本发明涉及化妆品领域，具体涉及一种二裂酵母发酵产物滤液及其在护肤品中的应用。
背景技术：
发酵是微生物在一定条件下进行生理活动，借助于酶的作用对有机物进行分解、转化取得c、n、维生素等各种营养以生长菌体，同时产生各种次级代谢产物，如：多糖、氨基酸等的过程。与其他加工方式相比，发酵能够产生新的活性物质，降低毒性，改变功效，同时可能由于微生物的水解作用，使发酵产物更易被吸收。
目前市场上利用发酵技术生产的化妆品有很多，其中比较有代表性的品牌有雅诗兰黛小棕瓶、sk-ⅱ神仙水、海蓝之谜等，因具有上述独特的优势，这类发酵化妆品已经成为继天然植物提取化妆品后的又一大市场发展的新方向。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种与现有技术不同的用于肌肤护理的二裂酵母发酵产物滤液及其制备方法。具体技术方案如下：
第一方面，本发明实施例提供了一种用于肌肤护理的二裂酵母发酵产物滤液，所述的二裂酵母发酵产物滤液通过如下方法制备的得到：
（1）取蛹虫草、露水草混合并粉碎，得到混合原料；向所述的混合原料中加入水，粉碎，榨汁，离心，取上清液；
（2）向所述上清液中加入葡萄糖、可溶性淀粉、琼脂、l-半胱氨酸、酵母浸粉、磷酸二氢钾、蛋白胨、牛肉浸粉、无水乙酸钠、番茄浸粉，搅拌均匀后灭菌，制得培养基；
（3）在所述培养基中接种双岐杆菌菌种，发酵，得到发酵液；将发酵液的ph值至5.5-6.5，高压均质3次，使酵母细胞充分破碎；进行过滤，获得滤液，即得到所述的二裂酵母发酵产物滤液。
具体的，作为优选，所述蛹虫草的添加量为10-50重量份，露水草的添加量为10-50重量份。
具体的，作为优选，所述水的添加量为所述混合原料重量的1-5倍。
具体的，作为优选，所述的营养液中加入以下重量份的物质：葡萄糖1.8份、可溶性淀粉0.3份、琼脂2.5份、l-半胱氨酸0.8份、酵母浸粉1.5份、磷酸二氢钾0.2份、蛋白胨2份、牛肉浸粉0.5份、无水乙酸钠0.6份、番茄浸粉1份。
具体的，作为优选，所述的双岐杆菌菌种中活菌数为1×106-1×108cfu/ml，所述双岐杆菌菌种的添加量是所述培养基质量的0.1-1%。
具体的，作为优先，所述的发酵条件：发酵温度37℃，搅拌转速50-100rpm、发酵时间10-12h。
具体的，利用500-800目的滤布进行所述过滤。
第二方面，本发明实施例提供了上述的用于肌肤护理的二裂酵母发酵产物滤液在制备护肤类日用品中的应用。
具体地，所述护肤类日用品包括：膏霜、乳液、水剂、精华、面膜。
本发明实施例提供的技术方案带来的有益效果是：
本发明实施例所制得的用于肌肤护理的二裂酵母发酵产物滤液是经双歧杆菌培养、灭活及分解得到代谢产物、细胞碎片的复合体，含有丰富的维生素、矿物质、氨基酸、多糖、多肽等活性小分子，是一种只用于护肤的优质酵母精华。其中富含的营养物质，有滋养皮肤的功能。将其应用在护肤品中可以加强皮肤新陈代谢，促进细胞增殖，紧致肌肤，减少小细纹，具有良好的祛皱功能。
具体实施方式
说明书中的实施方式仅用于对本发明进行说明，其并不对本发明的保护范围起到限定作用。本发明的保护范围仅由权利要求限定，在本发明公开的实施方式的基础上所做的任何省略、替换或修改将落入本发明的保护范围。
参选以下本发明的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本发明的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。
