用于治疗囊性纤维化的组合物和方法

背景技术：

1、囊性纤维化(cystic fibrosis，cf)是致命的常染色体隐性病症，仅在美国就有至少30,000人受到影响，并且在全世界至少有70,000人受到影响。cf患者的平均存活年龄约为40岁。cf是由编码囊性纤维化跨膜传导调节蛋白(cystic fibrosis transmembraneconductance regulator，cftr)的基因中的突变引起的，cftr是引导氯离子和碳酸氢根离子穿过上皮细胞膜的通道。受损的cftr功能导致气道炎症和进行性支气管扩张。由于cf的单基因病因学和患者群体中的多种cftr突变，基因治疗可能为cf提供普遍的治愈。

2、最近的研究表明，即使只实现了对cftr基因功能的部分校正，基因治疗也可为cf患者提供巨大益处。因此，本领域中仍然需要用于治疗cf的改进的组合物和方法。

技术实现思路

0、发明概述

1、本公开内容尤其提供了分离的多核苷酸、慢病毒载体、病毒体和药物组合物，及其制备和使用方法，例如，在治疗cf中。

2、在一个方面中，本公开内容提供了分离的多核苷酸，其包含与seq id no:1的核苷酸序列具有至少95％序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，分离的多核苷酸包含与seq id no:1的核苷酸序列具有至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，分离的多核苷酸包含seq id no:1的核苷酸序列。

3、在另一个方面中，本公开内容提供了包含seq id no:2的核苷酸序列的分离的多核苷酸。

4、在另一个方面中，本公开内容提供了分离的多核苷酸，其包含与seq id no:3的核苷酸序列具有至少95％序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，分离的多核苷酸包含与seq id no:3的核苷酸序列具有至少96％、至少97％、至少98％或至少99％序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，分离的多核苷酸包含seq id no:3的核苷酸序列。

5、在另一个方面中，本公开内容提供了慢病毒转移载体，其包含与密码子优化的人cftr基因可操作地连接的启动子，其中与野生型人cftr相比，密码子优化的人cftr基因在囊性纤维化人气道上皮细胞中的表达导致跨上皮cl-运输提高。在一些实施方案中，慢病毒转移载体包含与本文中所述的任一种多核苷酸可操作地连接的启动子。

6、在另一个方面中，本公开内容提供了慢病毒转移载体，其包含与本文中所述的任一种多核苷酸可操作地连接的启动子。在一些实施方案中，启动子是人磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase，pgk)启动子。在一些实施方案中，pgk启动子与seq id no:4的核苷酸序列具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性。在一些实施方案中，启动子是人延伸因子1-α(elongation factor 1-α，ef1α)启动子。在一些实施方案中，ef1α启动子与seq id no:5的核苷酸序列具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％)序列同一性。

7、在另一个方面中，本公开内容提供了慢病毒转移载体，其包含与人cftr基因可操作地连接的ef1α启动子。在一些实施方案中，ef1α启动子与seq id no:5的核苷酸序列具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、或至少99％)序列同一性。

8、在另一个方面中，本公开内容提供了慢病毒转移载体，其包含与多核苷酸可操作地连接的启动子，所述多核苷酸包含与seq id no:2的核苷酸序列具有至少95％(例如，至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)序列同一性的核苷酸序列。在一些实施方案中，多核苷酸包含seq id no:2的核苷酸序列。

9、在任一前述方面的一些实施方案中，慢病毒载体的慢病毒组分来源于hiv-1。在一些实施方案中，慢病毒载体还包含以下中的一者或更多者：5’长末端重复(long terminalrepeat，ltr)、3’ltr、包装信号、rev响应元件(rev response element，rre)、中央多嘌呤束(central polypurine tract，cppt)序列，和/或中央终止序列(central terminationsequence，cts)。

10、在任一前述方面的一些实施方案中，3’ltr是自失活3’ltr。在一些实施方案中，3’ltr包含相反取向的人锚蛋白1元件的插入。在一些实施方案中，3’ltr包含与seq id no:13的核苷酸序列具有至少95％序列同一性的多核苷酸序列。在一些实施方案中，3’ltr包含seq id no:13的多核苷酸序列。

11、在另一个方面中，本公开内容提供了包含本文中所述的任一种慢病毒载体的病毒体。

12、在另一个方面中，本公开内容提供了药物组合物，其包含本文中所述的分离的多核苷酸、慢病毒载体或病毒体中的任一种以及可药用载体。

13、在另一个方面中，本公开内容提供了治疗、或预防或抑制囊性纤维化的一种或更多种症状的方法，其包括向有此需要的对象施用治疗有效量的本文中所述的分离的多核苷酸、慢病毒载体、病毒体、或药物组合物中的任一种。在一些实施方案中，该方法还包括向对象施用一种或更多种另外的治疗剂。在一些实施方案中，一种或更多种另外的治疗剂包括抗生素、黏液稀释剂、cftr调节剂、黏液溶解剂、生理盐水、高渗盐水、或其组合。在一些实施方案中，施用通过吸入、喷雾(nebulization)、雾化(atomization)或经由雾化器、气溶胶化(aerosolization)、鼻内、气管内、支气管内、经口、静脉内、皮下或肌内进行。在一些实施方案中，施用通过吸入、喷雾、雾化或经由雾化器、气溶胶化、鼻内、气管内和/或支气管内进行。

14、在另一个方面中，本公开内容提供了用于治疗、或预防或抑制囊性纤维化的一种或更多种症状的本文中所述的多核苷酸、慢病毒载体、病毒体或药物组合物中的任一种。在一些实施方案中，用于治疗囊性纤维化的本文中所述的多核苷酸、慢病毒载体、病毒体或药物组合物中的任一种与一种或更多种另外的治疗剂组合施用。在一些实施方案中，一种或更多种另外的治疗剂包括抗生素、黏液稀释剂、cftr调节剂、黏液溶解剂、生理盐水、高渗盐水、或其组合。在一些实施方案中，本文中所述的多核苷酸、慢病毒载体、病毒体或药物组合物中的任一种待通过吸入、喷雾、雾化或经由雾化器、气溶胶化、鼻内、气管内、支气管内、经口、静脉内、皮下或肌内施用。在一些实施方案中，本文中所述的多核苷酸、慢病毒载体、病毒体或药物组合物中的任一种待通过吸入、喷雾、雾化或经由雾化器、气溶胶化、鼻内、气管内和/或支气管内施用。

15、在另一个方面中，本公开内容提供了雾化器喷雾器(atomizer sprayer)或喷雾装置，其包含本文中所述的分离的多核苷酸、慢病毒载体、病毒体、或药物组合物中的任一种。