一种硼携带剂注射剂的制作方法

1.本发明涉及一种硼携带剂注射剂，具体涉及一种硼携带剂即用型液体注射剂、其灭菌方法、降低其渗透压的方法，属于制药技术领域。


背景技术：

2.l
‑
bpa的化学名为4
‑
二羟基硼基
‑
l
‑
苯丙氨酸，结构式如下：
[0003][0004]
自然界中
10
b与
11
b的分布比为1:4，普通l
‑
bpa中
10
b丰度约为20％，在硼中子俘获治疗中使用的硼携带剂的
10
b丰度较高，可达到99.999％，其结构式如下：
[0005][0006]
硼中子俘获治疗(boron neutron capture therapy)简称bnct，是一种非侵入性的精准癌症放射治疗技术，适用于不易手术的局部肿瘤的治疗，如脑胶质瘤、头颈癌等。bnct的治疗过程主要分为两步：第一步，向病人注射硼
10
b化合物：硼
10
b化合物被设计成有很强的肿瘤细胞亲和性，进入人体后能迅速聚集于肿瘤细胞内，而在其他正常组织中分布很少。此外，
10
b是硼一种稳定的同位素，不具有放射性，而硼
10
b化合物在人体内代谢较快，化合物本身对组织细胞并无毒害作用。第二步，用中子束照射病人的肿瘤部位，聚集于肿瘤细胞内的
10
b俘获中子，形成同位素
11
b，进而迅速分裂为高能粒子4he和7li，肿瘤细胞最终被4he和7li释放的射线杀死。氦4he和锂7li的辐射半径仅为5
‑
9μm(约等于人体细胞的半径)，因此bnct保证杀死肿瘤细胞的同时又不会对周围正常细胞造成损伤，安全性较高。bnct对硼药的基本要求有三点：1.毒性小、正常组织中吸收较少，肿瘤中的富集度与正常组织中的富集度之比(t/nt)和肿瘤组织中的富集度与血液中的富集度之比(t/b)大于3；2.
10
b在肿瘤中浓度大于20ppm，即每个肿瘤细胞中至少要含109个
10
b原子或每g肿瘤组织含10～30μg的
10
b原子；3.在中子照射过程中血液中和正常组织中的硼相对快速代谢掉，而肿瘤中的存留时间要足够长。
[0007]
目前临床上已经批准应用的bnct药物有两种，4
‑
二羟基硼基
‑
l
‑
苯丙氨酸(l
‑
bpa)与巯基十二硼烷二钠盐(bsh)。l
‑
bpa为苯丙氨酸的一种类似物，能被细胞摄取，单独使用对
人体无生理活性，进入人体后在肿瘤组织与正常组织中的比例达到1.1～2.9，肿瘤组织与血液中的比例为1.1～3.6，具有一定的靶向性。由于bnct技术要求肿瘤组织中
10
b浓度较高，在临床使用l
‑
bpa的过程中，剂量为100～500mg/kg，以输注的方式进行给药。在制剂研发过程中，为了给药方便，降低无菌风险，首选是大输液。
[0008]
然而，l
‑
bpa水溶性差，难以满足大输液对药物溶解度的需求。
[0009]
专利us 5492900记载了一种l
‑
bpa
‑
果糖的组合物，采用的是过滤除菌的方法，进行了动物实验。
[0010]
专利jp 5150084记载了一种l
‑
bpa
‑
葡甲胺的组合物，采用过滤除菌的方法，最终制成冻干粉。
[0011]
专利jp 5345771记载了一种l
‑
bpa
‑
山梨醇的组合物，采用过滤除菌的方法。
[0012]
文献physicochemical investigation of the influence of saccharide
‑
based parenteral formulation excipients on l
‑
p
‑
boronphenylalanine solubilisation for boron neutron capture therapy(journal of pharmaceutical sciences,2012,101(1):223
‑
232.2012,101(1):223
‑
232.)中记载了多种助溶剂，未说明大输液的可行性。
[0013]
文献a cancer research uk pharmacokinetic study of bpa
‑
mannitol in patients with high grade glioma to optimise uptake parameters for clinical trials of bnct(applied radiation and isotopes,2009,67(7
‑
8):0
‑
0.)中采用了l
‑
bpa
‑
甘露醇处方进行临床试验。
[0014]
由于l
‑