如本文所用术语“由…制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。
当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
此外，本发明要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。
为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例对本发明作进一步详述，该实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。
本发明所涉及的蛹虫草，为子囊菌门，肉座目，麦角菌科、虫草属的模式种。由子座（即草部分，又称子实体）与菌核（即昆虫的尸体部分）两部分组成的复合体，简单来说，就是虫体与草的结合。中医认为，蛹虫草既能补肺阴，又能补肾阳，主治肾虚，阳痿遗精，腰膝酸痛，病后虚弱，久咳虚弱，劳咳痰血，自汗盗汗等，是一种能同时平衡、调节阴阳的中药。
本发明所涉及的露水草，又名蛛丝毛蓝耳草，是鸭跖草科蓝耳草属植物，多年生草本。中医全草入药，具有通经活络，除湿止痛之疗效。
实施例1
一种用于肌肤护理的二裂酵母发酵产物滤液，所述的二裂酵母发酵产物滤液通过如下方法制备的得到：
（1）取10重量份蛹虫草、50重量份露水草混合并粉碎，得到混合原料；向所述的混合原料中加入所述混合原料重量1倍的水，粉碎，榨汁，离心，取上清液；
（2）向所述上清液中加入葡萄糖1.8份、可溶性淀粉0.3份、琼脂2.5份、l-半胱氨酸0.8份、酵母浸粉1.5份、磷酸二氢钾0.2份、蛋白胨2份、牛肉浸粉0.5份、无水乙酸钠0.6份、番茄浸粉1份，搅拌均匀后灭菌，制得培养基；
（3）在所述培养基中接种双岐杆菌菌种，其中所述的双岐杆菌菌种中活菌数为1×108cfu/ml，所述双岐杆菌菌种的添加量是所述培养基质量的0.1%；在温度37℃、搅拌转速100rpm条件下发酵10h，得到发酵液；将发酵液的ph值至6.5，高压均质3次，使酵母细胞充分破碎；使用500目的滤布过滤，获得滤液，即得到所述的二裂酵母发酵产物滤液。
实施例2
一种用于肌肤护理的二裂酵母发酵产物滤液，所述的二裂酵母发酵产物滤液通过如下方法制备的得到：
（1）取50重量份蛹虫草、10重量份露水草混合并粉碎，得到混合原料；向所述的混合原料中加入所述混合原料重量1-5倍的水，粉碎，榨汁，离心，取上清液；
（2）向所述上清液中加入葡萄糖1.8份、可溶性淀粉0.3份、琼脂2.5份、l-半胱氨酸0.8份、酵母浸粉1.5份、磷酸二氢钾0.2份、蛋白胨2份、牛肉浸粉0.5份、无水乙酸钠0.6份、番茄浸粉1份，搅拌均匀后灭菌，制得培养基；
（3）在所述培养基中接种双岐杆菌菌种，其中所述的双岐杆菌菌种中活菌数为1×106cfu/ml，所述双岐杆菌菌种的添加量是所述培养基质量的1%；在温度37℃、搅拌转速50rpm条件下发酵12h，得到发酵液；将发酵液的ph值至5.5，高压均质3次，使酵母细胞充分破碎；使用800目的滤布过滤，获得滤液，即得到所述的二裂酵母发酵产物滤液。
实施例3
一种用于肌肤护理的二裂酵母发酵产物滤液，所述的二裂酵母发酵产物滤液通过如下方法制备的得到：
（1）取20重量份蛹虫草、30重量份露水草混合并粉碎，得到混合原料；向所述的混合原料中加入所述混合原料重量3倍的水，粉碎，榨汁，离心，取上清液；
