了在患有dncb诱导的特应性皮炎的balb/c小鼠中表皮厚度因核酸复合物而减少的视图；(i)显示了患有屋尘螨提取液诱导的特异性皮炎的nv/nga小鼠中的炎性标记物cd3因核酸复合物而减少的视图；(j)显示了患有dncb诱导的特异性皮炎的nv/nga小鼠中的炎性标记物cd3因核酸复合物而减少的视图。图9a和9b显示了靶向smad3基因的核酸复合物在人角质细胞中的细胞创伤愈合作用。(a)tgfβ-1诱导的人角质细胞的创伤愈合；(b)靶标基因在tgfβ-1诱导的人角质细胞中的表达；图10a和10b显示了靶向tieg1基因的核酸复合物在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的细胞生长抑制作用。(a)从瘢痕疙瘩组织中分离的细胞中的细胞活力；(b)靶标基因及其下游基因在从瘢痕疙瘩组织中分离的细胞中的表达。具体实施方式除非另有说明，否则本说明书中所用的所有技术和科学术语具有与本公开所述领域技术人员通常理解的相同含义。通常，本说明书中所用的命名是本领域中公知和常用的。在本发明的一个示例中，已发现其中生物活性核酸和载体肽核酸彼此互补结合的核酸复合物具有皮肤渗透能力和皮肤保持能力，因此可用于应用到皮肤表面以治疗疾病。因此，在一个方面，本发明涉及一种皮肤渗透载体，其包含具有以下结构式(1)的结构的核酸复合物：结构式(1)[a≡c(+)]其中，a代表具有能够与靶标基因结合的序列或靶标基因序列的生物活性核酸；c代表能够与生物活性核酸结合的载体肽核酸；‘≡’代表所述生物活性核酸和所述载体肽核酸之间的互补结合；a代表的所述生物活性核酸大体上为带负电荷或为中性；c(+)表示所述载体肽核酸大体上为带正电荷；和所述载体肽核酸包含一个或多个经修饰的肽核酸单体，以使得所述载体肽核酸大体上带正电荷。在本发明中，具有结构式(1)的结构的核酸复合物中的生物活性核酸和载体肽核酸可通过逆平行结合或平行结合来彼此结合(参见图1a和1b)。在本发明中，“皮肤渗透载体”是一种用于将生物活性物质递送到细胞中的工具，其是指通过与皮肤接触而使得生物活性物质能够渗透到体内并最终渗透到细胞中的载体。具体地，所述皮肤渗透载体是指具有穿过角质层(皮肤表皮的外层)和/或表皮并将所需的药物递送到表皮或真皮的能力，或具有甚至渗透真皮并递送所需药物的能力的物质。根据本发明的皮肤渗透载体可留在角质层、表皮或真皮中，或者甚至渗透真皮并递送所需药物到体内，这取决于具有结构式(1)的结构的核酸复合物的净电荷和/或所述核酸复合物中生物活性核酸和/或载体肽核酸的数量。因此，在本发明中，所述包含核酸复合物的皮肤渗透载体可具有皮肤保持能力。在本发明的一个示例中，证实了生物活性核酸存在于皮肤的角质层、表皮和真皮中。在本发明中，“皮肤渗透载体”中的所述生物活性核酸自身可用作治疗药物(参见图1a和1b)。可替代地，用于治疗疾病的治疗药物还可与所述“皮肤渗透载体”结合(参见图1c)。即，结构式(1)所示的核酸复合物可用作皮肤渗透载体和治疗试剂，或者还可在核酸复合物上结合治疗药物。具体地，所述“皮肤渗透载体”具有在透皮递送到体内之后递送到靶标细胞的能力，并且可以包含所述核酸复合物的任何形式使用。在本发明中，“生物活性核酸”是指具有能够与表达减少的靶标基因结合的互补序列，特别是能够与靶标基因的mrna结合的互补序列，或者包含促进所表达的靶标基因的表达的序列的核酸。具体地，其是指参与基因表达调节，例如抑制或促进目的基因的表达的核酸。所述生物活性核酸可为具有与表达减少或增加的靶标基因互补的序列的核酸，或者可为具有与如pre-mrna、mirna、mrna等的单链rna序列互补的序列的核酸。具体地，本发明中的“生物活性核酸”可在体内或体外与靶标基因或包含其的核苷酸序列结合，由此激活或抑制靶标基因的特征功能(例如，转录物表达或蛋白质表达)或调节pre-mrna的剪接(例如，外显子跳读)。在这里，所述核苷酸序列可为基因调节序列、或基因编码序列、或者剪接调节序列。所述基因调节序列可选自启动子、转录增强子、5’非翻译区、3’非翻译区、病毒包装序列和选择标记。所述基因编码序列可为外显子或内含子，且所述基因编码序列可位于距离基因的转录起始位点10、5、3或1kb、或500、300或200bp之内。例如，所述基因编码序列可位于所述起始位点的上游或下游。此外，所述剪接调节序列可包含与以下相关的序列：外显子跳读、隐蔽剪接、伪剪接位点激活、内含子保留、或选择性剪接异常调节。在本发明中，"载体肽核酸"是指其碱基与所述生物活性核酸部分或全部互补结合由此赋予功能性的核酸。可用于本发明中的载体肽核酸不仅包括肽核酸(pna)，还包括与其相似的修饰核酸。肽核酸是优选的，但不限于此。在本发明中，皮肤渗透载体中所含的核酸复合物可还包含用于促进内含体逃逸的材料，并且可具有以下结构式(2)的结构。即，根据本发明的“皮肤渗透载体”可具有结合促进内含体逃逸的材料的结构(参见结构式(2)以及图1d和1e)。结构式(2)[ma≡mc(+)]其中，‘m’代表用于促进所述生物活性核酸和所述载体肽核酸的内含体逃逸的材料。在本发明中，每个生物活性核酸和载体肽核酸可在其5’端和3’端包含用于促进内含体逃逸的材料。在本发明中，所述“用于促进内含体逃逸的材料”可通过增加内含体中的渗透压或使内含体膜失稳来促进生物活性核酸的内含体逃逸。这表示该材料帮助所述生物活性核酸更有效和快速地移动到细胞核或细胞质以遇见和作用于靶标基因(d.w.pack，a.s.hoffman，s.pun，p.s.stayton，“designanddevelopmentofpolymersforgenedelivery，”nat.rev.drug.discov.，4，581-593(2005))。作为用于促进内含体逃逸的材料，序列为glfdiikkiaesf(seqidno:49)的肽可经由所述接头结合到所述生物活性核酸，组氨酸(10)可经由接头结合到载体肽核酸，但本发明不限于此。在本发明中，所述促进内含体逃逸的材料可下组选自下组中的任一种或多种：肽、脂质纳米颗粒、核酸复合物纳米颗粒、聚合物纳米球、无机纳米颗粒、基于阳离子脂质的纳米颗粒、阳离子聚合物和ph敏感性聚合物。在本发明中，所述肽可选自下组：gigavlkvlttglpaliswikrkrqq(seqidno:48)、glfdiikkiaesf(seqidno:49)和组氨酸(10)。在本发明中，所述脂质纳米颗粒可选自下组：脂质、磷脂、棕榈酸鲸蜡酯、泊洛沙姆18、吐温85、三硬脂酸甘油酯和吐温80。在本发明中，所述核酸复合物纳米颗粒可为聚酰胺基胺或聚乙烯亚胺(pei)。在本发明中，所述聚合物纳米球可选自下组：聚己内酯、聚(丙交酯-共-乙交酯)、聚丙交酯、聚乙交酯、聚(d,l-丙交酯)、壳聚糖和plga-聚乙二醇。