犬科动物中代谢紊乱的治疗的制作方法

犬科动物中代谢紊乱的治疗
1.本技术是申请号为201580005117.1的中国专利申请(申请日：2015年1月20日，发明名称：犬科动物中代谢紊乱的治疗)的分案申请。
发明领域
2.本发明涉及兽医，特别是涉及犬科动物中代谢紊乱的治疗和/或预防。
3.发明背景
4.犬科动物，例如狗，受到各种代谢不调的影响。犬科动物中已知许多代谢不调，包括高血糖、胰岛素抵抗、糖尿病、肝脂沉积、肥胖症、高胰岛素血症、葡萄糖耐受不良、酮症(特别是酮酸中毒)、血脂异常、血脂肪素异常(dysadipokinemia)、亚临床炎症或全身性炎症(特别是低度全身性炎症)，其还包括脂肪组织、x综合征(代谢综合征)、和/或胰腺炎症。这些紊乱之间存在着各种相关性。在这些紊乱中，对于狗而言，糖尿病，特别是糖尿病前期和胰岛素依赖型糖尿病，以及高血糖、胰岛素抵抗、和肥胖症有着越来越高的重要性。这至少部分可以归因于过去几年中生活以及饲养行为的改变并且宠物在过去几年中由于预防性兽医护理的改善而活得更长。
5.糖尿病特征是，基于相对或者绝对胰岛素缺乏的碳水化合物、蛋白质和甘油三酯代谢的扰乱。
6.其在犬科动物如狗中是相对常见的内分泌病。狗中糖尿病的发病率在过去的几个十年已经提升至大约1.0％。已经鉴别出了若干风险因素：年龄、肥胖症、阉割、性别和品种。
7.目前的分类将人类中的糖尿病分为三种类别:
8.(1)1型其是由于胰岛素分泌细胞功能的丧失，例如通过β细胞或者胰岛素自身抗体的免疫破坏(人类中的青少年糖尿病)；
9.(2)2型其是由于胰岛素刺激细胞对胰岛素刺激适当应答的失效；其也与例如β细胞中的淀粉样物质累积相关；2型通常在长时间的所谓糖尿病前期阶段期间发展；
10.(3)继发性糖尿病其可以是由于致糖尿病的药物(例如长效糖类固醇(glucosteroid)、醋酸甲地孕酮等)或者是由于其它原发性疾病如胰腺炎、胰腺癌、库欣综合征(cushing)、甲状腺功能减退或亢进、产生长激素肿瘤导致肢端肥大症。
11.犬科糖尿病并不容易分类，但是人类和犬科疾病之间有着明显的相似性和差异。犬科中没有相当于2型糖尿病的证据，虽然肥胖症对于宠物狗以及其主人而言同样都是很大的问题。
12.该疾病可以广泛地分为胰岛素缺乏性糖尿病和胰岛素抵抗性糖尿病(catchpole et al.,diabetologia 2005.48:1948
–
1956)。胰岛素缺乏是最常见的类型。与人类的情形相反，其通常不是在年轻的狗中发现，而是与人类中1型糖尿病的成人隐匿性/迟发性自身免疫糖尿病(lada)形式具有可能的相似性，其特征在于由自身免疫反应而引起的进行性β细胞破坏。
13.然而狗中的自身免疫是有争议的。仅仅在患有犬科糖尿病的狗的亚群中检测到抗体，并且讨论认为其是疾病的结果而非原因(catchpole et al.,diabetologia 2005.48:
1948
–
1956)。
14.另外，在完整的雌性狗中，依赖于间情期/妊娠期的胰岛素抵抗性糖尿病是常见的。
15.为了在人类中治疗糖尿病，特别是2型糖尿病，已经批准了若干口服抗高血糖药物。这些药物例如以葡萄糖非亚赖性或葡萄糖依赖性的方式通过刺激胰腺胰岛素分泌而发挥作用(分别为磺脲类/氯茴苯酸类、或者dpp iv抑制剂类)、通过增强对胰岛素的组织敏感性来发挥作用(双胍类、噻唑烷二酮类)、或通过延缓餐后小肠葡萄糖吸收来发挥作用(α-葡萄糖苷酶抑制剂)。
16.已经使用了一些口服抗高血糖药物，但是它们要么就是对糖尿病的狗无效(例如磺酰脲药物)或者要么就是对于血糖控制有些作用但却因高发生率的副作用(例如α-葡萄糖苷酶抑制剂)而不利(nelson et al.j small anim pract 2000,41,486-490)。
17.已经设想了其它措施用于治疗糖尿病以及减少高血糖，包括抑制肾钠依赖性葡萄糖协同转运蛋白sglt2。肾脏中的sglt2通过在血液过滤后介导将葡萄糖重吸收回血浆而调节葡萄糖水平。sglt2抑制因而诱导糖尿并且可以降低血液葡萄糖水平。例如，在wo 2007/128749中，将化合物1-氰基-2-(4-环丙基-苄基)-4-(β-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯描述为sglt2抑制剂。许许多多其它sglt2抑制剂也是已知的。在wo 2011/117295中，其涉及以二肽基肽酶iv(dpp-iv)抑制剂来对肉食为主的非人动物用药，在与dpp-iv抑制剂组合疗法的背景下，于许多其它类型的化合物中提到了各种sglt2抑制剂。
18.此前未设想过将sglt2抑制用于治疗犬科动物(如狗)中的代谢紊乱。在犬科动物中，对代谢紊乱的用药发展远远不如在人类中的情况。不幸的是，即便治疗或预防在人类(或例如其它非犬科动物)中有效，也不能就断定同样的措施在犬科动物(如狗)中也会是有效、安全而又适当的。
19.犬科动物在代谢方面与人类或者其它肉食动物例如猫有着显著差别。
20.因此，犬科代谢紊乱的病理生理学、以及它们对此类紊乱用药的应答与其它物种有差别。
21.狗展现出肥胖症以及代谢综合征的所有特征，类似于例如人类以及猫。与这些物种相反，在犬科动物中，此综合征不会发展成2型糖尿病。在人类以及猫科动物中2型糖尿病的病理生理学标志——胰岛淀粉样沉积，在狗中是缺失的(verkest,vet j,in press doi.org/10.1016/j.tvjl.2013.09.057)。
22.作为糖尿病并发症，例如视力问题以及白内障，通常会在患有糖尿病的狗中发现，但是却很少在猫科动物中发现。虽然，视网膜病变常常在人类中检测到——但在狗中却很少发现，而视力问题起因于角膜病变以及特别是白内障。这些在高达80％的糖尿病狗中都有遇到(beam et al.vet.ophtalmol.1999.2,169-172)。
23.已经显示出，最佳的血糖控制对于预防白内障的发展或进展是关键的(wang et al.j diabet.compl.in press,doi:0.1016/j.jdiacomp.2013.11.002)。
24.目前认为狗糖尿病治疗的黄金标准是注射胰岛素。然而，没有单一类型的胰岛素在维持对血糖的控制方面是常规有效的，即使每天施用两次。即便是受调控的糖尿病最终也会达到这样的节点，此时它们的血液葡萄糖不再受到控制而必须要对胰岛素进行调节(通过剂量或者类型调节)。
25.另外主人严格顺应，控制也常常很差并且继发性问题也是常见的。许多主人发现不太可能实现可接受水平的顺应，因为在大多数情况中摄食和胰岛素注射的同步性是不可能的。最终许多患有糖尿病的狗都由于该疾病而被实施安乐死。
26.管理患者和主人顺应性的因素也是有很大差异的。与人类相比，在狗中依然更加高度期望进行例如口服施用。
27.能够产生比现有的基于胰岛素的治疗更顺应且因而有更好的血糖控制的治疗，将会有助于减弱疾病的进展，并在许多动物中延缓或者防止并发症的发作。
28.目前对于代谢紊乱，诸如肥胖症、胰岛素抵抗、高血糖、高胰岛素血症、葡萄糖耐受不良、肝脂沉积、血脂异常、血脂肪素异常、亚临床炎症或全身性炎症(特别是低度全身性炎症，其还包含脂肪组织)、以及相关的紊乱如x综合征(代谢综合征)，尚没有满意的治疗。另外，这些代谢紊乱可以与甲状腺功能减退或甲状腺功能亢进、皮质素功能亢进(肾上腺皮质功能亢进,库欣)和/或生长激素过多(肢端肥大症)相关联或者由其所诱导。这些代谢紊乱在犬科动物中可以变得有临床表现，例如通过高血压、心肌病、肾功能障碍和/或肌肉骨骼病症(muscoskeletal disorder)。
29.因而，依然特别需要对犬科动物中的代谢紊乱(包括糖尿病)的有效、安全等等的适当治疗。
30.发明的公开
31.发明概述
32.本发明人已经出乎意料地发现sglt2的抑制在犬科动物代谢紊乱的治疗和/或预防中是有效的且安全的。
33.本发明因而提供了一或多种sglt2抑制剂或其药物可接受的形式在治疗和/或预防犬科动物的代谢紊乱中的用途。
34.另外，本发明提供了一或多种sglt2抑制剂或其药物可接受的形式在治疗和/或预防犬科动物的代谢紊乱中的用途，其中所述一或多种sglt2抑制剂是1-氰基-2-(4-环丙基-苄基)-4-(β-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯(其在下文被称为化合物a)或者其药物可接受的形式。
35.化合物a具有以下化学式:
[0036][0037]
本发明另外的方面在下文以及权利要求中定义。
[0038]
所述一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)的药物可接受的形式，可以是所述一或多种sglt2抑制剂与一或多种氨基酸(如脯氨酸)之间的结晶复合物。
[0039]
根据本发明，所述一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)或其药物可接受的形式可以例如，提供用于口服或不经肠胃施用，优选用于口服施用。
[0040]
所述一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)或者其药物可接受的形式可以每天0.1至3.0mg/kg体重的剂量来施用、优选每天0.2至2.0mg/kg体重、更优选每天0.1至1mg/kg体
重。因而，可以将所述一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)或者其药物可接受的形式制备为用于每天0.1至3.0mg/kg体重的施用、优选每天0.2至2.0mg/kg体重的施用、更优选每天0.1至1mg/kg体重的施用。
[0041]
所述一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)或者其药物可接受的形式优选每天仅施用一次。
[0042]
本发明还提供了包含一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)或者其药物可接受的形式的药物组合物，用于本文中公开的本发明的用途。
[0043]
在本文提供的实例中，通过实验证明了根据本发明的sglt2的抑制所带来的治疗性和/或预防性益处。本文公开的实验数据是要用来对本发明进行说明，而不是要对本发明的范围进行限制，本发明的范围是由下文中的权利要求所定义的。
[0044]
具体而言，本发明人出乎意料地发现，根据本发明的sglt2抑制剂、优选化合物a的用途在高血糖的(例如糖尿病的)犬科动物中有利地导致高血糖的降低和/或另外还导致改善的例如9或24小时血糖谱。因而，这可以导致治疗糖尿病犬科动物所需胰岛素的减少。
[0045]
由于吸收和发生作用(糖尿)和快且显著(实施例1和2)，使得治疗新诊断为代谢紊乱的犬科动物可以在短时间内建立最优化的剂量(例如7-14天)。
[0046]
本发明显示出对高血糖的主要改善和最优化的治疗，并因而使得可以在犬科动物中对高血糖相关的并发症(特别是白内障形成)进行预防或者延缓其进展或者诱导其缓解。
[0047]
