丁内酯代谢酮I在制备抗肿瘤药物中的应用的制作方法

丁内酯代谢酮i在制备抗肿瘤药物中的应用
技术领域
[0001]
本发明属于医药技术领域，具体为丁内酯代谢酮i在制备抗肿瘤药物中的应用。


背景技术：

[0002]
丁内酯-i(butyrolactone i)是曲霉属真菌土曲霉aspergillus terreus的主要活性次级代谢产物，1977年kiriyama首先从真菌aspergillus terreus var.africanus ifo 8835中分离得到，因其结构中具有五元不饱和内酯环，故将其命名为butyrolactone i。已有文献报道butyrolactone i具有明确的选择性细胞周期依赖性激酶(cdk)抑制活性，其对cdc2和cdk2的体外抑制作用机理也被阐明，是潜在的抗肿瘤候选药物。butyrolactone i及其衍生物也被证明是一类多效的天然活性物质，具有广泛的药理活性。
[0003]
我们通过给大鼠口服butyrolactone i后，收集其尿液和粪便，利用各种化学及色谱手段，分离和鉴定butyrolactone i在体内的代谢产物，推测butyrolactone i在体内的转化过程，同时测定这些代谢产物的药理活性，其中从代谢产物中分离得到的丁内酯代谢酮i具备较好药理活性，前期药效研究发现该化合物具有抗抗氧化(cn201910558609.3，一种二苯酮类化合物及其制备方法和应用)，在此基础上我们对丁内酯代谢酮i在抗肿瘤方面进行研究，同样体现出显著的抗肿瘤活性。