在本发明中，所述无机纳米颗粒可选自下组：fe2o3fe3o4、wo3和wo2.9。在本发明中，所述基于阳离子脂质的纳米颗粒可选自下组：1-(氨基乙基)亚氨基二[n-(油酰基半胱氨酰基-1-氨基-乙基)丙酰胺]、pta的n-烷基化衍生物和3,5-双十二烷氧基苯甲脒。在本发明中，所述阳离子聚合物可选自下组：乙烯吡咯烷酮-n,n-二甲基氨基乙基甲基丙烯酸共聚物二乙基硫酸盐、聚异丁烯和聚(n-乙烯咔唑)。在本发明中，所述ph敏感性聚合物可选自下组：多元酸、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸和水解聚丙烯酰胺。在本发明中，所述皮肤渗透载体中所含的核酸复合物可还包含如上所述的治疗药物。治疗药物可为，例如选自下组中的一种或多种：治疗性蛋白质、治疗性化合物、癌症化疗试剂、毒素、细胞毒性物质、抗炎试剂、关节炎治疗试剂、生长因子、细胞因子、趋化因子、抗体、rnai如sirna或mirna、反义、核酸、核酸类似物、细胞、病毒、噬菌体、病毒颗粒、噬菌体颗粒、病毒衣壳、噬菌体衣壳、病毒样颗粒、脂质体、胶束、珠粒、纳米颗粒、微粒、化疗试剂、造影剂、显影剂、标签、标记试剂、或其组合。所述治疗药物可通过共价键或接头结合到根据本发明的皮肤渗透载体中所含的核酸复合物。在本发明中，每个所述生物活性核酸和所述载体肽核酸可包含2-50个，优选5-30个，更优选10-25个，最优选15-17个核酸单体。而且，所述生物活性核酸可由天然核酸碱基和/或修饰的核酸单体构成。在本发明中，生物活性核酸可选自下组：dna、rna和修饰的核酸，即pna(肽核酸)、pmo(磷二酰胺吗啉代寡核苷酸)、lna(锁核酸)、gna(二醇核酸)、tna(苏糖核酸)、反义寡核苷酸、适配子、sirna(小干扰rna)、shrna(短发夹rna)、核糖酶和dna酶。优选地，所述生物活性核酸可选自下组：dna、rna和修饰的核酸，即pna、pmo、lna、gna和tna，但不限于此。在本发明中，当所述生物活性核酸中所用的单体为pna时，所述生物活性核酸指代生物活性肽核酸，当使用另一种单体时，所述生物活性核酸也以相同方式指代。在本发明中，所述生物活性核酸和所述载体肽核酸可还包含选自下组中的一种或多种官能团：磷酸二酯、2’o-甲基、2’甲氧基-乙基、氨基磷酸酯、氨基磷酸甲酯和硫代磷酸酯。在本发明中，所述载体肽核酸可具有与所述生物活性核酸部分或完全互补的核苷酸序列。具体地，所述载体肽核酸可包含一个或多个通用碱基，并且所述载体肽核酸也可完全由通用碱基构成。在本发明中，所述核酸复合物的每个生物活性核酸和载体肽核酸可为大体上带正电荷的(阳离子)、带负电荷(阴离子)或中性的。在表达电荷时使用的术语“大体上”不表示个别碱基的电性，而是表示当从外部看时生物活性核酸或载体肽核酸的总体电性。例如，如果所述生物活性核酸中带负电荷的单体的数量更多时，尽管所述生物活性核酸中的一些单体带正电荷，但当“大体上”观察电性时，所述生物活性核酸为带负电荷的。如果所述载体肽核酸中带正电荷的碱基和/或骨架的数量更多时，即使所述载体肽核酸中的一些碱基和/或骨架带负电荷，但当“大体上”观察电性时，所述载体肽核酸为带正电荷的。在此方面，根据本发明的具有结构式(1)的结构的核酸复合物可为大体上带正电荷的。在结构式(1)的核酸复合物中，优选地，当大体上观察电性时，所述生物活性核酸为带负电荷或中性的，并且当大体上观察电性时，所述载体肽核酸为带正电荷的。然而，本发明不限于此。每个生物活性核酸和载体肽核酸的电性可使用修饰的肽核酸单体。所述修饰的肽核酸单体，当为带正电荷的载体肽核酸时，可包含选自下组的任一种或多种带正电荷氨基酸：赖氨酸(lys，k)、精氨酸(arg，r)、组氨酸(his，h)、二氨基丁酸(dab)、鸟氨酸(orn)和氨基酸类似物。此外，当为带负电荷的载体肽核酸时，所述修饰的肽核酸单体可包含谷氨酸(glu，e)，一种带负电荷的氨基酸，或者带负电荷的氨基酸类似物。在本发明中，所述载体肽核酸可包含一个或多个γ-或α-骨架经修饰的肽核酸单体以使其大体上带正电荷。所述γ-或α-骨架经修饰的肽核酸单体在其骨架中可包含选自下组的一种或多种带正电荷的氨基酸：赖氨酸(lys，k)、精氨酸(arg，r)、组氨酸(his，h)、二氨基丁酸(dab)、鸟氨酸(orn)和氨基酸类似物，以使其为正电性的。在本发明中，除了骨架修饰之外，可使用核酸碱基修饰的肽核酸单体进行对所述肽核酸单体修饰以赋予电荷。优选地，所述载体肽核酸在其核碱基中可包含胺、三唑或咪唑部分以使其为电正性的，或者在其碱基中可包含羧酸以使其为电负性的。在本发明中，所述载体肽核酸的所述经修饰的核酸单体在骨架或核碱基中还可包含负电荷，但所述经修饰的肽核酸单体所含的带正电荷的单体的数量优选大于带负电荷的单体的数量，以使载体肽核酸大体上为带正电荷的。优选地，根据本发明的结构式(1)的核酸复合物可为大体上带正电荷的。在根据本发明的结构式(1)的核酸复合物中，选自下组中的至少一种物质可结合到所述生物活性核酸和/或载体肽核酸：疏水性部分、亲水性部分、靶标抗原特异性抗体、适配子和荧光/发光标记。优选地，选自下组中的一种或多种物质可结合到所述载体肽核酸：疏水性部分、亲水性部分、靶标抗原特异性抗体、适配子和用于成像的荧光/发光标记。在本发明中，选自下组中的至少一种物质与所述生物活性核酸和/或载体肽核酸的结合可通过单个共价键或接头介导的共价键实现：疏水性部分、亲水性部分、靶标抗原特异性抗体、适配子、猝灭子、荧光标记和发光标记，但不限于此(参见表1)。优选地，结合到所述核酸载体的与细胞渗透、溶解度、稳定性、递送和成像相关的物质(例如，疏水性部分等)的存在与调节靶标基因表达的所述生物活性核酸无关。在本发明中，如上所述，所述生物活性核酸与所述载体肽核酸的互补结合大部分可归类为逆平行结合和平行结合。所述互补结合设置为使得在存在靶向所述生物活性核酸的序列，即与所述生物活性核酸互补的序列时，释放所述生物活性核酸。逆平行结合和平行结合是根据dna-dna或dna-pna结合的5’-方向性和’3’-方向性来确定的。逆平行结合是通用的dna-dna或dna-pna结合方法。以根据本发明的结构式(1)的核酸复合物为例，逆平行结合表示以5’至3’方向的所述生物活性核酸与以3’至5’方向的所述载体肽核酸彼此结合。平行结合显示了在一定程度上低于逆平行结合的结合亲和性，并且表示生物活性核酸与载体肽核酸以5’至3’方向或3’至5’方向彼此结合。在根据本发明的结构式(1)的核酸复合物中，所述生物活性核酸和载体肽核酸之间的结合亲和性可优选低于所述生物活性核酸和生物活性核酸所靶向的基因、特别是靶标基因的mrna之间的结合亲和性。