用于稳定化脂质纳米颗粒mRNA疫苗的组合物和方法与流程

背景技术：

1、信使rna(mrna)据证明是一种令人振奋的治疗方式，且最近获得了显著的关注，特别是在疫苗领域。

技术实现思路

1、本发明提供与rna(例如mrna)疗法的制剂相关的技术，特别是涉及包含rna(例如mrna)有效载荷的脂质纳米颗粒(lnp)制剂。在其他方面，本发明提供治疗性rna制剂(即lnp制剂)适于(例如稳定)在高于约-80℃或者甚至高于约-70℃、约-60℃、约-50℃、约-40℃、约-30℃或约-20℃的温度储存和/或处理。在一些实施方案中，提供的制剂可适于在高于冷冻(例如高于约0℃)温度、在标准冷藏温度(例如在约1℃至约8℃、或约2℃至约8℃、或约2℃至约6℃、或约2℃至约4℃的范围内)和/或在室温(例如约15℃至约25℃、或约20℃至约23℃的范围内)储存和/或处理。

2、在一些实施方案中，本发明提供适于干燥和/或是干燥(例如冻干的制剂)的制剂。

3、本发明特别提供用作(和/或制备)疫苗的某些制剂。

4、在一些实施方案中，本发明提供编码病毒抗原(例如sars-cov2抗原，如s-蛋白或其表位)的rna的制剂(特别是lnp制剂)。具体示例性制剂包括：其为bnt162构建体的rna构建体(例如在walsh,e.et al.rna-based covid-19vaccine bnt162b2 selected for apivotal efficacy study.medrxiv(2020)中所述)，例如bnt162b2；以及在2020年11月12日递交的题为“冠状病毒疫苗(coronavirus vaccine)”的pct申请号no.pct/ep2020/081981,其中各项内容通过援引加入本文用于本文所述的目的)。

5、在一方面，本文提供的制剂包含：(a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；(b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；以及(c)tris缓冲液，其中tris缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

6、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种冷冻制剂，其包含：(a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；(b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；以及(c)tris缓冲液，其中tris缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

7、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种干燥制剂，其包含：(a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；(b)蔗糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；以及(c)tris缓冲液，其中tris缓冲液基本上不含氯化钠并且干燥前在所述制剂中的浓度为约10mm。

8、本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

9、a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

10、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

11、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

12、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中所述第二缓冲系统包含：

13、i)tris缓冲液，其中所述tris缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；以及

14、ii)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v。

15、在一些实施方案中，一种方法，其包括以下步骤：

16、给药制剂的剂型，其中所述制剂包含：

17、a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

18、i)mrna，其浓度为约0.5mg/ml；

19、ii)((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)，其浓度为约7.17mg/ml；

20、iii)2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)，其浓度为约0.89mg/ml；

21、iv)二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)，其浓度为约1.56mg/ml；

22、v)胆固醇，其浓度为约3.1mg/ml；

23、b)蔗糖，其浓度为约10％w/v；

24、c)tris缓冲液，其中所述tris缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；

25、其中所述制剂在给药前稀释为所述剂型。

26、在一方面，本文提供一种制剂，其包含：(a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：(i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；(ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；(b)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；以及(c)tris缓冲液，其中tris缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

27、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种冷冻制剂，其包含：(a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；(b)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；以及c)tris缓冲液，其中tris缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

28、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种干燥制剂，其包含：(a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；(b)海藻糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；以及(c)tris缓冲液，其中tris缓冲液基本上不含氯化钠并且干燥前在所述制剂中的浓度为约10mm。

29、在一些实施方案中，本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

30、a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

31、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

32、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

33、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中所述第二缓冲系统包含：

34、i)tris缓冲液，其中所述tris缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；以及

35、ii)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v。

36、在一些实施方案中，本文提供一种方法，其包括给药制剂的剂型的步骤，其中制剂包含：

37、a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

38、i)mrna，其浓度为约0.5mg/ml；

39、ii)((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)，其浓度为约7.17mg/ml；

40、iii)2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)，其浓度为约0.89mg/ml；

41、iv)二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)，其浓度为约1.56mg/ml；

42、v)胆固醇，其浓度为约3.1mg/ml；

43、b)海藻糖，其浓度为约10％w/v；

44、c)tris缓冲液，其中tris缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；其中制剂在给药前稀释为所述剂型。

45、在一方面，本文提供的制剂包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；c)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；d)tris缓冲液，其中tris缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

46、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种冷冻制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及(b)蔗糖，其在制剂的浓度为约5％w/v；c)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；d)tris缓冲液，其中tris缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

47、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种干燥制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；c)海藻糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；d)tris缓冲液，其中tris缓冲液基本上不含氯化钠并且干燥前在所述制剂中的浓度为约10mm。

48、在一些实施方案中，本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

49、(a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

50、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

51、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

52、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中所述第二缓冲系统包含：

53、i)tris缓冲液，其中所述tris缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；

54、ii)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；以及

55、iii)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v。

56、在一些实施方案中，本文提供一种方法，其包括给药制剂的剂型的步骤，其中制剂包含：

57、a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

58、i)mrna，其浓度为约0.5mg/ml；

59、ii)((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)，其浓度为约7.17mg/ml；

60、iii)2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)，其浓度为约0.89mg/ml；

61、iv)二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)，其浓度为约1.56mg/ml；

62、v)胆固醇，其浓度为约3.1mg/ml；

63、b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；

64、c)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；

65、d)tris缓冲液，其中tris缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；其中制剂在给药前稀释为所述剂型。

66、在一方面，本文提供的制剂包含：(a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)tris缓冲液，其中tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

67、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种冷冻制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)tris缓冲液，其中tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

68、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种干燥制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)tris缓冲液，其中tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且干燥前在所述制剂中的浓度为约10mm。

