一种小分子肽及其衍生物在制备骨健康产品中的应用的制作方法

本发明涉及食品和医药健康，尤其是涉及一种小分子肽及其衍生物在制备骨健康产品中的应用。

背景技术：

1、骨骼是人体结构的重要组成部分，同时也是人体各项机能的支撑支架。骨骼健康对人体健康具有举足轻重的作用，骨骼的代谢异常可影响心血管系统等其他系统的代谢与健康状况，其中，骨质疏松症是一种最常见的全身性的骨骼代谢异常疾病，其以骨密度值(bone mineral density，bmd)降低、骨强度下降、骨骼矿化受损及骨折风险增加为主要病理特征。骨质疏松引起的脊柱、髋部、腕部等多部位的脆性骨折，严重影响患者的运动功能和生活质量，也为社会带来巨大的经济及医疗负担。目前骨质疏松的治疗主要基于两种策略，一种是增加成骨细胞分化和矿化，促进骨形成，旨在通过增加成骨细胞和骨细胞以补充缺失的骨组织，增加骨量，相关市售药物主要是甲状旁腺激素(pth)；另一种策略则是通过促进破骨细胞凋亡、抑制破骨细胞活化，旨在降低骨吸收，缓解骨量持续丢失，改善骨质疏松及相关症状，相关临床用药主要为双磷酸盐类。然而这些药物长期使用副作用较多，如长期使用双磷酸盐类药物对肾脏、肝脏和胃肠道等组织器官产生毒副作用，长期使用甲状旁腺激素类药物会增加骨肉瘤的发生风险。

2、相关技术中，生物活性肽的研究和产业化应用备受关注，生物活性肽通常含有2-20个氨基酸残基，分子量小于6000da。食源性生物活性肽因具有安全性高、吸收良好及营养丰富等特点，在食品、保健食品及生物医药领域具有广泛的应用前景。相关研究表明，鸡肽具有抗氧化、抗炎、免疫调节等广泛的生物活性，但是市场上多以低聚混合肽为主，且其在骨骼疾病中的作用机制及物质基础并不明确。

3、因此，开发一种安全性高、副作用低、适合长期服用的小分子肽用于制备骨健康产品是非常必要且迫切的。

技术实现思路

1、本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种小分子肽及其衍生物在制备骨健康产品中的应用，其能够有效增加斑马鱼脊柱椎骨的骨密度、逆转地塞米松诱导的斑马鱼脊椎骨骨密度降低以及显著促进转基因斑马鱼(osx:cy25)骨生成，对预防和改善骨质疏松症状具有显著的效果。

2、本发明还提出一种小分子肽或其衍生物在制备促进成骨细胞前体细胞增殖的产品中的应用。

3、本发明还提出一种小分子肽或其衍生物在制备促进动物骨生成的产品中的应用。

4、本发明还提出一种小分子肽或其衍生物在制备增加动物骨密度的产品中的应用。

5、本发明还提出一种小分子肽或其衍生物在制备预防和/或改善骨质疏松症状产品中的应用。

6、本发明的第一方面，提供一种小分子肽及其衍生物在制备骨健康产品中的应用，所述小分子肽为二肽cyclo(l-phe-l-phe)。

7、根据本发明实施例的应用，至少具有如下有益效果：本发明提供的寡肽cpp(即二肽cyclo(l-phe-l-phe))在促进骨生成、增加骨密度等方面具有优异的效果，具体包括以下方面：

