本发明涉及一种无毒可降解型蒸腾抑制剂的制备方法，属于蒸腾抑制剂制备技术领域。
背景技术：
蒸腾抑制剂是一种减少水分蒸发，保护植物，提高成活的一种药剂，其作用机理是通过均匀喷施于植物叶片和枝干后，在叶片表面形成一层保护膜，封闭气孔，减缓新陈代谢，特有的网状结构又能保证呼吸作用的正常进行，减少水分蒸发，从而提高树木的成活率。一般是在大树移植前后以及运输过程中、高温或干旱、园林绿化工程中大规格苗木古树名木珍稀树种等、常绿乔灌木移植等的情况下使用。
现有的蒸腾抑制剂主要有：①代谢型抗蒸腾剂：常用的有PMA（醋酸苯汞）、ABA、NaHSO3、CaC12、2,4-D、阿特拉津、甲草胺、三唑酮、黄腐酸，其中除黄腐酸外大都具有严重的环境毒性和生理毒性，危害环境和人类健康，同时ABA等生长调节剂不仅具有环境毒性而且价格昂贵，因此很难推广使用；②成膜型抗蒸腾剂，大都是国外昂贵的专利产品，很难自然降解，具有持久污染；③反射型抗蒸腾剂，常用的有：高岭土和高岭石，此类制剂的使用量大、效果差并且具有直接降低光合速率的副作用等，目前也较少实际应用；生物感应型抗蒸腾剂，它是一种基于酿酒酵母菌的生物型植物抗蒸腾剂，由于酿酒酵母菌可能产生酒精等对植物有副作用的物质，还需要进一步的完善才能被实际应用推广。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题：针对传统的蒸腾抑制剂含有毒性，危害环境和人体健康，且很难自然降解，具有持久污染的问题，提供了一种通过豆粕富集耐热型凝结芽孢杆菌，在中温下对牛奶与大豆进行发酵，通过牛奶与大豆中蒸煮出的脂肪蛋白复合物，负载至细菌产生的纤维素薄膜表面，将其碾磨并喷洒至树叶表面，待其干燥后形成一层复合薄膜，有效关闭树叶和植物表面气孔，抑制植物表面水汽的蒸腾作用的方法。本发明首先以豆粕、氯化钠等物质为原料，制得灭菌富集培养基，将凝结芽孢杆菌转接于灭菌富集培养基上，进行培养，经过滤，得到富集菌种液，接着将其接种于自制的灭菌培养基上，进行加热，收集培养基表层薄膜，进行干燥，研磨过筛，得到发酵膜粉末，最后将其与去离子水、磷酸二氢钾等物质进行均质处理，即可得到无毒可降解型蒸腾抑制剂。本发明制备的无毒可降解型蒸腾抑制剂中不含有有毒物质，不会对环境和人的身体健康产生危害，且具有可降解性，具有广泛的应用前景。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
（1）分别称量10～15g豆粕、650～700mL去离子水、5～10g氯化钠、10～15g磷酸氢二钾、1～2g锰酸钾置于培养皿中，搅拌混合并置于120～125℃下高温灭菌处理10～15min，静置冷却至室温后，制备得灭菌富集培养基；
（2）选用接种环挑选2～3环凝结芽孢杆菌转接于上述灭菌富集培养基上，控制培养温度为45～50℃，在120～200r/min下摇床振荡培养5～8天，待培养完成后，用三层纱布过滤并收集滤液，制备得富集菌种液；
（3）按重量份数计，分别称量45～50份新鲜牛奶、10～15份大豆、5～10份氯化钠、10～15份磷酸氢二钾、1～2份锰酸钾和45～50去离子水置于烧杯中，搅拌混合并置于100～110℃下水浴加热25～30min，静置冷却至室温，制备得灭菌培养基，再按接种量5%，将上述制备的富集菌种液添加至灭菌培养基中，在45～50℃下水浴加热5～7天；
（4）待水浴加热完成后，停止加热并静置冷却至室温，收集培养基表层薄膜，用去离子水冲洗3～5次后，真空冷冻干燥收集得干燥发酵薄膜，将干燥发酵薄膜置于研钵中研磨并过200目筛，收集得发酵膜粉末，随后按重量份数计，分别称量45～50份去离子水、10～15份磷酸二氢钾、5～8份蜂蜡和15～20份发酵膜粉末置于均质机中，在45～55℃下均质处理15～20min，收集均质液即可制备得一种无毒可降解型蒸腾抑制剂。
