GDF2在制备改善肿瘤异常血管的药物中的用途

gdf2在制备改善肿瘤异常血管的药物中的用途
技术领域
1.本发明涉及gdf2的用途。


背景技术：

2.临床上患者就诊时大多已属中晚期，对于较低分化癌、病程较晚以及放疗 后复发的病例，虽经手术、放疗和化疗等肝癌正规手段治疗后，也会常常发生 复发和转移。免疫细胞治疗是继手术、化疗和放疗之后的第四种治疗肿瘤的方 法。无论采用哪一类治疗方法，治疗疗效都与t细胞密不可分，其中t细胞存 在的活性和数量直接决定着治疗效果的好坏，而t细胞的运输和传递过程中血 管正常化对t细胞的活性和数量的保障发挥着重要作用。


技术实现要素：

[0003][0004]
本发明的目的在于提供gdf2的多种用途。
[0005]
为实现上述目的，所采取的技术方案：gdf2或表达gdf2的载体在制备改 善肿瘤异常血管的药物中的用途。
[0006]
本发明提供了gdf2或表达gdf2的载体在制备有助于免疫细胞杀伤肿瘤 的药物中的用途。
[0007]
本发明提供了gdf2和免疫细胞的联合使用在制备治疗肿瘤的药物中的用 途。
[0008]
免疫细胞是经外周血发挥作用的一类细胞。gdf2是可以显著延缓肿瘤的非 正常血管生长和促进非正常血管的正常化。同时gdf2能够利用正常化血管运 输免疫细胞使其数量增加且杀伤肿瘤能力增强，使其对肝癌具有更加显著的治 疗效果。
[0009]
本发明提供了表达gdf2的载体和免疫细胞的联合使用在制备治疗肿瘤的 药物中的用途。
[0010]
优选地，所述改善肿瘤异常血管是指抑制肿瘤非正常血管的生长，且修复 肿瘤非正常血管向正常化血管发展。
[0011]
优选地，所述肿瘤为肝癌。
[0012]
优选地，所述肿瘤为hbv阳性肝癌。
[0013]
本发明提供了一种治疗肿瘤的药物，所述药物包括gdf2和表达gdf2的 载体中的一种，以及免疫细胞。
[0014]
优选地，所述肿瘤为肝癌。
[0015]
优选地，所述肿瘤为hbv阳性肝癌。
[0016]
优选地，所述药物还包括医学上可接受的辅料或载体。
[0017]
有益效果：
[0018]
本发明提供了gdf2的多种用途，生长分化因子-2(gdf2)能够修复hbv 感染的肝癌非正常化血管，并且有助于免疫细胞治疗肝癌，为肝癌中对异常血 管的正常化修复提供了新的治疗方案，在肝癌的免疫治疗方面具有很好的应用 前景。
附图说明
[0019]
图1为过表达gdf2的肝细胞癌细胞株体外对血管内皮稳态的影响。
[0020]
图2为过表达gdf2的肝细胞癌细胞株体内对血管内皮稳态的影响。
[0021]
图3为过表达gdf2的肝细胞癌细胞株体内对免疫淋巴细胞浸润的影响。
具体实施方式
[0022]
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对 本发明作进一步说明。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技 术领域常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均 为市购。
[0023]
经过发明人团队多年的实践工作发现，临床上95％以上的肝癌患者均为 hbv阳性，因此，以下实施例实验以hbv阳性肝癌为例进行呈现。
[0024]
实施例1过表达gdf2对血管内皮稳态的影响和对免疫细胞浸润的影响
[0025]
1、实验材料
[0026]
(1)huvec内皮细胞：人来源的血管内皮细胞
[0027]
(2)cik细胞：人脐带血来源的cik细胞
[0028]
(3)癌细胞：hbv阴/阳性肝癌细胞(hepg2-hbv-,hepg2.2.15-hbv+和 huh6-hbv-,hb611-hbv+)
[0029]
(4)市购的免疫缺陷ncg小鼠。
[0030]
2、实验分组
[0031]
(1)对照组1：阴性对照(hepg2-hbv-)，即肝癌细胞不经过任何处理。
