口服GLP受体激动剂的制作方法

口服glp受体激动剂
1.本发明涉及一类新颖的口服递送的肽化合物、它们的盐、包含它们的药物组合物以及它们在人体的疗法中的用途。特别地，本发明涉及作为胰高血糖素样肽(glp)受体的激动剂的一类化合物。更特别地，本发明涉及作为胰高血糖素样肽-1(glp-1)受体和胰高血糖素样肽-2(glp-2)受体的激动剂的化合物。更特别地，本发明涉及作为胰高血糖素样肽-2(glp-2)受体的选择性激动剂的化合物。本公开内容提供了用于通过经由口服递送途径施用这样的化合物来治疗胃肠道疾病的治疗方法。本发明的化合物在胃肠道相关流体中具有增强的稳定性。本发明还涉及这些化合物和组合物的制造和在预防或治疗其中涉及glp受体的这样的疾病中的用途。
2.发明背景
3.胰高血糖素样肽-1(glp-1)和胰高血糖素样肽-2(glp-2)是源自相同前体蛋白的高度保守的氨基酸肽。这些生物活性肽由胰高血糖素原基因编码，在胰腺(α细胞)、肠(l-细胞)和中枢神经系统(cns)中经历组织特异性翻译后加工。在胃肠道中，激素原转化酶1/3负责裂解胰高血糖素原，以产生许多生物活性肽，包括glp-1、glp-2、ip2、胃泌酸调节素(oxyntomodulin)和肠高血糖素(glicentin)。glp-1和glp-2两者响应于通过定位在回肠末端和结肠中的肠l细胞的营养素摄入而分泌，并且这些肠道肽的血浆水平被报告为在人的食物摄取之后增加。
4.glp-1和glp-2的作用是通过b类g蛋白偶联受体glp-1r和glp-2r的活化介导的，该b类g蛋白偶联受体glp-1r和glp-2r与gs蛋白偶联并且经由腺苷酸环化酶的活化来刺激camp产生。glp-1r被发现在脑、胰岛细胞、心脏、肾和胃肠道中的肌间神经丛神经元中表达。在另一方面，glp-2r的表达是更受限的，并且受体被主要定位于cns和胃肠道。许多细胞类型已经被报告在肠道中表达glp-2r，所述细胞类型包括肠神经元、上皮下肌成纤维细胞和肠内分泌细胞，然而确切的细胞分布仍有待确定。
5.glp-2已经被报告参与包括肠道屏障功能、肠系膜血流、胃动力和胃酸分泌的多种生理功能。glp-2的外源性施用刺激隐窝细胞增殖，增加肠绒毛长度并且促进小肠粘膜的生长和修复。glp-2的有效的肠营养活性(intestinotrophic activity)已经在包括大鼠、猪和人类的物种中被记录。glp-2还通过调节肠刷状缘酶和溶质载体增强肠吸收能力，突出了这种肠道激素在控制能量稳态中的潜在作用。基于在肠道中促进有效的肠营养作用的能力，glp-2类似物替度鲁肽(teduglutide)已经被批准作为用于pn依赖性sbs患者的药理学疗法并且已经被示出减少pn需求以及促进肠内自主性。除了替度鲁肽之外，许多glp-2肽激动剂处于临床开发中(例如apraglutide、glepaglutide)，然而所有目前的剂是针对经由皮下注射的肠胃外递送。可以经由口服递送途径给予的glp肽可能通过给药方便提供更好的患者接受，允许更早的治疗开始并且改善长期依从性。当考虑为儿科患者开发肽治疗剂时，这可能是特别有利的。然而，肽的口服递送存在许多挑战，因为分子通常遭受差的肽稳定性(由于广泛的蛋白水解降解)以及低膜渗透性。在胃中，口服递送的肽需要在酸性低ph环境中的稳定性以及对胃蛋白酶的抗性。在肠中，肽还经受由一系列肠或胰腺分泌的酶以及刷状缘膜结合的酶的降解。广泛的生物制药策略、配制策略和递送策略目前正在研究中，以克
服这些障碍中的一些。开发适合于口服递送的新颖的有效且稳定的靶向glp-2受体和glp-1受体的肽仍然是一个有吸引力的策略并且是高度合意的。
6.glp-1是一种31个氨基酸的肽，其响应于腔内营养素(碳水化合物、脂肪、蛋白质)与glp-2共同释放，并且用作与葡萄糖依赖性促胰岛素多肽(gip)协同工作的肠道肠促胰岛素激素。glp-1在胰岛β细胞功能、调节β细胞增殖以及餐后胰岛素合成/释放中起关键的生理作用。研究还已经示出，glp-1控制其他肠道肽诸如生长抑素和胰高血糖素的释放。在生长抑素释放后，生长抑素起到抑制glp-1和gip的分泌的作用，从而在肠内分泌细胞中建立反馈系统。glp-1是一种参与饱腹感和食欲控制的调节的关键的厌食肽，并且通过影响胃排空和肠道动力来影响gi功能。目前市售若干种glp-1剂以用于治疗2型糖尿病，并且已经成功改善糖尿病患者的血糖控制。一种glp-1肽的口服制剂目前正在临床开发中(索马鲁肽(semaglutide),ph iii)，以用于治疗2型糖尿病。每日一次的口服索马鲁肽制剂已经示出优于活性比较物的效力，并且示出与可注射的glp-1受体激动剂相当的安全性和耐受性概况。
7.肠衰竭(if)指的是肠道无法吸收生存所必需的水、电解质、大量营养素和微量营养素的严重且致残的状况。if的病因是多种多样的，并且可以由与梗阻、运动障碍、手术切除、先天性缺陷或疾病相关的吸收损失导致。
8.短肠综合征代表肠衰竭的最常见病因并且由肠段的物理或功能损失引起，通常导致营养不良、体重损失、脱水、腹泻、脂肪痢、疲劳和腹痛。sbs的管理需要多学科护理和肠胃外营养(pn)支持，以补偿大量流体损失并且恢复营养素和电解质平衡。尽管对生存至关重要，但长期依赖于肠胃外营养可以负面地影响患者的生活质量，并且还增加危及生命的并发症诸如导管相关脓毒症、静脉血栓形成和肝损伤(例如脂肪变性、胆汁淤积)的风险。
9.sbs的症状和严重程度可以取决于残存肠的位置和长度而变化。已知肠动力受到包括glp-1、glp-2和pyy的多种肠道激素的影响，所述肠道激素通常由回肠和近端结肠中的l细胞产生。激素诸如glp-1起到提供重要的反馈机制，以控制gi运送的速率以用于高效的营养素消化和吸收的作用。已经失去回肠制动(ileal brake)的具有空肠造口术的患者在血浆中具有较低的空腹glp-1浓度和glp-2浓度，并且通常遭受快速胃排空和具有高造口输出的gi运送。小型先导性研究证明，艾塞那肽或利拉鲁肽(glp-1激动剂)改善了sbs患者的腹泻的症状并且还减少了对pn的需求。
10.除了复杂的临床表现外，还存在关于具有肠切除的患者的失调的肠胰岛轴的证据，该失调的肠胰岛轴导致响应于口服葡萄糖施用的受损的胰岛素响应。此外，高血糖症是住院患者的肠胃外营养的常见并发症，并且可以增加死亡和感染性并发症的风险。接受专门的营养支持的患者中的高血糖症的发生率被估计为对于接受肠内营养的患者高达30％，而在接受肠胃外营养的患者中高达50％。认识到，对高血糖症的持续差的控制可以导致胰腺β细胞功能的下降，并且可以有助于使并发症诸如微血管疾病、心血管事件和高血压恶化。与不患有高血糖症的患者相比，在tpn期间患有高血糖症的患者处于更大的被接纳进入icu的风险，具有更长的住院时间和更高的死亡率。
11.基于glp-1激动剂的已知的促胰岛素活性，该机制的活化因此可以潜在地为发展术后胰岛素敏感性降低的患者和接受肠胃外营养的患者提供另外的益处。因此，这些发现突出了组合的glp-2/glp-1药理学方法在管理包括sbs的肠衰竭状况中的潜力。
12.其中glp-2/glp-1激动剂可以提供益处的其他肠衰竭状况包括罕见的先天性腹泻病诸如簇绒肠病(tufting enteropathy)，其表现为在禁食期间持续存在的早发性严重顽固性腹泻。迫切需要用肠胃外营养、流体和电解质补充对婴儿进行紧急治疗，以防止由严重营养不良导致的脱水、电解质失衡和生长受损。
13.编码上皮细胞粘附分子epcam的基因示出与簇绒肠病相关，并且迄今为止在文献中已经描述了超过25种epcam突变。epcam基因的突变导致细胞表面表达的丧失，产生肠上皮的独特组织学特征，诸如肠上皮细胞的局灶性拥挤和
‘
簇’的形成。携带epcam基因的第4外显子缺失的小鼠展示出与具有显著的发病率和死亡率的簇绒患者相似的形态缺陷。epcam与紧密连接分子紧密连接蛋白7(claudin 7)直接相关，并且该基因的破坏导致差的肠上皮细胞粘附和受损的肠道屏障功能，这可能是通过紧密连接分子的下调。
14.患有簇绒肠病的婴儿具有低的igf-1水平，并且依赖于肠胃外营养来补偿降低的吸收营养素的能力。目前对于这种使人虚弱的状况不存在药理学治疗，并且对于可以改善肠功能以促进独立于肠胃外喂养的剂存在迫切需求。最近对簇绒患者的长期结果的分析已经揭示，如果患者在专家护理环境下被有效地管理，则可以在大多数患者中成功地实现肠内自主性。预期促进早期断奶的疗法导致这些患者的更好的长期结果并且改善生活质量。对glp-2受体和glp-1受体起作用的剂可能在这种先天性腹泻病中修复屏障功能和帮助肠功能的恢复方面具有前景。
15.发明概述
16.本发明涉及对glp-2受体和glp-1受体具有激动剂活性的新颖的化合物，包含这些化合物的药物组合物，以及所述化合物用于制造用于治疗疾病的药物的用途。本公开内容提供了用于通过经由口服递送途径施用这样的化合物来治疗胃肠道疾病的治疗方法。本发明的化合物通过具有一个或更多个内酰胺桥而在胃肠道相关流体中具有增强的稳定性。
17.因此，在一种实施方案中，本发明提供了式(1a)的化合物：
[0018][0019]
其中：
[0020]
r选自：
[0021][0022]
q是苯基或单环杂芳基环，其中每一个可以任选地被一个或更多个rq基团取代；
[0023]rq
选自卤素、羟基、氨基或c
1-6
烷基，所述c
1-6
烷基具有任选地包含一个或更多个选自o、n或s的杂原子的烷基链；
[0024]
n是1至3；
[0025]
r1和r2独立地选自氢或c
1-6
烷基基团，或者与它们被附接至的碳连接在一起以形成c
3-8
环烷基或杂环基基团；
[0026]
sa是序列-ser-phe-；
[0027]
ta是序列-glu-nle-；
[0028]
wa是序列-ala-ala-；
[0029]
xa是序列-asp-phe-ile-；
[0030]
ya是序列-trp-leu-ile-；
[0031]
za是不存在的或者是序列-ile-thr-；
[0032]
aa
1a
是-nhchr3co-；其中r3选自-(ch2)yconh2、-(ch2)ycooh或-(ch2)y四唑基；其中y是1或2；
[0033]
aa
2a
是-gly-、-dala-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
4a
的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
4a
的-glu-；
[0034]
aa
3a
是-ser-或者是任选地经由内酰胺桥连接至aa
5a
的-glu-；
[0035]
aa
4a
是任选地经由内酰胺桥连接至aa
2a
的-asp-，或任选地经由内酰胺桥连接至aa
2a
或aa
6a
的-lys-；
[0036]
aa
5a
是-dphe-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
8a
的-asp-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
3a
的-lys-；
[0037]
aa
6a
是-thr-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
4a
或aa
9a
的-asp-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
的-glu-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
的-lys-；
[0038]
aa
7a
是-ile-或以下式的α-甲基亮氨酸残基：
[0039][0040]
aa
8a
是-asp-或者是任选地经由内酰胺桥连接至aa
5a
的-lys-；
[0041]
aa
9a
是-leu-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
6a
或aa
11a
的-lys-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
6a
或aa
11a
的-asp-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
11a
的-glu-；
[0042]
aa
10a
是-lys-或者是任选地经由内酰胺桥连接至aa
11a
的-glu-；
[0043]
aa
11a
是-aib-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
或aa
10a
的-lys-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
的-glu-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
的-asp-；
[0044]
aa
12a
是-asn-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
13a
的-glu-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
13a
的-lys-；
[0045]
aa
13a
是-gln-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
