用于实现Prime-boost免疫程序的新型冠状病毒疫苗试剂盒及其制备方法和应用与流程

本发明涉及疫苗，尤其是涉及一种用于实现prime-boost免疫程序的新型冠状病毒疫苗试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术：

1、冠状病毒属于冠状病毒科(coronaviridae)，包括α-冠状病毒、β-冠状病毒、γ-冠状病毒和δ-冠状病毒四个属，此次爆发的新型冠状病毒(severe acute respiratorysyndrome coronavirus 2，sars-cov-2)属于β属的冠状病毒，主要经呼吸道飞沫传播，也可通过接触传播引起肺炎(novel coronavirus-infected pneumonia，ncp)，人群普遍易感。

2、2019年12月以来，sars-cov-2在中国和世界各地相继发生大规模爆发，2021年底将一新型变异株b.1.1.529命名为omicron，疫苗接种后omicron感染者的常见症状依次是：咳嗽、流涕、疲劳、咽痛和头痛，现有数据表明omicron突变株传染性极强，对疫苗的免疫逃逸非常明显，真实世界中发现，omicron感染者的症状确实较之前轻，但是目前没有证据比delta突变株感染者更轻。新型冠状病毒至今仍然严重威胁人类健康，研制有效的预防性疫苗是除了物理隔离以外缓解疫情的有效手段。核酸疫苗或者dna疫苗被称为“第三代疫苗”，其具有全方位诱导体液及细胞免疫应答，能够起到良好的预防疾病效果的优点；还具有生产工艺简单、保存稳定性好且无须冷链运输，适宜于大规模应用及分发的优点。

3、虽然目前已被条件性批准的紧急授权使用的新冠疫苗有mrna疫苗，腺病毒载体疫苗，蛋白疫苗、灭活疫苗等；但由于各种已上市疫苗存在着如诱导的体液免疫对突变株的中和效果下降、不能同时激发强的细胞免疫及体液免疫等问题，因此亟需结合不同形式疫苗联合免疫来克服上述不足之处。

4、有鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的第一目的在于提供一种用于实现prime-boost免疫程序的新型冠状病毒疫苗试剂盒，以缓解单一类型疫苗诱导的体液免疫对突变株的中和效果下降、不能同时激发强的细胞免疫的技术问题。

2、本发明的第二目的在于提供上述新型冠状病毒疫苗试剂盒的制备方法及上述新型冠状病毒疫苗试剂盒的应用。

3、为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：

4、根据本发明的一个方面，本发明提供了一种用于实现prime-boost免疫程序的新型冠状病毒疫苗试剂盒，包含至少一个第一容器和至少一个第二容器；

5、所述第一容器中含有新型冠状病毒dna疫苗，所述新型冠状病毒dna疫苗包含编码新型冠状病毒刺突蛋白抗原的核酸片段：所述新型冠状病毒刺突蛋白抗原的氨基酸序列如seq_1所示，或与seq_1所示序列具有70％以上的一致性；

6、所述第二容器中含有新型冠状病毒重组蛋白疫苗，所述新型冠状病毒重组蛋白疫苗含有新型冠状病毒抗原或其抗原表位，所述新型冠状病毒抗原或其抗原表位的氨基酸序列部分或全部来源于新型冠状病毒的表面刺突蛋白的受体结合区。

7、根据本发明的另一个方面，本发明还提供了新型冠状病毒疫苗试剂盒的制备方法，包括：

8、(a)制备新型冠状病毒dna疫苗并独立包装至所述第一容器；

9、(b)制备新型冠状病毒重组蛋白疫苗并独立包装至所述第二容器；

10、(c)将所述第一容器和所述第二容器组装为试剂盒。

11、根据本发明的另一个方面，本发明还提供了上述新型冠状病毒疫苗试剂盒在制备预防和/或治疗新型冠状病毒感染和/或新型冠状病毒感染引发的疾病covid-19的药物或产品中的应用；

12、根据本发明的另一个方面，本发明还提供一种预防和/或治疗新型冠状病毒sars-cov-2感染和/或新型冠状病毒sars-cov-2感染引发的疾病covid-19的方法，该方法包括向受试者施用上述新型冠状病毒疫苗试剂盒中的疫苗。

13、与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

14、本发明提供的新型冠状病毒疫苗试剂盒包含分别独立包装的新型冠状病毒dna疫苗和新型冠状病毒重组蛋白疫苗，其中dna疫苗中含有编码刺突蛋白抗原的核酸片段，蛋白疫苗含有表面刺突蛋白的受体结合区抗原。该试剂盒用于sars-cov-2病毒dna疫苗、sars-cov-2病毒蛋白疫苗联合方案，可用于预防covid-19。dna疫苗和蛋白疫苗分别独立包装，意味着dna疫苗和蛋白疫苗分别独立使用，该试剂盒采用初免-加强(prime-boost)免疫程序实施免疫，可以激发出更为高效的免疫反应。