所述结合亲和性通过熔融温度(tm)测定。使所述生物活性核酸与载体肽核酸之间的结合亲和性(熔融温度(tm))低于所述生物活性核酸与生物活性核酸所靶向的基因、特别是靶标基因的mrna之间的结合亲和性的方法的一个具体示例，所述生物活性核酸和所述载体肽核酸可通过平行结合或部分特异性结合而彼此结合，但本发明不限于此。作为另一个示例，所述载体肽核酸可具有选自下组中至少一种或多种肽核碱基：接头、通用碱基和不与生物活性核酸的相应碱基互补的肽核碱基，但本发明不限于此(参见表1)。本发明中所用的通用碱基可选自下组中的一种或多种：肌苷pna、吲哚pna、硝基吲哚pna和脱碱基pna，其是无选择性地结合天然碱基(包括腺嘌呤、鸟嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶)的碱基，并且其结合亲和性低于互补结合亲和性。优选地，肌苷pna可用作通用碱基。[表1]生物活性核酸和载体肽核酸之间结合的示例在上表1中，n代表核碱基(atgc)；*代表不与反义核酸序列互补的序列；$代表通用碱基；＝代表接头；5’-和3’-表示核酸(碱基)的方向性。本发明提供了结合核酸的结合形式与电性以调节核酸复合物的功能，可通过核酸的结合形式和电性的结合来控制粒径和作用时间，并且可增加细胞通透性、溶解度和特异性。在本发明中，可通过控制载体肽核酸与生物活性肽核酸之间的结合亲和性来控制所述生物活性肽核酸在靶标基因存在下结合到所述靶标序列的时间点(所述生物活性核酸与所述靶标序列的链置换时间，以及所述生物活性核酸的靶标特异性释放和结合的时间)。在根据本发明的结构式(1)的核酸复合物中，可通过复合物的非特异性结合的载体肽核酸的非特异性碱基、是否存在通用碱基和接头以及碱基的数量和位置来控制所述生物活性核酸与靶标序列的链置换时间，以及所述生物活性核酸的靶标特异性释放和结合的时间。此外，这些还可通过在复合物中互补结合的平行或逆平行结合的这些条件的结合来控制。在本发明中，所述结构式(1)的核酸复合物的粒径可为5nm-300nm，优选10nm-80nm，最优选15nm-70nm。在本发明中，可通过生物活性核酸和载体肽核酸之间的电荷平衡来控制所述核酸复合物的粒径。具体地，当载体肽核酸的正电荷增加时，粒径变小，但如果载体肽核酸的正电荷超过一定水平，粒径会变大。此外，通过生物活性核酸和载体肽核酸之间的适当电荷平衡来确定核酸复合物的粒径，依赖于所述复合物的生物活性肽核酸的电荷，其是确定粒径的另一个因素。根据本发明的载体肽核酸的正电荷数量是1-7个(指包含1-7个带正电荷的单体)，优选2-5个，最优选2-3个，生物活性核酸的电荷平衡的净电荷是0-5个负电荷，优选0-3个。在本发明中，所述结构式(1)的核酸复合物可通过在合适条件下的生物活性核酸和载体肽核酸之间的杂交来制备。如本文所用，术语“杂交”表示互补的单链核酸形成了双链核酸。杂交可在两条核酸链完美互补(完美匹配)时发生，或者可在存在一些错配残基时发生。杂交所必需的互补性程度可取决于杂交条件而不同，特别是可通过结合温度控制。另一方面，本发明涉及一种用于诊断疾病的组合物，该组合物包括包含具有结构式(1)或(2)的结构的核酸复合物的皮肤渗透载体。优选地，当根据本发明的皮肤渗透载体用于诊断疾病的目的时，报告子和能够猝灭报告子荧光的猝灭子可结合到所述生物活性核酸或载体肽核酸的两端。所述报告子可选自下组中的一种或多种：fam(6-羧基荧光素)、texasred、hex(2’,4’,5’,7’-四氯-6-羧基-4,7-二氯荧光素)和cy5。优选地，使用cy5。所述猝灭子可选自下组中的一种或多种：tamra(6-羧基四甲基-若丹明)、bhq1、bhq2和dabcyl，但不限于此。另一方面，本发明涉及一种用于预防或治疗疾病的组合物，其包括包含具有结构式(1)或(2)的结构的核酸复合物的皮肤渗透载体。另一方面，本发明涉及一种用于预防或治疗疾病的方法，其包括对需要预防或治疗的患者施用包括包含具有结构式(1)或(2)的结构的核酸复合物的皮肤渗透载体的组合物。另一方面，本发明涉及包含具有结构式(1)或(2)的结构的核酸复合物的皮肤渗透载体用于预防或治疗疾病的用途。另一方面，本发明涉及包含具有结构式(1)或(2)的结构的核酸复合物的皮肤渗透载体在制备预防或治疗疾病的药物中的应用。如本文所用，术语“靶标基因”是指被激活、抑制或标记的核酸序列(核苷酸序列)，其与术语“靶标核酸”没有区别并且可与其互换使用。如果包含靶标基因的靶标核酸(核苷酸序列)在体外或体内接触(结合)所述复合物，则所述生物活性核酸从所述载体肽核酸分离，并显示生物活性。在本发明中，可使用具有结构式(1)或(2)的结构的核酸复合物诊断、预防或治疗的疾病，可根据所述核酸复合物中的生物活性核酸所结合的靶标基因、或根据结合到所述核酸复合物的治疗药物来确定。优选地，所述核酸复合物可用于治疗皮肤疾病，例如，银屑病、特应性疾病包括特应性皮炎、皮肤癌症如黑素瘤、瘢痕疙瘩疾病、如皮肤损伤和色素淀积的疾病、肿瘤、癌症、炎性疾病、年龄相关的黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、罕见重病、心血管疾病、代谢疾病等，但不限于此。同时，在本发明中，术语“用于治疗的组合物”可与“药物组合物”互换使用。用于治疗的组合物包括作为活性成分的本发明的核酸复合物，其包含生物活性核酸和结合到所述生物活性核酸的载体生物活性核酸。此外，组合物可还包含用于治疗靶标疾病的治疗药物，其结合到所述核酸复合物。因此，在本发明中，包含皮肤渗透载体的用于治疗的组合物可用于治疗皮肤疾病，例如，银屑病、特异性疾病包括特异性皮炎、皮肤癌症如黑素瘤、瘢痕疙瘩疾病、如皮肤损伤和色素淀积的疾病、肿瘤、癌症、炎性疾病、年龄相关的黄斑变性、糖尿病性视网膜病变、罕见重病、心血管疾病、代谢疾病等，但不限于此。根据标准药物实践，根据本发明的用于治疗的组合物可配制为口服或肠胃外剂型。除了活性成分之外，该制剂可包含添加剂，例如药理学可接受的载体、赋形剂、补充剂或稀释剂。优选地，根据本发明的用于治疗的组合物可配制为水溶液、凝胶、软膏、乳膏、乳液、糊剂、擦剂或贴剂的形式。最优选地，组合物可配制为水溶液形式。在这种情况中，所述水溶液可采用蒸馏水或缓冲溶液的形式。术语“生理学可接受”是指不废除所述化合物的生物活性和性质。术语“载体”被定义为促进复合物加入细胞或组织中的化合物。例如，二甲亚砜(dmso)是一种常用于促进许多有机化合物渗透到生物体的细胞或组织中的载体。术语“稀释剂”不仅定义为稳定靶标化合物的生物活性形式的化合物，还是在其溶解的水中稀释的化合物。在相关领域中，使用溶解在缓冲溶液中的盐作为稀释剂。常用的缓冲溶液是磷酸缓冲盐溶液，其模拟人体内的盐浓度。