12a
的-asp-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
12a
的-lys-；
[0046]
aa
14a
是-thr-或者是任选地经由内酰胺桥连接至aa
16a
的-lys-；
[0047]
aa
15a
是任选地经由内酰胺桥连接至aa
16a
的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
16a
的-glu-；
[0048]
aa
16a
是不存在的或者是-asp-、-phe-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
15a
的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
14a
或aa
15a
的-glu-；
[0049]
其中aa
15a
或aa
16a
的c-末端是羧基基团或羧酰胺基团，或者被邻接至任何天然或非天然氨基酸序列或任何其他部分、一种或更多种官能团，并且其中所述化合物包含一个或两个内酰胺桥；
[0050]
或者其互变异构体形式或立体化学异构体形式，或其前药、盐或两性离子。
[0051]
因此，在一种实施方案中，本发明提供了式(1b)的化合物：
[0052][0053]
其中：
[0054]
r选自：
[0055][0056]
q是苯基或单环杂芳基环，其中每一个可以任选地被一个或更多个rq基团取代；
[0057]rq
选自卤素、羟基、氨基或c
1-6
烷基，所述c
1-6
烷基具有任选地包含一个或更多个选自o、n或s的杂原子的烷基链；
[0058]
n是1至3；
[0059]
r1和r2独立地选自氢或c
1-6
烷基基团，或者与它们被附接至的碳连接在一起以形成c
3-8
环烷基或杂环基基团；
[0060]
s是序列-glu-nle-；
[0061]
t是序列-phe-ile-；
[0062]
w是序列-trp-leu-ile-；
[0063]
z是不存在的或者是-pro-；
[0064]
aa1是-nhchr3co-；其中r3选自-(ch2)yconh2、-(ch2)ycooh或-(ch2)y四唑基；其中y是1或2；
[0065]
aa2是-gly-、-dala-、任选地经由内酰胺桥连接至aa5的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa5的-glu-；
[0066]
aa3是-ser-phe-或-ser-2-f-α-me-phe-；
[0067]
aa4是-ser-或任选地经由内酰胺桥连接至aa6的-glu-；
[0068]
aa5是任选地经由内酰胺桥连接至aa2的-asp-或任选地经由内酰胺桥连接至aa2或aa7的-lys-；
[0069]
aa6是-d-phe-、-d-α-me-phe-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
10
的-lys-；
[0070]
aa7是任选地经由内酰胺桥连接至aa5的-asp-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
10
的-glu-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
10
的-lys-；
[0071]
aa8是-ile-或-α-me-leu-；
[0072]
aa9是-leu-asp-或-leu-acpc-；
[0073]
aa
10
是任选地经由内酰胺桥连接至aa7或aa
14
的-asp-、任选地经由内酰胺桥连接至aa7或aa
14
的-glu-或任选地经由内酰胺桥连接至aa7的-lys-；
[0074]
aa
11
是-lysr-，其中lysr是n-取代的赖氨酸残基、任选地经由内酰胺桥连接至aa
14
的-glu-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
15
的-lys-；
[0075]
aa
12
是-ala-或-aib-；
[0076]
aa
13
是-ala-或-aib-；
[0077]
aa
14
是-aib-或者是任选地经由内酰胺桥连接至aa
10
或aa
11
的-lys-；
[0078]
aa
15
是任选地经由内酰胺桥连接至aa
11
的-asp-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
16
的-glu-；
[0079]
aa
16
是-asn-、-acpc-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
17
的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
17
的-glu-；
[0080]
aa
17
是-gln-、-acpc-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
16
的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
16
的-glu-；
[0081]
aa
18
是-thr-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
22
的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
22
的-glu-；
[0082]
aa
19
是-pro-、-pipala-、-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
22
的-glu-；
[0083]
aa
20
是不存在的或者是-ile-、-α-me-leu-或-pro-；
[0084]
aa
21
是不存在的或者是-thr-；
[0085]
aa
22
是不存在的或者是任选地经由内酰胺桥连接至aa
18
或aa
19
的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
18
的-glu-；
[0086]
其中c-末端是羧基基团或羧酰胺基团，或者被邻接至任何天然或非天然氨基酸序列或任何其他部分、一种或更多种官能团，并且其中所述化合物包含三个、四个或五个内酰胺桥；
[0087]
或者其互变异构体形式或立体化学异构体形式，或其前药、盐或两性离子。
[0088]
本发明的glp-2/glp-1衍生物可以用于治疗如下文描述的多种疾病。
[0089]
在一个方面中，本发明提供了用于促进有相应需要的患者的小肠组织的生长的方法，包括向患者递送肠营养量的本发明的glp-2/glp-1类似物的步骤。
[0090]
在另外的方面中，本发明涉及用于制备用于治疗胃肠道疾病的药物的方法，所述胃肠道疾病包括肠衰竭或导致营养素吸收不良和肠功能不全的其他状况。这样的疾病的实例可以包括小肠综合征，腹泻病，炎性肠综合征，克罗恩氏病，溃疡性结肠炎，贮袋炎(pouchitis)，辐射诱导的肠损伤，乳糜泻(谷蛋白敏感性肠病)，nsaid诱导的胃肠道损伤，癌症治疗诱导的组织损伤(例如化学疗法诱导的肠炎)，帕金森氏病，肠胃外营养诱导的粘膜萎缩，早产儿肠衰竭，坏死性小肠结肠炎，新生儿喂养不耐受，先天性腹泻病，先天性或获得性消化和吸收紊乱，由血管梗阻、外伤或缺血诱导的组织损伤。
[0091]
本发明的另外的方面是用于通过递送治疗有效量的本发明的glp-2/glp-1类似物来治疗有相应需要的患者的罕见的先天性腹泻病的症状，或者治疗该罕见的先天性腹泻病的方法。持续不受控制的腹泻可以导致严重脱水、电解质失衡、营养不良和发育停滞(failure to thrive)，如果未经治疗，则可能导致危及生命的状况，包括死亡。
[0092]
在另外的方面中，本发明提供了如上文概述的化合物用于制备用于治疗簇绒肠病的药物的用途，簇绒肠病是一种以常常导致肠衰竭的早发性严重且顽固性腹泻为特征的罕见的先天性腹泻病。
[0093]
本发明的另外的方面是用于通过递送治疗有效量的本发明的glp-2/glp-1类似物来治疗有相应需要的患者的代谢疾病和代谢综合征的方法，在一种实施方案中，代谢疾病和代谢综合征包括肥胖、2型糖尿病、非酒精性脂肪肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎
(nash)、胰岛素抵抗、高血糖症、胰岛素抵抗、葡萄糖不耐受。设想的是，用glp-2/glp-1类似物治疗可以恢复血糖控制和胰岛素敏感性。这对于在患有肠衰竭、功能不全或吸收不良紊乱的患者的肠内营养疗法和肠胃外营养疗法期间高血糖症的管理可能是有益的。
[0094]
发明详述
[0095]
本发明涉及新颖的化合物。本发明还涉及新颖的化合物作为glp受体的激动剂的用途。本发明还涉及新颖的化合物在制造用作glp受体激动剂或用于治疗胃肠道紊乱和代谢紊乱的药物中的用途。本发明还涉及作为选择性glp-2受体激动剂的化合物、组合物和药物。本公开内容提供了用于通过经由口服递送途径施用这样的化合物来治疗胃肠道疾病的治疗方法。本发明的化合物在胃肠道相关流体中具有增强的稳定性。
[0096]
本发明的化合物包含一个或更多个内酰胺桥。
[0097]
因此，在一种实施方案中，本发明提供了式(1a)的化合物：
[0098][0099]
其中：
[0100]
r选自：
[0101][0102]
q是苯基或单环杂芳基环，其中每一个可以任选地被一个或更多个rq基团取代；
[0103]rq
选自卤素、羟基、氨基或c
1-6
烷基，所述c
1-6
烷基具有任选地包含一个或更多个选自o、n或s的杂原子的烷基链；
[0104]
n是1至3；
[0105]
r1和r2独立地选自氢或c
1-6
烷基基团，或者与它们被附接至的碳连接在一起以形成c
3-8
环烷基或杂环基基团；
[0106]
sa是序列-ser-phe-；
[0107]
ta是序列-glu-nle-；
[0108]
wa是序列-ala-ala-；
[0109]
xa是序列-asp-phe-ile-；
[0110]
ya是序列-trp-leu-ile-；
[0111]
za是不存在的或者是序列-ile-thr-；
[0112]
aa
1a
是-nhchr3co-；其中r3选自-(ch2)yconh2、-(ch2)ycooh或-(ch2)y四唑基；其中y是1或2；
[0113]
aa
2a
是-gly-、-dala-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
4a
的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
4a
的-glu-；
[0114]
aa
3a
是-ser-或者是任选地经由内酰胺桥连接至aa
5a
的-glu-；
[0115]
aa
4a
是任选地经由内酰胺桥连接至aa
2a
的-asp-，或任选地经由内酰胺桥连接至aa
2a
或aa
6a
的-lys-；
[0116]
aa
5a
是-dphe-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
8a
的-asp-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
3a
的-lys-；
[0117]
aa
6a
是-thr-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
4a
或aa
9a
的-asp-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
的-glu-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
的-lys-；
[0118]
aa
7a
是-ile-或以下式的α-甲基亮氨酸残基：
[0119][0120]
aa
8a
是-asp-或者是任选地经由内酰胺桥连接至aa
5a
的-lys-；
[0121]
aa
9a
是-leu-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
6a
或aa
11a
的-lys-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
6a
或aa
11a
的-asp-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
11a
的-glu-；
[0122]
aa
10a
是-lys-或者是任选地经由内酰胺桥连接至aa
11a
的-glu-；
[0123]
aa
11a
是-aib-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
或aa
10a
的-lys-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
的-glu-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
的-asp-；
[0124]
aa
12a