69、在一些实施方案中，本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

70、a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

71、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

72、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

73、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中所述第二缓冲系统包含：

74、i)tris缓冲液，其中所述tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；

75、ii)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v。

76、在一些实施方案中，本文提供一种方法，其包括给药制剂的剂型的步骤，其中制剂包含：

77、a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

78、i)mrna，其浓度为约0.5mg/ml；

79、ii)((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)，其浓度为约7.17mg/ml；

80、iii)2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)，其浓度为约0.89mg/ml；

81、iv)二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)，其浓度为约1.56mg/ml；

82、v)胆固醇，其浓度为约3.1mg/ml；

83、b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；

84、c)tris缓冲液，其中tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；其中制剂在给药前稀释为所述剂型。

85、在一方面，本文提供的制剂包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)tris缓冲液，其中tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

86、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种冷冻制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)tris缓冲液，其中tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

87、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种干燥制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)海藻糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)tris缓冲液，其中tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且干燥前在所述制剂中的浓度为约10mm。

88、在一些实施方案中，本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

89、a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

90、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

91、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

92、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中所述第二缓冲系统包含：

93、i)tris缓冲液，其中所述tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；

94、ii)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v。

95、在一些实施方案中，本文提供一种方法，其包括给药制剂的剂型的步骤，其中制剂包含：

96、a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

97、i)mrna，其浓度为约0.5mg/ml；

98、ii)((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)，其浓度为约7.17mg/ml；

99、iii)2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)，其浓度为约0.89mg/ml；

100、iv)二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)，其浓度为约1.56mg/ml；

101、v)胆固醇，其浓度为约3.1mg/ml；

102、b)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；

103、c)tris缓冲液，其中tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；其中制剂在给药前稀释为所述剂型。

104、在一方面，本文提供的制剂包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及(b)蔗糖，其在制剂的浓度为约5％w/v；c)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；d)tris缓冲液，其中tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

105、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种冷冻制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及(b)蔗糖，其在制剂的浓度为约5％w/v；c)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；d)tris缓冲液，其中tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

106、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种干燥制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及(b)蔗糖，干燥前其在制剂的浓度为约5％w/v；c)海藻糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；d)tris缓冲液，其中tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且干燥前在所述制剂中的浓度为约10mm。

107、在一些实施方案中，本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

108、(a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

109、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

110、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

111、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中所述第二缓冲系统包含：

112、i)tris缓冲液，其中所述tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；

113、ii)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；以及

114、iii)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v。

115、在一些实施方案中，本文提供一种方法，其包括给药制剂的剂型的步骤，其中制剂包含：

116、a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

117、i)mrna，其浓度为约0.5mg/ml；

118、ii)((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)，其浓度为约7.17mg/ml；

119、iii)2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)，其浓度为约0.89mg/ml；

120、iv)二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)，其浓度为约1.56mg/ml；

121、v)胆固醇，其浓度为约3.1mg/ml；

122、b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；

123、c)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；

124、d)tris缓冲液，其中tris缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；其中制剂在给药前稀释为所述剂型。

125、在一方面，本文提供的制剂包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)his缓冲液，其中his缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

126、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种冷冻制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)his缓冲液，其中his缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

127、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种干燥制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)his缓冲液，其中his缓冲液基本上不含氯化钠并且干燥前在所述制剂中的浓度为约10mm。

128、在一些实施方案中，本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

129、(a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

130、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

131、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

132、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中所述第二缓冲系统包含：

133、i)his缓冲液，其中所述his缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；以及

134、ii)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v。

135、在一些实施方案中，本文提供一种方法，其包括给药制剂的剂型的步骤，其中制剂包含：

136、a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

137、i)mrna，其浓度为约0.5mg/ml；

138、ii)((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)，其浓度为约7.17mg/ml；

139、iii)2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)，其浓度为约0.89mg/ml；

140、iv)二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)，其浓度为约1.56mg/ml；

141、v)胆固醇，其浓度为约3.1mg/ml；

142、b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；

143、d)his缓冲液，其中his缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；其中制剂在给药前稀释为所述剂型。

144、在一方面，本文提供的制剂包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)his缓冲液，其中his缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

145、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种冷冻制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)his缓冲液，其中his缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

146、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种干燥制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)海藻糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)his缓冲液，其中his缓冲液基本上不含氯化钠并且干燥前在所述制剂中的浓度为约10mm。

147、在一些实施方案中，本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

148、(a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

149、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

150、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

151、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中所述第二缓冲系统包含：

152、i)his缓冲液，其中所述his缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；以及

153、ii)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v。

154、在一些实施方案中，本文提供一种方法，其包括给药制剂的剂型的步骤，其中制剂包含：

155、a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

156、i)mrna，其浓度为约0.5mg/ml；

157、ii)((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)，其浓度为约7.17mg/ml；

158、iii)2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)，其浓度为约0.89mg/ml；

159、iv)二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)，其浓度为约1.56mg/ml；

160、v)胆固醇，其浓度为约3.1mg/ml；

161、b)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；

162、d)his缓冲液，其中his缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；其中制剂在给药前稀释为所述剂型。

163、在一方面，本文提供的制剂包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及(b)蔗糖，其在制剂的浓度为约5％w/v；c)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；d)his缓冲液，其中his缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

164、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种冷冻制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及(b)蔗糖，其在制剂的浓度为约5％w/v；c)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；d)his缓冲液，其中his缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

165、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种干燥制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；c)海藻糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；d)his缓冲液，其中his缓冲液基本上不含氯化钠并且干燥前在所述制剂中的浓度为约10mm。