（2）向所述上清液中加入葡萄糖1.8份、可溶性淀粉0.3份、琼脂2.5份、l-半胱氨酸0.8份、酵母浸粉1.5份、磷酸二氢钾0.2份、蛋白胨2份、牛肉浸粉0.5份、无水乙酸钠0.6份、番茄浸粉1份，搅拌均匀后灭菌，制得培养基；
（3）在所述培养基中接种双岐杆菌菌种，其中所述的双岐杆菌菌种中活菌数为1×107cfu/ml，所述双岐杆菌菌种的添加量是所述培养基质量的0.5%；在温度37℃、搅拌转速80rpm条件下发酵11h，得到发酵液；将发酵液的ph值至6，高压均质3次，使酵母细胞充分破碎；使用600目的滤布过滤，获得滤液，即得到所述的二裂酵母发酵产物滤液。
对比例1
一种用于肌肤护理的二裂酵母发酵产物滤液，所述的二裂酵母发酵产物滤液通过如下方法制备的得到：
（1）取20重量份蛹虫草粉碎，得到混合原料；向所述的混合原料中加入所述混合原料重量3倍的水，粉碎，榨汁，离心，取上清液；
（2）向所述上清液中加入葡萄糖1.8份、可溶性淀粉0.3份、琼脂2.5份、l-半胱氨酸0.8份、酵母浸粉1.5份、磷酸二氢钾0.2份、蛋白胨2份、牛肉浸粉0.5份、无水乙酸钠0.6份、番茄浸粉1份，搅拌均匀后灭菌，制得培养基；
（3）在所述培养基中接种双岐杆菌菌种，其中所述的双岐杆菌菌种中活菌数为1×107cfu/ml，所述双岐杆菌菌种的添加量是所述培养基质量的0.5%；在温度37℃、搅拌转速80rpm条件下发酵11h，得到发酵液；将发酵液的ph值至6，高压均质3次，使酵母细胞充分破碎；使用600目的滤布过滤，获得滤液，即得到所述的二裂酵母发酵产物滤液。
对比例2
一种用于肌肤护理的二裂酵母发酵产物滤液，所述的二裂酵母发酵产物滤液通过如下方法制备的得到：
（1）取30重量份露水草粉碎，得到混合原料；向所述的混合原料中加入所述混合原料重量3倍的水，粉碎，榨汁，离心，取上清液；
（2）向所述上清液中加入葡萄糖1.8份、可溶性淀粉0.3份、琼脂2.5份、l-半胱氨酸0.8份、酵母浸粉1.5份、磷酸二氢钾0.2份、蛋白胨2份、牛肉浸粉0.5份、无水乙酸钠0.6份、番茄浸粉1份，搅拌均匀后灭菌，制得培养基；
（3）在所述培养基中接种双岐杆菌菌种，其中所述的双岐杆菌菌种中活菌数为1×107cfu/ml，所述双岐杆菌菌种的添加量是所述培养基质量的0.5%；在温度37℃、搅拌转速80rpm条件下发酵11h，得到发酵液；将发酵液的ph值至6，高压均质3次，使酵母细胞充分破碎；使用600目的滤布过滤，获得滤液，即得到所述的二裂酵母发酵产物滤液。
实验1刺激性测试
采用鸡胚绒毛尿囊膜试验评估本发明实施例所制得的二裂酵母发酵产物滤液。参照出入境检验检疫行业标准发布的化妆品眼刺激性/腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验标准（sn/t2329-2009化妆品眼刺激性／腐蚀性的鸡胚绒毛尿囊膜试验[s].北京:中国标准出版社，2009.），采用反应时间法，将9日龄鸡胚进行照蛋检查，在蛋壳表面标记气室位置；用牙科锯齿弯镊剥去带标记的蛋壳部分，暴露白色蛋膜。用吸管吸取适量质量分数为0.9%nacl溶液使蛋膜湿润后，将溶液倾出。小心用镊子去除内膜，保证血管膜不受损。分别吸取0.3ml的待测液，滴加在绒毛尿囊膜表面，记录5min内开始出现出血、血管融解、凝血的时间，期间录影并拍照，每种待测液做6次平行试验。以质量分数为0.9%nacl溶液为阴性对照，质量分数为0.3%naoh溶液为阳性对照，质量分数为1%脂肪醇醚硫酸钠盐混合物(asv)为基准物质对照。