本发明的应用方法：本发明制备的无毒可降解型蒸腾抑制剂可广泛适用于植物移植前后及待移栽过程；植物种植后的养护管理及在高温或干旱环境中生长的植物，按质量比1:80～1:100，将本发明制备的无毒可降解型蒸腾抑制剂与温度为35～40℃的水进行搅拌混合均匀，均匀的喷洒于所需使用蒸腾抑制剂的植物叶面，植物移栽采用起苗前喷洒1次，载植后间隔30天喷洒2次；植物种植后的养护管理每隔六个月喷洒1次；在高温或干旱环境中生长的植物在干旱期、灌浆期叶面喷洒2次。经检测，对于移栽和干旱、高温中生长的植物成活率提高了15～20%，对于养护的植物叶子枯黄推迟15～20天，有效降低植物的蒸腾速率。
本发明与其他方法相比，有益技术效果是：
（1）本发明制备的无毒可降解型蒸腾抑制剂能有效降低植物的蒸腾速率，对于移栽和干旱、高温中生长的植物成活率提高了15～20%，对于养护的植物叶子枯黄推迟15～20天；
（2）本发明制备的无毒可降解型蒸腾抑制剂中不含有有毒物质，不会对环境和人体身体健康造成危害；
（3）本发明制备的无毒可降解型蒸腾抑制剂易降解，不会造成持久污染，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
首先分别称量10～15g豆粕、650～700mL去离子水、5～10g氯化钠、10～15g磷酸氢二钾、1～2g锰酸钾置于培养皿中，搅拌混合并置于120～125℃下高温灭菌处理10～15min，静置冷却至室温后，制备得灭菌富集培养基；选用接种环挑选2～3环凝结芽孢杆菌转接于上述灭菌富集培养基上，控制培养温度为45～50℃，在120～200r/min下摇床振荡培养5～8天，待培养完成后，用三层纱布过滤并收集滤液，制备得富集菌种液；再按重量份数计，分别称量45～50份新鲜牛奶、10～15份大豆、5～10份氯化钠、10～15份磷酸氢二钾、1～2份锰酸钾和45～50去离子水置于烧杯中，搅拌混合并置于100～110℃下水浴加热25～30min，静置冷却至室温，制备得灭菌培养基，再按接种量5%，将上述制备的富集菌种液添加至灭菌培养基中，在45～50℃下水浴加热5～7天；待水浴加热完成后，停止加热并静置冷却至室温，收集培养基表层薄膜，用去离子水冲洗3～5次后，真空冷冻干燥收集得干燥发酵薄膜，将干燥发酵薄膜置于研钵中研磨并过200目筛，收集得发酵膜粉末，随后按重量份数计，分别称量45～50份去离子水、10～15份磷酸二氢钾、5～8份蜂蜡和15～20份发酵膜粉末置于均质机中，在45～55℃下均质处理15～20min，收集均质液即可制备得一种无毒可降解型蒸腾抑制剂。
实例1
首先分别称量15g豆粕、700mL去离子水、10g氯化钠、15g磷酸氢二钾、2g锰酸钾置于培养皿中，搅拌混合并置于125℃下高温灭菌处理15min，静置冷却至室温后，制备得灭菌富集培养基；选用接种环挑选3环凝结芽孢杆菌转接于上述灭菌富集培养基上，控制培养温度为50℃，在200r/min下摇床振荡培养8天，待培养完成后，用三层纱布过滤并收集滤液，制备得富集菌种液；再按重量份数计，分别称量50份新鲜牛奶、15份大豆、10份氯化钠、15份磷酸氢二钾、2份锰酸钾和50去离子水置于烧杯中，搅拌混合并置于110℃下水浴加热30min，静置冷却至室温，制备得灭菌培养基，再按接种量5%，将上述制备的富集菌种液添加至灭菌培养基中，在50℃下水浴加热7天；待水浴加热完成后，停止加热并静置冷却至室温，收集培养基表层薄膜，用去离子水冲洗5次后，真空冷冻干燥收集得干燥发酵薄膜，将干燥发酵薄膜置于研钵中研磨并过200目筛，收集得发酵膜粉末，随后按重量份数计，分别称量50份去离子水、15份磷酸二氢钾、8份蜂蜡和20份发酵膜粉末置于均质机中，在55℃下均质处理20min，收集均质液即可制备得一种无毒可降解型蒸腾抑制剂。