166、在一些实施方案中，本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

167、(a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

168、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

169、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

170、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中所述第二缓冲系统包含：

171、i)his缓冲液，其中所述his缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；

172、ii)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；以及

173、iii)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v。

174、在一些实施方案中，本文提供一种方法，其包括给药制剂的剂型的步骤，其中制剂包含：

175、a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

176、i)mrna，其浓度为约0.5mg/ml；

177、ii)((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)，其浓度为约7.17mg/ml；

178、iii)2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)，其浓度为约0.89mg/ml；

179、iv)二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)，其浓度为约1.56mg/ml；

180、v)胆固醇，其浓度为约3.1mg/ml；

181、b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；

182、c)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；

183、d)his缓冲液，其中his缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；其中制剂在给药前稀释为所述剂型。

184、在一方面，本文提供的制剂包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)hepes缓冲液，其中hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

185、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种冷冻制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)hepes缓冲液，其中hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

186、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种干燥制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)hepes缓冲液，其中hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且干燥前在所述制剂中的浓度为约10mm。

187、在一些实施方案中，本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

188、(a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

189、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

190、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

191、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中所述第二缓冲系统包含：

192、i)hepes缓冲液，其中所述hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；以及

193、ii)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v。

194、在一些实施方案中，本文提供一种方法，其包括给药制剂的剂型的步骤，其中制剂包含：

195、a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

196、i)mrna，其浓度为约0.5mg/ml；

197、ii)((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)，其浓度为约7.17mg/ml；

198、iii)2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)，其浓度为约0.89mg/ml；

199、iv)二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)，其浓度为约1.56mg/ml；

200、v)胆固醇，其浓度为约3.1mg/ml；

201、b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；

202、d)hepes缓冲液，其中hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；其中制剂在给药前稀释为所述剂型。

203、在一方面，本文提供的制剂包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)hepes缓冲液，其中hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

204、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种冷冻制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)hepes缓冲液，其中hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

205、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种干燥制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)海藻糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)hepes缓冲液，其中hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且干燥前在所述制剂中的浓度为约10mm。

206、在一些实施方案中，本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

207、(a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

208、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

209、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

210、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中所述第二缓冲系统包含：

211、i)hepes缓冲液，其中所述hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；以及

212、ii)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v。

213、在一些实施方案中，本文提供一种方法，其包括给药制剂的剂型的步骤，其中制剂包含：

214、a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

215、i)mrna，其浓度为约0.5mg/ml；

216、ii)((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)，其浓度为约7.17mg/ml；

217、iii)2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)，其浓度为约0.89mg/ml；

218、iv)二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)，其浓度为约1.56mg/ml；

219、v)胆固醇，其浓度为约3.1mg/ml；

220、b)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；

221、d)hepes缓冲液，其中hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；其中制剂在给药前稀释为所述剂型。

222、在一方面，本文提供的制剂包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及(b)蔗糖，其在制剂的浓度为约5％w/v；c)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；d)hepes缓冲液，其中hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

223、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种冷冻制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及(b)蔗糖，其在制剂的浓度为约5％w/v；c)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；d)hepes缓冲液，其中hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

224、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种干燥制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；c)海藻糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；d)hepes缓冲液，其中hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且干燥前在所述制剂中的浓度为约10mm。

225、在一些实施方案中，本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

226、(a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

227、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

228、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

229、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中所述第二缓冲系统包含：

230、i)hepes缓冲液，其中所述hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm。

231、ii)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；以及

232、iii)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v。

233、在一些实施方案中，本文提供一种方法，其包括给药制剂的剂型的步骤，其中制剂包含：

234、a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

235、i)mrna，其浓度为约0.5mg/ml；

236、ii)((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)，其浓度为约7.17mg/ml；

237、iii)2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)，其浓度为约0.89mg/ml；

238、iv)二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)，其浓度为约1.56mg/ml；

239、v)胆固醇，其浓度为约3.1mg/ml；

240、b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；

241、c)海藻糖，其在所述制剂中的浓度为约5％w/v；

242、d)hepes缓冲液，其中hepes缓冲液基本上不含氯化钠并且在所述制剂中的浓度为约10mm；其中制剂在给药前稀释为所述剂型。

243、在一方面，本文提供的制剂包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)pbs缓冲液，其中pbs缓冲液基本上不含氯化钠。

244、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种冷冻制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)pbs缓冲液，其中pbs缓冲液基本上不含氯化钠。

245、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种干燥制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)pbs缓冲液，其中pbs缓冲液基本上不含氯化钠。

246、在一些实施方案中，本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

247、(a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

248、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

249、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

250、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中所述第二缓冲系统包含：

251、i)pbs缓冲液，其中所述pbs缓冲液基本上不含氯化钠；以及

252、ii)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v。

253、在一些实施方案中，本文提供一种方法，其包括给药制剂的剂型的步骤，其中制剂包含：

254、a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

255、i)mrna，其浓度为约0.5mg/ml；

256、ii)((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)，其浓度为约7.17mg/ml；

257、iii)2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)，其浓度为约0.89mg/ml；

258、iv)二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)，其浓度为约1.56mg/ml；

259、v)胆固醇，其浓度为约3.1mg/ml；

260、b)蔗糖，其浓度为约10％w/v；

261、c)pbs缓冲液，其中pbs缓冲液基本上不含氯化钠；其中制剂在给药前稀释为所述剂型。

262、在一方面，本文提供的制剂包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)pbs缓冲液，其中pbs缓冲液在制剂中包含约6mg/ml的氯化钠。

263、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种冷冻制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)pbs缓冲液，其中pbs缓冲液在制剂中包含约6mg/ml的氯化钠。

264、在一些实施方案中，本文提供的制剂为一种干燥制剂，其包含：a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)；和胆固醇；以及b)蔗糖，干燥前其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；c)pbs缓冲液，干燥前其中pbs缓冲液在制剂中包含约6mg/ml的氯化钠。