[0032]
(2)对照组2：阳性对照(hepg2.2.15-hbv+)，即肝癌细胞转染过表达空载 体。
[0033]
(3)过表达gdf2细胞组：使用gdf2过表达病毒转染处理hbv阳性肝 癌细胞(hepg2.2.15-hbv+)。
[0034]
(4)cik细胞回输+对照组1：阴性对照组细胞接种后使用cik细胞回输 处理hbv阴性肝癌细胞。
[0035]
(5)cik细胞回输+对照组2：阳性对照组细胞接种后使用cik细胞回输 处理hbv阳性肝癌细胞。
[0036]
(6)cik细胞回输+过表达gdf2细胞组：过表达gdf2细胞接种后使用 cik细胞回输处理hbv阳性肝癌细胞。
[0037]
3、细胞系共孵育和伊万蓝实验检测过表达gdf2对内皮细胞稳定性的的影 响
[0038]
(1)分别以2
×
105数值的hbv阴/阳性肝癌细胞(hepg2,hepg2.2.15和 huh6,hb611)铺于6孔板上，每孔一个平行。随机分为3组：阴性对照组1， 阳性对照组2，过表达gdf2细胞组。另外以2
×
105数值的内皮细胞分别铺于 transwell小室(0.4um)中培养。
[0039]
(2)当6孔板和小室内的细胞平层长满之时：我们将小室分别嵌入对应的 6孔板内并进行96h的共孵育。
[0040]
(3)每天观察一次细胞状态，并同时进行细胞培养液的补充。
[0041]
(4)96h后，在小室中加入伊万蓝染料，静置90min后，分别吸取小室和 对应孔的培养基进行伊万蓝渗透检测情况。
[0042]
4、免疫缺陷ncg小鼠皮下成瘤实验检测cik细胞回输后或/和过表达gdf2 对hbv阳
性肝癌细胞移植瘤的影响
[0043]
(1)分别以2.5
×
106数值的hbv阴/阳性肝癌细胞(hepg2或hepg2.2.15) 植入20只4周龄ncg鼠腋窝皮下。随机分为6组：阴性对照组1，阳性对照 组2，过表达gdf2细胞组，cik细胞回输+对照组1，cik细胞回输+对照组2， cik细胞回输+过表达gdf2细胞组。
[0044]
(2)当皮下肿瘤大小达到100～200mm3时：cik细胞回输+对照组1的每 只老鼠每三天尾静脉给予cik细胞1
×
107个/只1次，期间每天腹腔给予il-2 (10000u/只/天)；cik细胞回输+对照组2的每只老鼠每三天尾静脉给予cik 细胞1
×
107个/只1次，期间每天腹腔给与il-2(10000u/只/天)；cik细胞回 输+过表达gdf2细胞组的每只老鼠每三天尾静脉给予cik细胞1
×
107个/只1 次，期间每天腹腔给予il-2(10000u/只/天)。
[0045]
(3)2周后，断颈处死小鼠，切除肿瘤组织，进行免疫组化检测cik标记 物(cd3)的浸润情况，同时检测肿瘤生长和重量情况，最后进行血管相关因子 (cd31,ng2,α-sma)的免疫荧光检测。
[0046]
5、实验结果
[0047]
结果如图1所示，gdf2过表达后能够抵制hbv阴/阳性肝癌细胞对内皮细 胞稳定性的破坏，表明gdf2的表达对hbv阴/阳性肝癌导致的血管内皮细胞稳 定性破坏具有显著的抑制效果。
[0048]
另外，如图2，免疫荧光检测结果显示在gdf2过表达后能够明显的招募周 细胞，促进异常的血管向着正常化方向生长，表明gdf2对于血管正常化的意 义。
[0049]
更为重要的是，如图3，免疫组化结果显示，gdf2过表达之后能够促进cik 细胞进入肿瘤内部。
[0050]
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本 发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的 普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而 不脱离本发明技术方案的实质和范围。