技术实现要素：

[0004]
本发明的目的在于提供丁内酯代谢酮i在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0005]
丁内酯代谢酮i在制备抗肿瘤药物中的应用，丁内酯代谢酮i的结构式如式(i)所示：
[0006][0007]
丁内酯代谢酮i的制备方法如下：
[0008]
(1)提取：wistar大鼠40只，雌雄各半，200
±
20g，动物适应性饲养1周后，灌胃给药40mg
·
kg-1，分别置于大鼠代谢笼中，1只/笼，收集24h的粪便。实验期间以淀粉馒头喂食大鼠，饮用水喂以4％生理盐水，1％葡萄糖溶液。每天早上收集24h的粪便保存于-80℃冰箱。累积灌胃给药4周，每天给药一次。从粪便的乙酸乙酯萃取物中共得到浸膏8g。
[0009]
(2)分离：将上述浸膏应用硅胶柱层析，以体积比为100:0-100:50的二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱，薄层层析检测，收集含有新化合物的流分，再经体积比为100:0-0:100的石油醚-乙酸乙酯系统梯度洗脱，最后经c18反相柱层析制备液相制备，以体积比为68:32的
甲醇-水进行洗脱，得到新化合物丁内酯代谢酮i。
[0010]
丁内酯代谢酮i，无色油状物(甲醇)，uv(meoh)λ
max
在209nm处。hr-esi-ms在m/z 333.1447处给出[m+na]
+
峰，推测分子式为c
20
h
22
o3。1h-nmr和
13
c-nmr数据见表1。
[0011]
表1丁内酯代谢酮i1h和
13
c核磁共振数据
[0012][0013]
丁内酯代谢酮i结构解析：
[0014]
如图1-5所示，丁内酯代谢酮i的1h nmr、
13
c nmr、2d-nmr(hsqc、hmbc)谱，以及hr-esi-ms谱得知化合物结构。具体地说：
[0015]
无色油状物(甲醇)，uv(meoh)λ
max
:209nm。红外光谱(ir)提示结构中存在羟基(3431cm-1
)、双键(1638cm-1
)等官能团。hr-esi-ms在m/z 333.1447处给出[m+na]
+
峰(calcd.333.1467)，确定其分子式为c
20
h
22
o3。
[0016]1h-nmr(400mhz,dmso-d6)谱中芳香区给出一组aa
′
bb
′
偶合系统的质子信号δ
h 6.91(2h,d,j＝8.4hz,h-2
′
,6
′
)、6.68(2h,d,j＝8.4hz,h-3
′
,5
′
)，推测存在对位取代苯的结构；δ
h 6.76(1h,dd,j＝8.0,2.0hz,h-6
″
)、6.75(1h,d,j＝2.0hz,h-2
″
)、6.70(1h,d,j＝
8.0hz,h-5
″
)，提示存在一个1,3,4-三取代苯环结构。由两个甲基信号δ
h 1.65(3h,s,h-10
″
)和1.67(3h,s,h-11
″
)，一个双键氢信号δ
h
5.23(1h,t,j＝7.2hz,h-8
″
)及与之相偶合的氢信号δ
h 3.16(2h,d,j＝7.2hz,h-7
″
)，推测存在一个异戊烯基片段。
[0017]
13
c-nmr(100mhz,dmso-d6)谱给出14个芳香或双键碳信号，符合以上推测的两个苯环片段和异戊烯基片段的碳的个数，与butyrolactone i相比，化合物丁内酯代谢酮i减少了-cooch3和内酯结构片段的碳信号，出现了酮羰基碳信号δ
c 206.9(c-2)和两个亚甲基碳信号δc 47.8(c-1)、48.0(c-3)。以上信息推测内酯环开环，发生脱羧重排。
[0018]
hsqc谱给出结构中所有氢碳直接相连的信息，如表1所示。
[0019]
hmbc谱中，质子信号δ
h 3.61(2h,s,h-1)与碳信号δ
c 206.9(c-2)、125.2(c-1')、130.9(c-2')相关，δ
h 3.59(2h,s,h-3)与碳信号δ
c 206.9(c-2)、128.2(c-6”)和c-2
′
(δc 130.9)相关h-7
″
(δ
h 3.16)与碳信号c-4
″
(δc 154.0),c-3
″
(δc 127.8)和c-8
″
(δc 123.3)相关，h-10
″
(δ
h 1.67)与c-9
″
(δc 131.5)和c-8
″
(δc 123.3)相关，h-11
″
(δ
h 1.65)与c-9
″
(δc 131.5)和c-8
″
(δc 123.3)相关，活泼氢信号4
′-
oh(δ
h 9.21)与c-4
′
(δc 156.5)和c-5
′
(δc 115.6)相关，4
″-
oh(δ
h 9.19)与c-4
″
(δc 154.0)和c-5
″
(δc 115.1)相关。确定化合物的结构为1-(4-hydroxy-3-(3-methylbut-2-enyl)phenyl)-3-(4-hydroxyphenyl)propan-2-one。
附图说明
[0020]
图1丁内酯代谢酮i的1h nmr谱；
[0021]
图2丁内酯代谢酮i的
13
c nmr谱；
[0022]
图3丁内酯代谢酮i的hsqc谱；
[0023]
图4丁内酯代谢酮i的hmbc谱；
[0024]
图5丁内酯代谢酮i的hr-esi-ms谱。
具体实施方式
[0025]
下面通过实施例进一步描述本发明，使本专业技术更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
[0026]
实施例1
[0027]
wistar大鼠40只，雌雄各半，200
±
20g，动物适应性饲养1周后，灌胃给药40mg
·
kg-1
，分别置于大鼠代谢笼中，1只/笼，收集24h的尿液与粪便。实验期间以淀粉馒头喂食大鼠，饮用水喂以4％生理盐水，1％葡萄糖溶液。每天早上收集24h的粪便保存于-80℃冰箱。累积灌胃给药4周，每天给药一次，共给药约14g。从粪便的乙酸乙酯萃取物中共得到浸膏8g。将浸膏用硅胶柱层析，以体积比为100:0-100:50的二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱，薄层层析检测，收集含有新化合物的流分，再经体积比为100:0-0:100的石油醚-乙酸乙酯系统梯度洗脱，最后经c18反相柱层析制备液相制备，以体积比为68:32的甲醇-水进行洗脱，流速3ml/min，检测波长210nm，得到丁内酯代谢酮i 80mg。
[0028]
实施例2
[0029]
丁内酯代谢酮i体外抗肿瘤试验
[0030]
采用mtt法测定细胞的增殖活性。分别取对数生长期的肿瘤细胞包括hepg-2(人肝
癌细胞)，a549(人肺癌细胞)，sgc-7901(人胃癌细胞)，mcf-7(人乳腺癌细胞)，lovo(人肠癌细胞)进行消化，得到细胞悬液后计数，按照计数结果将细胞浓度调整为大约1
×
105个/ml，以每孔100μl分别接种于96孔板中，在5％co2，37℃条件下的细胞培养箱中培养24h后，将上清液吸弃。随后加入以0.8％dmso溶解且培养基稀释所得的不同浓度的阳性对照药(羟基喜树碱)以及丁内酯代谢酮i(设置5个浓度，分别为5，10，20，40，80μg/ml)加入到96孔板中，空白对照组加等体积培养基，每孔100μl，每个浓度梯度设置5个复孔，于5％co2，37℃细胞培养箱中培养24h。最后，将pbs(磷酸缓冲液)稀释好的mtt(5mg/ml)20μl加入96孔板，继续培养4h，最后移除上清液，每孔加150μl dmso，震荡10分钟，用酶标仪在490nm波长下测定其吸光度od值，计算样品的半数抑制浓度(ic50)。
[0031]
按以下公式计算药物对肿瘤细胞体外增殖的抑制率(inhibition rate，ir％)
[0032]
ir％＝(1-odsample/odcontrol)
×
100％
[0033]
用icp1.0.0软件计算药物的半数抑制浓度(ic50)。
[0034]
表2.丁内酯代谢酮i体外抗肿瘤半数抑制浓度(n＝5)
[0035][0036]
实验结果(见表2)表明：丁内酯代谢酮i对以上各种肿瘤细胞均有不同程度的抑制作用。抑制强度由强到弱依次为sgc-7901、hepg-2、mcf-7、a549、lovo细胞。
[0037]
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。