8、(1)本发明提供的寡肽cpp在低剂量时能促进成骨细胞前体细胞mc3t3-e1增殖，在较高浓度时没有表现出明显的毒性；

9、(2)本发明提供的寡肽cpp对斑马鱼幼鱼没有显现出明显的毒性作用；

10、(3)本发明提供的寡肽cpp能有效增加斑马鱼脊柱椎骨的骨密度；

11、(4)本发明提供的寡肽cpp能有效逆转地塞米松诱导的斑马鱼脊椎骨骨密度降低；

12、(5)本发明提供的寡肽cpp显著促进转基因斑马鱼(osx:cy25)骨生成。

13、本发明的第二方面，提供一种小分子肽或其衍生物在制备促进成骨细胞前体细胞增殖的产品中的应用，所述小分子肽为二肽cyclo(l-phe-l-phe)。

14、本发明的第三方面，提供一种小分子肽或其衍生物在制备促进动物骨生成的产品中的应用，所述小分子肽为二肽cyclo(l-phe-l-phe)。

15、本发明的第四方面，提供一种小分子肽或其衍生物在制备增加动物骨密度的产品中的应用，所述小分子肽为二肽cyclo(l-phe-l-phe)。

16、本发明的第五方面，提供一种小分子肽或其衍生物在制备预防和/或改善骨质疏松症状产品中的应用。

17、在本发明的一些实施方式中，所述二肽cyclo(l-phe-l-phe)的结构式为：

18、

19、在本发明的一些实施方式中，所述产品包括药品和功能性食品

20、在本发明的一些实施方式中，所述药品的剂型为固体、半固体或液体的形式；

21、优选地，所述药品的剂型为水溶液、非水溶液、混悬液或膏体；

22、更优选地，所述药品的剂型为片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、口服液、乳剂、干混悬剂、干浸膏剂或注射剂。

23、在本发明的一些实施方式中，所述药品的制备原料还可以包括药用辅料。

24、在本发明的一些优选实施方式中，所述药用辅料为本领域常规药用载体，可以为任意合适的生理学或药学上可接受的药物辅料；

25、优选地，所述药用辅料选自崩解剂、稀释剂、润滑剂、粘合剂、湿润剂、矫味剂、助悬剂、表面活性剂、防腐剂中的至少一种；

26、更优选地，所述崩解剂选自玉米淀粉、马铃薯淀粉、交联聚乙烯吡咯烷酮、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联羧甲纤维素钠、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、藻酸中的至少一种；

27、更优选地，所述稀释剂选自乳糖、蔗糖、甘露醇、玉米淀粉、马铃薯淀粉、磷酸钙、柠檬酸钙、结晶纤维素中的至少一种；

28、更优选地，所述润滑剂选自微粉硅胶、硬脂酸镁、硬脂酸钙、硬脂酸、滑石粉、无水硅胶中的至少一种；

29、更优选地，所述粘合剂选自阿拉伯胶、明胶、糊精、羟丙基纤维素、甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮中的至少一种；

30、更优选地，所述湿润剂选自十二烷基硫酸钠；

31、更优选地，所述矫味剂选自阿斯巴甜、甜菊甙、蔗糖、麦芽糖醇、柠檬酸中的至少一种；

32、更优选地，所述助悬剂选自阿拉伯胶、明胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶中的至少一种；

33、更优选地，所述表面活性剂选自卵磷脂、山梨糖醇酐单油酸酯、单硬脂酸甘油酯中的至少一种；

34、更优选地，所述防腐剂选自对羟苯甲酸甲酯或对羟苯甲酸丙酯中的至少一种。

35、在本发明的一些实施方式中，所述功能性食品的形式包括汤剂、饮料、糖果、口服液、胶囊剂、片剂、粉剂中的至少一种。

36、在本发明的一些实施方式中，所述二肽cyclo(l-phe-l-phe)包括由动物、植物或微生物来源的天然产物。

37、在本发明的一些实施方式中，所述二肽cyclo(l-phe-l-phe)包括由发酵合成、真核表达系统合成或人工合成的具有相同结构或相似结构的化合物。

38、在本发明的一些实施方式中，所述二肽cyclo(l-phe-l-phe)的提取方法为采用有机试剂从鸡肉中提取二肽cyclo(l-phe-l-phe)，所述有机试剂为醋酸、乙醚、柠檬酸、甲酸、酒石酸、苹果酸、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、苯和石油醚中的一种或多种。

39、在本发明的一些实施方式中，所述二肽cyclo(l-phe-l-phe)的提取方法为采用醋酸和乙醚作为有机试剂从鸡肉中提取二肽cyclo(l-phe-l-phe)。

40、在本发明的一些实施方式中，所述二肽cyclo(l-phe-l-phe)的提取方法为：

41、步骤1、将鸡肉干燥粉碎处理成鸡肉粉末；

42、步骤2、在鸡肉粉末中加入有机试剂进行寡肽及其衍生物萃取，收集有机溶剂并干燥，得到寡肽及其衍生物粗品粉末；

43、步骤3、将所述粉末溶于缓冲溶液中，经过sephadex hh-20色谱柱洗脱，收集馏分并干燥，得到寡肽及其衍生物半成品粉末；

44、步骤4、将所述半成品溶于缓冲溶液中，经过ods-hg-5液相色谱柱洗脱，收集馏分并干燥，得到二肽cyclo(l-phe-l-phe)粉末。

45、在本发明的一些实施方式中，所述缓冲溶液为80wt％的乙腈水溶液。

46、本发明的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。