265、在一些实施方案中，本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

266、(a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

267、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

268、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

269、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中所述第二缓冲系统包含：

270、i)pbs缓冲液，其中在所述制剂中，所述pbs缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠；以及

271、ii)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v。

272、在一些实施方案中，本文提供一种方法，其包括给药制剂的剂型的步骤，其中制剂包含：

273、a)脂质纳米颗粒(lnp)，其中所述lnp包含：

274、i)mrna，其浓度为约0.5mg/ml；

275、ii)((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)，其浓度为约7.17mg/ml；

276、iii)2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)，其浓度为约0.89mg/ml；

277、iv)二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)，其浓度为约1.56mg/ml；

278、v)胆固醇，其浓度为约3.1mg/ml；

279、b)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v；

280、c)pbs缓冲液，其中pbs缓冲液包含约6mg/ml的氯化钠；其中制剂在给药前稀释为所述剂型。

281、在一些实施方案中，本文还描述了提供本文所述的这些制剂的方法。在一些实施方案中，本文提供一种制备制剂的方法，其包括以下步骤：

282、(a)在第一缓冲系统中制备脂质纳米颗粒(lnp)，其中lnp包含：

283、i)有效载荷，其为或包含一种或多种mrna；

284、ii)脂质，其包括：相对质量比为约8:1:1.5:3至约9:1:2:3.5的范围的((4-羟基丁基)氮烷二基)双(己烷-6,1-二基)双(2-癸酸己酯)(alc-0315)；2-[(聚乙二醇)-2000]-n,n-双十四烷基乙酰胺(alc-0159)；二硬脂酰基磷脂酰胆碱(dspc)和胆固醇；以及

285、b)将第一缓冲系统交换成第二缓冲系统，其中第二缓冲系统包含：

286、i)pbs缓冲液，其中pbs缓冲液在制剂中包含约6mg/ml的氯化钠；以及

287、ii)蔗糖，其在所述制剂中的浓度为约10％w/v，其中第一缓冲系统包含蔗糖，其浓度为约10％w/v。

288、在一些实施方案中，本文提供一种将核酸递送到受试者的细胞中的方法，其包括给药前述权利要求中任一项所定义的制剂的步骤。

289、在一些实施方案中，本文提供一种在受试者中诱导免疫应答的方法，其包括向受试者给药前述权利要求中任一项所定义的制剂的步骤。

290、定义

291、在本技术中，除非上下文另有说明，(i)术语“一个(种)”可理解为“至少一个(种)”；(ii)术语“或”可理解为“和/或”；(iii)术语“包含”和“包括”可理解为涵盖逐项列出的组件或步骤，无论其为单独出现还是与一种或多种另外的组件或步骤一起出现；(iv)术语“大约”和“约”可理解为本领域普通技术人员理解允许的标准变化；以及(v)在提供范围的情况下，包括端点。

292、给药：如本文所用，术语“给药”指将组合物给药至受试者。示例性的给药途径可包括支气管(包括通过支气管灌注)、颊、肠内、皮间、动脉内、皮内、胃内、髓内、肌内、鼻内、腹膜内、鞘内、静脉内、脑室内、粘膜、鼻腔、口腔、直肠、皮下、舌下、局部、气管(包括通过气管内灌注)、经皮、阴道和玻璃体内。在许多实施方案中，所提供的技术涉及通过肌内注射给药的lnp组合物(例如包含bnt162构建体)。在一些实施方案中，lnp组合物在第一次给药后进行一次或多次给药(例如，一次或多次加强给药)。在一些实施方案中，lnp组合物的各次给药之间(例如第一次给药和第二次给药之间)间隔一段时间，例如约24、48、72、96小时或更长，包括约1、2、3、4或更多周。在一些实施方案中，间隔给药的时间为约3周(例如约21天)。

293、抗体剂：如本文所用，术语“抗体剂(antibody agent)”是指与特定抗原特异性结合的试剂。在一些实施方案中，该术语包涵任意多肽或多肽复合物，其中包括足以赋予特异性结合的免疫球蛋白结构元件。示例性的抗体剂包括但不限于单克隆抗体或多克隆抗体。在一些实施方案中，抗体剂可包括一个或多个恒定区序列，其为鼠、兔、灵长目动物或人的抗体的特征。在一些实施方案中，抗体剂可包括一种或多种如本领域已知的人源化、灵长类化、嵌合体等的序列元件。在许多实施方案中，术语“抗体剂”用于指一种或多种本领域已知的或开发的构建体或形式，其用于在替代提呈中利用抗体的结构性和功能性的特征。例如，在本发明的实施方案中利用的抗体剂的形式选自但不限于：完整iga、igg、ige或igm抗体；双或多特异性抗体(例如等)；抗体片段，例如fab段、fab’片段、f(ab’)2片段、fd’片段、fd片段以及分离的cdr或其集合；单链fvs；多肽-fc融合体；单结构域抗体(例如鲨鱼单结构域抗体(如ignar或其片段)；骆驼抗体；掩蔽抗体(例如)；小型模块化免疫药物(“smipstm”)；单链或串联(tandem)双抗体vhh；微型抗体(minibody)；锚蛋白重复蛋白或dart；tcr-like抗体；，微蛋白；以及s。在一些实施方案中，抗体可能缺乏天然产生的抗体所具有的共价修饰(例如，聚糖的附着)。在一些实施方案中，抗体可含有共价修饰(例如聚糖附着、有效载荷[例如可检测部分、治疗性部分、催化性部分等]或其他侧基[例如聚乙二醇等]。在许多实施方案中，抗体剂为或包含多肽，其氨基酸序列包括一种或多种本领域技术人员认作互补性决定区(cdr)的结构性元件；在一些实施方案中，抗体剂为或包含多肽，其氨基酸序列包括至少一个cdr(例如至少一个重链cdr和/或至少一个轻链cdr)，其与参考抗体中存在的一个cdr实质相同。在一些实施方案中，所包括的cdr与参考cdr实质相同，即，与参考cdr相比，其序列相同或含有1-5个氨基酸取代。在一些实施方案中，所包括的cdr与参考cdr实质相同，即，其示出与参考cdr至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列相同性。在一些实施方案中，所包括的cdr与参考cdr实质相同，即，其示出与参考cdr至少96％、96％、97％、98％、99％或100％的序列相同性。在一些实施方案中，所包括的cdr与参考cdr实质相同，即，与参考cdr相比，在所包括的cdr之中至少一个氨基酸缺失、添加或取代，所包括的cdr具有与参考cdr在其他方面相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所包括的cdr与参考cdr实质相同，即，与参考cdr相比，所包括的cdr之中1-5个氨基酸缺失、添加或取代，所包括的cdr具有与参考cdr其他方面相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所包括的cdr与参考cdr实质相同，即，与参考cdr相比，所包括的cdr之中至少一个氨基酸被取代，所包括的cdr具有与参考cdr其他方面相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，所包括的cdr与参考cdr实质相同，即，与参考cdr相比，所包括的cdr之中1-5个氨基酸缺失、添加或取代，所包括的cdr具有与参考cdr其他方面相同的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体剂为或包含多肽，其氨基酸序列包括本领域技术人员认作免疫球蛋白可变域的结构元件。在一些实施方案中，抗体剂是具有结合域的多肽蛋白，该结合域与免疫球蛋白结合域同源或基本同源。