bpa处方的稳定性较差，在现有文献报道中，l
‑
bpa的临床试验多是采用医院制剂，在无菌环境下配制，过滤除菌，在72h之内给药。这种情况下，l
‑
bpa制剂的大量生产受到了限制，同时造成使用的不方便，小水针在使用过程中需要稀释，冻干粉需要复溶后再稀释，用药安全性风险较高。


技术实现要素：

[0015]
发明概述
[0016]
本发明旨在提供一种无需复溶、可直接使用、稳定性好的注射剂。本发明将l
‑
bpa进行增溶后，进行终端灭菌，制成稳定方便使用的大输液，为果糖不耐受的患者提供了一种新的用药选择。大输液制剂在临床可直接使用，避免复溶、稀释时操作失误和引入无菌风险。
[0017]
本发明第一方面提供一种含有l
‑
bpa的注射剂，所述注射剂包含助溶剂，所述注射剂中的杂质苯丙氨酸的含量小于10.0％。同时提供一种由l
‑
bpa即用型液体注射剂，该注射剂安全有效，储存稳定性好。
[0018]
本发明第二方面提供一种第一方面所述注射剂的灭菌方法，该方法简单易行，稳定性好，安全性高，适于工业化生产。
[0019]
本发明第三方面提供一种降低所述注射剂渗透压的方法，该方法操作简单，可控性好，适于工业化生产。
[0020]
术语定义
[0021]
术语“包含”或“包括”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其
他方面的内容。
[0022]
在本发明的上下文中，无论是否使用“大约”或“约”等字眼，所有在此公开了的数字均为近似值。每一个数字的数值有可能会出现10％以下的差异或者本领域人员认为的合理的差异，如1％、2％、3％、4％或5％的差异。
[0023]
本发明中，mg/ml表示毫克/毫升，μm表示微米，mmol/l表示毫摩尔/升，min表示分钟，h表示小时，mg表示毫克，g表示克，ml表示毫升，mg/kg表示毫克/千克，μl表示微升，m表示摩尔/升，ml/min表示毫升/分钟，nm表示纳米，℃表示摄氏度，mosm/kg表示毫渗透摩尔/千克。
[0024]
术语“api”指活性成分，本发明的活性成分为l
‑
bpa，其中
10
b丰度为20％～99.999％之间。
[0025]
本发明中活性成分l
‑
bpa浓度，为活性成分重量(mg)与注射剂总体积(ml)的比，即w/v，mg/ml，例如30mg/ml的l
‑
bpa表示每1ml注射剂中含有30mg的l
‑
bpa。
[0026]
术语“湿热灭菌法”是指利用高压饱和蒸汽、过热水喷淋等手段使微生物菌体中的蛋白质、核酸发生变性而杀灭微生物的方法。
[0027]
发明详述
[0028]
基于现有技术的不足，本发明经过深入考察和研究，将l
‑
bpa进行增溶后，进行终端灭菌，制成即用型液体注射剂，所得溶液灭菌彻底，稳定性好，满足制备成注射剂的溶解度需求。
[0029]
本发明第一方面，提供一种注射剂，所述注射剂含有活性成分l
‑
bpa和助溶剂。所述注射剂中，可被视为杂质的苯丙氨酸的含量小于10.0％，或者小于9.0％，或者小于8.0％，或者小于7.0％，或者小于6.0％，或者小于5.0％，或者小于1.0％，或者小于0.5％，或者小于0.1％。
[0030]
在一些实施方式中，所述注射剂为即用型液体注射剂。在一些实施例中，所述注射剂为大输液。
[0031]
在一些实施方式中，所述注射剂，灭菌前，杂质苯丙氨酸的含量小于10.0％，或者小于9.0％，或者小于8.0％，或者小于7.0％，或者小于6.0％，或者小于5.0％，或者小于1.0％，或者小于0.5％，或者小于0.1％。在一些实施方式中，所述注射剂，灭菌后，杂质苯丙氨酸的含量小于10.0％，或者小于9.0％，或者小于8.0％，或者小于7.0％，或者小于6.0％，或者小于5.0％，或者小于1.0％，或者小于0.5％，或者小于0.1％。在一些实施方式中，所述注射剂灭菌前的杂质苯丙氨酸的含量小于0.1％。在一些实施方式中，所述注射剂灭菌后的杂质苯丙氨酸的含量小于5.0％。在一些实施方式中，所述注射剂灭菌前，杂质苯丙氨酸的含量小于0.1％，灭菌后杂质苯丙氨酸的含量小于5.0％。
[0032]
所述注射剂可以采用任何能够达到本发明所述灭菌效果的方法。在一些实施方式中，所述注射剂采用湿热灭菌法灭菌，可以很好地达到本发明所需要的效果。
[0033]