本发明另外的优势在于，一或多种sglt2抑制剂、优选化合物a的用途单独针对代谢紊乱就是有效的，也即，如果需要的话，一或多种sglt2抑制剂、优选化合物a的用途在犬科动物中提供单一疗法(即独立疗法；也即，没有其它药物施用于犬科动物以用于治疗或预防同一代谢紊乱——只有胰岛素依赖性糖尿病是例外)。
[0048]
然而，本发明还允许与胰岛素进行组合疗法的可能性。与使用胰岛素对犬科动物进行单一疗法相比，此种组合有利地导致胰岛素施用剂量和/或频率的降低。
[0049]
有利的是，根据本发明的sglt2抑制剂、优选化合物a的用途不引起低血糖(实施例2)。
[0050]
另外的优势具体而言在于，本发明的一或多种sglt2抑制剂、优选化合物a的用途在经治疗的、胰岛素抵抗的犬科动物中导致胰岛素抵抗的降低。也就是说，相当于，根据本发明的sglt2抑制剂、优选化合物a的用途在经治疗的、胰岛素抵抗的犬科动物中有利地导致胰岛素敏感性的提高。
[0051]
因而，本发明的一或多种sglt2抑制剂、优选化合物a的用途，在犬科动物中提供了对本文所公开的代谢疾病(包括糖尿病)的改善的治疗和/或预防。
[0052]
使用本发明的一或多种sglt2抑制剂、优选化合物a的效果可以是相对于施用本发明的一或多种sglt2抑制剂、优选化合物a之前的相同的或相当的犬科动物，和/或可以是相对于没有接受所述治疗的相当的犬科动物(例如安慰剂组)。在每个情形中，当进行比较时，可以在特定治疗期之后进行比较，例如1、2、3、4、5、6或7天；10天、14天；1、2、3、4、5、6、7或8周；1、2、3或4个月。优选所述治疗期是4周。或者，所述治疗期可以是6或8周。或者，所述治疗期可以是8周或更长，例如8-16周，也即8、9、10、11、12、13、14、15或16周。
[0053]
本发明另外的优势在于，一或多种sglt2抑制剂、优选化合物a可以有效地口服施用于犬科动物。另外，根据本发明的所述一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)，可以每天仅
施用一次。这些优势使得所要治疗的犬科动物以及主人可以更好地顺应。这导致对犬科动物正接受胰岛素治疗的紊乱(例如糖尿病)的更好的血糖控制。一般而言，根据本发明的sglt2抑制剂、优选化合物a的用途因而有助于在犬科动物中减弱(也即延缓或阻止)代谢紊乱的进展以及延缓或阻止代谢紊乱(例如糖尿病)及其并发症的发作。
[0054]
使用本发明的一或多种sglt2抑制剂、优选化合物a的效果(例如上文提到的对于高血糖的有益效果)可以是相对于施用本发明的所述一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)之前的相同的或相当的犬科动物，和/或可以是相对于已经接受了例如标准胰岛素治疗(例如对照组)或未经治疗的相当的犬科动物。
[0055]
本发明另外的优势在于，所述一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)，可以有效地口服施用给犬科动物，例如以液体的形式。另外，本发明的所述一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)可以每天仅施用一次。这些优势使得所要治疗的犬科动物和主人有最优的剂量和顺应性。
[0056]
因此，本发明还提供了包含本发明的一或多种sglt2抑制剂、优选化合物a的药物组合物，用于在犬科动物中治疗和/或预防代谢紊乱。
[0057]
本发明还提供了在犬科动物中治疗和/或预防代谢紊乱的方法，其包括向需要此种治疗和/或预防的犬科动物施用有效剂量的如本文所述的一或多种sglt2抑制剂、优选化合物a。
[0058]
一般而言，根据本发明的sglt2抑制剂、优选化合物a的用途可以因而在犬科动物中减弱、延缓或预防代谢紊乱(例如本文公开的代谢紊乱)的进展，或者可以延缓或预防代谢紊乱及其并发症的进展或发作，例如高血压、肾功能障碍和/或肌肉骨骼病症得到了预防或者其进展得以减缓或者实现了缓解。
[0059]
定义
[0060]
本文所给出的所有数值和浓度要受到生物科学中可接受的古有偏差影响(在
±
10％的偏差之内)。术语“大约”也是指此种可接受的偏差。
[0061]
本文公开的治疗效果(如改善，紊乱、疾病或病征发作的减少或延缓，与紊乱、疾病或病征相关的任何效果、指数、标记物水平或其它参数的改善、减少、降低或延缓)可以用p《0.05(优选《0.01)的统计学显著性来观察。
[0062]
当本文中提到偏差时(例如提高、提升、超过、延长、增加、减少、降低、改善、延缓、异常水平、或任何相对于参照的其它改变、变化或偏差)，偏差可以例如是相对于相关参照值5％或更多、特别是10％或更多、更特别是15％或更多、更特别是20％或更多、更特别是30％或更多、更特别是40％或更多、或者更特别是50％或更多，除非另有说明。通常，偏差会是至少10％，也即10％或更多。偏差也可以是20％。偏差也可以是30％。偏差也可以是40％。相关参照值从参照动物(接受安慰剂治疗而不是所述一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)、或者是未经治疗)的组产生。
[0063]
在本文中，波动(例如胰岛素波动葡萄糖波动)指的是血液中浓度或水平随着时间的变化。波动(例如胰岛素波动葡萄糖波动)的幅度可以表达为曲线下面积(auc)值。
[0064]
在本文中，术语"活性物质"或"活性成分"涵盖一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)或者其任何药物可接受的形式(例如前药或结晶形式)，用于根据本发明的用途。在与一种或额外的活性化合物组合的情形中，术语"活性成分"或"活性物质"还可以包括额外的活
性化合物。
[0065]
在本文中，表述“临床病征”是指病理学病征或者可以识别(例如可见的和/或可测量的)的病理生理学或生理学改变(如血液参数)，并且与紊乱和/或疾病相关联和/或定义了紊乱和/或疾病。
[0066]
在本文中，表述“与
……
相关”特别涵盖了表达“由
……
引起”。
[0067]
在本文中，ivgtt是指静脉内葡萄糖耐受测试。在ivgtt中，通常使用每kg体重0.8g右旋糖。
[0068]
在本文中，ivitt是指静脉内胰岛素耐受测试。在ivgtt中，通常使用每kg体重0.05u胰岛素。
[0069]
sglt2抑制剂
[0070]
用于本发明的用途的sglt2抑制剂包括但不限于，吡喃葡萄糖基-取代的苯衍生物，例如如下中所述的：wo 01/27128、wo 03/099836、wo 2005/092877、wo 2006/034489、wo 2006/064033、wo 2006/117359、wo 2006/117360、wo 2007/025943、wo 2007/028814、wo 2007/031548、wo 2007/093610、wo 2007/128749、wo 2008/049923、wo 2008/055870、wo 2008/055940、wo 2009/022020或wo 2009/022008。
[0071]
另外，用于本发明的用途的所述一或多种sglt2抑制剂可选自以下化合物或者其药物可接受的形式：
[0072]
(1)化学式(1)的吡喃葡萄糖基-取代的苯衍生物
[0073][0074]
其中r1表示氰基、氯或甲基(最优选氰基)；
[0075]
r2表示h、甲基、甲氧基或羟基(最优选h)；以及
[0076]
r3表示环丙基、氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、3-甲基-丁-1-基、环丁基、环戊基、环己基、1-羟基-环丙基、1-羟基-环丁基、1-羟基-环戊基、1-羟基-环己基、乙炔基、乙氧基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、2-羟基-乙基、羟甲基、3-羟基-丙基、2-羟基-2-甲基-丙-1-基、3-羟基-3-甲基-丁-1-基、1-羟基-1-甲基-乙基、2,2,2-三氟-1-羟基-1-甲基-乙基、2,2,2-三氟-1-羟基-1-三氟甲基-乙基、2-甲氧基-乙基、2-乙氧基-乙基、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、2-甲氧基-乙氧基、甲基硫烷基、甲基亚磺酰基、甲基磺酰基、乙基亚磺酰基、乙基磺酰基、三甲基硅基、(r)-四氢呋喃-3-基氧或者(s)-四氢呋喃-3-基氧或氰基；
[0077]
其中r3优选选自环丙基、乙基、乙炔基、乙氧基、(r)-四氢呋喃-3-基氧或者(s)-四氢呋喃-3-基氧；并且最优选r3是环丙基，或者其衍生物，其中β-d-吡喃葡萄糖基基团的一或多个羟基基团被选自以下的基团酰化：(c
1-18-烷基)羰基、(c
1-18-烷基)氧羰基、苯基羰基和苯基-(c
1-3-烷基)-羰基；
[0078]
(2)1-氰基-2-(4-环丙基-苄基)-4-(β-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯，由化学式(2)表示:
[0079][0080]
(3)达格列净(dapagliflozin)，由化学式(3)表示:
[0081][0082]
(4)卡格列净(canagliflozin)，由化学式(4)表示:
[0083][0084]
(5)恩格列净(empagliflozin)，由化学式(5)表示:
[0085][0086]
(6)鲁格列净(luseogliflozin)，由化学式(6)表示:
[0087][0088]
(7)托格列净(tofogliflozin)，由化学式(7)表示:
[0089][0090]
(8)伊格列净(ipragliflozin)，由化学式(8)表示:
[0091][0092]
(9)埃格列净(ertugliflozin)，由化学式(9)表示:
[0093][0094]
(10)阿格列净(atigliflozin)，由化学式(10)表示:
[0095][0096]
(11)瑞格列净(remogliflozin)，由化学式(11)表示:
[0097][0098]
(12)化学式(12)的噻吩衍生物:
[0099][0100]
其中r表示甲氧基或三氟甲氧基；
[0101]
(13)1-(β-d-吡喃葡萄糖基)-4-甲基-3-[5-(4-氟苯基)-2-噻吩甲基]苯，如wo 2005/012326中所述，由化学式(13)表示:
[0102][0103]
(14)化学式(14)的螺酮缩醇衍生物:
[0104][0105]
其中r表示甲氧基、三氟甲氧基、乙氧基、乙基、异丙基或叔丁基；
[0106]
(15)化学式(15)的吡唑-o-葡萄糖苷衍生物:
[0107][0108]
其中
[0109]
r1表示c
1-3-烷氧基，
[0110]
l1，l2彼此独立表示h或f，
[0111]
r6表示h，(c
1-3-烷基)羰基、(c
1-6-烷基)氧羰基、苯氧羰基、苄氧羰基或者苄基羰基；