由于缓冲盐能在低浓度下控制溶液的ph，化合物的生物活性很少因缓冲稀释剂而改变。可给人类患者施用包含所述核酸复合物的物质本身，或者在其与其他活性成分混合的药物组合物中施用作为组合疗法，或者与合适的载体或赋形剂混合施用。适合用于本发明中的药物组合物包括其中有效成分含量能达到预期目的的组合物。更具体地，治疗有效量表示有效预防、稳定、减轻或缓解疾病的症状或延长所治疗的受试者的生存的化合物的量。确定治疗有效量完全在本领域技术人员的能力范围内，尤其是参考本文所提供的详细公开内容时。如本文所用，术语“预防(preventing或prevention)”是指通过施用(或应用)包含所述复合物或其药学可接受的盐的药物组合物，而显示出抗癌活性和抑制癌症生长或延缓癌症发展的所有行动。如本文所用，术语“治疗(treating或treatment)”是指通过施用(或应用)包含所述复合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，来减轻或完全治愈癌症的所有行动。在本发明中，用于预防或治疗疾病的包含皮肤渗透载体的组合物可优选为用于预防或治疗皮肤疾病的组合物。所述核酸复合物中含有的所述生物活性核酸结合的靶标基因可为例如选自下组中的任一个或多个：ifi16、tgfβr2、tlr2、smad3和tieg1，但不限于此。所述皮肤疾病的示例包括，但不限于，银屑病、皮肤癌症、特应性疾病、瘢痕疙瘩疾病和色素淀积。优选地，本发明提供了一种用于治疗银屑病的组合物。根据本发明的用于治疗银屑病的组合物包括：seqidno:22所示的ifi16特异性生物活性肽核酸，和与其互补的载体肽核酸。所述载体肽核酸可优选具有seqidno:23或seqidno:24的序列，并且所述序列的一部分还可由通用碱基取代。本发明提供了一种用于治疗恶性黑素瘤的组合物。根据本发明的用于治疗恶性黑素瘤的组合物包括具有序列idno:25或seqidno:26的tgfrβ2特异性生物活性核酸，和与其互补的载体肽核酸。所述载体肽核酸可优选具有seqidno:27-seqidno:30中任一序列，并且所述序列的一部分还可用通用碱基取代。本发明提供了一种用于治疗特应性皮炎的组合物。根据本发明用于治疗特应性皮炎包括：具有seqidno:31或seqidno:32的序列的tlr2特异性生物活性核酸，和与其互补的载体肽核酸。所述载体肽核酸可优选具有seqidno:33-seqidno:35中任一序列，并且所述序列的一部分还可用通用碱基取代。本发明还提供了一种用于治疗皮肤损伤的组合物。用于治疗皮肤损伤的组合物用于包括皮肤创伤愈合的皮肤再生，但不限于此。根据本发明的用于治疗皮肤损伤的组合物包括具有seqidno:36或seqidno:37的序列的smad3特异性生物活性肽核酸；和与其互补的载体肽核酸。所述载体肽核酸可优选具有seqidno:38-seqidno:41中任一序列，并且所述序列的一部分还可用通用碱基取代。本发明提供了一种用于治疗瘢痕疙瘩的组合物。根据本发明的用于治疗瘢痕疙瘩的组合物包括具有seqidno:42或seqidno:43的序列的tieg1特异性生物活性核酸，和与其互补的载体肽核酸。所述载体肽核酸可优选具有seqidno:44-seqidno:47中任一序列，并且所述序列的一部分还可用通用碱基取代。在本发明中，皮肤渗透载体中含有的所述核酸复合物可经由载体如脂质体施用(或应用)。所述脂质体可帮助复合物靶向特定组织如淋巴组织，或者特异性地靶向感染细胞，还可帮助增加包含该复合物的组合物的半衰期。所述脂质体的示例包括乳液、泡沫、胶束、不溶性单层、液晶、磷脂分散体、片状层等。在这些制剂中，递送的复合物为脂质体的一部分、单独存在或者与其结合的分子例如淋巴细胞中普遍存在的受体(例如结合cd45抗原的抗体)或其他治疗性组合物联合。这样，用本发明的所需复合物填充或修饰的脂质体，可被引至淋巴细胞的位置。用于本发明中的脂质体由形成标准囊泡的脂质形成，其通常包括中性和带负电荷的磷脂和固醇，例如胆固醇。脂质的选择大体上通过考虑例如血流中的脂质体大小、脂质体的酸不稳定性和稳定性来引导。许多方法可用于制备脂质体。例如，可使用以下文献方法中公开的方法[szoka等人，ann.rev.biophys.bioeng.，9：467，1980和u.s.pat.no.4,235,871、4,501,728、4,837,028和5,019,369]。另一方面，本发明提供了一种通过对受试者施用(或应用)包含具有结构式(1)或(2)结构的核酸复合物的皮肤渗透载体来治疗和抑制(或减轻)疾病的方法。可使用本发明的载体治疗的疾病可根据所用的生物活性核酸的特性来确定，并且没有具体限制。包含根据本发明的载体的组合物可以药学上有效的量应用到皮肤以治疗疾病或抑制(或减轻)疾病症状。本发明药物组合物的剂量/应用量可取决于多种因素，例如皮肤疾病的种类、患者的年龄和体重、症状的特性和程度、当前治疗方法的种类、治疗频率、施用(应用)的模式和途径等，并且可由相关领域技术人员容易地确定。本发明的组合物可与药理学或生理学成分共同施用，或者可顺序施用(应用)。此外，本发明的组合物可与其他常规治疗试剂组合施用(应用)，和与常规治疗试剂顺序或同时施用(应用)。所述施用(应用)可为单剂量施用(应用)或多剂量施用(应用)。在本发明中，术语“受试者”是指患有能通过施用(应用)本发明的皮肤渗透载体减轻、抑制或治疗的状况或疾病、或具有发展为所述状况或疾病的风险的哺乳动物。优选地，其是指人类。此外，本发明化合物对人体的剂量(应用量)可取决于以下而变：患者年龄、体重和性别、施用(应用)模式、患者的健康情况和疾病的严重程度。基于重70kg的成年患者，所用剂量通常为0.001-1,000mg/天，优选0.01-500mg/天。根据医生或药剂师的判断，所用剂量可为以预定的时间间隔每天施用(应用)一次或数次。本文所述皮肤渗透载体或包含其的组合物的毒性和治疗功效可通过标准药用程序在细胞培养物或实验动物中测定，例如，通过测定ld50(50％种群致死的剂量)和ed50(50％种群有治疗活性的剂量)。治疗和毒性作用之间的剂量比为治疗指数，其可表示为比率ed50(或ic50)/ld50。优选显示出最大治疗指数的化合物。从这些细胞培养物测定得到的数据可用于配制用于人的剂量范围。这些化合物的剂量或应用量优选在包括几乎没有或没有毒性的ed50(或ic50)的循环浓度范围内。在下文中，将参考实施例更详细地描述本发明。对本领域技术人员来说显而易见的是，这些实施例仅用于说明本发明，本发明的范围不受这些实施例所限。实施例实施例1：生物活性核酸、载体肽核酸和使用其的复合物制备。