在一些实施方式中，所述注射剂采用湿热灭菌法灭菌，灭菌前，杂质苯丙氨酸的含量小于0.1％，灭菌后，杂质苯丙氨酸的含量小于5.0％。在一些实施例中，灭菌前的杂质苯丙氨酸的含量为0.05％，灭菌后的杂质苯丙氨酸的含量为2.49％。在一些实施例中，灭菌前的杂质苯丙氨酸的含量为0.06％，灭菌后的杂质苯丙氨酸的含量为3.75％。在一些实施例中，灭菌前的杂质苯丙氨酸的含量为0.05％，灭菌后的杂质苯丙氨酸的含量为3.97％。在一
些实施例中，灭菌前的杂质苯丙氨酸的含量为0.05％，灭菌后的杂质苯丙氨酸的含量为4.10％。
[0034]
本发明所述注射剂中，杂质酪氨酸的含量小于1.0％。在一些实施例中，所述注射剂中，杂质酪氨酸的含量小于0.8％。在一些实施例中，所述注射剂中，杂质酪氨酸的含量小于0.7％。在一些实施例中，所述注射剂中，杂质酪氨酸的含量小于0.6％。在一些实施例中，所述注射剂中，杂质酪氨酸的含量小于0.5％。在一些实施例中，所述注射剂中，杂质酪氨酸的含量小于0.1％。
[0035]
在一些实施方式中，按照l
‑
bpa的重量与注射剂总体积的比，所述l
‑
bpa的浓度范围为10.0mg/ml
‑
150.0mg/ml(w/v)。在一些实施方式中，l
‑
bpa的浓度范围为30.0mg/ml
‑
150.0mg/ml(w/v)。在一些实施方式中，l
‑
bpa的浓度范围为10.0mg/ml
‑
30.0mg/ml；在一些实施方式中，l
‑
bpa的浓度范围为10.0mg/ml
‑
80.0mg/ml；在一些实施方式中，l
‑
bpa的浓度范围为10.0mg/ml
‑
120.0mg/ml；在一些实施方式中，l
‑
bpa的浓度范围为30.0mg/ml
‑
50.0mg/ml；在一些实施方式中，l
‑
bpa的浓度范围为30.0mg/ml
‑
80.0mg/ml；在一些实施方式中，l
‑
bpa的浓度范围为30.0mg/ml
‑
120.0mg/ml；在一些实施方式中，l
‑
bpa的浓度范围为50.0mg/ml
‑
80.0mg/ml；在一些实施方式中，l
‑
bpa的浓度范围为50.0mg/ml
‑
120.0mg/ml；在一些实施方式中，l
‑
bpa的浓度范围为50.0mg/ml
‑
150.0mg/ml；在一些实施方式中，l
‑
bpa的浓度范围为80.0mg/ml
‑
120.0mg/ml；在一些实施方式中，l
‑
bpa的浓度范围为80.0mg/ml
‑
150.0mg/ml；在一些实施方式中，l
‑
bpa的浓度范围为120.0mg/ml
‑
150.0mg/ml。在一些实施例中，l
‑
bpa的浓度为30.0mg/ml，50.0mg/ml，80.0mg/ml，120.0mg/ml，或者150.0mg/ml。一定浓度范围的l
‑
bpa，可制备成合适给药体积的大输液，且稳定性较好。
[0036]
所述助溶剂可包括选自山梨醇，甘露醇中的至少一种。在一些实施例中，所述助溶剂包括山梨醇；在一些实施例中，所述助溶剂包括甘露醇。l
‑
bpa水溶性差，加入一定种类的助溶剂，可得到澄清透明、稳定性好的溶液。
[0037]
按照重量比计算，所述助溶剂的用量可为l
‑
bpa用量的0.8倍
‑
1.6倍。在一些实施方式中，所述助溶剂的用量为l
‑
bpa用量的1.0倍
‑
1.3倍。在一些实施方式中，所述助溶剂的用量为l
‑
bpa用量的0.8倍
‑
1.0倍；在一些实施方式中，所述助溶剂的用量为l
‑
bpa用量的0.8倍
‑
1.1倍；在一些实施方式中，所述助溶剂的用量为l
‑
bpa用量的0.8倍
‑
1.3倍；在一些实施方式中，所述助溶剂的用量为l
‑
bpa用量的1.0倍
‑
1.1倍；在一些实施方式中，所述助溶剂的用量为l
‑
bpa用量的1.0倍
‑
1.6倍；在一些实施方式中，所述助溶剂的用量为l
‑
bpa用量的1.1倍
‑
1.3倍；在一些实施方式中，所述助溶剂的用量为l
‑
bpa用量的1.1倍
‑
1.6倍；在一些实施方式中，所述助溶剂的用量为l
‑
bpa用量的1.3倍
‑
1.6倍。在一些实施例中，所述助溶剂的用量为l
‑
bpa用量的0.79倍，0.96倍，1.13倍，1.31倍，或者1.57倍。加入一定量的助溶剂，可增加l
‑
bpa溶解度。
[0038]
在一些实施方式中，所述注射剂含有活性成分l
‑
bpa和山梨醇，杂质苯丙氨酸的含量小于10.0％。在一些实施方式中，所述注射剂含有活性成分l
‑
bpa和甘露醇，杂质苯丙氨酸的含量小于10.0％。在一些实施方式中，所述注射剂含有活性成分l
‑
bpa和山梨醇，山梨醇的用量为l
‑
bpa用量的0.8倍
‑