是-asn-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
13a
的-glu-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
13a
的-lys-；
[0125]
aa
13a
是-gln-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
12a
的-asp-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
12a
的-lys-；
[0126]
aa
14a
是-thr-或者是任选地经由内酰胺桥连接至aa
16a
的-lys-；
[0127]
aa
15a
是任选地经由内酰胺桥连接至aa
16a
的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
16a
的-glu-；
[0128]
aa
16a
是不存在的或者是-asp-、-phe-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
15a
的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
14a
或aa
15a
的-glu-；
[0129]
其中aa
15a
或aa
16a
的c-末端是羧基基团或羧酰胺基团，或者被邻接至任何天然或非天然氨基酸序列或任何其他部分、一种或更多种官能团，并且其中所述化合物包含一个或两个内酰胺桥；
[0130]
或者其互变异构体形式或立体化学异构体形式，或其前药、盐或两性离子。
[0131]
因此，在一种实施方案中，本发明提供了式(1b)的化合物：
[0132][0133]
其中：
[0134]
r选自：
[0135][0136]
q是苯基或单环杂芳基环，其中每一个可以任选地被一个或更多个rq基团取代；
[0137]rq
选自卤素、羟基、氨基或c
1-6
烷基，所述c
1-6
烷基具有任选地包含一个或更多个选自o、n或s的杂原子的烷基链；
[0138]
n是1至3；
[0139]
r1和r2独立地选自氢或c
1-6
烷基基团，或者与它们被附接至的碳连接在一起以形成c
3-8
环烷基或杂环基基团；
[0140]
s是序列-glu-nle-；
[0141]
t是序列-phe-ile-；
[0142]
w是序列-trp-leu-ile-；
[0143]
z是不存在的或者是-pro-；
[0144]
aa1是-nhchr3co-；其中r3选自-(ch2)yconh2、-(ch2)ycooh或-(ch2)y四唑基；其中y是1或2；
[0145]
aa2是-gly-、-dala-、任选地经由内酰胺桥连接至aa5的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa5的-glu-；
[0146]
aa3是-ser-phe-或-ser-2-f-α-me-phe-；
[0147]
aa4是-ser-或任选地经由内酰胺桥连接至aa6的-glu-；
[0148]
aa5是任选地经由内酰胺桥连接至aa2的-asp-或任选地经由内酰胺桥连接至aa2或aa7的-lys-；
[0149]
aa6是-d-phe-、-d-α-me-phe-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
10
的-lys-；
[0150]
aa7是任选地经由内酰胺桥连接至aa5的-asp-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
10
的-glu-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
10
的-lys-；
[0151]
aa8是-ile-或-α-me-leu-；
[0152]
aa9是-leu-asp-或-leu-acpc-；
[0153]
aa
10
是任选地经由内酰胺桥连接至aa7或aa
14
的-asp-、任选地经由内酰胺桥连接至aa7或aa
14
的-glu-或任选地经由内酰胺桥连接至aa7的-lys-；
[0154]
aa
11
是-lysr-，其中lysr是n-取代的赖氨酸残基、任选地经由内酰胺桥连接至aa
14
的-glu-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
15
的-lys-；
[0155]
aa
12
是-ala-或-aib-；
[0156]
aa
13
是-ala-或-aib-；
[0157]
aa
14
是-aib-或者是任选地经由内酰胺桥连接至aa
10
或aa
11
的-lys-；
[0158]
aa
15
是任选地经由内酰胺桥连接至aa
11
的-asp-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
16
的-glu-；
[0159]
aa
16
是-asn-、-acpc-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
17
的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
17
的-glu-；
[0160]
aa
17
是-gln-、-acpc-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
16
的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
16
的-glu-；
[0161]
aa
18
是-thr-、任选地经由内酰胺桥连接至aa
22
的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
22
的-glu-；
[0162]
aa
19
是-pro-、-pipala-、-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
22
的-glu-；
[0163]
aa
20
是不存在的或者是-ile-、-α-me-leu-或-pro-；
[0164]
aa
21
是不存在的或者是-thr-；
[0165]
aa
22
是不存在的或者是任选地经由内酰胺桥连接至aa
18
或aa
19
的-lys-或任选地经由内酰胺桥连接至aa
18
的-glu-；
[0166]
其中c-末端是羧基基团或羧酰胺基团，或者被邻接至任何天然或非天然氨基酸序列或任何其他部分、一种或更多种官能团，并且其中所述化合物包含三个、四个或五个内酰胺桥；
[0167]
或者其互变异构体形式或立体化学异构体形式，或其前药、盐或两性离子。
[0168]
本文描述的所有化合物可以包含至少一个内酰胺桥以使肽序列内部环化。本文描述的所有化合物可以包含一个、两个、三个、四个或五个内酰胺桥以使肽序列内部环化。内酰胺桥可以在赖氨酸部分的侧链氨基基团和天冬氨酸或谷氨酸的侧链羧酸酯基团之间。具体地，赖氨酸可以处于位置aa
2a
、aa
4a
、aa
5a
、aa
6a
、aa
8a
、aa
9a
、aa
11a
、aa
12a
、aa
13a
、aa
14a
、aa
15a
或aa
16a
。天冬氨酸或谷氨酸可以处于位置aa
2a
、aa
3a
、aa
4a
、aa
5a
、aa
6a
、aa
9a
、aa
10a
、aa
11a
、aa
12a
、aa
13a
、aa
15a
或aa
16a
。
[0169]
所述化合物必须在下文所示出的氨基酸对之间包括一个或两个内酰胺桥：
[0170]
aa
2a-aa
4a
；aa
3a-aa
5a
；aa
4a-aa
6a
；aa
5a-aa
8a
；aa
6a-aa
9a
；aa
9a-aa
11a
；aa
10a-aa
11a
；aa
12a-aa
13a
；aa
14a-aa
16a
；aa
15a-aa
16a
。
[0171]
在条件是所述化合物具有至少一个内酰胺桥的情况下，氨基酸可以独立地选自下文所示出的基团中的每一个基团。
[0172]
aa
1a
可以是-nhchr3co-；其中r3是-(ch2)y四唑基，其中y是1。
[0173]
aa
1a
可以是-nhchr3co-；其中r3是-(ch2)y四唑基，其中y是2。
[0174]
aa
1a
可以是-nhchr3co-；其中r3是-(ch2)ycooh，其中y是1。
[0175]
aa
1a
可以是-nhchr3co-；其中r3是-(ch2)ycooh，其中y是2。
[0176]
r3可以是-ch2cooh。
[0177]
aa
1a
可以是
[0178][0179]
aa
1a
可以是-asp-。aa
1a
可以是天冬氨酸残基。aa
1a
可以是
[0180][0181]
q可以是咪唑环。q可以是：
[0182]
n可以是1。n可以是2。n可以是3。
[0183]
r1和r2可以独立地选自氢或c
1-6
烷基基团。r1可以是氢或c
1-6
烷基基团。r2可以是氢
或c
1-6
烷基基团。r1和r2可以都是甲基。r1可以是甲基。r2可以是甲基。
[0184]
r3可以是-ch2四唑基。r3可以是-ch2cooh。
[0185]
aa
2a
可以是-gly-。aa
2a
可以是-dala-。aa
2a
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
4a
。aa
2a
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
4a
。
[0186]
aa
3a
可以是-ser-。aa
3a
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
5a
。
[0187]
aa
4a
可以是-asp-。天冬氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
2a
。aa
4a
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
2a
或aa
6a
。
[0188]
aa
5a
可以是-dphe-。aa
5a
可以是-asp-。天冬氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
8a
。aa
5a
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
3a
。
[0189]
aa
6a
可以是-thr-。aa
6a
可以是-asp-。天冬氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
4a
。天冬氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
。aa
6a
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
。aa
6a
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
。
[0190]
aa
7a
可以是-ile-。aa
7a
可以是以下式的α-甲基亮氨酸残基：
[0191][0192]
aa
8a
可以是-asp-。aa
8a
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
5a
。
[0193]
aa
9a
可以是-leu-。aa
9a
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
6a
。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
11a
。aa
9a
可以是-asp-。天冬氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
6a
。天冬氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
11a
。aa
9a
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
11a
。
[0194]
aa
10a
可以是-lys-。aa
10a
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
11a
。
[0195]
aa
11a
可以是-aib-。aa
11a
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
10a
。aa
11a
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
。aa
11a
可以是-asp-。天冬氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
9a
。
[0196]
aa
12a
可以是-asn-。aa
12a
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