为证实根据本发明的结构式(1)的核酸复合物的皮肤渗透作用和皮肤保持作用，使用ifi16(一种靶向银屑病疾病的基因)作为靶标基因。ifi16是一种通常在银屑病患者的皮肤中表达的蛋白质，并且被认为是治疗银屑病的重要靶标(干扰素诱导蛋白16的上调通过调节角质细胞中趋化因子的产生而导致银屑病6:25381)。为评价核酸复合物的皮肤渗透作用和皮肤保持作用，反义肽核酸(pna)和rna用作针对ifi16的生物活性核酸。本发明的生物活性核酸(反义pna和rna)具有seqidno:1-9中所示的序列。该实施例中所用的基于肽核酸的生物活性核酸用cy3标记3’端以成像，且所述核苷酸序列、单体修饰及其结构如下表2中所示。本发明中所用的所有肽核酸使用hplc纯化方法通过panagene(韩国)合成。本发明实施例中使用的载体肽核酸具有seqidno:10-21中所示的序列(表2)。[表2]用于证实皮肤渗透和皮肤保持作用的生物活性核酸和载体肽核酸的序列为赋予电性，构建单体修饰，其中使用赖氨酸(lys，k；以(+)表示)修饰的带正电荷的肽核酸骨架，和使用谷氨酸(glu，e；以(-)表示)修饰的带负电荷的肽核酸骨架。每个生物活性核酸和载体肽核酸在dmso中杂化，由此合成了包含所述生物活性核酸和所述载体肽核酸的各复合物。实施例2：包含生物活性核酸和载体肽核酸的核酸复合物的皮肤渗透作用的分析为分析实施例1中制得的复合物的皮肤渗透作用，将预定量的每种复合物施用于裸鼠背部，随后使其保留1、3和24小时，将施用区域的组织进行活检。活检的组织在4％福尔马林溶液中固定，使其保留1天，使用显微切片机切片成20μm，并贴在载玻片上。通过荧光显微镜观察贴好的组织以检查复合物是否渗透皮肤。该实施例中所用的核酸复合物如下表3中所示。[表3]用于分析皮肤渗透作用的核酸复合物名称核酸复合物单个sirnaseqidno:8sirna双链体seqidno:8和10单个pnaseqidno:1pna双链体1seqidno:1和17pna双链体2seqidno:1和13结果，如图3和图4a-4l中所示，证实了各种核酸复合物在1、3和24小时显示出透皮递送作用。实施例3：包含具有结构式(1)结构的复合物的皮肤渗透载体的皮肤渗透作用的分析，其中低分子量物质经由连接子结合到该复合物为分析其中低分子量物质经由接头结合到每种复合物的皮肤渗透载体的皮肤渗透作用与实施例1中制得的每种复合物的比较，将预定量的每种复合物施用到裸鼠背部，随后使其保留0、3和24小时，对施用区域的组织进行活检。活检组织在4％福尔马林中固定，保留1天，使用显微切片机切片成20μm，并贴在玻璃载玻片上。通过荧光显微镜观察贴好的组织以检查皮肤渗透载体的透皮递送作用，其中低分子量物质结合到每种核酸复合物。该实施例中所用的核酸复合物如下表4所示。[表4]用于分析具有与其结合的低分子量物质的核酸复合物的皮肤渗透作用的核酸复合物名称核酸复合物pna双链体1seqidno:1和17pna双链体2seqidno:1和13pna双链体3seqidno:9和17pna双链体4seqidno:9和13结果，如图5a-5c所示，通过荧光显微镜证实了具有经由接头与其结合的低分子量物质的皮肤渗透核酸复合物也在3小时及之后显示出透皮递送作用。实施例4：包含具有结构式(1)的结构的复合物的皮肤渗透载体的银屑病治疗作用的分析根据实施例1制备具有如下表5中所示结构的包含靶向ifi16基因的生物活性肽核酸和载体肽核酸的各皮肤渗透载体，并分析其银屑病治疗作用。[表5]抑制ifi16活性的生物活性肽核酸和载体肽核酸的序列实施例4-1：细胞培养物从cls(cls细胞系服务，德国)得到的人角质细胞(hacat)在包含10％(v/v)胎牛血清，100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素的dmem培养基(改良伊格尔培养基，welgene，韩国)中在37℃和5％(v/v)co2下培养。为制成模拟银屑病的细胞模型，将细胞用10ng/mlil-17a处理并培养。实施例4-2：通过mtt测定法分析角质细胞中的细胞活力根据实施例1制备具有表5中所示结构的各自包含生物活性核酸和载体肽核酸的复合物。将人角质细胞以6x103细胞/孔的密度接种到96孔板中，用所述复合物处理，然后在实施例4-1中所示的条件下培养24小时。然后，将每个孔用在1xpbs中制备的浓度为5mg/ml的mtt(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物)溶液处理。然后，将每个孔孵育4小时，然后通过分光光度计测量光密度(od)并分析。使用seqidno：22和seqidno：23的核酸复合物(pna4)。结果，如图6a所示，证实了核酸复合物以浓度依赖性方式降低了由il-17a诱导的模拟银屑病的细胞模型中的细胞活力。实施例4-3：通过蛋白质印迹分析法分析基因表达将人角质细胞以1x105细胞/孔的密度接种到6孔板中，在实施例4-1所示的条件下培养24小时，用包含所述生物活性核酸和所述载体肽核酸的复合物处理，随后培养24、48和72小时。接下来，将30μlripa缓冲液添加到每个孔以得到蛋白裂解液。所述蛋白裂解液使用bca测定试剂盒(thermofisher，usa)定量，并将30μg蛋白质根据尺寸分离，转移到pvdf膜，随后用ifi16(cellsignalingtechnology，usa)和p-nfkb(cellsignalingtechnology，usa)作为一抗以1:1000的稀释度处理，随后使其于4℃保留1天。接下来，将膜用1xtbs-t洗涤，以山羊抗兔(santacruzbiotech.，usa)作为二抗以1:2000的稀释度处理，并使其于室温保留2小时。所述膜用supersignaltmwestfemto最大灵敏度底物(thermofisher，usa)处理，并使用image600(amersham，德国)成像仪分析角质细胞中靶标基因表达的抑制效率。对于表5所示的seqidno：22和seqidno：23的核酸复合物，分析了其ifi16及其下游基因的表达模式。结果，如图6b所示，证实了核酸复合物以浓度依赖性的方式抑制靶标基因及其下游基因的表达。实施例4-4：分析咪喹莫特诱导的银屑病动物模型中的银屑病表型通过对balb/c小鼠的左耳每天应用62.5mg5％咪喹莫特并持续7天来制备银屑病诱导的动物模型。对于表5中所示的seqidno：22和seqidno：23的核酸复合物，对动物模型中的银屑病表型进行了图像分析，并测量耳部厚度，以微米记。结果，证实了在核酸复合物组(图6c)的银屑病表型减少。此外，可证实相对于银屑病诱导的动物组，应用核酸复合物的组中的耳部厚度减小(图6d，pna1是不含制剂的核酸复合物，pna2是包含乳膏制剂的核酸复合物)。