1.6倍，杂质苯丙氨酸的含量小于10.0％。在一些实施方式中，所述注射剂含有活性成分l
‑
bpa和甘露醇，甘露醇的用量为l
‑
bpa的用量的0.8
‑
1.6倍，杂质苯丙氨酸的含量小于10.0％。
[0039]
前述注射剂，还可以包含抗氧剂。前述注射剂，也可以不包含抗氧剂。
[0040]
所述抗氧剂可包括选自亚硫酸氢钠，亚硫酸钠，硫代硫酸钠中的至少一种。按照抗氧剂重量(g)与注射剂总体积(ml)的比例，所述抗氧剂的用量范围可为0.025％～0.5％。在一些实施例中，所述抗氧剂包括亚硫酸氢钠。在一些实施方式中，抗氧剂的用量范围为0.025％～0.05％；在一些实施方式中，抗氧剂的用量范围为0.025％～0.1％；在一些实施方式中，抗氧剂的用量范围为0.025％～0.2％；在一些实施方式中，抗氧剂的用量范围为0.05％～0.1％；在一些实施方式中，抗氧剂的用量范围为0.05％～0.2％；在一些实施方式中，抗氧剂的用量范围为0.05％～0.5％；在一些实施方式中，抗氧剂的用量范围为0.1％～0.2％；在一些实施方式中，抗氧剂的用量范围为0.1％～0.5％；在一些实施方式中，抗氧剂的用量范围为0.2％～0.5％；在一些实施例中，抗氧剂的用量为0.025％，0.05％，0.1％，0.2％，或者0.5％。加入一定量的抗氧剂，可以有效控制氧化杂质的增长。
[0041]
所述注射剂的ph可为6.8
‑
9.0。在一些实施方式中，所述注射剂的ph为7.8
‑
9.0。在一些实施方式中，所述注射剂的ph为6.8
‑
7.2；在一些实施方式中，所述注射剂的ph为6.8
‑
7.4；在一些实施方式中，所述注射剂的ph为6.8
‑
7.8；在一些实施方式中，所述注射剂的ph为6.8
‑
8.5；在一些实施方式中，所述注射剂的ph为7.2
‑
7.4；在一些实施方式中，所述注射剂的ph为7.2
‑
7.8；在一些实施方式中，所述注射剂的ph为7.2
‑
8.5；在一些实施方式中，所述注射剂的ph为7.2
‑
9.0；在一些实施方式中，所述注射剂的ph为7.4
‑
7.8；在一些实施方式中，所述注射剂的ph为7.4
‑
8.5；在一些实施方式中，所述注射剂的ph为7.4
‑
9.0；在一些实施方式中，所述注射剂的ph为7.8
‑
8.5；在一些实施方式中，所述注射剂的ph为8.5
‑
9.0。在一些实施例中，所述注射剂的ph为6.8，7.0，7.2，7.4，或者7.8。l
‑
bpa溶液在一定ph范围，物理稳定性好。
[0042]
在一些实施方式中，前述注射剂，包含：l
‑
bpa和助溶剂，所述注射剂的ph为6.8
‑
9.0。
[0043]
在一些实施方式中，所述注射剂，包含：l
‑
bpa，助溶剂，和/或抗氧剂，所述注射剂的ph为6.8
‑
9.0。
[0044]
在一些实施方式中，所述注射剂，包含：
[0045]
(1)l
‑
bpa，按照l
‑
bpa的重量与注射剂总体积的比，所述l
‑
bpa的浓度范围为30.0mg/ml
‑
150.0mg/ml；
[0046]
(2)助溶剂，按照重量比计算，所述助溶剂用量为l
‑
bpa用量的1.0倍
‑
1.3倍；
[0047]
(3)和/或抗氧剂，按照抗氧剂重量(g)与注射剂总体积(ml)的比例，所述抗氧剂的用量范围为0.025％～0.5％；
[0048]
所述注射剂的ph为7.8
‑
9.0。
[0049]
在一些实施方式中，所述注射剂，包含：
[0050]
(1)l
‑
bpa，按照l
‑
bpa的重量与注射剂总体积的比，所述l
‑
bpa的浓度为100.0mg/ml；
[0051]
(2)山梨醇，按照重量比计算，其用量为l
‑
bpa用量的1.0倍；
[0052]
(3)和/或亚硫酸氢钠，亚硫酸氢钠的用量为0.05％；
[0053]
所述注射剂的ph为7.8。
[0054]
本发明另一方面，提供上述注射剂的灭菌方法，其特征在于，包括湿热灭菌法。在
一些实施例中，所述灭菌方法为湿热灭菌法。
[0055]
在一些实施方式中，所述灭菌方法包括：在121℃条件下灭菌8min
‑
15min。在一些实施方式中，所述灭菌方法包括：在121℃条件下灭菌8min
‑
10min；在一些实施方式中，所述灭菌方法包括：在121℃条件下灭菌8min
‑
12min；在一些实施方式中，所述灭菌方法包括：在121℃条件下灭菌10min
‑
12min；在一些实施方式中，所述灭菌方法包括：在121℃条件下灭菌10min
‑