[0112]
(16)化学式(16)的化合物:
[0113]
以及
[0114]
(17)舍格列净(sergliflozin)，由化学式(17)表示:
[0115][0116]
本文所使用的术语"达格列净"是指上述结构的达格列净以及其药物可接受的形式，包括其水合物和溶剂化物、以及其结晶形式。该化合物及其合成方法例如在wo 03/099836中有描述。优选的水合物、溶剂化物和结晶形式例如在专利申请wo 2008/116179和wo 2008/002824中有描述。
[0117]
本文所使用的术语"卡格列净"是指上述结构的卡格列净以及其药物可接受的形式，包括其水合物和溶剂化物、以及其结晶形式。该化合物及其合成方法例如在wo 2005/012326和wo 2009/035969中有描述。优选的水合物、溶剂化物和结晶形式例如在专利申请wo 2008/069327中有描述。
[0118]
本文所使用的术语"恩格列净"是指上述结构的恩格列净以及其药物可接受的形式，包括其水合物和溶剂化物、以及其结晶形式。该化合物及其合成方法例如在wo 2005/092877、wo 2006/120208和wo 2011/039108中有描述例如。优选的结晶形式例如在专利申请wo 2006/117359和wo 2011/039107中有描述。
[0119]
本文所使用的术语"阿格列净"是指上述结构的阿格列净以及其药物可接受的形式，包括其水合物和溶剂化物、以及其结晶形式。该化合物及其合成方法例如在wo 2004/007517中有描述。
[0120]
本文所使用的术语"伊格列净"是指上述结构的伊格列净以及其药物可接受的形式，包括其水合物和溶剂化物、以及其结晶形式。该化合物及其合成方法例如在wo 2004/080990、wo 2005/012326和wo 2007/114475中有描述。
[0121]
本文所使用的术语"托格列净"是指上述结构的托格列净以及其药物可接受的形式，包括其水合物和溶剂化物、以及其结晶形式。该化合物及其合成方法例如在wo 2007/140191和wo 2008/013280中有描述。
[0122]
本文所使用的术语"鲁格列净"是指上述结构的鲁格列净以及其药物可接受的形式，包括其水合物和溶剂化物、以及其结晶形式。
[0123]
本文所使用的术语"埃格列净"是指上述结构的埃格列净以及其药物可接受的形式，包括其水合物和溶剂化物、以及其结晶形式。该化合物在例如wo 2010/023594中有描述。
[0124]
本文所使用的术语"瑞格列净"是指上述结构的瑞格列净以及其药物可接受的形式，包括瑞格列净的前药，特别是依碳酸瑞格列净，包括其水合物和溶剂化物、以及其结晶形式。其合成方法在例如专利申请ep 1 213 296和ep 1 354 888中有描述。
[0125]
本文所使用的术语"舍格列净"是指上述结构的舍格列净以及其药物可接受的形式，包括舍格列净的前药，特别是依碳酸舍格列净，包括其水合物和溶剂化物、以及其结晶
形式。其制造方法在例如专利申请ep 1 344 780和ep 1 489 089中有描述。
[0126]
上述化学式(16)的化合物及其制造在例如wo 2008/042688或wo 2009/014970中有描述。
[0127]
优选的sglt2抑制剂是吡喃葡萄糖基-取代的苯衍生物。任选地，此种一或多种sglt2抑制剂的一或多个羟基基团可以被选自以下的基团所酰化：(c
1-18-烷基)羰基、(c
1-18-烷基)氧羰基、苯基羰基和苯基-(c
1-3-烷基)-羰基。
[0128]
更优选的是上文所公开的化学式(1)的吡喃葡萄糖基取代的苯甲氰衍生物。更优选的是化学式(18)的吡喃葡萄糖基取代的苯甲氰衍生物：
[0129][0130]
其中
[0131]
r3表示环丙基、氢、氟、氯、溴、碘、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基、3-甲基-丁-1-基、环丁基、环戊基、环己基、1-羟基-环丙基、1-羟基-环丁基、1-羟基-环戊基、1-羟基-环己基、乙炔基、乙氧基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、2-羟基-乙基、羟甲基、3-羟基-丙基、2-羟基-2-甲基-丙-1-基、3-羟基-3-甲基-丁-1-基、1-羟基-1-甲基-乙基、2,2,2-三氟-1-羟基-1-甲基-乙基、2,2,2-三氟-1-羟基-1-三氟甲基-乙基、2-甲氧基-乙基、2-乙氧基-乙基、羟基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、2-甲氧基-乙氧基、甲基硫烷基、甲基亚磺酰基、甲基磺酰基、乙基亚磺酰基、乙基磺酰基、三甲基硅基、(r)-四氢呋喃-3-基氧或者(s)-四氢呋喃-3-基氧或氰基(其中r3优选选自环丙基、乙基、乙炔基、乙氧基、(r)-四氢呋喃-3-基氧或者(s)-四氢呋喃-3-基氧；并且r3最优选是环丙基，
[0132]
或者其衍生物，其中β-d-吡喃葡萄糖基基团的一或多个羟基基团被选自以下的基团酰化：(c
1-18-烷基)羰基、(c
1-18-烷基)氧羰基、苯基羰基和苯基-(c
1-3-烷基)-羰基。
[0133]
优选地，此种sglt2抑制剂是1-氰基-2-(4-环丙基-苄基)-4-(β-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯，如化学式(2)中所示的(本文中也称作“化合物a”)。任选地，化合物a的β-d-吡喃葡萄糖基基团的一或多个羟基基团被选自以下的基团酰化：(c
1-18-烷基)羰基、(c
1-18-烷基)氧羰基、苯基羰基和苯基-(c
1-3-烷基)-羰基。
[0134]
因而，在优选的实施方案中，根据本发明的sglt2抑制剂是吡喃葡萄糖基-取代的苯衍生物sglt2抑制剂，优选化学式(1)的sglt2抑制剂、更优选化学式(18)的、或者更优选化学式(2)的(也即化合物a)，每种情形都如上文所定义。
[0135]
代谢紊乱
[0136]
代谢紊乱可以是糖尿病、糖尿病前期、肥胖症和/或与一或多种这些紊乱相关联的任何紊乱、疾病、病征或症状。具体而言，所述代谢紊乱可以是高血糖、葡萄糖耐受不良、胰岛素抵抗、胰岛素依赖性糖尿病和/或肝脂沉积。另外的相关代谢紊乱包括高胰岛素血症、葡萄糖耐受不良、酮症(特别是酮酸中毒)、高脂血、血脂异常、血液脂肪酸和/或甘油水平升高、x综合征(代谢综合征)、和/或胰腺炎症、低度全身性炎症、脂肪组织炎症。
[0137]
在一些实施方案中，所述代谢紊乱是糖尿病。在本文中，糖尿病可以是糖尿病前期、胰岛素依赖性糖尿病或胰岛素抵抗性糖尿病。具体而言，糖尿病可以是胰岛素依赖性糖尿病。
[0138]
在一些实施方案中，所述代谢紊乱是高血糖。在本文中，高血糖可以与糖尿病(例如胰岛素依赖性糖尿病或胰岛素抵抗性糖尿病)相关联。在一些实施方案中，高血糖可以与肥胖症相关联。所述高血糖可以是慢性的。
[0139]
在一些实施方案中，所述代谢紊乱是胰岛素抵抗。在本文中，胰岛素抵抗可以与糖尿病相关联，例如与胰岛素抵抗性糖尿病相关联。在一些实施方案中，胰岛素抵抗可以与肥胖症相关联。
[0140]
在一些实施方案中，所述代谢紊乱是葡萄糖耐受不良(igt)。在本文中，葡萄糖耐受不良可以与糖尿病相关联，例如与胰岛素依赖性糖尿病或胰岛素抵抗性糖尿病相关联。在一些实施方案中，葡萄糖耐受不良可以与肥胖症相关联。
[0141]
在一些实施方案中，所述代谢紊乱是高胰岛素血症。在本文中，高胰岛素血症可以与糖尿病相关联，例如与胰岛素抵抗性糖尿病相关联。在一些实施方案中，高胰岛素血症可以与肥胖症相关联。
[0142]
在一些实施方案中，所述代谢紊乱是高血糖、胰岛素抵抗、和肝脂沉积中的一或多种。在一些实施方案中，所述代谢紊乱选自高血糖和胰岛素抵抗。
[0143]
在一些实施方案中，所述代谢紊乱是高胰岛素血症、葡萄糖耐受不良、高血糖和胰岛素抵抗的一或多种。
[0144]
在某些实施方案中，所述犬科动物是肥胖的。例如，根据本发明，在肥胖的犬科动物中可以治疗和/或预防选自高血糖、胰岛素抵抗和肝脂沉积的一或多种代谢紊乱。另外，例如，在肥胖的犬科动物中可以治疗和/或预防高胰岛素血症和/或葡萄糖耐受不良。另外，在肥胖的犬科动物中可以治疗和/或预防选自酮症(特别是酮酸中毒)、高脂血、血液脂肪酸和/或甘油水平升高、x综合征(代谢综合征)、胰腺炎症、脂肪组织炎症的一或多种紊乱。
[0145]
在某些实施方案中，所述犬科动物不是肥胖的。所述代谢紊乱可以是与例如甲状腺功能减退或甲状腺功能亢进、皮质素功能亢进(肾上腺皮质功能亢进,库欣)和/或生长激素过多(肢端肥大症)相关联和/或由其所引起。例如，根据本发明，在非肥胖的犬科动物中可以治疗和/或预防选自高血糖、胰岛素抵抗和肝脂沉积的一或多种代谢紊乱。另外，在非肥胖的犬科动物中可以治疗和/或预防例如高胰岛素血症和/或葡萄糖耐受不良。另外，在非肥胖的犬科动物中可以治疗和/或预防选自以下的一或多种紊乱：酮症(特别是酮酸中毒)、高脂血、血液脂肪酸和/或甘油水平升高、x综合征(代谢综合征)、胰腺炎症和/或脂肪组织炎症。
[0146]
在某些实施方案中，所述犬科动物患有糖尿病，例如胰岛素依赖性糖尿病或胰岛素抵抗性糖尿病。例如，根据本发明，在患有糖尿病(例如胰岛素依赖性糖尿病或胰岛素抵抗性糖尿)的犬科动物中可以治疗和/或预防选自高血糖、葡萄糖耐受不良和肝脂沉积的一或多种代谢紊乱。另外，例如，在患有糖尿病(例如胰岛素抵抗性糖尿病)的犬科动物中可以治疗和/或预防高胰岛素血症和/或胰岛素抵抗。另外，在患有糖尿病(例如胰岛素依赖性糖尿病或胰岛素抵抗性糖尿病)的犬科动物中可以治疗和/或预防选自以下的的一或多种紊乱：酮症(特别是酮酸中毒)、高脂血、血液脂肪酸和/或甘油水平升高、x综合征(代谢综合征)、胰腺炎症、脂肪组织炎症。
[0147]
在一些实施方案中，所述犬科动物是肥胖的但不患有糖尿病。
[0148]
在一些实施方案中，所述犬科动物不是肥胖的但是患有糖尿病。
[0149]
本发明还提供了一或多种sglt2抑制剂、优选化合物a用于治疗和/或预防高血糖相关并发症的用途。例如，通过在犬科动物中改善日间血糖控制并由此延缓或防止白内障形成的发展或进展或者诱导白内障形成的退化。
[0150]
酮症是体内酮体水平提升的状态。酮酸中毒可以描述为一种类型的代谢性酸中毒，其由高浓度的酮体(由脂肪酸的断裂和氨基酸的脱氨基所形成)所引起。人类中产生的两种常见酮是乙酰乙酸和β-羟基丁酸。在狗中，发现三种酮占主导：乙酰乙酸、β-羟基丁酸和丙酮酸。酮酸中毒可以从对象的呼吸中闻到。这是由于丙酮(乙酰乙酸的自然分解的直接副产品)。
[0151]
酮酸中毒是酮症极端的和不受控制的形式。酮症也是长期节食的正常反应。在酮酸中毒中，身体未能充分调节酮产生(特别是通过产生乙酰基-coa)，引起了酮酸的此种严重累积而使得血液ph大大降低，也即过量的酮体可以显著地使血液酸化。在极端的情形中，酮酸中毒可以是致命的。
[0152]