13a
。aa
12a
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
13a
。
[0197]
aa
13a
可以是-gln-。aa
13a
可以是-asp-。天冬氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
12a
。aa
13a
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
12a
。
[0198]
aa
14a
可以是-thr-。aa
14a
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
16a
。
[0199]
aa
15a
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
16a
。aa
15a
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
16a
。
[0200]
aa
16a
可以是不存在的。在aa
16a
是存在的情况下，aa
16a
可以是-asp-，在aa
16a
是存在的情况下，aa
16a
可以是-phe-。在aa
16a
是存在的情况下，aa
16a
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
15a
。在aa
16a
是存在的情况下，aa
16a
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
14a
或aa
15a
。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
14a
或aa
15a
。
aa
22
的第五桥的化合物。
[0220]
具有五个桥的示例性化合物包括具有来自位置aa
2-aa5的第一桥、来自位置aa
7-aa
10
的第二桥、来自位置aa
11-aa
15
的第三桥、来自位置aa
16-aa
17
的第四桥和来自位置aa
18-aa
22
的第五桥的化合物。
[0221]
具有五个桥的示例性化合物包括具有来自位置aa
4-aa6的第一桥、来自位置aa
7-aa
10
的第二桥、来自位置aa
11-aa
14
的第三桥、来自位置aa
16-aa
17
的第四桥和来自位置aa
18-aa
22
的第五桥的化合物。
[0222]
具有五个桥的示例性化合物包括具有来自位置aa
4-aa6的第一桥、来自位置aa
7-aa
10
的第二桥、来自位置aa
11-aa
15
的第三桥、来自位置aa
16-aa
17
的第四桥和来自位置aa
18-aa
22
的第五桥的化合物。
[0223]
在条件是所述化合物包含三个、四个或五个内酰胺桥的情况下，氨基酸可以独立地选自下文所示出的基团中的每一个基团。
[0224]
aa1可以是-nhchr3co-；其中r3是-(ch2)y四唑基，其中y是1。
[0225]
aa1可以是-nhchr3co-；其中r3是-(ch2)y四唑基，其中y是2。
[0226]
aa1可以是-nhchr3co-；其中r3是-(ch2)ycooh，其中y是1。
[0227]
aa1可以是-nhchr3co-；其中r3是-(ch2)ycooh，其中y是2。
[0228]
r3可以是-ch2cooh。
[0229]
aa1可以是
[0230][0231]
aa1可以是-asp-。aa1可以是天冬氨酸残基。aa1可以是
[0232][0233]
q可以是咪唑环。q可以是：
[0234]
n可以是1。n可以是2。n可以是3。
[0235]
r1和r2可以独立地选自氢或c
1-6
烷基基团。r1可以是氢或c
1-6
烷基基团。r2可以是氢或c
1-6
烷基基团。r1和r2可以都是甲基。r1可以是甲基。r2可以是甲基。
[0236]
r3可以是-ch2四唑基。r3可以是-ch2cooh。
[0237]
aa2可以是-gly-。aa2可以是-dala-，aa2可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa5。aa2可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa5。
[0238]
aa3可以是-ser-phe-。aa3可以是-ser-2-氟-α-me-phe-。
[0239]
aa4可以是-ser-。aa4可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa6。
[0240]
aa5可以是-asp-。天冬氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa2。aa5可以是-lys-。
赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa2或aa7。
[0241]
aa6可以是-d-phe-。aa6可以是-d-α-me-phe-。aa6可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
10
。
[0242]
aa7可以是-asp-。天冬氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa5。aa7可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
10
。aa7可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
10
。
[0243]
aa8可以是-ile-。aa8可以是-α-me-leu-。
[0244]
aa9可以是-leu-asp-。aa9可以是-leu-acpc-。
[0245]
aa
10
可以是-asp-。天冬氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa7。天冬氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
14
。aa
10
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
14
。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa7。aa
10
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa7。
[0246]
aa
11
可以是-lysr-，其中lysr是n-取代的赖氨酸残基。aa
11
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
14
。aa
11
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
15
。
[0247]
lysr可以是n-取代的赖氨酸残基，其中n-取代基选自：-co(ch2)qch3、-co(ch2)qco2h、-co(ch2)qchch2、-coo(ch2)qch3、-coo(ch2)qco2h和-coo(ch2)qchch2；其中q是1至22。
[0248]
lysr可以是n-取代的赖氨酸残基，其中n-取代基是-coo(ch2)qchch2；其中q是1至22。lysr可以是n-取代的赖氨酸残基，其中n-取代基是-coo(ch2)qchch2；其中q是1。lysr可以是n-取代的赖氨酸残基，其中n-取代基是-cooch2chch2。
[0249]
lysr可以是
[0250][0251]
lysr可以是n-取代的赖氨酸残基，其中n-取代基是基团-l-g；其中l选自由以下组成的组：
[0252][0253][0254]
并且g选自由以下组成的组：
[0255][0256]
其中m是1至23；
[0257]
p是1至3；
[0258]
r是1至20；
[0259]
s是0至3；
[0260]
t是0至4；
[0261]
并且w是0至4。
[0262]
lysr可以是
[0263][0264]
lysr可以是
[0265][0266]
aa
12
可以是-ala-。aa
12
可以是-aib-。
[0267]
aa
13
可以是-ala-。aa
13
可以是-aib-。
[0268]
aa
14
可以是-aib-。aa
14
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
10
。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
11
。
[0269]
aa
15
可以是-asp-。天冬氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
11
。aa
15
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
16
。
[0270]
aa
16
可以是-asn-。aa
16
可以是-acpc-。aa
16
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
17
。aa
16
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
17
。
[0271]
aa
17
可以是-gln-。aa
17
可以是-acpc-。aa
17
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
16
。aa
17
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
16
。
[0272]
aa
18
可以是-thr-。aa
18
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
22
。aa
18
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
22
。
[0273]
aa
19
可以是-pro-。aa
19
可以是-pipala-。aa
19
可以是-lys-。aa
19
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
22
。
[0274]
aa
20
可以是不存在的，使得aa
19
是c-末端。aa
20
可以是-ile-。aa
20
可以是-α-me-leu-。aa
20
可以是-pro-。
[0275]
aa
21
可以是不存在的，使得aa
19
或aa
20
是c-末端。aa
21
可以是-thr-。
[0276]
aa
22
可以是不存在的，使得aa
19
、aa
20
或aa
21
是c-末端。aa
22
可以是-lys-。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
18
。赖氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
19
。aa
22
可以是-glu-。谷氨酸可以任选地经由内酰胺桥连接至aa
18
。
[0277]
c-末端可以是羧基基团。c-末端可以是羧酰胺基团。c-末端可以被邻接至任何天然或非天然氨基酸序列或任何其他部分、一种或更多种官能团。
[0278]
化合物可以选自表1中示出的实施例1至实施例81中的任一种。
[0279]
化合物可以选自表1和表1a中示出的实施例1至实施例117中的任一种。
[0280]
化合物的具体实例包括具有glp受体激动剂活性的化合物。
[0281]
化合物的具体实例包括具有glp-1受体激动剂活性和/或glp-2受体激动剂活性的化合物。
[0282]
化合物的具体实例包括具有与glp-1受体激动剂活性相比更高的glp-2受体激动剂活性的化合物。
[0283]
本发明的化合物可以用于包含本发明的化合物和药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
[0284]
本发明的化合物可以用于医学。
[0285]
本发明的化合物可以用于治疗与glp受体相关的紊乱。
[0286]
本发明的化合物可以用于治疗与glp-1受体和/或glp-2受体相关的紊乱。
[0287]
本发明提供了glp-2/glp-1类似物化合物用于制备用于治疗胃肠道疾病和代谢疾病的药物的用途。如本文定义的glp-2/glp-1类似物可用于促进患有吸收不良紊乱、肠衰竭、肠功能不全、腹泻病和慢性炎性肠紊乱的患者的肠恢复和营养状态。此外，用glp-2/glp-1类似物的治疗性治疗可以改善粘膜屏障功能，减轻肠道炎症并且降低肠通透性，其可以改善患有炎性紊乱、乳糜泻、先天性和获得性消化和吸收不良综合征、慢性腹泻病、由粘膜损伤(例如癌症治疗)引起的状况的患者的症状。预期本发明的glp-2/glp-1类似物恢复血糖控制和胰岛素敏感性。这对于在患有肠衰竭、功能不全或吸收不良紊乱的患者的肠内营养疗法和肠胃外营养疗法期间高血糖症的管理可能是有益的。
[0288]