本发明制备的无毒可降解型蒸腾抑制剂可广泛适用于植物移植前后及待移栽过程，按质量比1:100，将本发明制备的无毒可降解型蒸腾抑制剂与温度为40℃的水进行搅拌混合均匀，均匀的喷洒于所需移栽的植物，植物移栽采用起苗前喷洒1次，栽植后间隔30天喷洒2次，经检测，对于移栽的植物成活率提高了15%，有效降低植物的蒸腾速率。
实例2
首先分别称量10g豆粕、650mL去离子水、5g氯化钠、10g磷酸氢二钾、1g锰酸钾置于培养皿中，搅拌混合并置于120℃下高温灭菌处理10min，静置冷却至室温后，制备得灭菌富集培养基；选用接种环挑选2环凝结芽孢杆菌转接于上述灭菌富集培养基上，控制培养温度为45℃，在120r/min下摇床振荡培养5天，待培养完成后，用三层纱布过滤并收集滤液，制备得富集菌种液；再按重量份数计，分别称量45份新鲜牛奶、10份大豆、5份氯化钠、10份磷酸氢二钾、1份锰酸钾和45去离子水置于烧杯中，搅拌混合并置于100℃下水浴加热25min，静置冷却至室温，制备得灭菌培养基，再按接种量5%，将上述制备的富集菌种液添加至灭菌培养基中，在45℃下水浴加热5天；待水浴加热完成后，停止加热并静置冷却至室温，收集培养基表层薄膜，用去离子水冲洗3次后，真空冷冻干燥收集得干燥发酵薄膜，将干燥发酵薄膜置于研钵中研磨并过200目筛，收集得发酵膜粉末，随后按重量份数计，分别称量45份去离子水、10份磷酸二氢钾、5份蜂蜡和15份发酵膜粉末置于均质机中，在45℃下均质处理15min，收集均质液即可制备得一种无毒可降解型蒸腾抑制剂。
本发明制备的无毒可降解型蒸腾抑制剂可适用于植物种植后的养护管理，按质量比1:80，将本发明制备的无毒可降解型蒸腾抑制剂与温度为35℃的水进行搅拌混合均匀，均匀的喷洒于所需养护的植物叶面，植物种植后的养护管理每隔六个月喷洒1次，经检测，养护的植物叶子枯黄推迟15天，有效降低植物的蒸腾速率。
实例3
首先分别称量12g豆粕、670mL去离子水、7g氯化钠、12g磷酸氢二钾、2g锰酸钾置于培养皿中，搅拌混合并置于122℃下高温灭菌处理12min，静置冷却至室温后，制备得灭菌富集培养基；选用接种环挑选2环凝结芽孢杆菌转接于上述灭菌富集培养基上，控制培养温度为47℃，在130r/min下摇床振荡培养7天，待培养完成后，用三层纱布过滤并收集滤液，制备得富集菌种液；再按重量份数计，分别称量47份新鲜牛奶、12份大豆、7份氯化钠、12份磷酸氢二钾、2份锰酸钾和47去离子水置于烧杯中，搅拌混合并置于105℃下水浴加热27min，静置冷却至室温，制备得灭菌培养基，再按接种量5%，将上述制备的富集菌种液添加至灭菌培养基中，在47℃下水浴加热6天；待水浴加热完成后，停止加热并静置冷却至室温，收集培养基表层薄膜，用去离子水冲洗4次后，真空冷冻干燥收集得干燥发酵薄膜，将干燥发酵薄膜置于研钵中研磨并过200目筛，收集得发酵膜粉末，随后按重量份数计，分别称量47份去离子水、12份磷酸二氢钾、7份蜂蜡和17份发酵膜粉末置于均质机中，在50℃下均质处理17min，收集均质液即可制备得一种无毒可降解型蒸腾抑制剂。
本发明制备的无毒可降解型蒸腾抑制剂可适用于在高温或干旱环境中生长的植物，按质量比1:90，将本发明制备的无毒可降解型蒸腾抑制剂与温度为37℃的水进行搅拌混合均匀，均匀的喷洒于干旱环境中生长的植物叶面，在干旱期、灌浆期叶面喷洒2次。经检测，对于干旱、高温中生长的植物成活率提高了20%，有效降低植物的蒸腾速率。