阿魏酸在制备抑制铬诱导的肺部炎性损伤药物中的应用的制作方法

本发明涉及阿魏酸的应用，具体地说，涉及阿魏酸在制备抑制铬诱导的肺部炎性损伤药物中的应用。

背景技术：

铬广泛存在于自然界中，其自然来源主要是岩石风化，人为污染来源是铬的开采、工业含铬废气和废水的排放以及含铬产品的消耗等。目前，铬是所有危险废物场所中一半以上的主要环境污染物，其许多化学形式都对环境和人类健康有严重影响。六价铬(cr(vi))被认为是铬的最具毒性的类型，通常与氧气结合生成铬酸盐(cro4^2-)或重铬酸盐(cr2o7^2-)氧阴离子。

肺是人体的重要器官，是呼吸系统的一部分，功能是进行气体交换，良好的肺功能是维持生命的基本保障，人体为了完成新陈代谢需要不断从空气中摄取氧气和排出二氧化碳(气体交换)。然而吸入是人体接触铬的主要形式，因此当环境暴露的铬通过呼吸道进入人体时，容易沉积在肺部，同时侵害上呼吸道产生炎症反应，从而引起鼻炎、支气管炎和肺炎等肺部疾病。然而肺除了主管呼吸功能外还具备非呼吸性的防御、免疫及内分泌代谢功能。当遭受到持续的、过量的外界刺激时，作为呼吸器官对抗有害刺激的第一道防线(人肺支气管上皮细胞)也会最先遭受损伤。人肺支气管上皮细胞在遭受铬的刺激时可发生活化，刺激nkrp3炎症小体的组装，从而释放一系列的炎症介质和细胞炎症因子来诱导肺的炎症损伤。因此，寻找和开发能够防治铬造成的肺部炎症损伤的天然保护性药物具有重要的意义。

许多报道指出多酚类化合物可在多个领域作为预防和治疗性药物应用，目前已有研究表明多酚类化合物在体内和体外对肺细胞具有预防和保护作用。阿魏酸是一种广泛存在于植物中的酚酸，最初在植物的种子和叶子中发现，具备多种生物活性。已有研究指出作为多酚类化合物之一的阿魏酸对肝脏、神经及心脑血管疾病存在有益效果，但目前阿魏酸对铬诱导的beas-2b细胞炎性损伤的保护作用尚未明确。

技术实现要素：

本发明目的是提供一种含有阿魏酸的药物，在制备防治铬诱导的肺部炎性损伤药物中的应用。阿魏酸能够抑制铬诱导的细胞炎性损伤，本发明从细胞炎性损伤、nlrp3炎症小体的组装和炎症因子的产生角度出发，为阿魏酸在肺部炎性损伤的预防和治疗的应用中提供理论基础及实验依据。

本发明采用的技术方案为：阿魏酸在制备抑制铬诱导的肺部炎性损伤药物中的应用。

阿魏酸单用或与其他药物联用在铬诱导的肺部炎性损伤药物中的应用。

优选地，上述的应用，所述的铬为重铬酸钾(k2cr2o7)。

优选地，上述的应用，所述的阿魏酸通过抑制炎性小体nlrp3的组装成熟，来抑制细胞炎症因子的表达。

优选地，上述的应用，所述的细胞炎症因子为：il-1β。

优选地，上述的应用，所述的肺部炎性损伤的疾病为：慢性支气管炎、慢性阻塞性肺疾病、肺炎。

优选地，上述的应用，所述的药物是以阿魏酸为有效成分，加入常规辅料获得的药物制剂。

优选地，上述的应用，所述的药物制剂为：片剂、注射剂、颗粒剂。

优选地，上述的应用，其特征在于，阿魏酸的剂量为25-100μm。

本发明的有益效果：

本发明通过探究阿魏酸在制备防治铬造成的肺部炎性损伤药物中的应用，对阿魏酸的生物学活性进行进一步的探索，为肺部炎性损伤的预防和治疗提供理论基础和实验依据。

本发明利用阿魏酸及以其为主要活性成分，在制备预防和治疗肺部炎症药物(或保健食品)中的应用。发现了阿魏酸能够预防和治疗铬对肺部造成的炎性损伤，抑制其对beas-2b细胞的损伤。阿魏酸来源广泛，价格低廉，具备可深入开发潜力。