在另外的方面中，本发明提供了治疗由以下疾病组成的组中的一种的方法：胃肠道损伤、腹泻病、肠功能不全、肠衰竭、酸诱导的肠损伤、精氨酸缺乏症、肥胖、乳糜泻、化学疗法诱导的肠炎、糖尿病、肥胖、脂肪吸收不良、脂肪痢、自身免疫性疾病、食物过敏、胃溃疡、胃肠道屏障紊乱、帕金森氏病、脓毒症、细菌性腹膜炎、炎性肠病、化学疗法相关的组织损伤、肠外伤、肠缺血、肠系膜缺血、短肠综合征、营养不良、坏死性小肠结肠炎、坏死性胰腺炎、新生儿喂养不耐受、nsaid诱导的胃肠道损伤、营养不足、胃肠道的全肠胃外营养损伤、新生儿营养不足、辐射诱导的肠炎、辐射诱导的肠损伤、粘膜炎、贮袋炎、缺血、肥胖、2型糖尿病、非酒精性脂肪肝病(nafld)、非酒精性脂肪性肝炎(nash)、胰岛素抵抗、高血糖症、胰岛素抵抗、葡萄糖不耐受。
[0289]
具体地，表明以严重腹泻、流体和电解质损失、吸收不良和营养运输损伤为特征的先天性腹泻病可以通过用本发明的glp-2/glp-1类似物治疗来减轻。特别地，簇绒肠病是一种与导致受损的营养素吸收和增强的肠通透性的破坏的绒毛形态结构相关的状况。可以改善流体和营养吸收以及纠正肠道屏障损伤的剂可能在促进从肠胃外营养的早期断奶中提供价值。
[0290]
可以用本发明的肽治疗的先天性腹泻病的其他实例包括刷状缘酶缺乏症(先天性乳糖酶缺乏症、先天性蔗糖酶-异麦芽糖酶缺乏症、先天性麦芽糖酶-葡糖淀粉酶缺乏症)、膜载体缺陷(葡萄糖-半乳糖吸收不良、果糖吸收不良、肠病性肢端皮炎、先天性氯/钠腹泻、原发性胆汁吸收不良、囊性纤维化)、脂质/脂蛋白代谢缺陷(乳糜微粒驻留病(chylomicron retention disease)、无β脂蛋白血症)、肠上皮细胞分化或细胞极化缺陷(微绒毛萎缩、簇绒肠病、发-肝-肠综合征(trichohepatoenteric syndrome))和肠内分泌细胞缺陷(先天性吸收不良型腹泻、内分泌失调(anendocrinosis)、蛋白转化酶1/3缺乏症)。
[0291]
本发明的化合物可以用于治疗簇绒肠病。
[0292]
定义
[0293]
在本技术中，除非另外指示，否则适用以下定义。
[0294]
除非另外指示，否则术语“烷基”、“芳基”、“卤素”、“烷氧基”、“环烷基”、“杂环基”和“杂芳基”以其常规意义(例如，如在iupac gold book中所定义的)使用。
[0295]
关于包括式(1a)和式(1b)的那些化合物的本文描述的任何化合物的用途，术语“治疗”被用于描述任何形式的干预，其中将化合物施用至患有所讨论的疾病或紊乱或处于患有所述疾病或紊乱的风险或潜在地处于患有所述疾病或紊乱的风险的受试者。因此，术语“治疗”涵盖预防性(防治性)治疗和其中展示疾病或紊乱的可测量或可检测的症状的治疗两者。
[0296]
如本文使用的术语“有效治疗量”(例如，关于紊乱、疾病或状况的治疗方法)指的是有效产生期望的治疗效果的化合物的量。例如，如果状况是疼痛，则有效治疗量是足以提供期望水平的疼痛缓解的量。期望水平的疼痛缓解可以是例如完全去除疼痛或降低疼痛的严重程度。
[0297]
就所描述的任何化合物具有手性中心来说，本发明扩展到这样的化合物的所有光学异构体，不论是呈外消旋体还是拆分的对映异构体的形式。然而，本文描述的发明涉及如此制备的任何所公开的化合物的所有晶体形式、溶剂化物和水合物。就本文公开的任何化合物具有酸性中心或碱性中心诸如羧酸基团或氨基基团来说，则所述化合物的所有盐形式都被包括在本文中。在制药用途的情况下，盐应当被看作是药学上可接受的盐。
[0298]
可以提及的盐或药学上可接受的盐包括酸加成盐和碱加成盐。这样的盐可以通过常规手段形成，例如通过化合物的游离酸形式或游离碱形式与一个或更多个当量的适合的酸或碱任选地在溶剂中或在盐不溶于其中的介质中反应，随后使用标准技术(例如在真空中，通过冷冻干燥或通过过滤)去除所述溶剂或所述介质。盐还可以例如使用合适的离子交换树脂，通过将呈盐形式的化合物的抗衡离子与另一种抗衡离子进行交换来制备。
[0299]
药学上可接受的盐的实例包括衍生自无机酸和有机酸的酸加成盐，以及衍生自金属诸如钠、镁、钾和钙的盐。
[0300]
酸加成盐的实例包括用以下形成的酸加成盐：乙酸、2,2-二氯乙酸、己二酸、海藻酸、芳基磺酸(例如苯磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸和对甲苯磺酸)、抗坏血酸(例如l-抗坏血酸)、l-天冬氨酸、苯甲酸、4-乙酰氨基苯甲酸、丁酸、(+)-樟脑酸、樟脑磺酸、(+)-(1s)-樟脑-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、肉桂酸、柠檬酸、环拉酸、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羟基乙磺酸、甲酸、富马酸、粘酸、龙胆酸、葡庚糖酸、葡糖酸(例如d-葡糖酸)、葡糖醛酸(例如d-葡糖醛酸)、谷氨酸(例如l-谷氨酸)、α-酮戊二酸、乙醇酸、马尿酸、氢溴
酸、盐酸、氢碘酸、羟乙基磺酸、乳酸(例如(+)-l-乳酸和(
±
)-dl-乳酸)、乳糖醛酸、马来酸、苹果酸(例如(-)-l-苹果酸)、丙二酸、(
±
)-dl-扁桃酸、偏磷酸、甲磺酸、1-羟基-2-萘甲酸、烟酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕榈酸、帕莫酸(pamoic acid)、磷酸、丙酸、l-焦谷氨酸、水杨酸、4-氨基-水杨酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、鞣酸、酒石酸(例如(+)-l-酒石酸)、硫氰酸、十一碳烯酸和戊酸。
[0301]
还涵盖的是这些化合物及其盐的任何溶剂化物。优选的溶剂化物是通过将非毒性药学上可接受的溶剂(在下文被称为溶剂化溶剂)的分子并入本发明的化合物的固态结构(例如，晶体结构)中而形成的溶剂化物。这样的溶剂的实例包括水、醇(诸如乙醇、异丙醇和丁醇)和二甲基亚砜。可以通过用溶剂或含有溶剂化溶剂的溶剂混合物将本发明的化合物重结晶来制备溶剂化物。在任何给定情况下是否已经形成溶剂化物可以通过使用熟知和标准的技术诸如热重分析(tga)、差示扫描量热法(dsc)和x-射线晶体学使化合物的晶体经历分析来确定。
[0302]
所述溶剂化物可以是化学计量的或非化学计量的溶剂化物。特定的溶剂化物可以是水合物，并且水合物的实例包括半水合物、一水合物和二水合物。对于溶剂化物以及用于制备并表征它们的方法的更详细的讨论，参见bryn等人,solid-state chemistry of drugs,第二版,由ssci,inc of west lafayette,in,usa出版,1999,isbn 0-967-06710-3。
[0303]
在本发明的上下文中，术语“药物组合物”意指包含活性剂并且另外包含一种或更多种药学上可接受的载体的组合物。取决于施用模式的性质和剂型，组合物还可以包含选自例如稀释剂、佐剂、赋形剂、媒介物、防腐剂、填充剂、崩解剂、润湿剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂、增香剂(perfuming agent)、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂的成分。组合物可以采取例如以下的形式：片剂；糖衣丸；粉剂；酏剂；糖浆剂；液体制品，包括悬浮液、喷雾剂、吸入剂、片剂、锭剂、乳液、溶液、扁囊剂、颗粒剂、胶囊和栓剂；以及注射用液体制品，包括脂质体制品。
[0304]
本发明的化合物可以包含一个或更多个同位素取代，并且提及特定元素将该元素的所有同位素包括在其范围内。例如，提及氢将1h、2h(d)和3h(t)包括在其范围内。类似地，提及碳和氧分别将
12
c、
13
c和
14
c以及
16
o和
18
o包括在其范围内。以类似的方式，除非上下文另外指示，否则提及特定官能团也将同位素变型包括在其范围内。例如，提及烷基基团诸如乙基基团或烷氧基基团诸如甲氧基基团还包括其中基团中的一个或更多个氢原子呈氘或氚同位素形式的变型，例如，如在其中所有五个氢原子都呈氘同位素形式的乙基基团(全氘化乙基基团(perdeuteroethyl group))，或其中所有三个氢原子都呈氘同位素形式的甲氧基基团(三氘化甲氧基基团)中。同位素可以是放射性的或非放射性的。
[0305]
治疗剂量可以取决于患者的需要、被治疗的状况的严重程度和所采用的化合物而变化。对特定情况适合的剂量的确定在本领域的技术范围内。通常，以小于化合物的最佳剂量的较小的剂量开始治疗。此后，以小的增量增加剂量，直到达到在这种情况下的最佳效果。为方便起见，如果需要，可以将每日总剂量分开并且在一日期间分批施用。
[0306]
当然，化合物的有效剂量的大小(magnitude)将随着待治疗的状况的严重程度的性质并且随着特定化合物及其施用途径而变化。适合的剂量的选择在本领域普通技术人员的能力之内，而没有过度的负担。通常，每日剂量范围可以是每kg人类体重和非人类动物体重从约10μg至约30mg，优选地每kg人类体重和非人类动物体重从约50μg至约30mg，例如每
kg人类体重和非人类动物体重从约50μg至约10mg，例如每kg人类体重和非人类动物体重从约100μg至约30mg，例如每kg人类体重和非人类动物体重从约100μg至约10mg，并且最优选地每kg人类体重和非人类动物体重从约100μg至约1mg。
[0307]
药物制剂
[0308]
虽然单独施用活性化合物是可能的，但是优选的是将其提供为药物组合物(例如，制剂)。
[0309]
因此，在本发明的另一种实施方案中，提供了一种药物组合物，该药物组合物包含至少一种如上文所定义的式(1a)和式(1b)的化合物连同至少一种药学上可接受的赋形剂。
[0310]
该组合物可以是片剂组合物。
[0311]
该组合物可以是胶囊组合物。
[0312]
该组合物可以是适合于注射的组合物。注射可以是静脉内的(iv)或皮下的。该组合物可以在无菌缓冲溶液中或作为固体被提供，所述固体可以悬浮或溶解在注射用无菌缓冲液中。
[0313]
药学上可接受的赋形剂可以选自例如，载体(例如固体、液体或半固体的载体)、佐剂、稀释剂(例如固体稀释剂，诸如填充剂或疏松剂(bulking agent)；和液体稀释剂，诸如溶剂和共溶剂)、粒化剂、粘合剂(binder)、助流剂(flow aid)、包衣剂(coating agent)、释放控制剂(例如释放延缓或释放延迟聚合物或蜡)、粘合剂(binding agent)、崩解剂、缓冲剂、润滑剂、防腐剂、抗真菌剂和抗细菌剂、抗氧化剂、缓冲剂、张力调节剂、增稠剂、调味剂、甜味剂、颜料、增塑剂、掩味剂、稳定剂或常规用于药物组合物中的任何其他赋形剂。
[0314]
如本文使用的术语“药学上可接受的”意指在合理医学判断范围内适合用于与受试者(例如，人类受试者)的组织接触而无过度毒性、刺激性、过敏反应或其他的问题或并发症，与合理的益处/风险比相称的化合物、材料、组合物和/或剂型。每种赋形剂必须在与制剂的其他成分相容的意义上也是“可接受的”。
[0315]
包含式(1a)和式(1b)的化合物的药物组合物可以根据已知技术来配制，参见例如remington’s pharmaceutical sciences,mack publishing company,easton,pa,usa。
[0316]
药物组合物可以呈适合于口服施用、肠胃外施用、局部施用、鼻内施用、支气管内施用、舌下施用、眼部施用、耳部施用、直肠施用、阴道内施用或经皮施用的任何形式。
[0317]
适合于口服施用的药物剂型包括片剂(包衣的或未包衣的)、胶囊(硬壳或软壳)、囊片、丸剂、锭剂、糖浆剂、溶液、粉剂、颗粒剂、酏剂和悬浮液、舌下片剂、糯米纸囊剂(wafer)或贴剂诸如口腔贴剂(buccal patch)。
[0318]
片剂组合物可以包含单位剂量的活性化合物连同惰性稀释剂或载体，诸如糖或糖醇，例如乳糖、蔗糖、山梨糖醇或甘露糖醇；和/或非糖源性的稀释剂，诸如碳酸钠、磷酸钙、碳酸钙、或纤维素或其衍生物，诸如微晶纤维素(mcc)、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙甲基纤维素，以及淀粉诸如玉米淀粉。片剂还可以包含诸如以下的标准成分：粘合剂和粒化剂，诸如聚乙烯吡咯烷酮；崩解剂(例如，可溶胀的交联聚合物，诸如交联的羧甲基纤维素)；润滑剂(例如硬脂酸酯)；防腐剂(例如对羟基苯甲酸酯)；抗氧化剂(例如bht)；缓冲剂(例如磷酸盐缓冲剂或柠檬酸盐缓冲剂)；以及泡腾剂(effervescent agent)，诸如柠檬酸盐/碳酸氢盐混合物。这样的赋形剂是熟知的，并且不需要在此详细地讨论。
[0319]
片剂可以被设计成在与胃液接触时释放药物(立即释放片剂)或者在延长的时间
段内或在gi道的特定区域内以受控的方式释放药物(控制释放片剂)。
[0320]
药物组合物通常包含从约1％(w/w)至约95％(优选地％(w/w))的活性成分，以及从99％(w/w)至5％(w/w)的药学上可接受的赋形剂(例如如上文所定义的)或这样的赋形剂的组合。优选地，该组合物包含从约20％(w/w)至约90％(w/w)的活性成分以及从80％(w/w)至10％的药学上可接受的赋形剂或赋形剂的组合。药物组合物包含从约1％至约95％、优选地从约20％至约90％的活性成分。根据本发明的药物组合物可以是例如呈单位剂量形式，诸如呈安瓿、小瓶、栓剂、预填充注射器、糖衣丸、粉剂、片剂或胶囊的形式。