当身体通过脂肪酸的代谢而产生高水平的酮体(酮症)并且胰岛素并未充分地缓解其产生(例如由于胰岛素抵抗/降低的胰岛素敏感性或胰岛素的缺乏)时可以发生酮酸中毒。由于缺乏胰岛素而引起的高血糖水平(高血糖)的出现可以导致血液的进一步酸化。这在健康个体中通常不会发生，因为胰腺会针对提高的酮/血糖水平而产生胰岛素。
[0153]
酮酸中毒在未经治疗的糖尿病中最常见(当肝脏应答呼吸基质的感知需求(perceived need)而分解脂肪和蛋白质的时候)。
[0154]
犬科动物中的糖尿病前期特征在于高胰岛素血症、靶器官中的胰岛素抵抗、葡萄糖耐受不良，包括例如对血糖的挑战的胰岛素应答的改变，还例如是由应激所诱导的。糖尿病前期也常常与肥胖症相关联。糖尿病前期还可以与间歇性高血糖相关联。
[0155]
犬科动物中的胰岛素抵抗性糖尿病特征在于作为高血糖后果的靶器官中胰岛素产生和胰岛素抵抗的提高。其常常在完整的雌性糖尿病犬科动物中检测到，并且主要归因于作为内源性胰岛素拮抗剂的孕酮。因此，其大部分情况是与月经周期(也即间情期)相关联或者与怀孕——妊娠期相关联。遗传因素、糖类固醇、缺乏锻炼、和肥胖症是胰岛素抵抗的其它可能原因。
[0156]
犬科动物观察到的糖尿病临床迹象包括多饮、多尿、重量减轻、和/或多食。相反，在其它物种如猫中，比起多食更常描述的是厌食。本发明背景下，犬科动物中糖尿病另外的特别相关的迹象为高血糖和糖尿。犬科动物(例如狗)中的高血糖定义为血浆葡萄糖值高于正常值(3.5-7mmol/l或60-120mg/dl)，例如8mmol/l或更多或者150mg/dl或更多的血浆葡萄糖。犬科动物(例如狗)中的糖尿定义为尿液中葡萄糖水平高于正常值(0～2mmol/l，或36mg/dl)。葡萄糖浓度大约8-11mmol/l或150-200mg/dl的血液葡萄糖浓度达到了肾阈值。
[0157]
犬科动物中糖尿病的诊断还可以基于三个条件，例如，如下:
[0158]
(1)节食血液葡萄糖浓度测量》250mg/dl；
[0159]
(2)如上文所定义的糖尿；和
[0160]
(3)以下的一或多种：多尿、多饮、多食、虽然胃口很好但重量减轻、或酮尿(没有严重酮酸中毒的迹象)。
[0161]
在上述诊断之外以及为了对其进行支持，进一步的检查可以包括血液学、血液化学、x-光和/或腹部超声波。
[0162]
优选地，根据本发明的所述一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)的用途，使得可以保持和/或建立正常的或接近正常的葡萄糖浓度。然而，与人类疗法不同，认为这对于糖尿病动物并不总是必要的，因而并不总是本发明的目标。根据本发明，血液葡萄糖浓度也可以保持在，例如5.5至16.6mmol/l之间或者100至300mg/dl之间。对于犬科动物常常是满足要求的。
[0163]
高血糖诱导的白内障通常是急性发作、进展迅速、以及两侧对称的。眼睛里晶状体的浑浊导致视力的降低或者最终丧失。
[0164]
胰岛素抵抗可以描述为这样的病征：其中正常量的胰岛素不足以从脂肪、肌肉和肝细胞中产生正常的胰岛素应答。脂肪细胞中的胰岛素抵抗降低了胰岛素的效果并导致储存的甘油三酯水解的增加(在缺少提高胰岛素敏感性或提供额外的胰岛素的措施的时候)。提高这些细胞中储存的脂质的动员提升血浆中的游离脂肪酸。肌肉细胞中的胰岛素抵抗降低了葡萄糖摄取(以及因而降低葡萄糖局部存储为糖原)，而肝细胞中的胰岛素抵抗糖原合成受损且不能阻抑葡萄糖产生。提升的血液脂肪酸水平、降低的肌肉葡萄糖摄取、和提高的肝葡萄糖产生，都会有助于提升血液葡萄糖水平(高血糖)。在肥胖的狗中，检测到胰岛素抵抗，也即比瘦狗中低5倍的胰岛素敏感性。
[0165]
胰岛素抵抗可以与以下关联出现：肥胖症、内脏脂肪过多、涉及提升的甘油三酯的高血压和血脂异常、小而密低密度脂蛋白(sdldl)颗粒、和降低的hdl胆固醇水平。对于内脏脂肪过多，人类中的许多证据提示了与胰岛素抵抗的两个强关联。首先，与皮下脂肪组织不同，内脏脂肪细胞产生显著量的促炎症反应细胞因子如肿瘤坏死因子-α(tnf-α)、和白细胞介素-1和-6等。在许多实验模型中，这些促炎症反应细胞因子在脂肪和肌肉细胞中深切地破坏了正常胰岛素的作用，并且可以是引起全身胰岛素抵抗(患有内脏脂肪过多的人类患者中观察到的)的主要因素。类似地，犬科动物中过量的脂肪蓄积会促成低度全身性炎症。胰岛素抵抗绝大多数病例的成因依然未知。明显有遗传的成分。然而，有一些理由怀疑胰岛素抵抗与高碳水化合物饮食相关。炎症似乎也与引起胰岛素抵抗相关。
[0166]
高胰岛素血症可以描述为这样的病征：其中血液中有过量水平的循环胰岛素，也即超过大约35pmol/l低于基础或大约200pmol/l，例如在血糖挑战期间(例如ivgtt或应激)。如所提到的，其通常在犬科动物中胰岛素抵抗的情形中出现(并且可能是其所造成的后果)。
[0167]
葡萄糖耐受不良可以描述成这样的病征：其中在血糖挑战之后(例如餐后或者载荷测试(葡萄糖耐受测试)后或者在应激诱导的血液葡萄糖浓度提升之后)的应答，葡萄糖波动血糖峰值更高和/或葡萄糖波动的期间延长。
[0168]
血脂异常或高脂血是血液中存在提高的异常水平的脂质和/或脂蛋白。脂质和脂蛋白异常被认为是心血管疾病(由于胆固醇的影响)的高度可变的风险因素。甘油是肝脏和脂肪组织中的三酰基甘油(甘油三酯)和磷脂合成的前体。当身体使用脂肪作为能量来源时，甘油三酯水解之后甘油和脂肪酸被释放至血流中。甘油成分可以被肝脏转化成葡萄糖并提供能量用于细胞代谢。陪伴(如犬科)动物血液中正常水平的游离脂肪酸为50-150mg/dl的甘油三酯浓度。对于狗，正常水平的血液胆固醇为例如，130-300mg/dl。
[0169]
血脂肪素异常可以描述为这样的病征：其中脂肪组织中产生的生物学活性物质(以自分泌/旁分泌或内分泌的方式作用)的循环血浆水平发生了改变。例如瘦素的提升和/
或脂联素的降低。
[0170]
亚临床炎症或全身性炎症，特别是低度全身性炎症特征在于促炎症反应细胞因子如肿瘤坏死因子-α的表达和分泌提高和/或抗炎症细胞因子例如白细胞介素-10和/或其各自首体标的和分泌水平的降低。
[0171]
肥胖症可以描述成这样的医学病征：其中过量的体脂以及累积到可对健康有不利影响的程度，导致寿命缩短。在肥胖的犬科动物中，遇到了例如高于7(最高9)的身体状况评分(bcs)。
[0172]
要根据本发明进行治疗和/或预防的代谢紊乱包括x综合征(代谢综合征)。此种紊乱在犬科动物中可以描述成这样的多种医学紊乱的组合，其提高发展出明显的临床后果的风险，例如高血压,心肌病,肾功能障碍和/或肌肉骨骼病症。
[0173]
代谢综合征也已知为代谢综合征x(代谢综合征)、x综合征(代谢综合征)、胰岛素抵抗综合征、reaven's综合征、以及chaos(冠状动脉疾病、高血压、动脉粥样硬化、肥胖症、和休克的缩写)。
[0174]
代谢综合征复杂途径的确切机制还未完全清楚。病理生理学极其复杂并且仅仅被部分阐明。大多数患者较老、肥胖、久坐、并且有一定程度的胰岛素抵抗。最重要的因素按次序为：(1)超重和肥胖症、(2)遗传、(3)年龄、和(4)久坐的生活方式，也即，运动量低和过量卡路里摄入。
[0175]
病理生理学通常特征在于内脏脂肪，其后内脏脂肪的脂细胞(脂肪细胞)提高了tnf-α的血浆水平并改变了足多其它物质的水平(例如，脂联素、抵抗素、pai-1)。已经显示出tnf-α不仅仅引起炎症性细胞因子的产生，还可能通过与tnf-α受体相互作用而引发细胞信号，这可导致胰岛素抵抗。
[0176]
目前的第一线治疗是改变生活方式(也即，限制卡路里以及体育活动)。然而，经常会需要药物治疗。因此，本发明还提供了在犬科动物中对代谢紊乱相关临床后果的预防，例如高血压、心肌病、肾功能障碍和/或肌肉骨骼病症。
[0177]
根据本发明要进行治疗和/或预防的代谢紊乱包括胰腺炎症(胰腺炎)。此种紊乱可以急性的形式或者慢性的形式发生。慢性胰腺炎的发生可以伴有或者不伴有脂肪痢(steatorrhea)和/或糖尿病。
[0178]
胰腺炎可以由以下引起：高甘油三酯血症(特别是当甘油三酯值超过1500mg/dl(16mmol/l)时)、高血钙、病毒感染、创伤、血管炎(也即胰腺内小血管的炎症)、和自身免疫胰腺炎。
[0179]
代谢紊乱，特别是血脂异常和甘油三酯血清水平提升是发展出胰腺炎的风险因素，并且因而可以根据本发明与胰腺炎联合治疗。因此，本发明还提供了对胰腺炎的预防。
[0180]
根据本发明要进行治疗和/或预防的代谢紊乱包括脂肪组织炎症(脂膜炎)，其是特征为皮下脂肪组织炎症的一组紊乱。
[0181]
脂膜炎可以在脂肪组织(皮肤的和/或内脏的)中发生。其可以在深层皮肤活检的基础上进行诊断，并且可以进一步通过组织学特征基于炎性细胞的部位(在脂肪小叶内或者在分离它们的隔膜中)以及基于血管炎的存在与否来进行分类。脂膜炎也可以基于全身性症状的存在与否来分类。
[0182]
代谢疾病特别是胰腺炎，是发展出脂膜炎的风险因素，并且因而可以根据本发明
与脂膜炎联合治疗。因此，本发明还提供了对脂膜炎的预防。
[0183]
犬科动物
[0184]
在本文中，犬科动物可以是犬科的成员(也即犬科动物(canid))。其因而可以属于犬亚科(canini，与狼相关)或者狐亚科(vulpini，与狐狸相关)。术语犬科动物涵盖了术语狗，例如，家犬。术语家犬涵盖了术语家犬(canis lupus familiaris)和澳洲野犬(canis lupus dingo)。
[0185]
药物可接受的形式
[0186]
在本文中，所提到的本发明的sglt2抑制剂和/或其用途涵盖了所述sglt2抑制剂的药物可接受的形式，除非另有说明。
[0187]
根据本发明，可以使用所述sglt2抑制剂的任何药物可接受的形式，例如化学式(1)、优选化学式(18)、更优选化学式(2)。例如可以使用结晶形式。
[0188]
本发明也涵盖了前药形式。
[0189]
前药形式可以包括例如，酯和/或水合物。术语前药也意味着要包括当前药施用于哺乳动物对象时体内释放本发明的活性化合物的任何供价结合的载体。本发明化合物的前药可以通过修饰本发明化合物的官能团来进行制备，以这样的方式从而切割修饰(通过常规操作或者在体内)成为本发明的亲代化合物。
[0190]
用于本发明的结晶体形式包括sglt2抑制剂与一或多种氨基酸的复合物(参见例如wo 2014/016381)。用于此用途的氨基酸可以是天然氨基酸。所述氨基酸可以是成蛋白氨基酸(包括l-羟脯氨酸)、或者非成蛋白氨基酸。所述氨基酸可以是d-或l-氨基酸。在一些优选的实施方案中，所述氨基酸是脯氨酸(l-脯氨酸和/或d-脯氨酸、优选l-脯氨酸)。例如，优选1-氰基-2-(4-环丙基-苄基)-4-(β-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯(化学式(2)；化合物a)与脯氨酸(例如l-脯氨酸)的结晶复合物。
[0191]
因而，本发明公开了一或多种天然氨基酸与sglt2抑制剂之间的结晶复合物，例如，结晶复合物一或多种天然氨基酸与吡喃葡萄糖基-取代的苯衍生物sglt2抑制剂(优选化学式(1)、更优选化学式(18)或更优选化学式(2)(化合物a)的sglt2抑制剂)之间的结晶复合物。因而，本文公开了一或多种天然氨基酸与1-氰基-2-(4-环丙基-苄基)-4-(β-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯(化合物a)之间的结晶复合物。