实施例4-5：通过h&e染色分析银屑病诱导的动物模型中的表型在实施例4-4的条件下进行的实验的最后一天，对于小鼠的耳部组织进行活检，并在4％福尔马林溶液中固定1天。将固定的组织包埋在石蜡中，切片成5μm，并贴在载玻片上。将贴好的组织用苏木精：伊因染色液进行预定时间的染色，用1xpbs洗涤，然后用显微镜分析。结果，如图6e所示，与源自银屑病的对照组相比，用核酸复合物治疗的组的表皮异常生长减少。实施例4-6：通过免疫染色法分析银屑病诱导的动物模型的组织中的炎性标记在实施例4-4的条件下进行的动物实验的最后一天，对小鼠耳部组织进行活检，并在4％福尔马林溶液中固定1天。将固定的组织包埋在石蜡中，切片成5μm，并贴好在载玻片上。将贴好的组织在0.5％bsa溶液中封闭1小时，用针对cd3和cd11c的一抗溶液处理，并孵育1天。接下来，移除一抗溶液，剩余材料用1xpbs洗涤，用二抗溶液处理，于室温孵育2小时，随后通过dab染色分析。结果，如图6f所示，与银屑病诱导的对照组相比，证实了核酸复合物治疗组的组织中的炎性标记物cd3和cd11c减少。实施例5：分析包含具有结构式(1)的结构的复合物的皮肤渗透载体的恶性黑素瘤治疗作用为分析核酸复合物的恶性黑素瘤治疗作用，使用tgfβr2作为靶标基因。由于开发出了抑制癌症转移机制中的tgfβ-2诱导的激活机制的基于rna的治疗试剂，因此进行了实验以验证核酸复合物的治疗作用。[表6]抑制tgfβr2活性的生物活性核酸和载体肽核酸的序列实施例5-1：细胞培养从atcc(美国模式培养物保藏中心，usa)获得的转移性皮肤黑素瘤细胞(a375sm)在包含10％(v/v)胎牛血清，100单位/ml青霉素和100μg/mll链霉素的dmem培养基(改良伊格尔培养基，welgene，韩国)中在37℃和5％(v/v)co2下培养。为分析转移，将细胞用5ng/mltgfβ-2处理并孵育。实施例5-2：通过蛋白质印迹法分析基因表达将转移性皮肤黑素瘤细胞以1x105细胞/孔的密度接种到6孔板中，在实施例5-1所示的条件下培养24小时，用包含生物活性核酸和载体肽核酸的复合物处理，随后培养24、48和72小时。接下来，将30μlripa缓冲液添加到每个孔以得到蛋白裂解液。使用bca测定试剂盒(thermofisher，usa)定量蛋白裂解液，将30μg蛋白质根据大小通过电泳分离，转移到pvdf膜，随后用tgfβr2(abcam，usa)、mmp9(santacruzbiotech.，usa)和p-akt1(cellsignalingtechnology，usa)作为一抗以1:1000的稀释度处理，随后使其于4℃保留1天。接下来，将膜用1xtbs-t洗涤，用山羊抗兔、山羊抗小鼠(santacruzbiotech.，usa)作为二抗以1:2000的稀释度处理，并使其于室温保留2小时。膜用supersignaltmwestfemto最大灵敏度底物(thermofisher，usa)处理，使用image600(amersham，德国)分析转移性皮肤黑素瘤细胞中的靶标基因表达的抑制效率。分析了tgfβr2及其下游基因在转移性皮肤黑素瘤细胞中的表达模式。该实施例中所用的核酸复合物如表7中所示。[表7]用于分析黑素瘤细胞中tgfβr2表达的核酸复合物编号核酸复合物1seqidno：25和272seqidno：25和283seqidno：26和294seqidno：26和30结果，如图7a所示，证实了核酸复合物以浓度依赖性方式抑制靶标基因及其下游基因的表达。实施例5-3：通过细胞迁移测定分析核酸复合物的细胞迁移抑制作用将转移性皮肤黑素瘤细胞以2x104细胞/孔的密度接种到24孔板中的上段腔室中，将所有腔室以无fbs的培养基处理。细胞在实施例5-1中所述的条件下培养24小时，将上段腔室用所述包含生物活性肽核酸和载体肽核酸的复合物处理，下段腔室用20ng/mltgfβ-2处理，随后培养24、48和72小时。随后，为分析细胞迁移，将细胞用0.5％结晶紫染色。染色细胞用甲醇处理以溶解结晶紫，随后测量450nm的吸光度。对于上表7中所示的核酸复合物，分析了每种复合物在转移性细胞黑素瘤细胞中的细胞迁移抑制作用。结果，如图7b所示，证实了核酸复合物抑制了随时间推移的细胞迁移。实施例6：分析包含具有结构式(1)的结构的复合物的皮肤渗透载体的特异性皮炎治疗作用为分析核酸复合物的特异性皮炎治疗作用，tlr2(toll样受体2)用作靶标基因。tlr2是当过敏原或细菌渗透皮肤时表达的基因。tlr2在特异性皮炎患者中过表达，并且因皮肤中的炎性细胞因子导致的炎症增加而加剧特异性皮炎。出于这一原因，tlr2被认为是特异性皮炎的重要靶标。[表8]用于抑制tlr2的生物活性核酸和载体肽核酸的序列实施例6-1：细胞培养从cls(cls细胞系服务，德国)获得的人角质细胞(hacat)在包含10％(v/v)胎牛血清，100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素的dmem培养基(改良伊格尔培养基，welgene，韩国)培养中在37℃和5％(v/v)co2下培养。为制备模拟特异性皮炎的细胞模型，将细胞用5ng/ml屋尘螨提取物和5μmdncb(2-二硝基氯苯)处理并培养24小时。实施例6-2：通过mtt测定法分析角质细胞中的细胞活力将人角质细胞以6x103细胞/孔的的密度接种到96孔板中，在实施例6-1的条件下培养24小时，随后用制备为具有表8中所示结构的各自包含生物活性核酸和载体肽核酸的复合物处理。接下来，每个孔用在1xpbs中以5mg/ml的浓度制备的20μlmtt(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物)溶液。接着，每个孔孵育4小时，然后用分光光度计测量并分析光密度(od)。结果，如图8a所示，证实了核酸复合物以浓度依赖性方式降低了屋尘螨提取物或dncb诱导的模拟特应性皮炎的细胞模型中的细胞活力。实施例6-3：通过蛋白质印迹法分析基因表达将人角质细胞以1x105细胞/孔的密度接种到6孔板中，在实施例6-1中所示的条件下培养24小时，用包含生物活性核酸和载体肽核酸的复合物处理，随后培养24、48和72小时。接下来，将30μlripa缓冲液添加到每个孔以得到蛋白裂解液。使用bca测定试剂盒(thermofisher，usa)定量蛋白裂解液，将30μg蛋白质根据大小通过电泳分离，转移到pvdf膜，随后用tlr2(santacruzbiotech.，usa)、mmp9(santacruzbiotech.