技术特征：
1.一种禽大肠杆菌病三价灭活疫苗，该疫苗还含有灭活的o109、o36和o78三种血清型大肠埃希氏菌，三种大肠埃希氏菌分别经通气培养后收获菌液再经灭活，再混合后而制成灭活疫苗，o109血清型大肠埃希氏菌，其保藏号为cctcc m 20211519，o36血清型大肠埃希氏菌，其保藏号为cctcc m 20211520，o78血清型大肠埃希氏菌，其保藏号为cctcc m 20211518。2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于，所述禽致病性大肠杆菌灭活疫苗中，灭活的各大肠埃希氏菌菌株的抗原含量大于等于1.2
×
10
10
cfu/ml。3.根据权利要求2所述的疫苗，其特征在于，还包含佐剂。4.根据权利要求3所述的疫苗，其特征在于，所述佐剂为铝胶佐剂或医用白油佐剂。5.制备权利要求1-4任意一项所述禽致病性大肠杆菌三价灭活疫苗的方法，其特征在于，其包括如下步骤：1)制备禽致病性大肠杆菌菌株灭活抗原取所述禽致病性大肠杆菌菌株接种于lb培养基中培养，并分别进行一级和二级种子繁殖；然后转接培养，并进行灭活处理；2)配制疫苗将灭活处理的菌液稀释或浓缩，使灭活前活菌数大于等于1.2
×
10
10
cfu/ml；取灭活菌液与佐剂按3：1体积比进行混匀，搅拌并乳化处理，得所述禽致病性大肠杆菌灭活疫苗。6.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，步骤1)中所述转接培养的条件为二级种子液按照体积比1：100转接至摇瓶中，37℃震荡摇床180r/min，发酵至三小时后，每0.5h测定一次od
600
，当发酵液od
600
测定为1.3时，停止发酵。通过高速冷冻离心机4℃，8000r/min离心15min，弃上清，采用原体积发酵液的1/20体积的生理盐水重悬菌泥，充分震荡混匀后取100μl菌液倍比稀释后通过活菌计数确定各菌液的终浓度；所述灭活处理采用所述菌液加入体积比0.5％甲醛溶液，37℃温度下摇床100r/min灭活48h。
技术总结
本发明提供一种禽大肠杆菌病三价灭活疫苗及制备方法，该疫苗含有灭活的O109、O36和O78三种血清型大肠埃希氏菌和佐剂，三种大肠埃希氏菌分别经通气培养后收获菌液再经灭活，再混合后而制成灭活疫苗，O109血清型大肠埃希氏菌，其保藏号为CCTCCM20211519，O36血清型大肠埃希氏菌，其保藏号为CCTCCM20211520，O78血清型大肠埃希氏菌，其保藏号为CCTCCM20211518。本发明对血清O109、O36、O78血清型禽致病性大肠杆菌强毒菌株攻毒的免疫保护率均达到90％以上。本发明对O109、O36、O78血清型禽致病性大肠杆菌菌株感染具有良好的免疫保护效果。疫保护效果。
技术研发人员：王湘如 贾超莹 付霁阳 李祖刚 胡子喆 陈焕春
受保护的技术使用者：华中农业大学
技术研发日：2022.04.07
技术公布日：2022/11/24