[0321]
片剂和胶囊可以包含例如0％-20％的崩解剂、0％-5％的润滑剂、0％-5％的助流剂和/或0％-99％(w/w)的填充剂或疏松剂(取决于药物剂量)。它们还可以包含0％-10％(w/w)的聚合物粘合剂、0％-5％(w/w)的抗氧化剂、0％-5％(w/w)的颜料。此外，缓慢释放片剂通常还将包含0％-99％(w/w)的控制释放的(例如延迟释放的)聚合物(取决于剂量)。片剂或胶囊的膜包衣通常包含0％-10％(w/w)的聚合物、0％-3％(w/w)的颜料和/或0％-2％(w/w)的增塑剂。
[0322]
肠胃外制剂通常包含0％-20％(w/w)的缓冲剂、0％-50％(w/w)的共溶剂和/或0％-99％(w/w)的注射用水(wfi)(取决于剂量和是否冷冻干燥)。用于肌肉内储库的制剂还可以包含0％-99％(w/w)的油。
[0323]
药物制剂可以以在单个包装(通常是泡罩包装)内包含整个疗程的“患者包(patient pack)”提供给患者。
[0324]
式(1a)和式(1b)的化合物通常将以单位剂型呈现，并且因此通常将包含足够的化合物以提供期望水平的生物学活性。例如，制剂可以包含从1纳克至2克的活性成分，例如从1纳克至2毫克的活性成分。在这些范围内，化合物的特定子范围是0.1毫克至2克的活性成分(更通常从10毫克至1克，例如50毫克至500毫克)，或1微克至20毫克(例如1微克至10毫克，例如0.1毫克至2毫克的活性成分)。
[0325]
对于口服组合物，单位剂型可以包含从1毫克至2克，更典型地10毫克至1克，例如50毫克至1克，例如100毫克至1克的活性化合物。
[0326]
活性化合物将以足以实现期望的治疗效果的量(有效量)施用至有相应需要的患者(例如人类患者或动物患者)。所施用的化合物的精确量可以由监督医师根据标准程序来确定。
[0327]
生物学活性
[0328]
表1中说明的化合物的体外glp-2测定结果在从约0.001nm至约1nm的范围内。本发明的glp-2类似物对glp-2受体和glp-1受体两者展示出活性，其中对glp-2受体展示出更大的活性。
实施例
[0329]
现在将通过参考在以下实施例中描述的具体实施方案来说明本发明，但不限制本发明。
[0330]
[0331]
[0332]
[0333]
[0334]
[0335]
[0336]
[0337]
[0338]
[0339]
[0340][0341]
一般程序
[0342]
在不包括制备路线的情况下，相关中间体是可商购的。商业试剂在没有进一步纯
化的情况下使用。室温(rt)指的是约20℃-27℃。在bruker仪器上在400mhz记录1h nmr光谱。化学位移值以百万分率(ppm)，即(δ)-值表示。以下缩写用于nmr信号的多重性：s＝单峰，br＝宽峰，d＝双重峰，t＝三重峰，q＝四重峰，quint＝五重峰，td＝双重峰的三重峰，tt＝三重峰的三重峰，qd＝双重峰的四重峰，ddd＝双重峰的双重峰的双重峰，ddt＝三重峰的双重峰的双重峰，m＝多重峰。耦合常数作为以hz测量的j值列出。对nmr和质谱结果进行校正以将背景峰考虑在内。色谱法指的是使用60目-120目硅胶进行的并且在氮气压力(快速色谱法)条件下执行的柱色谱法。
[0343]
分析方法
[0344]
在电喷雾条件下进行化合物的lcms分析。
[0345]
lcms方法a
[0346]
仪器：waters acquity uplc，waters 3100 pda检测器，sqd；柱：acquity hss-t3，1.8微米，2.1
×
100mm；梯度[时间(min)/在溶剂a中的溶剂b(％)]：0.00/10、1.00/10、2.00/15、4.50/55、6.00/90、8.00/90、9.00/10、10.00/10；溶剂：溶剂a＝在水中的0.1％三氟乙酸；溶剂b＝乙腈；注射体积1μl；检测波长214nm；柱温30℃；流量0.3ml/min。
[0347]
lcms方法b
[0348]
lcms：agilent 1200 hplc&6410b triple quad，柱：xbridge c18 3.5μm 2.1*30mm。梯度[时间(min)/溶剂b(％)]：0.0/10、0.9/80、1.5/90、8.5/5、1.51/10。(溶剂a＝在1000ml水中的1ml的tfa；溶剂b＝在1000ml的mecn中的1ml的tfa)；注射体积5μl；uv检测220nm 254nm 210nm；柱温25℃；1.0ml/min。
[0349]
分析方法c
[0350]
ms离子在电喷雾条件下使用lcms方法确定；hplc保留时间(r
t
)使用下文的hplc方法确定；除非指示，否则根据hplc的纯度》95％。
[0351]
lcms：agilent 1200 hplc&6410b triple quad，柱：xbridge c18 3.5μm 2.1*30mm。梯度[时间(min)/溶剂b(％)]：0.0/10、0.9/80、1.5/90、8.5/5、1.51/10。(溶剂a＝在1000ml水中的1ml的tfa；溶剂b＝在1000ml的mecn中的1ml的tfa)；注射体积5μl(可以变化)；uv检测220nm 254nm 210nm；柱温25℃；1.0ml/min。
[0352]
hplc：agilent technologies 1200，柱：gemini-nx c18 5μm 110a 150*4.6mm。梯度[时间(min)/溶剂b(％)]：0.0/30、20/60、20.1/90、23/90。(溶剂a＝在1000ml水中的1ml的tfa；溶剂b＝在1000ml的mecn中的1ml的tfa)；注射体积5μl(可以变化)；uv检测220nm 254nm；柱温25℃；1.0ml/min。
[0353]
分析方法d
[0354]
仪器：thermo scientific orbitrap fusion；柱：phenomenex luna omega c18 1.6μm，2.1
×
50mm；梯度[时间(min)/在溶剂a中的溶剂b(％)]：0.00/10、0.30/10、0.40/60、1.10/90、1.70/90、1.75/10、1.99/10、2.00/10；溶剂：溶剂a＝在水中的0.1％甲酸；溶剂b＝在乙腈中的0.1％甲酸；注射体积5μl；柱温25℃；流量0.8ml/min。
[0355]
中间体和化合物的合成
[0356]
提供以下实施例以说明本发明的优选的方面并且不意图限制本发明的范围。
[0357]
中间体的合成
[0358]
除了中间体1、中间体2和fmoc-环肽构建模块(中间体3至中间体21)之外，所有的
fmoc-氨基酸是可商购的。
[0359]
2,2-二甲基-3-氧代-3-((2-(1-三苯甲基-1h-咪唑-4-基)乙基)氨基)丙酸(中间体1)的合成
[0360][0361]
步骤-1：2,2,2-三氟-n-(2-(1-三苯甲基-1h-咪唑-4-基)乙基)乙酰胺(2)的合成：在室温，向2-(1h-咪唑-4-基)乙-1-胺二盐酸盐(1,25.0g,136.6mmol)在meoh(100ml)中的溶液添加et3n(67ml,464.4mmol)，并且将反应混合物冷却至0℃。在0℃，将三氟乙酸乙酯(20ml,164.0mmol)在meoh(50ml)中的溶液经30min添加到反应混合物，并且将反应混合物在室温搅拌持续4h。将该反应混合物用干燥的dcm(200ml)和et3n(60ml,409.8mmol)稀释，并且将反应混合物冷却至0℃。分批添加tr-cl(76g,273.2mmol)，并且将所得到的反应混合物在室温搅拌持续16h。在完成之后，将反应混合物用水(300ml)猝灭，并且将含水层用氯仿(3
×
150ml)萃取。将有机层合并，干燥(na2so4)并且在真空中浓缩。将粗制残余物用正己烷研磨，以给出作为白色固体的2,2,2-三氟-n-(2-(1-三苯甲基-1h-咪唑-4-基)乙基)乙酰胺(2,50.10g,81％)。
[0362]
ms(esi+ve)：450
[0363]1h-nmr(400mhz；cdcl3)：δ2.75(t，j＝5.9hz，2h)，3.60-3.65(m，2h)，6.61(s，1h)，7.08-7.15(m，5h)，7.31-7.38(m，9h)，7.40(s，1h)，8.41(bs，1h).
[0364]
步骤-2：2-(1-三苯甲基-1h-咪唑-4-基)乙-1-胺(3)的合成：在0℃，向2,2,2-三氟-n-(2-(1-三苯甲基-1h-咪唑-4-基)乙基)乙酰胺(2,50.0g,111.3mmol)在thf(150ml)和meoh(180ml)中的溶液缓慢添加在水(100ml)中的naoh(22.0g,556.7mmol)，并且将反应混合物在室温搅拌持续2h。在完成之后，将反应混合物用水(300ml)猝灭，并且将含水层用氯仿(3
×
150ml)萃取。将有机层合并，干燥(na2so4)并且在真空中浓缩，以给出作为微黄色粘性固体的2-(1-三苯甲基-1h-咪唑-4-基)乙-1-胺(3,34.0g,86％)。粗制残余物在没有进一步纯化的情况下用于下一步骤。
[0365]
ms(esi+ve)：354
[0366]1h-nmr(400mhz；cdcl3)：δ1.53(bs，2h)，2.65(t，j＝6.5hz，2h)，2.95(t，j＝6.5hz，2h)，6.58(s，1h)，7.11-7.16(m，6h)，7.28-7.38(m，10h).
[0367]
步骤-3：2,2,5,5-四甲基-1,3-二氧六环-4,6-二酮(5)的合成：在室温，向2,2-二甲基-1,3-二氧六环-4,6-二酮(4,20.0g,138.8mmol)在acn(200ml)中的溶液添加k2co3(96g,694.0mmol)和mei(26ml,416.6mmol)，并且将反应混合物回流持续10h。在完成之后，将反应混合物冷却至室温，通过硅藻土垫过滤，用etoac(3
×
50ml)洗涤。将有机层用10％的
含水na2s2o3(100ml)洗涤，干燥(na2so4)并且在真空中浓缩，以给出作为黄色固体的2,2,5,5-四甲基-1,3-二氧六环-4,6-二酮(5,21g,88％)。粗制残余物在没有进一步纯化的情况下用于下一步骤。
[0368]1h-nmr(400mhz；cdcl3)：δ1.63(s，6h)，1.73(s，6h).
[0369]
步骤-4：2,2-二甲基-3-氧代-3-((2-(1-三苯甲基-1h-咪唑-4-基)乙基)氨基)丙酸(中间体1)的合成：在75℃，将2-(1-三苯甲基-1h-咪唑-4-基)乙-1-胺(3,8.0g,22.6mmol)和et3n(16.0ml,113.0mmol)在甲苯(100ml)中的溶液经60min逐滴添加到2,2,5,5-四甲基-1,3-二氧六环-4,6-二酮(5,5.8g,29.76mmol)在甲苯(50ml)中的溶液。将反应混合物在相同的温度进一步搅拌持续3h。在完成之后，将反应混合物在真空中浓缩。将残余物溶解在氯仿(100ml)中，并且用10％的含水柠檬酸(ph～6-6.5)洗涤。将有机层干燥(na2so4)并且在真空中浓缩。将所获得的粗制残余物用热的氯仿(150ml)和正己烷(75ml)研磨，并且将悬浮液在室温搅拌持续16h。将固体过滤，用氯仿:正己烷(1:1，2
×
50ml)洗涤并且在真空中干燥，以给出作为白色固体的2,2-二甲基-3-氧代-3-((2-(1-三苯甲基-1h-咪唑-4-基)乙基)氨基)丙酸(中间体1,6.8g,64％)。
[0370]
lcms(方法a)：m/z 468[m+h]
+
(es
+
)，在5.38min处，99.31％。
[0371]1h-nmr(400hhz；dmso-d6)：δ1.21(s，6h)，2.57(t，j＝6.8hz，2h)，3.22-3.27(m，2h)，6.66(s，1h)，7.06-7.11(m，6h)，7.28(s，1h)，7.35-7.42(m，8h)，7.64(t，j＝5.4hz，1h)，8.31(s，1h)，12.44(bs，1h).
[0372]
(s)-2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(2-三苯甲基-2h-四唑-5-基)丙酸(中间体2)的合成
[0373][0374]
步骤-1：(s)-2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-氰基丙酸(7)的合成：在0℃，向(((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)-l-天冬酰胺(7,50.0g,423.7mmol)在吡啶(200ml)中的悬浮液添加dcc(34.0g,466.1mmol)，并且将反应混合物在室温搅拌持续5h。将反应混合物用含水2n hcl小心地猝灭，直到ph变成酸性，并且用二乙醚(3
×
500ml)萃取。将有机层合并，并且用盐水洗涤，干燥(na2so4)并在真空中浓缩。将残余物用戊烷研磨，以给出作为白色固体的(s)-2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-氰基丙酸(7,96g,68％)。
[0375]
ms(esi-ve)：335.