，usa)、p-nfkb(cellsignalingtechnology，usa)、myd88(cellsignalingtechnology，usa)和tarc(abcam，usa)作为一抗以1:1000的稀释度处理，随后使其于4℃保留1天。接下来，将膜用1xtbs-t洗涤，用山羊抗兔和山羊抗小鼠(santacruzbiotech.，usa)作为二抗以1:2000的稀释度处理，并使其于室温保留2小时。膜用supersignaltmwestfemto最大灵敏度底物(thermofisher，usa)处理，使用image600(amersham，德国)成像仪分析角质细胞中靶标基因表达的抑制效率。该实施例中所用的核酸复合物如下表9中所示。[表9]用于分析角质细胞中tlr2表达的核酸复合物编号核酸复合物1seqidno：31和332seqidno：31和343seqidno：31和354seqidno：32和335seqidno：32和346seqidno：32和35结果，如图8b所示，证实了核酸复合物以浓度依赖性方式抑制靶标基因及其下游基因的表达。实施例6-4：分析针对屋尘螨提取物和dncb诱导的特异性皮炎动物模型中特异性皮炎表型的作用通过将nc/nga小鼠的背部剃毛并每周两次施用100mgad乳膏(屋尘螨提取物乳膏，biostir，日本)，共施用3周，来制备患有屋尘螨诱导的特异性皮炎的动物模型。此外，通过将balb/c小鼠的背部剃毛并每周两次施用50μmdncb，共施用3周，来制备患有致病屋综合征诱导的特异性皮炎的动物模型。每个动物模型用核酸复合物的乳膏制剂治疗总共一周三次，并在图像中分析特异性皮炎动物模型中的表型，通过imagej测量背部上的毛发生长程度。该实施例中所用的核酸复合物如下表10中所示。[表10]用于分析特异性皮炎表型的核酸复合物名称核酸复合物pna1seqidno：32和34pna2seqidno：32和35如图8c和8e所示，证实了核酸复合物组中的特异性皮炎表型减少。实施例6-5：分析血清中ige和tarc浓度的变化在实施例6-4的条件下进行的动物实验的最后一天，通过眼眶静脉收集小鼠血液，使其于室温保留2小时或更长时间，并以14,000rpm离心15分钟，然后收集血清。使用igeelisa试剂盒(komabiotechinc.，韩国)和tarcelisa试剂盒(r&dsystem，usa)提供的实验方法，测量收集的血清中ige和tarc的浓度。结果，如图8d和8f所示，可证实与患有诱导的特异性皮炎的对照组不同，核酸复合物治疗组中ige和tarc的浓度降低至与阴性对照组相似的水平。实施例6-6：通过h&e染色分析特异性皮炎诱导的动物模型的组织中的表型在实施例6-4的条件下进行的动物实验的最后一天，对小鼠耳部组织进行活检，并在4％福尔马林溶液中固定1天。将固定的组织包埋在石蜡中，切片成5μm，并贴好在载玻片上。将贴好的组织用苏木精：伊因染色溶液中进行预定时间的染色，用1xpbs洗涤，然后用显微镜分析。结果，如图8g和8h所示，相比于特应性对照组，用核酸复合物治疗的组的表皮异常生长降低。实施例6-7：通过免疫染色分析特异性皮炎诱导的动物模型的组织的炎性标记在实施例6-4的条件下进行的动物实验的最后一天，对小鼠背部组织进行活检，并在4％福尔马林溶液中固定1天。将固定的组织包埋在石蜡中，切片成5μm，并贴好在载玻片上。将贴好的组织在0.5％bsa溶液中封闭1小时，用针对cd3和cd11c的一抗溶液处理，并孵育1天。接下来，移除一抗溶液，剩余材料用1xpbs洗涤，用二抗溶液处理，于室温孵育2小时，随后通过dab染色分析。结果，如图8i和8j所示，证实了相比于特异性皮炎诱导的对照组，用核酸复合物治疗的组中的组织中的炎性标记cd3减少。实施例7：分析包含具有结构式(1)的结构的复合物的皮肤渗透载体的皮肤再生作用为分析核酸复合物的皮肤再生作用，smad3用作靶标基因。smad3是在损伤皮肤中过表达的蛋白质，并且被认为是皮肤再生中的重要靶标。[表11]用于抑制smad3活性的生物活性核酸和载体肽核酸的序列实施例7-1：细胞培养从cls(cls细胞系服务，德国)获得的人角质细胞(hacat)在包含10％(v/v)胎牛血清，100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素的dmem培养基(改良伊格尔培养基，welgene，韩国)中在37℃和5％(v/v)co2下培养。为分析细胞迁移，将细胞用5ng/mltgfβ-1处理并培养。实施例7-2：通过创伤愈合测定法分析核酸复合物对改善细胞迁移能力的作用将人角质细胞以2x104细胞/孔的密度接种到12孔板中，用无fbs的培养基处理，培养24小时。在实施例7-1中所述的条件下进行测试，培养的细胞用包含生物活性肽核酸和载体肽核酸的复合物处理，并用5ng/mltgfβ-1处理，培养24和48小时。接下来，用显微镜分析细胞迁移。该实施例中所用的核酸复合物如下表12中所示。[表12]用于分析角质细胞中的细胞迁移的核酸复合物名称核酸复合物pna1seqidno：37和38pna2seqidno：37和39pna3seqidno：36和40结果，如图9a所示，证实了与tgfβ-1处理的阳性对照组相比，核酸复合物处理组的细胞迁移有所改善。实施例7-3：通过蛋白质印迹法分析基因表达将人角质细胞以1x105细胞/孔的密度接种到6孔板中，培养24小时。在实施例7-1中所述的条件下进行测试，用包含生物活性核酸和载体肽核酸的复合物处理，随后培养24、48和72小时。接下来，将30μlripa缓冲液添加到每个孔以得到蛋白裂解液。使用bca测定试剂盒(thermofisher，usa)定量蛋白裂解液，将30μg蛋白质根据大小通过电泳分离，转移到pvdf膜，随后用p-smad3(cellsignalingtechnology，usa)作为一抗以1:1000的稀释度处理，随后使其于4℃保留1天。接下来，将膜用1xtbs-t洗涤，用山羊抗兔(santacruzbiotech.，usa)作为二抗以1:2000的稀释度处理，并使其于室温保留2小时。膜用supersignaltmwestfemto最大灵敏度底物(thermofisher，usa)处理，使用image600(amersham，德国)分析角质细胞中靶标基因表达的抑制效率。该实施例中所用的核酸复合物如下表13中所示。[表13]用于分析角质细胞中smad3蛋白及下游基因表达的核酸复合物编号核酸复合物1seqidno：37和382seqidno：37和383seqidno：37和394seqidno：37和405seqidno：37和416seqidno：36和387seqidno：36和388seqidno：36和399seqidno：36和4010seqidno：36和41结果，如图9b所示，核酸复合物以浓度依赖性方式抑制靶标基因及其下游基因的表达。