根据sn/t2329-2009，刺激评分（is）法采用反应时间法的评分标准，is计算公式为：
is＝（301-sech）×5/300+（301-secl）×7/300+（301-secc）×9/300
式中，sech为鸡胚绒毛尿囊膜上观察到开始发生出血的平均时间，s；secl为鸡胚绒毛尿囊膜上观察到开始发生血管融解的平均时间，s；secc为鸡胚绒毛尿囊膜上观察到开始出现凝血的平均时间，s。根据计算的is值按表1对受试物眼刺激性进行分类。
表1刺激评分结果评价
开始出现出血、血管融解和凝血时间及is值各待测液的is值及其刺激性见表2。
表2鸡胚绒毛尿囊膜测试记录表
从表2可知，本发明实施例1-3所制得的二裂酵母发酵产物滤液的刺激性低，可以作为一种原料应用在护肤品中。
实验2细胞增殖测试
将表皮细胞消化，制成细胞悬液后，接种于96孔板，每孔10000个细胞。应用km培养基（gibco公司，美国）进行培养，培养24h后，换液，于7组中分别添加pbs、角质细胞生长因子kgf（浓度为5ng/ml），实施例1-3、对比例1-2所制得的二裂酵母发酵产物滤液（浓度为5ng/ml），继续培养72h。每孔添加20μl无菌cck-8液，继续避光培养2h，上酶标仪检测450nm的吸光度值。细胞增殖率=（实验组od值-空白组od值）/（对照组od值-空白组od值）。
细胞增殖检测结果如表3所显示，在pbs空白组和kgf阳性对照组、实施例1-3、对比例1-2所制得的二裂酵母发酵产物滤液，均存在显著差异，实施例1-3所制得的二裂酵母发酵产物滤液均能够促进表皮细胞增殖。
表3细胞增殖测试数据
实施例4
一种祛皱精华液，包括如下质量百分含量的组分：
甘油5%
丁二醇1%
1,3-丙二醇1%
透明质酸钠0.05%
黄原胶0.05%
卡波姆0.3%
精氨酸0.3%
戊二醇5%
海藻糖0.2%
实施例3所制得的二裂酵母发酵产物滤液5%
水余量。
实验3志愿者功效测评
测试对象：召集30名45-60岁女性志愿者。受试者面部细纹轻度或中度、皮肤松弛轻度或中度、皮肤缺乏弹性，能很好配合试验，试用产品期间保持生活规律；能阅读和理解知情同意书的所有内容并自愿签署；试验期间停止使用其它皮肤护理产品，不再参与其他任何研究中心的临床试验，并同意不使用任何对结果有影响的化妆品、药物和保健品。
测试安排：志愿者洁肤后取0.1g实施例4所制得的祛皱精华液拍拭于面部肌肤，早晚各一次。在使用前、使用4周和8周后，受试者清洗面部并在温度21±1℃，相对湿度50%±5%rh的环境中休息30min，用面部图像分析仪visia采集数据，检测皮肤皱纹。
仪器：皮肤快速光学成像系统visia面部图像分析仪。皱纹特征计数：反应面部的皱纹数量，其数值越小，说明面部皮肤皱纹数量越少。皱纹分值：反应面部皱纹的大小、面积和密度，其数值越小，说明面部皱纹的大小、面积和密度越小。
测试结果与评价：受试者受试区域使用产品前后，皮肤皱纹特征计数的测试值数据分析见表4。其中，皱纹特征计数变化率%=（测试周的皱纹特征计数-第0周的皱纹特征计数）/第0周的皱纹特征计数*100%。
由表4可以看出：实施例子4的受试者的皮肤皱纹特征计数随着使用时间4周、8周，皱纹数在减少，8周时皱纹特征计数、皱纹分值减少更显著。
以上实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。