[0192]
本文还公开了本文上文或下文定义的一或多种结晶复合物用于制备药物组合物的用途，所述药物组合物适宜用于治疗或者预防这样的疾病或病征，所述疾病或病征可以通过抑制钠依赖葡萄糖共转运蛋白sglt、优选sglt2的进行影响。本文还公开了本文上文或下文定义的一或多种结晶复合物用于制备药物组合物的用途，所述药物组合物用于抑制钠依赖葡萄糖共转运蛋白sglt2。
[0193]
一或多种天然氨基酸(例如脯氨酸、优选l-脯氨酸)与sglt2抑制剂之间的结晶复合物，是用于根据本发明的用途的sglt2抑制剂的优选药物可接受的形式。具体而言，一或多种天然氨基酸(例如脯氨酸、优选l-脯氨酸)与吡喃葡萄糖基-取代的苯衍生物sglt2抑制剂(优选化学式(1)的sglt2抑制剂、更优选化学式(18)，更优选化学式(2)(化合物a))之间的结晶复合物，是用于根据本发明的用途的sglt2抑制剂的优选药物可接受的形式。一或多种天然氨基酸(例如脯氨酸、优选l-脯氨酸)与1-氰基-2-(4-环丙基-苄基)-4-(β-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯(化合物a)之间的结晶复合物是用于根据本发明的用途的sglt2抑制剂的特
别优选的药物可接受的形式。
[0194]
本文还公开了用于制备本文上文或下文所定义的一或多种结晶复合物的方法，所述方法包括以下步骤：
[0195]
(a)在溶剂中或者溶剂混合物中制备所述sglt2抑制剂(例如吡喃葡萄糖基-取代的苯衍生物，或者化学式(1)、优选化学式(18)或更优选化学式(2)也即化合物a的sglt2抑制剂)与一或多种天然氨基酸的溶液；
[0196]
(b)存储所述溶液以从溶液中沉淀出结晶复合物；
[0197]
(c)从所述溶液中移出沉淀；和
[0198]
(d)任选将所述沉淀干燥直至去除任何过量的所述溶剂或溶剂混合物。
[0199]
某种药物活性当然是药物活性物质被批准作为药物上市之前需要满足的基本前提条件。然而，药物活性物质还有许多其它的要求需要满足。这些要求是基于与该活性物质本身的性质关联的各种参数。不受限制，这些参数的实例有活性物质在各种环境条件下的稳定性、其在药物制剂生产过程中的稳定性以及活性物质在最终药物组合物中的稳定性。用于制备药物组合物的药物活性物质应当尽可能地纯并且其在各种环境条件下长期储存的稳定性必须得到保障。这对于防止使用在实际的活性物质之外还含有例如其分解产物的药物组合物是很重要的。在此类情形中，药物中活性物质的含量可能少于所标注的。
[0200]
药物在制剂中的均匀分布是关键的因素，特别是当该药物必须要以低剂量给予时。为了确保均匀分布，可以将活性物质的颗粒大小降低至适宜的水平，例如通过研磨。由于需要尽可能地避免作为研磨(或微粉化)副作用的药物活性物质的分解，虽然在该过程中所需的条件很严苛，但是必须使活性物质在整个研磨过程中高度稳定。只有当活性物质在研磨过程中足够稳定的时候，才可能以可重复产生的方式来产生均质化的药物制剂(其总是含有指定量的活性物质)。
[0201]
用于制备期望的药物制剂的研磨过程中可能产生的另外的问题是此过程可能引起的能量输入以及对晶体表面的压力。这在某些情况下可导致多形性地变成非晶体化(amorphization)，或者导致晶格的改变。由于药物制剂的药物量需要使活性物质总是具有相同的晶体形态，因而结晶体活性物质的稳定性和性质在这一点来看也要经受严格的要求。
[0202]
药物活性物质的稳定性在药物组合物中对于确定特定药物的保存期也是很重要的；保存期是期间药物可以无任何风险进行施用的时间长度。药物在各种储存条件下于上述药物组合物中的高稳定性因而对于患者和厂商来说都是额外的优势。
[0203]
水分的吸收降低了药物活性物质的含量，这是由于摄取水分而引起的重量增加所导致的。具有吸收水分倾向的药物组合物需要在储存期间进行防潮，例如通过添加适宜的干燥剂或者通过将药物储存在防潮的环境中。因而，优选药物活性物质应当是稍微吸湿的。
[0204]
另外，良好限定的结晶形式使得能够通过重结晶来纯化药物物质。
[0205]
除了上述要求之外，应当记住的是能够改善其物理和化学稳定性的任何对药物组合物固体状态的改变，相对于相同药物稳定较差的形式而言，都是显著的优势。
[0206]
天然氨基酸与sglt2抑制剂(例如吡喃葡萄糖基-取代的苯衍生物，或者化学式(1)、或化学式(18)、或特别是化学式(2)也即化合物a的sglt2抑制剂)之间的结晶复合物满足上文提到的重要的要求。
[0207]
优选天然氨基酸以其(d)或者(l)对映体形式存在，最优选是作为(l)对映体。
[0208]
另外根据本发明的那些结晶复合物优选是在所述sglt2抑制剂(例如化学式(1)、优选化学式(18)、或者特别是化学式(2)也即化合物a)和一种天然氨基酸之间形成的，最优选是在化合物a和天然氨基酸的(l)对映体之间形成的。
[0209]
根据本发明优选的氨基酸选自：苯丙氨酸和脯氨酸、特别是(l)-脯氨酸和(l)-苯丙氨酸。
[0210]
根据优选的实施方案的结晶复合物特征在于天然氨基酸是脯氨酸、特别是(l)-脯氨酸。
[0211]
优选所述sglt2抑制剂(例如化学式(1)、优选化学式(18)、或者特别是化学式(2)也即化合物a)与天然氨基酸之间的摩尔比率范围从大约2:1至大约1:3；更优选从大约1.5:1至大约1:1.5、更优选从大约1.2:1至大约1:1.2、最优选大约1:1。下文中此种实施方案被称为是"复合物(1:1)"或者"1:1复合物"。
[0212]
因此根据本发明优选的结晶复合物是所述sglt2抑制剂(例如化学式(1)、优选化学式(18)、或者特别是化学式(2)也即化合物a)与脯氨酸之间的复合物(1:1)；特别是所述sglt2抑制剂和l-脯氨酸之间的。
[0213]
根据优选的实施方案，所述结晶复合物，特别是所述sglt2抑制剂与l-脯氨酸的1:1复合物，是水合物。
[0214]
优选结晶复合物与水的摩尔比率范围从大约1:0至1:3；更优选从大约1:0至1:2，更优选从大约1:0.5至1:1.5，最优选大约1:0.8至1:1.2，特别是大约1:1。
[0215]
所述sglt2抑制剂与脯氨酸(特别是l-脯氨酸)以及水的结晶复合物，可以通过其特征性x射线粉末衍射(xrpd)模式的手段来与其它结晶形式进行鉴别和区分。
[0216]
例如，化合物a与l-脯氨酸的结晶复合物优选由这样的x射线粉末衍射图表征：其包含位于20.28、21.14和21.64度的2θ(
±
0.1度的2θ)处的峰，其中所述x射线粉末衍射图用cukα1射线来制备。
[0217]
特别是所述x射线粉末衍射图包含位于4.99、20.28、21.14、21.64和23.23度的2θ(
±
0.1度的2θ)处的峰，其中所述x射线粉末衍射图用cukα1射线来制备。
[0218]
更具体地，所述x射线粉末衍射图包含位于4.99、17.61、17.77、20.28、21.14、21.64、23.23和27.66度的2θ(
±
0.1度的2θ)处的峰，其中所述x射线粉末衍射图用cukα1射线来制备。
[0219]
更具体地，所述x射线粉末衍射图包含位于4.99、15.12、17.61、17.77、18.17、20.28、21.14、21.64、23.23和27.66度的2θ(
±
0.1度的2θ)处的峰，其中所述x射线粉末衍射图用cukα1射线来制备。
[0220]
更具体地，所述化合物a与l-脯氨酸的结晶复合物由使用cukα1射线制备的x射线粉末衍射图表征，其包含位于表1中所含度数的2θ(
±
0.1度的2θ)处的峰。
[0221]
表1:化合物a与l-脯氨酸的结晶复合物的x射线粉末衍射图
[0222]
(只列出了2θ中最高达30
°
的峰):
[0223][0224][0225]
更具体地，所述结晶复合物由使用cukα1射线制备的x射线粉末衍射图表征，其包含位于2θ度数(
±
0.1度的2θ，如图3中所示)处的峰。
[0226]
另外，所述化合物a与l-脯氨酸的结晶复合物特征在于超过89℃的熔点，特别是范围从大约89℃至大约115℃，更优选范围从大约89℃至大约110℃(经dsc确定；评估为发作温度；加热速率10k/min)。可以观察到此结晶复合物在脱水时熔解。所获得的dsc曲线在图4中示出。
[0227]
所述化合物a与l-脯氨酸的结晶复合物通过热重分析(tg)显示出重量减轻。所观测到的重量减轻表明结晶形式含有水分(其可通过吸附而被结合和/或其可以是晶格的一部分)，也即所述结晶形式可以作为晶体水合物存在。结晶形式中的水分含量范围在0至大约10重量-％之间、特别是0至大约5重量-％之间、更优选从1.5至大约5重量-％。图2中的虚线示出了2.8至3.8％之间的水分重量减轻。从所观测的重量减轻可以估算出接近单水合物的化学计量。
[0228]
所述结晶复合物具有优越的物理化学性质，其在药物组合物的制备中是有利的。特别是结晶复合物在各种环境条件下以及在生产药物期间具有高度的物理和化学稳定性。
例如可以获得这样形状和颗粒大小的晶体，所述形状和颗粒大小特别适宜于固体药物制剂生产方法。另外，所述晶体显示出允许研磨该晶体的高度的机械稳定性。另外，所述结晶复合物并不显示出吸湿的高度倾向并且是化学稳定的，也即所述结晶复合物允许产生具有长的存储期的固体药物。另一方面，所述结晶复合物在广泛的ph范围有很高的可溶性，其对于口服施用的固体药物制剂是有利的。
[0229]
可以使用发射模式的stoe-stadi p-衍射计来记录x射线粉末衍射图，所述衍射计装配有未知感应检测器(oed)和cu-阳极作为x-光源(cukα1射线，40kv，40ma)。在表1中的值"2θ[
°
]"代表以度数表示的衍射的角度，而值代表以表示的晶格平面之间的指定距离。图3中显示的强度以cps(每秒计数)的单位给出。
[0230]
为了考虑到实验误差，上文所述的2θ值应当准确地理解为
±
0.1度的2θ、特别是
±
0.05度的2θ。也就是说，当评估给定的化合物a的晶体样品是否是依照上文所述2θ值的结晶形式时，该样品经实验观测的2θ值如果落在上文所述的特征值
±
0.1度(特别是
±
0.05度)的2θ之内，则应当认为其是等于该特征值。
[0231]
使用dsc 821(mettler toledo)通过dsc(差示扫描量热法)来确定熔点。使用tga 851(mettler toledo)通过热重分析(tg)来确定重量减轻。
[0232]
本文还公开了用于制备上文和下文所定义的结晶复合物的方法，所述方法包括以下步骤：
[0233]
(a)在溶剂或溶剂的混合物中制备如本文所述的sglt2抑制剂(例如化合物a或者任何其它本文所述的sglt2抑制剂)和一或多种天然氨基酸的溶液；
[0234]
(b)存储所述溶液以从溶液中沉淀出结晶复合物；
[0235]
(c)从所述溶液中移出沉淀；和