实施例8：分析包含具有结构式(1)的结构的复合物的皮肤渗透载体的瘢痕疙瘩治疗作用为分析新型核酸复合物的瘢痕疙瘩治疗作用，tieg1用作靶标基因。tieg1是一种在瘢痕疙瘩患者的皮肤组织中过表达的蛋白质，并且被认为是治疗瘢痕疙瘩的重要靶标。[表14]用tieg1抑制的生物活性核酸和载体肽核酸的序列实施例8-1：细胞培养从atcc(美国模式培养物保藏中心，usa)获得的瘢痕疙瘩成纤维细胞(kelfib)在包含10％(v/v)胎牛血清，100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素的dmem培养基(改良伊格尔培养基，welgene，韩国)中在37℃和5％(v/v)co2下培养。实施例8-2：通过mtt测定法分析瘢痕疙瘩成纤维细胞中的细胞活力在实施例8-1中所述的条件下，将瘢痕疙瘩角质细胞以6x103细胞/孔的密度接种到96孔板中，培养24小时，随后用所制备的具有表14中所示的结构并各自包含生物活性核酸和载体肽核酸的复合物处理。接下来，每个孔用在1xpbs中以5mg/ml的浓度制备的20μlmtt(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物)溶液处理。接下来，每个孔孵育4小时，然后用分光光度计测量光密度(od)并分析。该实施例中所用的核酸复合物如下表15中所示。[表15]用于分析瘢痕疙瘩成纤维细胞中的细胞活力的核酸复合物编号核酸复合物1seqidno：42和442seqidno：42和453seqidno：42和464seqidno：42和475seqidno：43和446seqidno：43和457seqidno：43和468seqidno：43和47结果，如图10a所示，证实了核酸复合物以浓度依赖性方式减少瘢痕疙瘩细胞中的细胞活力。实施例8-3：通过蛋白质印迹法分析基因表达瘢痕疙瘩角质细胞以1x105细胞/孔的密度接种到6孔板中，培养24小时，在实施例8-1中所述的条件下进行测试，用包含生物活性核酸和载体肽核酸的复合物处理，随后培养24、48和72小时。接下来，将30μlripa缓冲液添加到每个孔以得到蛋白裂解液。使用bca测定试剂盒(thermofisher，usa)定量蛋白裂解液，将30μg蛋白质根据大小通过电泳分离，转移到pvdf膜，随后用tieg1(santacruzbiotech.，usa)、p-smad2(santacruzbiotech.，usa)、smad7(cellsignalingtechnology，usa)作为一抗以1:1000的稀释度处理，随后使其于4℃保留1天。接下来，将膜用1xtbs-t洗涤，用山羊抗兔和山羊抗小鼠(santacruzbiotech.，usa)作为二抗以1:2000的稀释度处理，并使其于室温保留2小时。所述膜用supersignaltmwestfemto最大灵敏度底物(thermofisher，usa)处理，使用image600(amersham，德国)分析瘢痕疙瘩角质细胞中的靶标基因表达的抑制效率。对于上表14中所示的核酸复合物，分析tieg基因及下游基因的表达模式。结果，如图10b所示，证实了核酸复合物以浓度依赖性方式抑制靶标基因及其下游基因的表达。工业实用性根据本发明，包含具有结构式(1)的结构的核酸复合物的皮肤渗透载体具有有效地递送大分子量药物的皮肤渗透功能和体内有效性。具体地，根据本发明的载体使生物活性核酸或各种化合物能够穿过皮肤的角质层、表皮和/或真皮，因此，该载体使得外用治疗能够应用于皮肤表面并且使所需的药物能够递送到包括血液在内的体内循环系统。尽管已参考特定特征详细描述了本发明，但对本领域技术人员来说显而易见的是，本说明书仅是其优选实施方式，并非限制本发明的范围。因此，本发明的实质范围将通过所附权利要求及其等同范围来确定。序列表<110>海阳制药股份有限公司<120>含有核酸复合物的皮肤渗透载体及其用途<130>pp-b2088<150>kr10-2018-0015751<151>2018-02-08<160>49<170>kopatentin3.0<210>1<211>15<212>dna<213>人工序列（artificialsequence）<220><223>pna<400>1attcacatcagccac15<210>2<211>15<212>dna<213>人工序列（artificialsequence）<220><223>pna<400>2attcacatcagccac15<210>3<211>15<212>dna<213>人工序列（artificialsequence）<220><223>pna<400>3attcacatcagccac15<210>4<211>15<212>dna<213>人工序列（artificialsequence）<220><223>pna<400>4attcacatcagccac15<210>5<211>15<212>dna<213>人工序列（artificialsequence）<220><223>pna<400>5attcacatcagccac15<210>6<211>15<212>dna<213>人工序列（artificialsequence）<220><223>pna<400>6attcacatcagccac15<210>7<211>15<212>dna<213>人工序列（artificialsequence）<220><223>pna<400>7attcacatcagccac15<210>8<211>15<212>dna<213>人工序列（artificialsequence）<220><223>pna<400>8attcacatcagccac15<210>9<211>15<212>dna<213>人工序列（artificialsequence）<220><223>pna<400>9attcacatcagccac15<210>10<211>15<212>dna<213>人工序列（artificialsequence）<220><223>pna<400>10gtggctgatgtgaat15<210>11<211>15<212>dna<213>人工序列（artificialsequence）<220><223>pna<400>11taagtgtagtcggtg15<210>12<211>15<212>dna<213>人工序列（arti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