294、抗原：术语“抗原”，如本文所用，指引起免疫应答的试剂或部分；和/或与抗体特异性结合或者特异性结合至t细胞受体(例如当由mhc分子提呈时)的试剂或部分。在一些实施方案中，抗原引起体液应答(例如可能涉及或包括抗原特异性抗体的产生)；在一些实施方案中，抗原引起细胞反应(例如其可涉及或包括其受体与抗原特异性相互作用的t细胞)。在一些实施方案中，抗原结合至抗体且可以或可以不在生物体内诱发特定的生理反应。通常地，抗原可为或包括任意化学实体，例如，如小分子、核酸、多肽、碳水化合物、脂质、聚合物(在一些实施方案中，除了生物聚合物[例如除了核酸或氨基酸聚合物)等。在一些实施方案中，抗原为或包含多肽或其表位。在一些实施方案中，抗原为重组抗原。

295、相关：如果一个事件或实体的存在、水平、程度、类型和/或形式与另一个事件或实体的存在、水平、程度、类型和/或形式相关，那么这两个事件或实体就彼此“相关”，正如本文所使用的术语。例如，如果一个特定的实体(如多肽、遗传特征、代谢物、微生物等)的存在、水平和/或形式与特定疾病、障碍或病况的发病率和/或易感性相关(例如在相关人群中)，则认为该特定实体与该特定的疾病、障碍或病况相关。在一些实施方案中，如果两个或多个实体直接或间接地相互作用，从而使它们彼此物理接近和/或保持物理接近，则它们物理上彼此“相关”。在一些实施方案中，彼此物理相关的两个或多个实体是相互共价连接的；在一些实施方案中，彼此物理相关的两个或多个实体不是相互共价连接的，而是非共价相关的，例如通过氢键、范德华相互作用、疏水相互作用、磁性及其组合的方式。

296、联合疗法：如本文所用，术语“联合疗法”，或提及“联合”给药的试剂，是指受试者同时暴露于两种或更多的治疗性方案(例如两种或更多的治疗性试剂或模式)的那些情况。在一些实施方案中，两个或多个治疗方案可同时给药；在一些实施方案中，此类治疗方案可按顺序给药(例如，在给药第二个治疗方案的任何剂量之前，给药第一个治疗方案的所有“剂量”)；在一些实施方案中，此类药剂以重叠给药方案给药。在一些实施方案中，组合疗法的“给药”可能涉及向接受其他试剂或方式的受试者联合给药一种或多种试剂或模式。为明确起见，联合疗法并不要求单一试剂在单一组合物中共同给药(或甚至必须同时给药)，尽管在一些实施方案中，两个或多个试剂或其活性部分可在组合物中或甚至在组合化合物中(例如，作为单一化学复合物或共价实体的一部分)共同给药。

297、表达：如本文所用，核酸序列的“表达”是指以下一种或多种事件：(1)互补核酸的模板合成(例如从dna序列产生rna模板，例如通过转录)；(2)rna转录物的加工(例如，通过拼接、编辑、5’帽形成和/或3’端形成)例如以产生mrna；(3)将rna(例如，mrna)翻译成多肽或蛋白；和/或(4)多肽或蛋白的翻译后修饰。本领域的技术人员会理解，在某些情况下，“表达”可能包含多步骤的模板合成(例如rna的逆转录以生成dna链，然后转录该dna链和/或任选地合成互补dna链，例如以生成双链dna)。

298、制剂：“制剂”是如按本文所述制备和/或提供的组合物。在许多实例中，术语“制剂”用于指lnp组合物-即其包括rna(特别是治疗性rna，例如mrna)和本文所述的脂质。

299、片段：本文所述的物质或实体的“片段”，其结构包括整体的离散部分，但缺少在整体中发现的一个或多个部分。在一些实施方案中，片段由这样离散的部分组成。在一些实施方案中，片段包括或由在整体中发现的特征性结构元件或部分组成。在一些实施方案中，聚合物片段包含或由以下组成：至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500或更多的如在整个聚合物中所发现的(例如连续相关)单体单元(例如残基)。在一些实施方案中，聚合物片段包含或由以下组成：至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、25％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多在整个聚合物中发现的单体单元(例如残基)。在一些实施方案中，整个物质或实体可称为片段的“母体”。