15min；在一些实施方式中，所述灭菌方法包括：在121℃条件下灭菌12min
‑
15min。在一些实施例中，所述灭菌方法包括：在121℃条件下灭菌8min；在一些实施例中，所述灭菌方法包括：在121℃条件下灭菌10min；在一些实施例中，所述灭菌方法包括：在121℃条件下灭菌12min；在一些实施例中，所述灭菌方法包括：在121℃条件下灭菌15min。
[0056]
在一些实施方式中，所述灭菌方法包括：在115℃条件下灭菌30min
‑
40min。在一些实施例中，所述灭菌方法包括：在115℃条件下灭菌30min；在一些实施例中，所述灭菌方法包括：在115℃条件下灭菌40min。
[0057]
不同的注射剂组分组成，可使产品的稳定性不同和带来不同的杂质含量。不同的灭菌方法也可导致杂质的含量不同。前述的注射剂，可以符合产品杂质含量要求。前述的湿热灭菌法，既可以达到灭菌的要求，简便可控可行，又可以使产品稳定，杂质的含量控制在质量要求的范围内。
[0058]
本发明所述注射剂，稳定性好，可采用上述方法进行终端灭菌。
[0059]
本发明采用的湿热灭菌法，简单易行，稳定性好，安全性高，适于工业化生产。
[0060]
本发明第三方面，提供一种降低本发明所述注射剂的渗透压的方法，所述方法包括：采用纳滤技术。在一些实施方式中，采用纳滤技术，可获得渗透压为280mosm/kg
‑
330mosm/kg的l
‑
bpa注射剂。
[0061]
本发明采用的纳滤技术，操作简单，可控性好，适于工业化生产。
具体实施方式
[0062]
为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面进一步披露一些非限制实施例对本发明作进一步的详细说明。
[0063]
本发明所使用的试剂均可以从市场上购得或者可以通过本发明所描述的方法制备而得。
[0064]
实施例表格中的n/a表示无内容。
[0065]
l
‑
bpa含量和有关物质检测方法(实施例通用)：
[0066]
色谱条件：高效液相色谱仪(agilent hplc
‑
dad)；色谱柱：welch ultimate aq
‑
c18(d),4.6*250mm,5um；检测器：dad检测器，210nm；流速：1.0ml/min；流动相a：10mmol/lph2.8 kh2po
4 buffer；流动相b：甲醇；稀释液：0.1m hcl；柱温：35℃。
[0067]
有关物质测定为梯度洗脱，洗脱条件见表a，运行时间为55min，进样量为10μl。
[0068]
表a梯度洗脱条件
[0069][0070]
含量测定为等度洗脱，洗脱条件：流动相a：流动相b＝95:5，运行时间为20min，进样量为10μl。
[0071]
实施例1不同处方的高浓度l
‑
bpa溶液灭菌稳定性考察(湿热灭菌，过度杀灭，121℃，15min)
[0072]
表1
‑
1处方表
[0073][0074]
处方1～3制备工艺：
[0075]
(1)称取处方量api，加入注射用水分散；
[0076]
(2)加入氢氧化钠适量，搅拌至api完全溶解；
[0077]
(3)加入处方量的糖醇(果糖，山梨醇，甘露醇中的一种)，搅拌至完全溶解；
[0078]
(4)采用盐酸回调溶液的ph至7.8，定容，0.45μmpes滤膜过滤，每支4ml进行灌装，加塞，轧盖；
[0079]
(5)采用121℃，15min条件进行灭菌(常用过度杀灭条件)。
[0080]
处方4制备工艺：
[0081]
(1)称取处方量api，加入注射用水分散；
[0082]
(2)加入处方量葡甲胺，搅拌至api与葡甲胺完全溶解；
[0083]
(3)采用盐酸回调溶液的ph至7.8，定容，0.45μmpes滤膜过滤，每支4ml进行灌装，加塞，轧盖；
[0084]
(4)采用121℃，15min条件进行灭菌(常用过度杀灭条件)。
[0085]
结果如下表所示：
[0086]
表1
‑
2 121℃，15min条件下灭菌结果
[0087][0088][0089]
根据上表，处方2与处方3有关物质增长结果可以看出：主要增长杂质为苯丙氨酸，该杂质为人体必需氨基酸，安全性好，由于该产品热稳定性较差，故认为当杂质增长不超过10％，且含量降低不超过10％的条件下，是可接受的。在121℃，15min条件下过度杀灭后，处方1溶液颜色改变明显，由淡黄色变为黑褐色，故未再考察含量与有关物质的稳定性情况；处方2颜色有改变，较处方1稍好，但有关物质增长明显，总杂增长超过13％；处方3颜色无明显变化，但有关物质增长超过12％；说明在该浓度条件下，过度杀灭的方法对含量、有关物质影响较大，风险较高，该方法不符合要求。