附图说明

图1为阿魏酸对铬诱导的beas-2b细胞存活数量下降的影响。

图2为阿魏酸对铬诱导的beas-2b细胞中nlrp3炎症小体激活的影响。

图3为阿魏酸对铬诱导的beas-2b细胞中nlrp3蛋白水平升高的量化分析。

图4为阿魏酸对铬诱导的beas-2b细胞中cleavedcaspase-1蛋白水平升高的量化分析。

图5为阿魏酸对铬诱导的beas-2b细胞中il-1β蛋白水平升高的量化分析。

具体实施方式

本实施例选用beas-2b细胞为研究对象，检测阿魏酸对铬造成的细胞损伤及炎症的保护作用，具体实验步骤如下：

实施例1beas-2b细胞存活数量检测

取对数生长期的beas-2b细胞接种于96孔板中，按照实验需求将细胞分组：空白对照组，k2cr2o7(2.5μm)损伤组，三种浓度的阿魏酸(25μm、50μm和100μm)保护组。损伤组中单独加入2.5μm的k2cr2o7处理24小时，保护组中则先加入三种浓度的阿魏酸预保护3小时然后加入2.5μm的k2cr2o7再共同孵育24小时。处理后向每个孔中加入20μlmtt溶液，置于5％co2、37℃细胞培养箱中继续培养4小时。染色之后吸出培养基每孔加入150μl的dmso溶液，置于摇床上摇10分钟，待甲瓒晶体完全溶解后使用酶标仪检测490nm处的吸光度值，并计算beas-2b细胞的存活比率。

从图1可以发现，与空白对照组相比，k2cr2o7处理后的beas-2b细胞的存活数量显著(p<0.01)降低。将空白对照组细胞存活率设为100％，k2cr2o7损伤组的细胞存活率降低到84.40％，而在阿魏酸共孵育的处理组中，细胞存活率相对于k2cr2o7损伤组呈现升高的趋势，25μm，50μm及100μm的阿魏酸能够使细胞存活率分别提高到87.54％，93.74％及98.46％。结果表明，阿魏酸能够显著(p<0.01)抑制k2cr2o7诱导的beas-2b细胞存活率的降低，对beas-2b细胞具有保护作用。

实施例2nlrp3炎症小体组装活化检测

上述实施例1表明阿魏酸能够保护beas-2b细胞免受铬诱导的细胞活力的下降。与此同时，对其保护机制的研究是有必要的。nlrp3炎性小体由nod样受体(nlrs)、凋亡相关的斑点样蛋白(asc)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)组成，它是最重要的细胞内模式识别受体之一。nlrp3炎性小体可以感知外源性和内源性的“危险信号”，诱发炎症。nlrp3炎症小体被激活后可通过caspase-1水解il-1β前体(pro-il-1β)，使其形成具有活性的il-1β，继而介导炎症的发生。

取对数生长期的beas-2b细胞处理分组，细胞分组情况为空白对照组，k2cr2o7(2.5μm)损伤组，三种浓度的阿魏酸(25μm、50μm和100μm)保护组。损伤组单独加入2.5μm的k2cr2o7，保护组中则先加入三种浓度的阿魏酸预保护3小时然后加入2.5μm的k2cr2o7再共同孵育24小时。随后置于5％co2、37℃细胞培养箱中培养24小时。利用蛋白免疫印迹法检测nlrp3，裂解的caspase-1，il-1β蛋白表达情况。

结果如图2所示，k2cr2o7处理后beas-2b细胞中nlrp3炎症小体被激活，nlrp3炎症小体相关蛋白(nlrp3，cleavedcaspase-1，il-1β)表达水平显著升高。在阿魏酸保护条件下nlrp3炎症小体相关蛋白的表达显著降低。

具体情况如下，如图3所示，k2cr2o7处理后的beas-2b细胞中nlrp3蛋白水平显著(p<0.01)升高，蛋白表达量是空白对照组的1.71倍。而在阿魏酸保护条件下nlrp3蛋白表达水平显著(p<0.01)降低，与单独的k2cr2o7处理组相比，25μm、50μm和100μm的阿魏酸处理组中nlrp3蛋白表达量分别降低了19.29％，27.48％和70.76％。

如图4所示，k2cr2o7处理后的beas-2b细胞中cleavedcaspase-1蛋白水平显著(p<0.01)升高，蛋白表达量是空白对照组的1.73倍。而在阿魏酸保护条件下cleavedcaspase-1蛋白表达水平显著(p<0.01)降低，与单独的k2cr2o7处理组相比，25μm、50μm和100μm的阿魏酸处理组中cleavedcaspase-1蛋白表达量分别降低了20.23％，22.54％和27.74％。

如图5所示，k2cr2o7处理后的beas-2b细胞中il-1β蛋白水平显著(p<0.01)升高，蛋白表达量是空白对照组的1.53倍。而在阿魏酸保护条件下il-1β蛋白表达水平显著(p<0.01)降低，与单独的k2cr2o7处理组相比，25μm、50μm和100μm的阿魏酸处理组中il-1β蛋白表达量分别降低了11.11％，18.95％和24.83％。

以上数据说明k2cr2o7存在的条件下，beas-2b细胞中nlrp3炎症小体被激活，而阿魏酸可以抑制k2cr2o7的毒性从而表现出对beas-2b细胞的保护作用，这与抑制nlrp3炎症小体相关蛋白(nlrp3，cleavedcaspase-1，il-1β)的表达有关。