300、功能性:如本文所用，术语“功能性”用于指实体表现出特定属性和/或活性的形式或者片段。在一些实施方案中，这种“功能性”片段的性质和/或活性与其整体相当。

301、相同性：如本文所用，术语“相同性”指聚合物分子之间(例如核酸分子(如dna分子和/或rna分子)之间和/或多肽分子之间的整体相关性。在一些实施方案中，如果它们的序列至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％是相同的，聚合物分子则被认为与另一个“实质相同”。正如本领域技术人员所理解的，有多种算法允许对序列进行比较，以确定其同源性程度，包括在考虑不同序列中哪些残基相互"对应"时，允许一个序列相对于另一个序列存在指定长度的间隙。例如，计算两个核酸序列之间的相同性百分比，可以通过将两个序列对齐以达到最佳的比较目的(例如，可以在第一和第二核酸序列中的一个或两个引入间隙以达到最佳对齐，并且可以不考虑非对应的序列，以达到比较目的)。在某些实施方案中，用于比较目的而对齐的序列的长度为参考序列长度的至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％或基本上100％。然后比较在对应的核苷酸位置的核苷酸。当第一个序列中的一个位置被第二个序列中的对应位置的相同的核苷酸所占据时，那么这两个分子在该位置是相同的。两个序列之间的相同性百分比是两个序列共享的相同位置数量的函数，同时考虑到间隙的数量以及各个间隙的长度，这需要引入两个序列的最佳对齐。对确定两个核苷酸序列之间的相同性百分比有用的代表性算法和计算机程序包括，例如，meyers和miller的算法(cabios,1989,4：11-17)，该算法已纳入align程序(2.0版)使用pam120重量残基表，间隙长度惩罚为12且间隙惩罚为4。也可以确定两个核苷酸序列之间的相同性百分比，例如使用gcg软件包中的gap程序，使用nwsgapdna.cmp矩阵。

302、核酸：如本文所用，其最广泛的意义上，术语“核酸”指任意化合物和/或物质，其为或可以掺入寡核苷酸链。在一些实施方案中，核酸是以下化合物和/或物质：其为寡核苷酸链或可通过磷酸二酯连接掺入寡核苷酸链。如从上下文可以清楚看出，在一些实施方案中，“核酸”指单个核酸残基(例如核苷酸和/或核苷)；在一些实施方案中，“核酸”指包含单个核酸残基的寡核苷酸链。在一些实施方案中，“核酸”为rna或包含rna；在一些实施方案中，“核酸”为dna或包含dna。在一些实施方案中，核酸为一种或多种天然核酸残基、包含一种或多种天然核酸残基或由一种或多种天然核酸残基组成。在一些实施方案中，核酸为一种或多种核酸类似物、包含一种或多种核酸类似物或由一种或多种核酸类似物组成。在一些实施方案中，核酸类似物与核酸的不同之处在于核酸类似物不利用磷酸二酯骨架。例如，在一些实施方案中，核酸为一种或多种“肽核酸”、包含一种或多种“肽核酸”或由一种或多种“肽核酸”组成，这些肽核酸在本领域是已知的，其骨架中有肽键而不是磷酸二酯键，认为其在本发明的范围内。可替代地或额外地，在一些实施方案中，核酸具有一种或多种硫代磷酸酯和/或5’-n-亚磷酰胺连接而不是磷酸二酯键。在一些实施方案中，核酸为一种或多种天然核苷(例如：腺苷、胸苷、鸟苷、胞苷、尿苷、脱氧腺苷、脱氧胸苷、脱氧鸟苷和脱氧胞苷)、包含一种或多种天然核苷或由一种或多种天然核苷组成。在一些实施方案中，核酸为一种或多种核苷类似物、包含一种或多种核苷类似物或由一种或多种核苷类似物组成(例如：2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯并嘧啶、3-甲基腺苷、5-甲基胞苷,c-5丙炔基-胞苷、c-5丙炔基-尿苷、2-氨基腺苷、c5-溴尿苷、c5-氟尿苷、c5-碘尿苷、c5-丙炔基-尿苷、c5-丙炔基-胞苷、c5-甲基胞苷、2-氨基腺苷、7-去氮腺苷、7-去氮鸟苷、8-氧腺苷、8-氧鸟苷、o(6)-甲基鸟嘌呤、2-硫胞苷、甲基化碱基、插层碱基及其组合)。在一些实施方案中，与天然核酸中的糖相比，核酸包含一种或多种修饰糖(例如2’-氟核糖、核糖、2’-脱氧核糖、阿拉伯糖和己糖)。在一些实施方案中，核酸具有编码功能性基因产物(例如rna或多肽)的核苷酸序列；在一些实施方案中，这种核苷酸序列可以为用于优化在特定宿主中(例如在受体受试者中)的表达的密码子。在一些实施方案中，包括编码序列的核酸还包括一种或多种内含子。在一些实施方案中包括编码序列的核酸不包括内含子。在一些实施方案中，核酸是通过以下一种或多种方式制备的：从天然来源中分离，通过基于互补模板的聚合反应进行酶促合成(在一些实施方案中，在体内；在一些实施方案中，在体外),在重组细胞或系统中复制以及化学合成。在一些实施方案中，核酸的长为至少3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、20、225、250、275、300、325、350、375、400、425、450、475、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000或更多残基长。