[0090]
实施例2低浓度条件下l
‑
bpa处方溶液灭菌稳定性考察
[0091]
表2
‑
1处方表
[0092][0093]
处方1～3制备工艺：
[0094]
(1)称取处方量api，加入注射用水分散；
[0095]
(2)加入氢氧化钠适量，搅拌至api完全溶解；
[0096]
(3)加入处方量的糖醇(果糖，山梨醇，甘露醇中的一种)，搅拌至完全溶解；
[0097]
(4)采用盐酸回调溶液的ph至7.8，定容，0.45μmpes滤膜过滤，按比例将各处方溶液稀释至l
‑
bpa为30mg/ml的浓度，每支4ml进行灌装，加塞，轧盖；
[0098]
(5)采用121℃，15min条件进行灭菌。
[0099]
处方4制备工艺：
[0100]
(1)称取处方量api，加入注射用水分散；
[0101]
(2)加入处方量葡甲胺，搅拌至api与葡甲胺完全溶解；
[0102]
(3)采用盐酸回调溶液的ph至7.8，定容，0.45μmpes滤膜过滤，将处方溶液按比例稀释至l
‑
bpa为30mg/ml的浓度，每支4ml进行灌装，加塞，轧盖；
[0103]
(4)采用121℃，15min条件进行灭菌(常用过度杀灭条件)。
[0104]
结果如下表所示：
[0105]
表2
‑
2 121℃，15min灭菌结果
[0106][0107]
根据上表，在30mg/ml的浓度下进行过度杀灭，处方2与处方3的情况优于处方1与处方4，其中处方3最优，颜色无明显变化，含量降低较少，总杂增长约6％，主要增长杂质为苯丙氨酸，相对于实施例1中200mg/ml的浓度进行灭菌，杂质增长较低。根据实际情况，处方2与处方3是可接受的，即助溶剂为山梨醇或者甘露醇处方可满足要求。
[0108]
实施例3高浓度l
‑
bpa溶液在121℃，8min灭菌条件下稳定性情况
[0109]
表3
‑
1处方表
[0110][0111]
制备工艺：
[0112]
(1)称取处方量api，加入注射用水分散；
[0113]
(2)加入氢氧化钠适量，搅拌至api完全溶解；
[0114]
(3)加入处方量的糖醇(果糖，山梨醇，甘露醇中的一种)，搅拌至完全溶解；
[0115]
(4)采用盐酸回调溶液的ph至7.8，定容，0.45μmpes滤膜过滤，每支4ml进行灌装，加塞，轧盖；
[0116]
(5)采用121℃，8min条件进行灭菌。
[0117]
结果如下表：
[0118]
表3
‑
2 121℃，8min灭菌结果
[0119][0120]
根据上表，采用121℃，8min条件对高浓度的l
‑
bpa各处方溶液进行灭菌，处方2灭菌后杂质可接受，处方3灭菌后总杂超过10％，风险较高。
[0121]
实施例4：低浓度l
‑
bpa溶液在121℃，8min灭菌条件下稳定性情况
[0122]
表4
‑
1处方表
[0123][0124]
制备工艺：
[0125]
(1)称取处方量api，加入注射用水分散；
[0126]
(2)加入氢氧化钠适量，搅拌至api完全溶解；
[0127]
(3)加入处方量的糖醇(果糖，山梨醇，甘露醇中的一种)，搅拌至完全溶解；
[0128]
(4)采用盐酸回调溶液的ph至7.8，定容，0.45μmpes滤膜过滤，将各处方按比例稀释至30mg/ml，每支4ml进行灌装，加塞，轧盖；
[0129]
(5)采用121℃，8min条件进行灭菌(残存概率法)。
[0130]
结果如下表：
[0131]
表4
‑
2 121℃，8min灭菌结果
[0132][0133][0134]
根据上表，采用121℃，8min条件对30mg/ml的l
‑
bpa各处方溶液进行灭菌，其中处方2与处方3的灭菌稳定性较处方1更好，有关物质增长约4％左右，且主要增长的杂质为苯丙氨酸，苯丙氨酸为人体必需氨基酸，其安全性高；酪氨酸为人体非必需氨基酸，无安全性风险；rrt2.69杂质增长约为0.2％左右。与实施例2中的121℃，15min灭菌条件相比，121℃，8min灭菌条件对产品的影响更小。在该浓度条件下，处方2与处方3均可接受。
[0135]
实施例5：高浓度l
‑
bpa溶液在115℃，30min灭菌条件下稳定性情况
[0136]
表5
‑
1处方表
[0137][0138]
制备工艺：
[0139]
(1)称取处方量api，加入注射用水分散；
[0140]