[0376]1h-nmr(400mhz；dmso-d6)：δ2.85-3.05(m，2h)，4.22-4.39(m，4h)，7.33(t，j＝7.6hz，2h)，7.42(t，j＝7.6hz，2h)，7.72(d，j＝7.2hz，2h)，7.90(d，j＝7.6hz，2h)，8.09(d，j＝8.4hz，1h).
[0377]
步骤-2：(s)-2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(2h-四唑-5-基)丙酸(8)的合成：向(s)-2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-氰基丙酸(7,48.0g,142.8mmol)在甲苯(50ml)中的悬浮液添加二丁基氧化锡(21.0g,85.6mmol)，并且将反应混合物搅拌持续15min。向该反应混合物添加叠氮基三甲基硅烷(61ml,422.8mmol)，并且将反应混合物在120℃回流持续15min。在将反应混合物冷却至室温之后，将所得到的固体过滤并且用二乙
醚洗涤。将固体残余物用5％meoh/dcm(500ml)研磨，以给出作为灰白色固体的(s)-2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(2h-四唑-5-基)丙酸(8,32.5g,60％)。
[0378]
ms(esi+ve)：380
[0379]1h-nmr(400mhz；dmso-d6)：δ3.22-3.41(m，2h)，4.18-4.28(m，3h)，4.41-4.48(m，1h)，7.31(t，j＝7.2hz，2h)，7.41(t，j＝7.2hz，2h)，7.65(t，j＝7.6hz，2h)，7.77(d，j＝7.6hz，1h)，7.88(d，j＝7.6hz，2h).
[0380]
步骤-3：(s)-2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(2-三苯甲基-2h-四唑-5-基)丙酸(中间体2)的合成：在0℃，向(s)-2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(2h-四唑-5-基)丙酸(8,12
×
5g,12
×
13.0mmol)在dcm(12
×
45ml)中的溶液添加et3n(12
×
5.6ml,12
×
39.0mmol)。在搅拌持续5min之后，添加三苯甲基氯(12
×
4.0g,12
×
14.0mmol)，并且将反应混合物在相同的温度搅拌持续2h。将反应混合物用水(50ml)猝灭并且用dcm(2
×
100ml)萃取(12次)。将有机层合并，并且用盐水洗涤，干燥(na2so4)并在真空中浓缩。残余物通过快速柱色谱法[正相，硅胶(100目-200目)，梯度在dcm中的1％至5％甲醇]纯化，以给出作为白色固体的(s)-2-((((9h-芴-9-基)甲氧基)羰基)氨基)-3-(2-三苯甲基-2h-四唑-5-基)丙酸(中间体2,41g,41％)。
[0381]
lcms(方法a)：m/z 620[m-h]
+
(es-)，在5.99min处，86.85％。
[0382]1h-nmr(400mhz；cdcl3)：δ3.44-3.62(m，2h)，40.12-4.20(m，1h)，4.25-4.32(m，1h)，4.36-4.44(m-1h)，4.82-4.88(m，1h)，7.02-7.12(m，6h)，7.24-7.32(m，11h)，7.34-7.42(m，2h)，7.44-7.48(m，1h)，7.49-7.58(m，2h)，7.74(d，j＝6.6hz，2h).
[0383]
在没有进一步纯化的情况下用于固相肽合成。
[0384]
用于合成fmoc-环肽构建模块的方法，通过中间体8,fmoc-[asp-ile-leu-lys]的合成所例示
[0385]
1)将dcm添加到包含ctc树脂(3mmol,3g,1.0mmol/g)和fmoc-lys(alloc)-oh(1.35g,3mmol,1当量)的容器，在n2鼓泡的情况下搅拌。
[0386]
2)逐滴添加diea(4.0当量)，并且在n2鼓泡的情况下搅拌持续2小时。
[0387]
3)添加meoh(3ml)，并且在n2鼓泡的情况下搅拌持续30min。
[0388]
4)沥干并且用dmf洗涤树脂(5次，在每次洗涤之间沥干)。
[0389]
5)添加20％哌啶在dmf中的溶液，并且将树脂在n2鼓泡的情况下搅拌持续30min。
[0390]
6)沥干并且用dmf洗涤(5次，在每次洗涤之间沥干)。
[0391]
7)添加fmoc-氨基酸溶液(在dmf中的3.0当量)并且在n2鼓泡的情况下搅拌持续30秒，然后添加活化缓冲液(在dmf中的hbtu(2.85当量)和diea(6当量))，在n2鼓泡的情况下搅拌持续1小时。
[0392]
8)通过茚三酮测试监测偶联反应。
[0393]
9)如果出现低效偶联，如果需要，则对于相同的氨基酸偶联重复步骤6至步骤8。
[0394]
10)对于下一个氨基酸偶联重复步骤3至步骤8。
[0395]
注：对于下表中的酸，使用了不同的保护基团和/或偶联剂。
[0396][0397]
肽侧链脱保护环化：
[0398]
1)将dcm添加到树脂，并且在n2鼓泡的情况下搅拌，然后添加phsih3(10当量)、pd(pph3)4(0.2当量)，在n2的情况下搅拌持续15min，进行3次。
[0399]
2)将树脂用dcm洗涤三次，并且然后用dmf洗涤三次。
[0400]
3)将树脂用在dmf中的0.5％二乙基二硫代氨基甲酸钠三水合物和在dmf中的0.5％diea洗涤十次。
[0401]
4)将hatu(2当量)和diea(4当量)添加到在dmf中的树脂，并且在n2鼓泡的情况下搅拌持续1小时。
[0402]
3)将树脂用meoh洗涤三次并且在真空中干燥。
[0403]
4)将树脂添加到20％hfip/80％dcm的溶液，并且搅拌持续30min，过滤并重复。
[0404]
5)将有机层合并，并且在真空中去除溶剂。
[0405]
6)将肽用h2o洗涤两次。
[0406]
7)将肽重新溶解并且冻干，以给出作为固体的中间体8(1.5g,55.6％收率)。
[0407]
使用上文程序合成中间体3至中间体21，分析数据在下文给出：
[0408]
[0409]
[0410]
[0411][0412]
实施例1-实施例81的合成
[0413]
使用标准fmoc固相肽合成(spps)来合成肽，然后将该肽从树脂上裂解并纯化。
[0414]
用于肽合成的一般方法：
[0415]
使用标准fmoc化学来合成肽。
[0416]
方法a-通过实施例1的合成所例示
[0417]
肽合成
[0418]
1)将dcm添加到包含rink酰胺mbha树脂(sub:0.35mmol/g,0.15mmol,0.42g)的容器，并且溶胀持续2小时。
[0419]
2)沥干并且然后用dmf洗涤(5次，在每次洗涤之间沥干)。
[0420]
3)添加20％哌啶在dmf中的溶液，在n2鼓泡的情况下搅拌持续30min。
[0421]
4)沥干并且用dmf洗涤(5次，在每次洗涤之间沥干)。
[0422]
5)添加fmoc-氨基酸溶液(在dmf中的3.0当量)并且混合持续30秒，然后添加活化缓冲液(在dmf中的hbtu(2.85当量)和diea(6当量))，在n2鼓泡的情况下搅拌持续1小时。
[0423]
6)通过茚三酮测试监测偶联反应。
[0424]
7)如果出现低效偶联，如果需要，则对于相同的氨基酸偶联重复步骤4至步骤6。
[0425]
8)对于下一个氨基酸偶联重复步骤2至步骤6。
[0426]
注：对于下表中的酸，使用了不同的保护基团和/或偶联剂。
[0427]
步骤材料偶联试剂1中间体5(2.0当量)dic(2.0当量)和hobt(2.0当量)11中间体4(2.0当量)dic(2.0当量)和hobt(2.0当量)15中间体3(2.0当量)dic(2.0当量)和hobt(2.0当量)20中间体2(2.0当量)dic(2.0当量)hobt(2.0当量)21中间体1(1.5当量)dic(1.5当量)hobt(1.5当量)
[0428]
9)将树脂用dmf洗涤五次并且用meoh洗涤三次，并且在真空中干燥。
[0429]
肽裂解和纯化：
[0430]
1)在室温，将裂解缓冲液(92.5％tfa/2.5％edt/2.5％tis/2.5％h2o)添加到包含树脂上的侧链保护的肽的烧瓶，并且搅拌持续3小时。
[0431]
2)过滤并且收集肽溶液。
[0432]
3)将肽用冷的叔丁基甲基醚沉淀并且离心(以3000rpm离心3min)。
[0433]
4)将残余物用叔丁基甲基醚洗涤(2次)。
[0434]
5)将粗制肽在真空下干燥持续2小时。
[0435]
6)粗制肽通过制备型hplc纯化。制备型hplc条件：仪器：gilson 281。溶剂：a-在h2o中的0.1％tfa，b-乙腈，柱：串联的luna c18(200
×
25mm；10μm)和gemini c18(150*30mm；5μm)。梯度[时间(min)/溶剂b(％)]：0.0/25、60.0/55、60.1/90、70/90、70.1/10，以20ml/min使用uv检测(波长＝215nm/254nm)。残余物通过制备型hplc再纯化。制备型hplc条件：仪器：gilson 281。溶剂：a-在h2o中的0.08％nh4hco3，b-乙腈，柱：串联的luna c18(200
×
25mm；10μm)和gemini c18(150*30mm；5μm)。梯度[时间(min)/溶剂b(％)]：0.0/20、60.0/55、60.1/90、70/90、70.1/10，以20ml/min使用uv检测(波长＝215nm/254nm)，并且然后冻干，以给出实施例1(65.7mg,11.6％收率)。
[0436]
表2-由实施例1-实施例81表示的纯化的肽的hrms性质和lcms性质
[0437]
[0438]
[0439]
[0440]
[0441]
[0442]
[0443][0444]
nd-未确定
[0445]
实施例82-实施例117的合成
[0446]
使用标准fmoc固相肽合成(spps)来合成肽，然后将该肽从树脂上裂解并纯化。
[0447]
用于肽合成的一般方法：
[0448]
使用标准fmoc化学来合成肽。
[0449]
方法a-通过实施例82的合成所例示
[0450]
肽合成
[0451]
1)将dcm添加到包含rink酰胺mbha树脂(sub:0.35mmol/g,0.2mmol,0.57g)的容器，并且溶胀持续2小时。
[0452]
2)沥干并且然后用dmf洗涤(5次，在每次洗涤之间沥干)。
[0453]
3)添加20％哌啶在dmf中的溶液，在n2鼓泡的情况下搅拌持续30min。
[0454]
4)沥干并且用dmf洗涤(5次，在每次洗涤之间沥干)。
[0455]
5)添加fmoc-氨基酸溶液(在dmf中的3.0当量)并且混合持续30秒，然后添加活化缓冲液(在dmf中的hbtu(2.85当量)和diea(6当量))，在n2鼓泡的情况下搅拌持续1小时。
[0456]
6)通过茚三酮测试监测偶联反应。
[0457]
7)如果出现低效偶联，如果需要，则对于相同的氨基酸偶联重复步骤4至步骤6。
[0458]
8)对于下一个氨基酸偶联重复步骤2至步骤6。
[0459]
注：对于下表中的酸，使用了不同的保护基团和/或偶联剂。
[0460][0461]