303、特异性：术语“特异性”在本文中用于指当提及具有活性的试剂时，本领域技术人员理解为是指该试剂区分潜在的目标实体或状态。例如，在一些实施方案中，如果试剂在存在一个或多个竞争性替代靶标的情况下优先与该靶标结合，则试剂称为“特异性”结合至其靶标。在许多实施方案中，特异性相互作用取决于目标实体的特定结构特征(例如表位、裂隙、结合位点)的存在。应该理解，特异性不一定是绝对的。在一些实施方案中，特异性可以相对于结合试剂对一个或多个其他潜在目标实体(例如竞争者)的特异性进行评估。在一些实施方案中，特异性相对于参考特异性结合试剂的特异性进行评估。在一些实施方案中，特异性相对于参考非特异性结合试剂的特异性进行评估。在一些实施方案中，试剂或实体在与其目标实体结合条件下，不能检测到与竞争的替代靶标结合。在一些实施方案中，与竞争的替代靶标相比，结合试剂以更高的结合速率(on-rate)、更低的解离速率(off-rate)、增加的亲和力、减少的分离和/或增加的稳定性与其目标实体结合。

304、稳定的：当应用于本文的组合物时，术语“稳定的”意为在指定的条件集合下，组合物在一段时间内保持它们一个或多个方面的物理结构和/或活性。在一些实施方案中，该时间段为至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12周或更长，包括约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12个月或更长；在一些实施方案中，该在指定的条件集合为或包含高于低温阈值的温度。在一些实施方案中，低温阈值为高于约-80℃、-70℃、-50℃、-30℃、-20℃、0℃、2℃、4℃、8℃、15°、20℃、30℃、40℃或更高。在一些实施方案中，基于包含脂质纳米颗粒(lnp)的胶体含量的维持，认为组合物是稳定的。在一些实施方案中，基于lnp的一种或多种特征(包括，例如但不限于其z-平均和/或多分散性指数(pdi))的维持，认为组合物是稳定的。在一些实施方案中，基于核酸完整性、核酸包封的程度(例如百分比)和/或核酸表达性(例如编码多肽的表达水平，如可表示为相关参考水平的百分比)的维持，认为组合物是稳定的。在一些实施方案中，在一定时间段内在指定的条件集合下与相关参考水平相比，如果此类组合物中的脂质纳米颗粒表现出小于约20nm的z-平均变化(包括，例如，小于19nm、18nm、17nm、16nm、15nm、14nm、13nm、12nm、11nm或更小的z-平均变化)，则认为本文所述组合物是稳定的。在一些实施方案中，在一定时间段内在指定的条件集合下与相关参考水平相比，如果此类组合物中的脂质纳米颗粒表现出小于约10nm的z-平均变化(包括，例如，小于9nm、8nm、7nm、6nm、5nm、4nm、3nm、2nm、1nm、0.5nm或更小的z-平均变化)，则认为本文所述组合物是稳定的。在一些实施方案中，在一定时间段内在指定的条件集合下与相关参考水平相比，如果此类组合物中核酸包封维持至少50％(包括例如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或更多)，则认为本文所述组合物是稳定的。在一些实施方案中，在一定时间段内在指定的条件集合下与相关参考水平相比，如果编码的多肽的表达水平维持至少50％(包括例如至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或更多)，则认为本文所述组合物是稳定的。

305、受试者：如本文所用，术语“受试者”或“患者”指被给药(例如为了实验、诊断、预防、美容和/或治疗性目的)或可能被给药所提供的组合物的任何生物体。典型的受试者包括动物(例如哺乳动物，如小鼠、大鼠、兔子、非人灵长类动物和/或人)。在一些实施方案中，受试者为人。在一些实施方案中，受试者患有或易患有一种或多种障碍或病况。在一些实施方案中，受试者展现出一种或多种障碍或病况的症状。在一些实施方案中，患者已诊断出患有一种或多种障碍或病况。在一些实施方案中，受试者处于病毒感染或者与病毒感染相关的疾病或障碍的风险中。

306、基本上：如本文所用，术语“基本上”指表现出全部或接近全部的特征或相关属性的程度或度的定性条件。生物技术领域的普通技术人员会明白，生物和化学现象很少(如果有的话)会完成和/或进行到完整的程度或达到或避免绝对的结果。因此，本文使用术语“基本上”来捕捉许多生物和化学现象中固有的潜在的不完整性。

307、治疗有效量：如本文所用，术语“治疗有效量”意为指当按照治疗性给药方案给患有或易患某种疾病、障碍和/或病况的人群给药时，足以治疗该疾病、障碍和/或病况的量。在一些实施方案中，治疗有效量是能够减少疾病、障碍和/或病况的一种或多种症状的发生率和/或严重程度和/或推迟发病。本领域的普通技术人员会理解，术语“治疗有效量”实际上并不要求在特定个体中实现成功治疗。相反，治疗有效量可以是当给需要这种治疗的患者给药时，在相当数量的受试者中提供特定期望的药理反应的量。特别理解的是，特定的受试者可能对“治疗有效量”是“难治的”。仅举一例，难治性受试者可能具有较低的生物利用度，以致无法获得临床疗效。在一些实施方案中，提及治疗有效量可以是指在一种或多种特异性组织(例如受疾病、障碍或病况影响的组织)或液体(例如血液、唾液、血清、汗液、眼泪、尿液等)中测量的量。本领域的普通技术人员会理解，在一些实施方案中，治疗有效量可配制和/或以单剂量给药。在一些实施方案中，治疗有效量可以配制和/或以多剂量给药，例如，作为给药方案的一部分。

308、变体：如本文所用，在分子(例如核酸、蛋白或小分子)的上下文中，术语“变体”指分子与参考分子显示出明显的结构相同性，但结构上与参考分子不同，例如，与参考实体相比，在存在或不存在或一个或多个化学部分的水平上不同。在一些实施方案中，变体功能上也与其参考分子不同。通常，是否认为一个特定的分子是参考分子的“变体”是基于它与参考分子的结构相同性程度。正如本领域技术人员会理解的，任何生物或化学参考分子都有某些特征性的结构元件。在一些实施方案中，变体是一种独特的分子，它具有一个或多个这样的特征性结构元件，但在至少一个方面与参考分子不同。