(2)加入氢氧化钠适量，搅拌至api完全溶解；
[0141]
(3)加入处方量的糖醇(果糖，山梨醇，甘露醇中的一种)，搅拌至完全溶解；
[0142]
(4)采用盐酸回调溶液的ph至7.8，定容，0.45μmpes滤膜过滤，每支4ml进行灌装，加塞，轧盖；
[0143]
(5)采用115℃，30min条件进行灭菌(残存概率法)。
[0144]
结果如下表：
[0145]
表5
‑
2 115℃，30min灭菌结果
[0146][0147][0148]
根据上表，采用115℃，30min条件对高浓度的l
‑
bpa各处方溶液进行灭菌，其中处方2与处方3的灭菌稳定性较处方1更好，但有关物质增长约9％，处方2可接受，处方3总杂超过10％，风险高。
[0149]
实施例6：低浓度l
‑
bpa溶液在115℃，30min灭菌条件下稳定性情况
[0150]
表6
‑
1处方表
[0151][0152]
制备工艺：
[0153]
(1)称取处方量api，加入注射用水分散；
[0154]
(2)加入氢氧化钠适量，搅拌至api完全溶解；
[0155]
(3)加入处方量的糖醇(果糖、山梨醇，甘露醇、葡甲胺中的一种)，搅拌至完全溶解；
[0156]
(4)采用盐酸回调溶液的ph至7.8，定容，0.45μmpes滤膜过滤，将各处方溶液灌装至输液袋中，200ml/袋，封口。
[0157]
(5)采用115℃，30min条件进行灭菌(残存概率法)。
[0158]
结果如下表：
[0159]
表6
‑
2 115℃，30min灭菌结果
[0160][0161]
根据上表，采用115℃，30min条件对30mg/ml的l
‑
bpa各处方溶液进行灭菌，其中处方2与处方3的灭菌稳定性较处方1更好，主要增长杂质为苯丙氨酸，无新增未知杂质，其中酪氨酸与苯丙氨酸无安全性风险，rrt2.69杂质增长在0.1％以下，相对可控。在该浓度条件
下，处方2与处方3均可接受。
[0162]
实施例7不同助溶剂用量考察
[0163]
表7
‑
1处方表
[0164][0165][0166]
制备工艺：
[0167]
(1)称取处方量api，加入注射用水分散；
[0168]
(2)加入氢氧化钠适量，搅拌至api完全溶解；
[0169]
(3)加入处方量的糖醇(山梨醇，甘露醇中的一种)，搅拌至完全溶解；
[0170]
(4)采用盐酸回调溶液的ph至7.8，定容，0.45μmpes滤膜过滤，灌装至30ml中硼硅管制玻璃注射剂瓶中，加塞，轧盖，观察放置后物理稳定性。
[0171]
结果如下表：
[0172]
表7
‑
2不同用量助溶剂用量处方物理稳定性情况
[0173][0174][0175]
根据上表，可以说明：助溶剂用量越多，溶液物理稳定性越好，但对于大输液而言，需要考虑产品的渗透压，助溶剂量越大，渗透压越高，且溶液黏度也会增加，给药风险越高，故处方中助溶剂的量不宜过大。根据上述数据，助溶剂用量可以为api用量的0.8～1.6倍，优选1.0～1.3倍。
[0176]
实施例8不同处方ph稳定性考察
[0177]
表8
‑
1处方表
[0178][0179]
制备工艺：
[0180]
(1)称取处方量api，加入注射用水分散；
[0181]
(2)加入氢氧化钠适量，搅拌至api完全溶解；
[0182]
(3)加入处方量的糖醇(山梨醇，甘露醇中的一种)，搅拌至完全溶解；
[0183]
(4)加入稀盐酸，按处方表中调节ph：处方1与8调节至api析出，记录ph值，其余处方调节至相应ph后，定容，过滤，灌装至30ml中硼硅管制玻璃注射剂瓶中，观察物理稳定性。
[0184]
结果如下表：
[0185]
表8
‑
2不同ph处方物理稳定性情况
[0186][0187]
根据上表，可以说明：ph越高，溶液物理稳定性越好，但对于大输液而言，产品应尽量接近生理ph7.4，至少在3
‑
9范围内。根据上述数据，ph可以选择6.8～9.0范围，优选7.8～9.0。
[0188]
实施例9不同浓度处方灭菌稳定性考察(121℃，8min)
[0189]
表9
‑
1处方表
[0190][0191][0192]
制备工艺：
[0193]
(1)称取处方量api，加入注射用水分散；
[0194]
(2)加入氢氧化钠适量，搅拌至api完全溶解；
[0195]
(3)加入处方量的糖醇(山梨醇，甘露醇中的一种)，搅拌至完全溶解；
[0196]
(4)采用盐酸回调溶液的ph至7.8，定容，0.45μmpes滤膜过滤，每支4ml进行灌装，加塞，轧盖；