肽侧链脱保护环化：
[0462]
1)将dcm添加到树脂，并且在n2鼓泡的情况下搅拌，然后添加phsih3(10当量)、pd(pph3)4(0.2当量)，在n2的情况下搅拌持续15min，进行3次。
[0463]
2)将树脂用dcm洗涤三次，并且然后用dmf洗涤三次。
[0464]
3)将树脂用在dmf中的0.5％二乙基二硫代氨基甲酸钠三水合物和在dmf中的0.5％diea洗涤十次。
[0465]
4)将hatu(2当量)和diea(4当量)添加到在dmf中的树脂，并且在n2鼓泡的情况下搅拌持续1小时。
[0466]
5)将树脂用meoh洗涤三次并且在真空中干燥。
[0467]
肽裂解和纯化：
[0468]
1)在室温，将裂解缓冲液(92.5％tfa/2.5％edt/2.5％tis/2.5％h2o)添加到包含树脂上的侧链保护的肽的烧瓶，并且搅拌持续3小时。
[0469]
2)过滤并且收集肽溶液。
[0470]
3)将肽用冷的叔丁基甲基醚沉淀并且离心(以3000rpm离心3min)。
[0471]
4)将残余物用叔丁基甲基醚洗涤(2次)。
[0472]
5)将粗制肽在真空下干燥持续2小时。
[0473]
6)粗制肽通过制备型hplc纯化。制备型hplc条件：仪器：gilson 281。溶剂：a-在h2o中的0.1％tfa，b-乙腈，柱：串联的luna c18(200
×
25mm；10μm)和gemini c18(150*30mm；5μm)。梯度[时间(min)/溶剂b(％)]：0.0/25、60.0/55、60.1/90、70/90、70.1/10，以20ml/min使用uv检测(波长＝215nm/254nm)，并且然后冻干，以给出实施例1(10.3mg,1.34％收率)。
[0474]
方法b-通过实施例105的合成所例示
[0475]
肽合成
[0476]
9)将dcm添加到包含rink酰胺mbha树脂(sub:0.35mmol/g,0.15mmol,0.42g)的容器，并且溶胀持续2小时。
[0477]
10)沥干并且然后用dmf洗涤(5次，在每次洗涤之间沥干)。
[0478]
11)添加20％哌啶在dmf中的溶液，在n2鼓泡的情况下搅拌持续30min。
[0479]
12)沥干并且用dmf洗涤(5次，在每次洗涤之间沥干)。
[0480]
13)添加fmoc-氨基酸溶液(在dmf中的3.0当量)并且混合持续30秒，然后添加活化缓冲液(在dmf中的hbtu(2.85当量)和diea(6当量))，在n2鼓泡的情况下搅拌持续1小时。
[0481]
14)通过茚三酮测试监测偶联反应。
[0482]
15)如果出现低效偶联，如果需要，则对于相同的氨基酸偶联重复步骤4至步骤6。
[0483]
16)对于下一个氨基酸偶联重复步骤2至步骤6。
[0484]
注：对于下表中的酸，使用了不同的保护基团和/或偶联剂。
[0485]
步骤材料偶联试剂1中间体5(2.0当量)dic(2.0当量)和hobt(2.0当量)16中间体8(2.0当量)dic(2.0当量)和hobt(2.0当量)25中间体2(2.0当量)dic(2.0当量)hobt(2.0当量)26中间体1(1.5当量)dic(1.5当量)hobt(1.5当量)
[0486]
10)将树脂用dmf洗涤五次并且用meoh洗涤三次，并且在真空中干燥。
[0487]
肽裂解和纯化：
[0488]
7)在室温，将裂解缓冲液(92.5％tfa/2.5％edt/2.5％tis/2.5％h2o)添加到包含树脂上的侧链保护的肽的烧瓶，并且搅拌持续3小时。
[0489]
8)过滤并且收集肽溶液。
[0490]
9)将肽用冷的叔丁基甲基醚沉淀并且离心(以3000rpm离心3min)。
[0491]
10)将残余物用叔丁基甲基醚洗涤(2次)。
[0492]
11)将粗制肽在真空下干燥持续2小时。
[0493]
12)粗制肽通过制备型hplc纯化。制备型hplc条件：仪器：gilson 281。溶剂：a-在h2o中的0.1％tfa，b-乙腈，柱：串联的luna c18(200
×
25mm；10μm)和gemini c18(150*30mm；5μm)。梯度[时间(min)/溶剂b(％)]：0.0/25、60.0/55、60.1/90、70/90、70.1/10，以20ml/min使用uv检测(波长＝215nm/254nm)，并且然后冻干，以给出实施例24(109.8mg,19.3％收率)。
[0494]
表2a-由实施例82-实施例117表示的纯化的肽的hrms性质和lcms性质
[0495]
[0496]
[0497][0498][0499]
nd-未确定
[0500]
生物学活性
[0501]
提供以下实施例以说明本发明的优选的方面并且不意图限制本发明的范围。
[0502]
实施例a.肽的体外药理学表征-人类glp2受体或glp1受体的功能激动，camp积累测定：
[0503]
使用hirange camp试剂盒(cisbio)评估在人类glp2受体或glp1受体的激动剂刺激后的camp产生。简言之，将hek细胞用人类glp2受体或glp1受体bacmam病毒感染持续24小时，并且冷冻以用于之后在测定中使用。当天，使用echo-555(labcyte)将总体积为100nl的多种浓度的化合物分配到低体积384孔的proxi板(perkin elmer)中，随后添加10μl的细胞悬浮液，每孔递送800k个细胞。在测定缓冲液(补充有0.5mm ibmx(tocris)的hbss(lonza))中制备细胞。在37℃孵育45min之后，通过在试剂盒中提供的裂解缓冲液中添加htrf检测试剂来停止反应。在室温孵育1小时后，在pherastar fs(bmg labtech,inc.)上读取板，使用dotmatics studies软件以用于通过将数据拟合到四参数剂量响应曲线来计算pec
50
值。
[0504]
毒蜥外泌肽-4(exendin-4)和利拉鲁肽被用作glp-1受体活化的参考化合物，而替度鲁肽和fe-203799被用作glp-2受体活化的参考化合物。
[0505]
[0506]
[0507][0508][0509]
实施例b.肽的体外药理学表征-小鼠glp2受体或glp1受体的功能激动，camp积累
测定：
[0510]
使用hirange camp试剂盒(cisbio)评估在小鼠glp2受体或glp1受体的激动剂刺激后的camp产生。简言之，使用genejuice转染试剂(emd millipore)将hek细胞用cdna短暂转染持续24小时，并且在-80℃冷冻以用于之后在测定中使用。当天，使用echo-555(labcyte)将总体积为100nl的多种浓度的化合物分配到低体积384孔的proxi板(perkin elmer)中，随后添加10μl的细胞悬浮液，每孔递送8000个细胞。在测定缓冲液(补充有0.5mm ibmx(tocris)的hbss(lonza))中制备细胞。在37℃孵育45min之后，通过在试剂盒中提供的裂解缓冲液中添加htrf检测试剂来停止反应。在室温孵育1小时后，使用标准htrf设置在pherastar fs(bmg labtech,inc.)上读取板。使用dotmatics studies软件以用于通过将数据拟合到四参数浓度响应曲线来计算pec
50
值。
[0511]
利拉鲁肽被用作glp-1受体活化的参考化合物，而替度鲁肽和fe-203799被用作glp-2受体活化的参考化合物。
[0512][0513]
nd-未确定
[0514]
实施例c：肽的体外药理学表征-肽在禁食状态模拟的肠液中的稳定性的评价：
[0515]
在根据制造商的方案制备的禁食状态模拟的肠液(fassif)(biorelevant,产品编号fff01,ph 6.5)中测试肽的稳定性。fassif组成：3mm牛磺胆酸钠、0.75mm卵磷脂、105.9mm nacl、28.4mm na2hpo4、8.7mm naoh和10mg/ml胰酶(sigma)。将fassif在37℃预孵育持续15min，并且掺有测试项目工作溶液和参考项目工作溶液。实验以非系列方式一式两份地进行。每次重复的总孵育体积为150μl。测试项目的取样时间点为0min、0.5min、2min、5min、
10min、15min和30min。所有样品和校准标准品(在fassif中制备)通过向150μl样品中添加包含内标(istd)的300μl沉淀剂(acn/2％乙酸/0.2％hfba，(沉淀试剂，pr))进行沉淀。在室温孵育持续1h之后，所有样品以2,200
×
g(室温)离心持续10min。在经受lc-ms之前，将样品在pbs缓冲液中1:1稀释，以便将样品中的有机溶剂含量降低至33％。
[0516]
在t＝30min时剩余的化合物的％在下文概述。神经降压素被纳入作为参考剂。
[0517][0518]
在t＝15min时剩余的化合物的％在下文概述。神经降压素被纳入作为参考剂。
[0519]
[0520][0521]
实施例d：肽的体外药理学表征-肽在禁食状态模拟的胃液中的稳定性的评价：
[0522]
在根据制造商的方案制备的禁食状态模拟的胃液(fassgf)(biorelevant,产品编号fff01)中测试肽的稳定性。fassgf组成：0.08mm牛磺胆酸钠、0.02mm卵磷脂、34.2mm nacl、25.1mm hcl和0.1mg/ml胃蛋白酶(sigma)。将ph调节至1.6。将fassgf在37℃预孵育持续15min，并且掺有测试项目工作溶液和参考项目工作溶液。实验以非系列方式一式两份地进行。每次重复的总孵育体积为150μl。测试项目和参考项目神经降压素的取样时间点为0min、0.5min、2min、5min、10min、15min和30min。所有样品和校准标准品(在fassgf中制备)通过向150μl样品中添加包含内标(istd)的300μl沉淀剂(acn/2％乙酸/0.2％hfba，(沉淀试剂，pr))进行沉淀。在室温孵育持续1h之后，所有样品以2,200
×
g(室温)离心持续10min。在经受lcms之前，将样品在pbs缓冲液中1:1稀释，以便将样品中的有机溶剂含量降低至33％。
[0523]
在t＝30min时剩余的化合物的％在下文概述。神经降压素被纳入作为参考剂。
[0524][0525]
实施例e：肽的体外药理学表征-肽在大鼠肠液中的稳定性的评价：
[0526]
在获自大鼠小肠的天然肠液中测试肽的体外稳定性。将大鼠sprague dawley小肠液(ratif)(来自biotrend产品编号rsd-sif-mi-30ml，未稀释)在37℃预孵育持续15min，并且掺有测试项目工作溶液和参考项目工作溶液。实验以非系列方式一式两份地进行。每次重复的总孵育体积为150μl。测试项目和参考项目神经降压素的取样时间点为0min、0.5min、2min、5min、10min、15min和30min。所有样品和校准标准品(在ratif中制备)通过向150μl样品中添加包含内标(istd)的300μl沉淀剂(acn/2％乙酸/0.2％hfba，(沉淀试剂，pr))进行沉淀。在室温孵育持续1h之后，所有样品以2,200
×
g(室温)离心持续10min。将所得到的样品转移到自动进样器小瓶，并且随后经受lc-ms分析以经受lc-ms。
[0527]
在t＝30min时剩余的化合物的％在下文概述。神经降压素被纳入作为参考剂。
[0528][0529]
在t＝15min时剩余的化合物的％在下文概述。神经降压素被纳入作为参考剂。
[0530]