[0236]
(d)任选将所述沉淀干燥直至去除任何过量的所述溶剂或溶剂混合物。
[0237]
根据步骤(a)，制备了在溶剂或溶剂混合物中的所述sglt2抑制剂(例如化合物a或者任何其它本文所述的sglt2抑制剂)与所述一或多种天然氨基酸的溶液。对于所述结晶复合物，优选所述溶液是饱和的或者至少接近饱和或者甚至是过饱和的。在步骤(a)中，可以将所述sglt2抑制剂溶解在包含所述一或多种天然氨基酸的溶液中，或者可以将所述一或多种天然氨基酸溶解在包含所述sglt2抑制剂的溶液中。根据另外的程序，将所述sglt2抑制剂溶解在溶剂中或者溶剂的混合物中，以产生第一溶液，并将所述一或多种天然氨基酸溶解在溶剂中或者溶剂的混合物中，以产生第二溶液。之后将所述第一溶液和所述第二溶液组合以形成根据步骤(a)的溶液。
[0238]
优选溶液中天然氨基酸与所述sglt2抑制剂(例如化合物a或者任何其它本文所述的sglt2抑制剂)的摩尔比率对应于所要获得的结晶复合物中天然氨基酸与所述sglt2抑制剂的摩尔比率。因此优选的摩尔比率范围是从大约1:2至3:1；最优选大约1:1。
[0239]
适宜的溶剂优选选自：c
1-4-醇类、水、乙酸乙酯、乙腈、丙酮、二乙醚、四氢呋喃、以及两种或更多种这些溶剂的混合物。
[0240]
更优选的溶剂选自：甲醇、乙醇、异丙醇、水、以及两种或更多种这些溶剂的混合物，特别是一或多种所述有机溶剂与水的混合物。
[0241]
特别优选的溶剂选自：乙醇、异丙醇、水、以及乙醇和/或异丙醇与水的混合物。
[0242]
对于采用水和一或多种c
1-4-醇类(特别是甲醇、乙醇和/或异丙醇，最优选乙醇)的混合物的情形，水:烷醇的优选体积比例范围从大约99:1至1:99；更优选从大约50:1至1:80；更优选从大约10:1至1:60。
[0243]
优选所述步骤(a)在大约室温(约20℃)进行，或者在提升的室温(最高达到大约所使用溶剂或溶剂混合物的沸点)进行。
[0244]
根据优选的实施方案，所述sglt2抑制剂(例如化合物a或本文所述的任何其它sglt2抑制剂)的和/或所述一或多种天然氨基酸的和/或所述溶剂和溶剂混合物的起始材料含有一定量的h2o，其至少是形成所述sglt2抑制剂的水合物所需的量；特别是每摩尔sglt2抑制剂至少1mol、优选至少1.5mol的水。更优选水的量为每摩尔sglt2抑制剂至少2mol的水。这意味着作为起始材料的所述sglt2抑制剂(例如化合物a)、或者所述一或多种天然氨基酸、或者所述溶剂或溶剂混合物、或者所述化合物和/或溶剂组合含有上文所述的量的h2o。例如在步骤(a)中，如果所述sglt2抑制剂(例如化合物a)或所述天然氨基酸的起始材料确实含有上述指定的足够的水分，则溶剂中的水分就不是必须的。
[0245]
为了降低根据本发明的结晶复合物在溶液中的溶解度，在步骤(a)中和/或在步骤(b)中，可以添加一或多种抗溶剂(antisolvent)，优选是在步骤(a)期间或者至少是在步骤(b)的开始。水是适宜的抗溶剂的实例。优选对抗溶剂的量进行选择，以获得所述结晶复合物过饱和的或者饱和的溶液。
[0246]
在步骤(b)中，将所述溶液储存足以获得沉淀(也即结晶复合物)的时间。步骤(b)中溶液的温度大约与步骤(a)中相同或者偏低。在储存期间，优选将溶液温度降低，优选降低至20℃至0℃的范围或者甚至更低。步骤(b)的进行可以有或者没有搅拌。如本领域技术人员所知的那样，通过步骤(b)中时间段和温度的差异，可以控制所获得的晶体的大小、形状和质量。另外，可以通过本领域已知的方法来诱导结晶，例如通过机械手段如使用例如玻璃棒来刮或擦反应器皿的接触表面。任选(接近)饱和的或过饱和的溶液可以接种晶种(seed crystal)。
[0247]
在步骤(c)中，可以通过已知的方法从沉淀去除溶剂，如例如过滤、抽滤、倾滤(decantation)或离心。
[0248]
在步骤(d)中，通过本领域技术人员已知的方法从沉淀去除过量的溶剂，如例如通过降低溶剂的局部压力(优选在真空中)，和/或通过升温至超过约20℃、优选在低于100℃的温度范围内、更优选低于85℃。
[0249]
化合物a可以通过国际申请wo 2007/128749中具体和/或整体描述或引用的方法来合成，其以整体援引加入本文，和/或通过下文中公开的实施例中的方法来合成。也可以如wo 2007/128749中所述研究化合物a的生物学性质。
[0250]
本文中所述的结晶复合物优选以基本上纯的形式被用作药物活性物质，也就是说，基本上没有其它结晶形式的所述sglt2抑制剂(例如化合物a)。尽管如此，本发明也包括与其它结晶形式或多种结晶形式混合的结晶复合物。如果所述药物活性物质是结晶形式的混合物，则优选该物质至少占50％-重量、更优选至少90％-重量、最优选至少95％-重量的本文所述结晶复合物。
[0251]
鉴于其抑制sglt活性的能力，根据本发明的结晶复合物适宜用于治疗和/或预防这样的病征或疾病的用途，所述病征或疾病可以受到sglt活性(特别是sglt-2活性)抑制的
影响，特别是如本文所述的代谢紊乱。根据本发明的结晶复合物还适宜于制备用于治疗和/或预防这样的病征或疾病的药物组合物，所述病征或疾病可以受到sglt活性(特别是sglt-2活性)抑制的影响，特别是如本文所述的代谢紊乱。如本文所述的结晶复合物(特别是化合物a与天然氨基酸例如脯氨酸特别是l-脯氨酸的)还适宜用于治疗犬科动物的用途。
[0252]
药物组合物和制剂
[0253]
用于本发明的用途的一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)可以被制备为药物组合物。其可以被制备为固体或液体制剂。在每个情形中，其优选被制备用于口服施用，优选以液体形式用于口服施用。然而，所述一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)还可以被制备以用于，例如不经肠胃施用。
[0254]
固体制剂包括片剂、颗粒形式、和其它固体形式如栓剂。在固体制剂中，优选片剂和颗粒形式。
[0255]
本发明含义之内的药物组合物可以包含根据本发明的一或多种sglt2抑制剂(优选化合物a)以及一或多种赋形剂。可以使用允许、或支持所需医疗效果的任何赋形剂。此类赋形剂是本领域技术人员可得的。可用的赋形剂例如有抗粘附剂(用于降低粉末(颗粒)与冲压界面之间的粘附，并由此防止粘附至片剂的冲压)、粘合剂(将组分粘合在一起的溶液粘合剂或者干粘合剂)、涂层(以保护片剂组分不受空气中的水分破坏以及使大的或者味道不好的片剂更易于吞咽)、崩解剂(以使片剂在稀释后分解)、填充剂、稀释剂、调味剂、颜料、助流剂(流调节剂-通过减少颗粒间摩擦与凝聚来促进粉末流动)、润滑剂(以防止组分凝结在一起及粘附至片剂冲压或胶囊填充机)、防腐剂、吸附剂、甜味剂等。
[0256]
根据本发明的制剂，例如固体制剂，可以包含选自以下的载体和/或崩解剂：糖和糖醇，例如甘露醇，乳糖，淀粉，纤维素，微晶纤维素和纤维素衍生物，例如甲基纤维素等。
[0257]
适宜于犬科动物的制剂的制备程序是本领域技术人员已知的，并且对于固体制剂包括，例如直接压缩、干法制粒和湿法制粒。在直接压缩过程中，将活性成分和所有其它的赋形剂一起置于压缩装置中直接用于从此材料压出片剂。所得的片剂可以任选在之后进行涂敷，以便对其进行物理和/或化学防护，例如用本领域已知的材料。
[0258]
用于施用的单位(例如单一液体剂量或固体制剂单位如片剂)可以包含0.01mg至10mg、或例如0.3mg至1mg、1mg至3mg、3mg至10mg；或者5至2500mg、或例如5至2000mg、5mg至1500mg、10mg至1500mg、10mg至1000mg、或10-500mg的sglt2抑制剂用于本发明的用途。如本领域技术人员会理解的那样，用于施用于犬科动物的固体制剂、或本文公开的任何制剂中所述sglt2抑制剂的含量，可以提高或者降低以与要治疗的犬科动物的体重成适宜的比例。
[0259]
在一个实施方案中用于本发明用途的药物组合物被设计为用于口服或不经肠胃施用，优选用于口服施用。特别是口服施用可由赋形剂进行改进，其为患者改变药物组合物的气味和/或触觉性质，例如如所述的那样。
[0260]
当所述用于本发明的用途的sglt2抑制剂配制为用于口服施用时，优选赋形剂会赋予性质，例如使得制剂适宜施用于犬科动物的适口性和/或可咀嚼性。
[0261]
也优选液体制剂。液体制剂可以是，例如溶液、浆或或悬液。它们可以直接施用于犬科动物，或者可以与犬科动物的食物和/或饮料(例如饮用水等)混合。液体制剂的一种优势(类似于颗粒形式的制剂)在于，此种给药形式允许精准的剂量。例如，所述sglt2抑制剂可以与犬科动物的体重精准地成比例给药。液体制剂通常的成分是本领域技术人员已知
iv抑制剂组合使用，也即，不用dpp-iv抑制剂治疗犬科动物。
[0271]
在一些实施方案中，所述sglt2抑制剂被用作单一疗法，也即独立疗法，也即没有其它药物施用于犬科动物以用于治疗或预防同一代谢紊乱，也即所述sglt2抑制剂所针对而进行施用的代谢紊乱。例如，在施用所述sglt2抑制剂之前或之后的至少2、3、或4周的时间段内，没有其它药物施用于犬科动物以用于治疗或预防同一代谢紊乱。
[0272]
附图简述
[0273]
图1：在小猎犬(beagle dog)中将化合物a单次口服给药之后的尿液葡萄糖排泄。在施用后0-24h和24-48h对尿液进行个别取样。在24h后，将通过将导尿管插入膀胱而获得的尿液加入至自由取样的尿液。在对照中以及低剂量(0.01mg/kg)中，在尿液中几乎没有葡萄糖可以检测到。条之上所示出的p-值是针对对照(*，p《0.05)。
[0274]
图2：在施用化合物a之后的0-24小时的时间段中，尿液葡萄糖排泄的s形剂量反应，如所示。在小猎犬中由化合物a所致的葡萄糖排泄的ed50为0.1mg/kg(95％ci 0.02-0.52mg/kg)。
[0275]
图3：显示化合物a与l-脯氨酸的结晶复合物(1:1)的代表性批次的x射线粉末衍射图。
[0276]
图4：显示化合物a与l-脯氨酸的结晶复合物(1:1)的代表性批次的dsc/tg图。
实施例
[0277]
以下实施例显示了根据本发明在犬科动物中使用一或多种sglt2抑制剂，对于血糖控制和/或胰岛素抵抗等的有益治疗作用。这些实施例是要更详细地说明本发明而不是要限制权利要求的范围。
[0278]
实施例1:在狗中单次口服给药的化合物a的药代动力学(pk)
[0279]
将化合物a施用于节食过夜的狗。各个组(每组n＝4)接受了单次施用的：含有1mg/kg和10mg/kg剂量的sglt2抑制剂化合物a的口服载剂(di水)、或者含有1mg/kg剂量的sglt2抑制剂化合物a的静脉注射载剂(盐水)。进行pk测试直至单次施用化合物a或其载剂之后第3天。
[0280]
表2:药代动力学数据，单次给药(静脉注射1mg/kg,口服1和10mg/kg)
[0281]
参数 静脉注射1mg/kg口服1mg/kg口服10mg/kgt
max
[小时]平均 1,90,6c
max