15、本发明提供的试剂盒将dna疫苗和蛋白疫苗分别独立包装，可以实现异源初免-加强免疫策略。本发明发现异源初免-加强免疫策略所产生的免疫原性高于同源初免-加强免疫策略。异源初免-加强免疫策略对靶抗原的免疫反应具有加强协同作用，这种协同作用表现在抗原特异性的t细胞数量的增加、加强的细胞免疫和体液免疫，以及较为广谱的免疫反应。

16、用于实现异源疫苗初免-加强免疫方案的试剂盒能够克服现有单一种类疫苗产品的不足，从而更好地发挥新冠疫苗的免疫效果。本发明提供的试剂盒联合施用dna疫苗和蛋白疫苗所诱发的保护性免疫应答要优于单独施用单个种类疫苗所诱发的免疫应答。本发明用于实现(序贯)prime-boost免疫方法的新型冠状病毒疫苗试剂盒能够提供针对多种sars-cov-2病毒突变株的保护作用。

技术特征：

1.一种用于实现prime-boost免疫程序的新型冠状病毒疫苗试剂盒，其特征在于，包含至少一个第一容器和至少一个第二容器；

2.根据权利要求1所述的新型冠状病毒疫苗试剂盒，其特征在于，所述编码新型冠状病毒刺突蛋白抗原的核酸片段的核苷酸序列如seq_2所示；或与seq_2所示序列具有70％以上一致性；

3.根据权利要求1所述的新型冠状病毒疫苗试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒重组蛋白疫苗中的新型冠状病毒抗原或其抗原表位的氨基酸序列选自seq_4、seq_5、seq_6、seq_7和seq_8中的一种或多种的组合；

4.根据权利要求1-3任一项所述的新型冠状病毒疫苗试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒dna疫苗含有核苷酸序列如seq_3所示的质粒；所述新型冠状病毒重组蛋白疫苗中的抗原或其抗原表位的氨基酸序列含有由两个如seq_4所示的氨基酸序列直接串联得到的序列。

5.根据权利要求1-3任一项所述的新型冠状病毒疫苗试剂盒，其特征在于，所述第一容器和所述第二容器的数量比为1～2：1～2；

6.根据权利要求1-3任一项所述的新型冠状病毒疫苗试剂盒，其特征在于，所述新型冠状病毒dna疫苗和所述新型冠状病毒重组蛋白疫苗还分别独立的包含药学上可接受的赋形剂；所述药学上可接受的赋形剂包括载体、稀释剂、助悬剂、转染促进剂、佐剂和编码佐剂的核苷酸中的一种或几种；

7.权利要求1-6任一项所述的新型冠状病毒疫苗试剂盒的制备方法，其特征在于，包括：

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)包括制备质粒，所述制备质粒包括将所述编码新型冠状病毒刺突蛋白抗原的核酸片段插入表达载体中；

9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(b)包括将编码所述新型冠状病毒抗原或其抗原表位的核苷酸序列的5’端加入编码信号肽的序列，3’端加上终止密码子，进行克隆表达，筛选正确的重组子，然后转染表达系统的细胞进行表达，表达后收集细胞上清，纯化，得到所述新型冠状病毒抗原或其抗原表位；

10.权利要求1-6任一项所述的新型冠状病毒疫苗试剂盒在制备预防和/或治疗新型冠状病毒感染和/或新型冠状病毒感染引发的疾病covid-19的药物或产品中的应用；

技术总结
本发明提供了一种用于实现Prime‑boost免疫程序的新型冠状病毒疫苗试剂盒及其制备方法和应用，涉及疫苗技术领域。该新型冠状病毒疫苗试剂盒包括分别独立包装的新型冠状病毒DNA疫苗和新型冠状病毒重组蛋白疫苗，新型冠状病毒DNA疫苗含有编码新型冠状病毒刺突蛋白抗原的核酸片段，新型冠状病毒重组蛋白疫苗以表面刺突蛋白的受体结合区作为抗原。该新型冠状病毒疫苗能够实现(序贯)Prime‑boost免疫程序，从而缓解单一类型疫苗诱导的体液免疫对突变株的中和效果下降、不能同时激发强的细胞免疫的技术问题。

技术研发人员：赵干,侯佳望,高福,戴连攀,安亚玲,徐坤
受保护的技术使用者：艾棣维欣(苏州)生物制药有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/2/25