309、仅举几个实例，多肽可以具有由多个氨基酸组成的特征序列元件，所述氨基酸在线性或三维空间中具有彼此相对的指定位置和/或有助于特定的结构基序和/或生物功能；核酸可以具有由多个核苷酸残基组成的特征性序列元件，这些核苷酸残基在线性或三维空间中具有彼此相对的指定的位置。在一些实施方案中，由于氨基酸或核苷酸序列中的一个或多个差异和/或作为多肽或核酸的共价成分(例如，连接到多肽或核酸骨架上)的化学部分(例如，碳水化合物、脂质、磷酸基团)中的一个或多个差异，变体多肽或核酸可能不同于参考多肽或核酸。在一些实施方案中，变体多肽或核酸表现出与参考多肽或核酸的整体序列相同性为至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％或99％。在一些实施方案中，变体多肽或核酸与参考多肽或核酸不共享至少一个特征性序列元件。在一些实施方案中，参考多肽或核酸具有一种或多种生物活性。在一些实施方案中，变体多肽或核酸与参考多肽或核酸共享一种或多种生物活性。在一些实施方案中，变体多肽或核酸缺乏参考多肽或核酸的一种或多种生物活性。在一些实施方案中，变体多肽或核酸与参考多肽或核酸相比，表现出一种或多种生物活性的降低。在一些实施方案中，如果相关的多肽或核酸具有与参考多肽或核酸相同的氨基酸或核苷酸序列，但在特定位置有少量的序列改变，则认为相关的多肽或核酸是参考多肽或核酸的“变体”。

310、在一些实施方案中，通常，与参考相比，变体中少于约20％、约15％、约10％、约9％、约8％、约7％、约6％、约5％、约4％、约3％或约2％的残基取代、插入或缺失。在一些实施方案中，与参考相比，变体多肽或核酸包括约10、约9、约8、约7、约6、约5、约4、约3、约2或约1个取代的残基。在一些实施方案中，相对于参考，变体多肽或核酸包含非常少(例如少于约5、约4、约3、约2或约1)数量的取代、插入或缺失的功能性残基(即参与特定的生物活性的残基)。在一些实施方案中，与参考相比，变体多肽或核酸包含不超过约5、约4、约3、约2或约1个的添加或缺失，并且，在一些实施方案中，不包含添加或缺失。在一些实施方案中，与参考相比，变体多肽或核酸包含少于约25、约20、约19、约18、约17、约16、约15、约14、约13、约10、约9、约8、约7、约6且通常少于约5、约4、约3或约2的添加或缺失。在一些实施方案中，参考多肽或核酸为在自然中所发现的。在一些实施方案中，参考多肽或核酸为人的多肽或核酸。

311、在一些实施方案中，氨基酸序列(肽、蛋白或多肽)的“变体”可以为或包含氨基酸插入变体、氨基酸添加(即末端添加)变体、氨基酸缺失变体和/或氨基酸取代变体。

312、在一些实施方案中，“变体”可以为或包含突变体、剪接变体、翻译后的修饰变体、构象、异构体、等位基因变体、物种变体和物种同源体，特别是天然存在的那些变体。在一些实施方案中，特别地，术语“变体”包括氨基酸序列的片段。

313、在一些实施方案中，通过插入单个、或两个或更多个氨基酸，氨基酸插入变体得以与相关参考多肽不同。

314、在一些实施方案中，氨基酸添加变体可能包含一个或多个氨基酸的氨基端和/或羧基端融合(即延伸)，例如1、2、3、5、10、20、30、50或更多氨基酸。

315、在一些实施方案中，氨基酸缺失变体的特征在于从序列中去除一个或多个氨基酸，例如去除1、2、3、5、10、20、30、50或更多氨基酸。在一些实施方案中，缺失的可以是一个或多个n-端氨基酸、一个或多个c-端氨基酸、一个或多个内部氨基酸或其组合。

316、在一些实施方案中，氨基酸取代变体的特征在于序列中的至少一个残基移除并且另一个残基插入其位置。在一些实施方案中，取代的残基在相关多肽中不是高度保守的，例如共享一个或多个共同基序(例如特征序列元件)和/或功能。在一些实施方案中，取代是“保守”取代，即原始残基和其取代物共享一个或多个结构性或功能性能属性或特性(例如电荷的特征和/或类型，或其缺失；侧链的疏水性或亲水性，侧链的三维体积，侧链的线性或支链特性、侧链中杂原子的存在和/或类型等)。例如，在一些实施方案中，如果取代涉及交换家族内的残基，则取代是保守的，例如：酸性氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸)、碱性氨基酸(赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、非极性(丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、不带电的极性氨基酸(甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸)、芳香族氨基酸(苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸)。在一些实施方案中，认为在以下组内的保守氨基酸取代是保守取代：甘氨酸、丙氨酸；缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸；天冬氨酸、谷氨酸；天冬酰胺、谷氨酰胺；丝氨酸、苏氨酸；赖氨酸、精氨酸；以及苯丙氨酸、酪氨酸。

317、在一些实施方案中，变体可以指除了少量的成分改变(例如，某些成分存在或不存在，或某些成分的浓度不同)，与参考组合物相同的组合物(例如缓冲液)。

318、野生型：如本文所用，术语“野生型”或“wt”或“天然”具有其本领域所理解的含义，是指具有在“正常”(与突变、患病、改变等相反)状态或背景下在自然界中发现的结构和/或活性的实体。本领域的普通技术人员会理解，野生型基因和多肽通常以多种不同形式(例如等位基因)存在。在许多实施方案中，如本文所用，“野生型”可以指在自然中发现的氨基酸序列，包括等位基因变体。野生型氨基酸序列、肽或蛋白质具有未经有意修饰的氨基酸序列。