[nmol/l]平均 484551525cl[ml/min/kg]平均0,63
ꢀꢀ
cl/f[ml/min/kg]平均 0,640,71f[％]平均 10192auc0→
∞
[nmol
·
h/l]平均6702567675616750t
1/2
[小时]平均13,413,914,5 [0282]
实施例2:在狗中单次给药后化合物a对于尿液和血液葡萄糖的作用
[0283]
小猎犬节食过夜并且接受了单次口服施用化合物a(以0mg/kg体重、0.01mg/kg体重、0.1mg/kg体重、或1mg/kg体重的剂量)(每组n＝3per group)，随后是用水清洗(1ml/kg体重)。
[0284]
用少量提及的1％(w/v)水成polysorbat 80(tween80,polyoxyethylene sorbitan monooleate,icn biomedicals)溶液将化合物a湿润，接着再通过缓慢添加大体积的0.5％(w/v)的水成羟乙基纤维素(natrosol 250hx,boehringer ingelheim)溶液并在室温搅拌大约15分钟将其溶解。polysorbat80的最终浓度为0.015％。以2ml/kg体重的体积应用化合物a。
[0285]
将动物个别地养在代谢笼中并在施用后2h接受了食物。在实验期间它们可以自由地接触到水。在施用后的时间段0-8h、8-24h、24-32h、和32-48h收集了尿液。将导尿管(eickemeyer)插入至膀胱内以完全收集24h的尿液。将此尿液与在8-24h的时间段中排泄的尿液混合。在取样前已将5ml体积的10％叠氮化钠盐水溶液添加至每个尿液收集管。确定了尿液的体积并将样品冷冻以用于随后的葡萄糖浓度测定。
[0286]
在实验期间，从前腿静脉取血液样品。在施用载剂或化合物a之前、以及随后在给药后于0.25h、0.5h、1h、2h、4h、8h、24h、32h、和48h的时间点将血液收集在edta管中。收集血液后制备了血浆并冷冻以用于测定葡萄糖浓度。
[0287]
·
在两个较高剂量于施用后8h出现尿液葡萄糖浓度和体积的明显提高(图1)。
[0288]
·
化合物a的各剂量在狗中均未诱导低血糖、或者改变血液葡萄糖水平(与正常参考值相比)。
[0289]
对于尿液葡萄糖排泄，由此估计ed50为0.1mg/kg(图2)。
[0290]
实施例3:在狗中治疗胰岛素依赖性糖尿病
[0291]
治疗患有胰岛素依赖性糖尿病的狗
[0292]
胰岛素与根据本发明的化合物a或者根据本发明的活性物质的组合，在对葡萄糖代谢状况产生急性改善之外，还在长期防止代谢状况恶化并且降低治疗糖尿病犬科动物所需的胰岛素剂量。如果使用本发明的药物组合物对狗进行较短期的或者较长期的(例如2-4周或者3个月至1年)治疗，并且与治疗前的代谢状况或者与只用例如胰岛素治疗的狗相比较，则可以观测到这一点。如果每日平均血液葡萄糖和果糖胺水平与治疗前水平相比降低了，则有了治疗成功的证据。如果与使用其它药物治疗的狗相比，用本发明的药物组合物治疗的狗有显著更低的百分比经历葡萄糖代谢状态的瞬时恶化(例如高血糖或低血糖)，则可以获得其它的治疗成功的证据。
[0293]
实施例4:在患有间情期/妊娠期糖尿病的雌性狗中胰岛素抵抗性糖尿病的改善
[0294]
胰岛素抵抗性糖尿病是完整的雌性犬科动物中常发现的糖尿病形式。用化合物a治疗可以提供用于防止转变为明显糖尿病的目的。在较短或较长时间段(例如2-4周或1-2年)的研究中，通过在研究期间月经周期的所有不同阶段和/或在研究的治疗期结束后，测定节食葡萄糖值和/或进餐后或者负载测试(静脉注射葡萄糖耐受测试或者给定进食后的食物耐受测试)后的葡萄糖值，并将它们与研究开始前的值和/或安慰剂组的值比较，来检验治疗的成功。另外，在治疗之前和之后可以测定果糖胺值，并与初始值和/或用其它药物或安慰剂治疗的狗比较。节食或非节食葡萄糖和/或果糖胺水平的显著降低，证明了在具有间情期/妊娠期糖尿病史的雌性狗中，对胰岛素抵抗糖尿病治疗的效力以及预防明显糖尿病的效力。
[0295]
实施例5:高血糖的治疗
[0296]
在临床研究中，在患有进行了不同时间长度(例如2周至12个月)的代谢紊乱的狗
中，使用基准血液葡萄糖和/或血液果糖胺的测量来检查治疗的成功。
[0297]
血糖控制的改善可以通过建立日间血液葡萄糖曲线来进一步确定，例如9或24小时血液葡萄糖曲线(在用药之前开始并且在用药后重复测量)。
[0298]
在研究期间或者在研究结尾，与初始值或者相比与安慰剂组或接受不同疗法的组相比，这些值的显著降低证明了本发明的药物组合物在狗中降低高血糖的效力。
[0299]
或者，可以在接受持续葡萄糖灌注(高血糖钳夹)的狗中，显示化合物a对于高血糖的作用。高血糖的正常化可以通过与以下的进行比较来评估：无治疗和/或与胰岛素组合治疗和/或仅用胰岛素治疗。
[0300]
实施例6:高血糖相关并发症的预防或治疗
[0301]
用本发明的化合物a或者本发明的活性物质组合来对高血糖的或者胰岛素依赖的或者胰岛素抵抗的糖尿病狗进行治疗，预防或者减少了高血糖相关并发症，例如白内障形成。
[0302]
治疗成功的证据是与用其它抗糖尿病药物或者安慰剂治疗的狗进行比较。例如通过眼科眼睛检查白内障形成的发展或进展或退化来确定治疗的成功。和/或可以测定白内障发展的时间和/或白内障成熟的进展，并且与使用其它抗糖尿病药物或安慰剂治疗的狗进行比较。
[0303]
实施例7：胰岛素抵抗的治疗
[0304]
在临床研究中，在患有进行了不同时间长度(例如4周至12个月)的胰岛素抵抗的狗中，使用基准血液葡萄糖、血液果糖胺和血液胰岛素和/或c-肽水平的测量以及与个体狗中参数的相应关系来检查治疗的成功。
[0305]
还有研究期间或者研究结束时，在餐后或者负载测试(葡萄糖耐受测试或者胰岛素耐受测试)后，葡萄糖和血液脂质(例如nefa)和/或胰岛素值，可以与研究开始前的值比较/或与胰岛素抗性狗(经其它药物或者安慰剂治疗)的值进行比较。
[0306]
实施例8：狗中糖尿病前期的治疗
[0307]
根据本发明的sglt2抑制在治疗糖尿病前期(由节食葡萄糖和/或葡萄糖耐受不良和/或胰岛素抵抗所表征)中的效力可以用临床研究进行测试。在较短或较长时间段(例如2-4周或1-2年)的研究中，通过在研究的治疗期结束后，测定节食葡萄糖值和/或进餐后或者负载测试(静脉注射葡萄糖耐受测试或者给定进食后的食物耐受测试或者胰岛素耐受测试)后的葡萄糖值，并将它们与研究开始前的值和/或安慰剂组的值比较，来检验治疗的成功。另外，在治疗之前和之后可以测定果糖胺值，并与初始值和/或安慰剂值比较。节食或非节食葡萄糖和/或果糖胺水平的显著降低证明了对糖尿病前期治疗的效力。
[0308]
实施例9：对体重、身体成分、血脂异常和血脂肪素异常的作用
[0309]
对于患有代谢紊乱的狗，如肥胖症、血脂异常、血脂肪素异常、肝脂沉积、亚临床炎症或全身性炎症(特别是低度全身性炎症，其还包含)、以及相关紊乱如x综合征(代谢综合征)、和/或胰岛素抵抗、高血糖、高胰岛素血症、葡萄糖耐受不良进行治疗，也寻求这样的目标：在犬科动物中防止其转变为或者延缓其进展为例如代谢紊乱临床明显的后果——例如高血压、心肌病、肾功能障碍和/或肌肉骨骼病症。
[0310]
可以在比较临床研究中调研治疗的效力，在所述比较临床研究中，对狗进行长期(例如3-12个月)的治疗：使用化合物a或者活性物质的组合或者安慰剂或者使用非药物疗
法(例如饮食)或者其它药物。在治疗之前、期间和结束时，可以测定参数：体重(尺度)和身体成分，例如通过双能x线吸收计量法。在血浆中或血清中，可以测量脂质(例如甘油三脂、胆固醇、nefa)和脂肪素(例如脂联蛋白、瘦素)谱以及炎症标记物(例如c-反应蛋白、单核细胞趋化蛋白-1)。可以测定胰岛素和葡萄糖水平的基底以及例如负载测试后进行测定。在血液和尿液样品中可确定肾脏参数(例如尿素、肌酸酐、尿白蛋白)。另外，可以通过超声心动图超声多普勒来调研血压和/或还有心肌病的证据。可以用例如活性、跛足、和疼痛分数来对肌肉骨骼病症(例如骨关节炎)的改善进行定量。
[0311]
实施例10：1-氰基-2-(4-环丙基-苄基)-4-(β-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯(化合物a)的制备
[0312]
如下合成的实施例用于说明制备1-氰基-2-(4-环丙基-苄基)-4-(β-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯(化合物a)的方法。还描述了制备其与l-脯氨酸的结晶复合物的方法。其应视为仅仅是通过实例的方式来描述可能的方法，而不是限制本发明的范围。术语"室温"和"环境温度"可互换使用并且表示大约20℃的温度。使用了以下缩写：
[0313]
dmf二甲基甲酰胺
[0314]
nmp n-甲基-2-吡咯烷酮
[0315]
thf四氢呋喃
[0316]
4-溴-3-羟甲基-1-碘-苯的制备
[0317][0318]
将乙二酰氯(13.0ml)添加至2-溴-5-碘-苯甲酸(49.5g)于ch2cl2(200ml)中的冰冷溶液中。添加dmf(0.2ml)并在室温搅拌溶液6h。接着，在减压下将溶液浓缩并将残余溶于thf(100ml)。在冰浴中将所得的溶液冷却并且添加libh4(3.4g)部分。移除冷浴并在室温将混合物搅拌1h。用thf稀释反应混合物并用0.1m盐酸处理。接着，分离有机层并用乙酸乙酯萃取水层。将混合的有机层干燥(na2so4)并在减压下让溶剂蒸发以给出粗产物。
[0319]
产率：47.0g(99％理论值)
[0320]
4-溴-3-氯甲基-1-碘-苯的制备
[0321][0322]
将亚硫酰氯(13ml)添加至二氯甲烷(100ml)中含有dmf(0.1ml)的4-溴-3-羟甲基-1-碘-苯(47.0g)的悬液中。在环境温度将混合物搅拌3h。接着，在减压下将溶剂和过量的实际去除。用甲醇将残余粉碎并干燥。
[0323]
产率：41.0g(82％理论值)
[0324]
4-溴-1-碘-3-苯氧甲基-苯的制备
[0325][0326]
将溶于4m koh溶液(60ml)的苯酚(13g)添加至溶于丙酮(50ml)中的4-溴-3-氯甲基-1-碘-苯(41.0g)。添加nai(0.5g)并在50℃将所得的溶液搅拌过夜。接着，添加水并用乙酸乙酯萃取所得的混合物。将混合的萃取物干燥(na2so4)并在减压下将溶剂蒸发。通过硅胶上的层析来纯化残余(环己烷/乙酸乙酯19:1)。
[0327]
产率：38.0g(79％理论值)
[0328]
1-溴-4-(1-甲氧基-d-吡喃葡萄糖-1-基)-2-(苯氧甲基)-苯的制备
[0329][0330]