[0197]
(5)采用121℃，8min条件进行灭菌。
[0198]
结果如下表：
[0199]
表9
‑
2不同浓度处方灭菌结果
[0200]
[0201][0202]
根据上表，可以说明：浓度越高，灭菌后杂质增长越大，主要增长的杂质为苯丙氨酸，但苯丙氨酸属于人体必需氨基酸，安全性好，故在此认为，当灭菌后总杂不超过10％，含量下降不超过10％的情况下，是可接受的。结合上述实施例，含山梨醇的处方在api浓度为10～200mg/ml条件下，121℃，8min灭菌结果可接受，含甘露醇的处方在api浓度为10～150mg/ml条件下，121℃，8min灭菌结果可接受；由于产品在10mg/ml浓度下，给药体积将很大，会给人体带来负担，故优选浓度为30～150mg/ml。
[0203]
实施例10不同灭菌工艺考察
[0204]
表10
‑
1处方表
[0205][0206]
制备工艺：
[0207]
(1)称取处方量api，加入注射用水分散；
[0208]
(2)加入氢氧化钠适量，搅拌至api完全溶解；
[0209]
(3)加入处方量的糖醇(山梨醇，甘露醇中的一种)，搅拌至完全溶解；
[0210]
(4)采用盐酸回调溶液的ph至7.8，定容，0.45μmpes滤膜过滤，每支4ml进行灌装，加塞，轧盖；
[0211]
(5)分别采用不同灭菌工艺对2种处方进行灭菌：121℃，8min/10min/12min/15min；115℃，30min/40min。
[0212]
结果如下表：
[0213]
表10
‑
2不同灭菌工艺灭菌结果
[0214][0215]
根据上表，可以说明：灭菌时间越长，杂质增长越大，但主要增长的杂质为苯丙氨酸，苯丙氨酸属于人体必需氨基酸，安全性好，故在此认为，当灭菌后总杂不超过10％，含量下降不超过10％的情况下，是可接受的，即产品在上述灭菌条件下，均可接受。由于灭菌时间越长，杂质增长越快，在f0值均大于等于8的情况下，优选更高温度，故优选121℃，8～15min。
[0216]
实施例11加入抗氧剂的处方
[0217]
表11
‑
1处方表
[0218]
[0219]
制备工艺：
[0220]
(1)称取处方量api，加入注射用水分散；
[0221]
(2)加入氢氧化钠适量，搅拌至api完全溶解；
[0222]
(3)加入处方量的山梨醇与亚硫酸氢钠，搅拌至完全溶解；
[0223]
(4)采用盐酸回调溶液的ph至7.8，定容，0.45μmpes滤膜过滤，每支4ml进行灌装，加塞，轧盖；
[0224]
(5)采用121℃，8min条件进行灭菌。
[0225]
实验结果：
[0226][0227][0228]
根据上表，可以说明，加入亚硫酸氢钠后，杂质增长仍可控，亚硫酸氢钠用量在0.025％～0.5％之间均可接受。
[0229]
总结：根据上述实验结果，所有含果糖的处方在灭菌后颜色均会变为黑褐色，葡甲胺处方高浓度在灭菌后性状会有所改变，而含山梨醇和含甘露醇的处方在一定浓度下，控制灭菌条件，得到的产品符合要求：含量降低较少，颜色无明显变化，无新增未知杂质；苯丙氨酸增长较快，但其为人体必需氨基酸，安全性高；酪氨酸为人体非必需氨基酸，其安全性好。当l
‑
bpa的给药剂量为500mg/kg时，苯丙氨酸杂质以最高10％计，则苯丙氨酸的给药浓度为50mg/kg,单人(60kg计)给药量为3g，不存在安全性问题(华瑞制药复方氨基酸注射液18aa
‑ⅰ
中苯丙氨酸的给药剂量可高达到：11g/天)；酪氨酸杂质以最高2％计，则酪氨酸给药浓度为10mg/kg，单人(60kg计)给药量为0.6g，亦不存在安全性问题(华瑞制药复方氨基酸注射液18aa
‑ⅰ
中酪氨酸给药剂量达到1.0g/天)。
[0230]
本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在本发明内容、
精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。
[0231]
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“一些实施方式”、“一些实施方案”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。
[0232]
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。