将iprmgcl于thf(11ml)中的2m溶液添加至悬浮于thf(11ml)中的干licl(0.47g)。将混合物在室温搅拌直至licl溶解。将此溶液逐滴添加至4-溴-1-碘-3-苯氧甲基-苯(8.0g)于四氢呋喃(40ml)中氩环境下冷却至-60℃的溶液。将溶液升温至-40℃并接着添加四氢呋喃(5ml)中的2,3,4,6-四-o-(三甲基硅基)-d-吡喃酮葡萄糖(10.7g，90％纯)。在冷浴中将所得的溶液升温至-5℃并在此温度再搅拌另外的30min。添加水成nh4cl溶液并用乙酸乙酯萃取所得的混合物。在硫酸钠上干燥混合的有机萃取物并在减压下去除溶剂。将残余溶于甲醇(80ml)并用甲基磺酸处理(0.6ml)以唯一地产生更稳定的端基异构体。在将溶液于35-40℃搅拌过夜后，用固体nahco3将溶液中和并在减压下去除甲醇。用水成nahco3溶液稀释剩余的并用乙酸乙酯萃取所得的混合物。混合的萃取物在硫酸钠上干燥并将溶剂蒸发以产生粗产物(提交用于还原而无进一步的纯化)。
[0331]
产率：7.8g(93％理论值)
[0332]
1-溴-4-(2,3,4,6-四-o-乙酰基-d-吡喃葡萄糖-1-基)-2-(苯氧甲基)-苯的制备
[0333][0334]
将三氟化硼二乙醚化物(4.9ml)添加至1-溴-4-(1-甲氧基-d-吡喃葡萄糖-1-基)-2-(苯氧甲基)-苯(8.7g)和三乙基硅烷(9.1ml)于二氯甲烷(35ml)和乙腈(50ml)中冷却至-20℃的溶液中，其中添加的速率使得温度保持在-10℃。在1.5h的时间段将所得的溶液升温至0℃并接着用水成碳酸氢钠溶液处理。将所得的混合物搅拌0.5h，去除有机溶剂，并用乙酸乙酯萃取残余。在硫酸钠上干燥混合的有机层，并去除溶剂。在二氯甲烷(50ml)和吡啶(9.4ml)中提取残余，接连将乙酸酐(9.3ml)和4-二甲氨基吡啶(0.5g)添加至溶液。将溶液在环境温度搅拌1.5h并接着用二氯甲烷稀释。用1m盐酸将此溶液洗涤两次并在硫酸钠上干燥。在去除溶剂后，将残余从乙醇重结晶以将产物布置为无色固体。
[0335]
产率：6.78g(60％理论值)
[0336]
质谱(esi
+
):m/z＝610/612(br)[m+nh4]
+
[0337]
2-(苯氧甲基)-4-(2,3,4,6-四-o-乙酰基-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯甲氰的制备
[0338][0339]
用氩冲刷装有氰化锌(1.0g)、锌(30mg)、pd2(二亚苄基丙酮)3*chcl3(141mg)和三-叔-丁基磷鎓四氟硼酸(111mg)的烧瓶。接着添加1-溴-4-(2,3,4,6-四-o-乙酰基-d-吡喃葡萄糖-1-基)-2-(苯氧甲基)-苯(5.4g)在nmp(12ml)中的溶液，并将所得的混合物在室温搅拌18h。用乙酸乙酯稀释之后，过滤混合物，并用水成碳酸氢钠溶液洗涤过滤物。干燥有机相(硫酸钠)并去除溶剂。将残余从乙醇重结晶。
[0340]
产率：4.10g(84％理论值)
[0341]
质谱(esi
+
):m/z＝557[m+nh4]
+
[0342]
或者，从1-溴-4-(2,3,4,6-四-o-乙酰基-d-吡喃葡萄糖-1-基)-2-(苯氧甲基)-苯起始用氰化铜(i)(2等价物)在nmp中于210℃合成上述的化合物。
[0343]
2-溴甲基-4-(2,3,4,6-四-o-乙酰基-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯甲氰的制备
[0344][0345]
将氢溴酸于乙酸(15ml)中33％的溶液添加至2-苯氧基甲基-4-(2,3,4,6-四-o-乙酰基-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯甲氰(0.71g)和乙酸酐(0.12ml)于乙酸(10ml)中的溶液中。将所得的溶液在55℃搅拌6h并继而在冰浴中冷却。用冰冷的水成碳酸钾溶液将反应混合物中和，并用乙酸乙酯萃取所得的混合物。将混合的有机萃取物在硫酸钠上干燥，并在减压下去除溶剂。在乙酸乙酯/环己烷(1:5)中提取残余，并通过过滤分离沉淀以及在50℃干燥以提供纯产物。
[0346]
产率：0.52g(75％理论值)
[0347]
质谱(esi
+
):m/z＝543/545(br)[m+nh4]
+
[0348]
4-环丙基-苯基硼酸的制备
[0349][0350]
将正丁基锂于己烷(14.5ml)中的2.5m溶液逐滴添加至溶解于thf(14ml)和甲苯(50ml)中的1-溴-4-环丙基-苯(5.92g)中，并冷却至-70℃。将所得的溶液在-70℃搅拌30min，之后添加硼酸三异丙酯(8.5ml)。将溶液升温至-20℃并接着用4m的水成盐酸(15.5ml)处理。将反应混合物进一步升温至室温，并接着分离有机相。用乙酸乙酯萃取水相，并将混合的有机相干燥(硫酸钠)。将溶剂蒸发，并用乙醚和环己烷的混合物来洗涤残
余，以给出无色固体的产物。
[0351]
产率：2.92g(60％理论值)
[0352]
质谱(esi-):m/z＝207(cl)[m+hcoo]-[0353]
1-氰基-2-(4-环丙基-苄基)-4-(β-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯的制备
[0354][0355]
将ar填充的烧瓶装入2-溴甲基-4-(2,3,4,6-四-o-乙酰基-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯甲氰(1.60g)、4-环丙基-苯基硼酸(1.0g)、碳酸钾(1.85g)以及丙酮和水的脱气3:1混合物(22ml)。将混合物在室温搅拌5min，之后在冰浴中冷却。接着添加二氯化钯(30mg)，并将反应混合物在环境温度搅拌16h。接着用卤水稀释混合物并用乙酸乙酯萃取。混合的萃取物在硫酸钠上干燥并在减压下去除溶剂。将残余溶于甲醇(20ml)并用4m的水成氢氧化钾溶液(4ml)处理。将所得的溶液在环境温度搅拌1h，并接着用1m盐酸中和。将甲醇蒸发，并用卤水稀释残余以及用乙酸乙酯萃取。将手机的有机萃取物在硫酸钠上干燥，并去除溶剂。将残余在硅胶上层析(二氯甲烷/甲醇1:0-》8:1)。
[0356]
产率：0.91g(76％理论值)
[0357]
质谱(esi
+
):m/z＝413[m+nh4]
+
[0358]
化合物a与l-脯氨酸的结晶复合物(1:1)的制备
[0359]
将溶于2.1ml的乙醇与水的混合物(体积比率10:1)的l-脯氨酸(0.34g)添加至1-氰基-2-(4-环丙基-苄基)-4-(β-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯(1.17g，如上文所述获得)溶于2ml乙醇的溶液。使所得的溶液处于环境温度。大约16h后，通过过滤将结晶复合物分离为白色晶体。如果必要的话，可以用玻璃棒或金属刮刀刮擦来起始结晶，或者例如通过接种晶种来起始结晶。通过将晶体储存在稍微升高的温度(30至50℃)在真空下大约4h以去除残余溶剂，产生1.27g的晶体1:1混合物(l-脯氨与1-氰基-2-(4-环丙基-苄基)-4-(β-d-吡喃葡萄糖-1-基)-苯。
[0360]
获得了若干批次的上述制剂的结晶复合物。x射线粉末衍射图一致。通过dsc确定了熔点并评估为发作温度。熔点的实例有大约89℃、90℃、92℃、101℃和110℃。表1中所含的以及图11中所示的x射线粉末衍射图、以及图12中的dsc和tg图对应于大约90℃熔点的批次。
[0361]
上文表1中给出了化合物a与l-脯氨酸的结晶复合物的x射线粉末衍射图(2θ中最高达30
°
的峰)。
[0362]
实施例11：制剂
[0363]
描述了一些制剂的实例，其中术语"活性物质"表示sglt2抑制剂或者其药物可接受的形式，例如前药或结晶形式，用于本发明的用途。在组合了一种或另外的活性物质的情形中，术语"活性物质"也可以包括另外的活性物质。
[0364]
含有100mg活性物质的片剂
[0365]
成分:
[0366][0367]
制备方法:
[0368]
将活性物质、乳糖和淀粉混合在一起，并用聚乙烯吡咯烷酮的水成溶液均匀湿润。在将湿润组合物进行筛选(2.0mm的网眼大小)并在齿条式干燥器中于50℃进行干燥之后，再次将其进行筛选(1.5mm的网眼大小)，并添加润滑剂。压缩完成的混合物以形成片剂。
[0369]
片剂重量：220mg
[0370]
直径：10mm，双平面，两侧有小平面并且一侧有槽口。
[0371]
含有150mg活性物质的片剂
[0372]
成分:
[0373][0374]
制备:
[0375]
用20％的水成聚乙烯吡咯烷酮溶液将混有乳糖、玉米淀粉和硅石的活性物质湿润，并通过1.5mm网眼大小的筛子。将45℃干燥的颗粒再次通过相同的筛子，并与指定量的硬脂酸镁混合。从混合物压出片剂。
[0376]
片剂的重量:300mg
[0377]
模具(die)：10mm，平的
[0378]
含有150mg活性物质的硬明胶胶囊
[0379]
成分:
[0380][0381]
制备:
[0382]
将活性物质与赋形剂混合，通过网眼大小0.75mm的筛子并使用适宜的装置进行均匀混合。完成的混合物封装至大小1的硬明胶胶囊中。
[0383]
胶囊填料:大约320mg
[0384]
胶囊壳:大小1的硬明胶胶囊.
[0385]
含有150mg活性物质的栓剂
[0386]
成分:
[0387]
1栓剂含有:
[0388][0389]
制备:
[0390]
在栓剂物质熔解后，活性物质均匀地分布在其中，并且将熔解物倾倒至冷却的模子中。
[0391]
含有10mg活性物质的安瓿
[0392]
成分:
[0393]
活性物质
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
10.0mg
[0394]
0.01n盐酸/nacl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
适量
[0395]
双蒸水
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
加至2.0ml
[0396]
制备:
[0397]
将所述活性物质溶解在必要量的0.01n hcl中，用食盐制成等渗，过滤灭菌并转移至2ml的安瓿。
[0398]
含有50mg活性物质的安瓿
[0399]
成分:
[0400]
活性物质
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
50.0mg
[0401]
0.01n盐酸/nacl
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
适量
[0402]
双蒸水
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
加至10.0ml
[0403]
制备:
[0404]
将所述活性物质溶解在必要量的0.01n hcl中，用食盐制成等渗，过滤灭菌并转移至10ml的安瓿。
[0405]
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(41)wo 2011/039107
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