一种抗衰组合物及其在化妆品中的应用的制作方法

1.本发明涉及一种组合物，具体涉及一种含聚谷氨酸及其盐、透明质酸及其盐、甜橙提取物的抗衰组合物，还涉及该组合物在化妆品中的应用，属于化妆品技术领域。


背景技术：

2.皮肤失去弹性是人类衰老的自然过程，人体皮肤的真皮层内蕴含着数量巨大的成纤维细胞，而成纤维细胞的作用就是不断的产生胶原蛋白、透明质酸、弹性纤维等支撑皮肤年轻态的物质，年轻人的皮肤看起来光滑有弹性就是因为大量成纤维细胞的存在。当人到达一定的年龄时，皮肤内的成纤维细胞开始流失，相应导致胶原蛋白、弹性纤维、透明质酸等物质减少，皮肤就出现衰老，所以成纤维细胞的活力下降、数量减少是造成皮肤失去弹性导致衰老的根本原因之一。提升成纤维细胞的增殖能力可以提升皮肤弹性，抵抗衰老。
3.现有技术中，cn113209271a公开了一种可以促进成纤维细胞增殖的组合物及其制备方法，所述组合物由序列为gly-asn-pro-asn-asn-cly-ile、gly-pro-hyp-gly-ser-pro、gly-leu-hyp-gly-hyp-ala、gly-his-lys-val-lys的肽与锁链素、异锁链素组成，所用成分不易获取、制备方法复杂且价格昂贵。
4.目前市场中存在的抗衰产品，普遍成分复杂、成本较高，部分产品为提升抗衰效果添加具有刺激性的活性成分，从而导致皮肤出现刺激性不良反应。


技术实现要素：

5.针对现有技术存在的现状，本发明提供了一种抗衰组合物，该组合物包含三种有效成分，成分类型简单且各成分协同增效，可提高成纤维细胞的增殖，并促进胶原蛋白的合成，从而具有减少皱纹、紧致肌肤和提高皮肤弹性的功效。
6.本技术提供了如下技术方案：
7.1、一种抗衰组合物，其特征是，所述组合物包含聚谷氨酸及其盐、透明质酸及其盐、甜橙提取物。
8.2、根据权利要求1所述的抗衰组合物，其特征是，所述抗衰组合物包含以下重量份的组分：
9.聚谷氨酸及其盐0.01-1.0份、透明质酸及其盐0.01-1.0份、甜橙提取物0.0015-1.35份。
10.3、根据权利要求1或2所述的抗衰组合物，其特征是，包含以下重量份的组分：聚谷氨酸及其盐0.01-0.3份，透明质酸及其盐0.01-0.3份，甜橙提取物0.015-0.9份。
11.4、根据权利要求1-3任一项所述的抗衰组合物，其特征是，透明质酸及其盐的分子量为1.5
×
106da以下，优选1.0
×
106da以下。
12.5、根据权利要求1-4任一项所述的抗衰组合物，其特征是，聚谷氨酸及其盐的分子量为1.0
×
104da-2.0
×
106da。
13.6、根据权利要求1-5任一项所述的抗衰组合物，其特征是，还包含化妆品领域常用
的辅料和/或功效成分。
14.7、权利要求1-6中任一项所述的抗衰组合物在制备促进成纤维细胞增殖的产品中的应用。
15.8、权利要求1-6中任一项所述的抗衰组合物在制备化妆品中的应用。
16.9、根据权利要求8所述的应用，其特征是，所述抗衰组合物用于制备抗衰化妆品。
17.与现有技术相比，本发明的有益效果为：
18.本发明通过将聚谷氨酸及其盐、透明质酸及其盐、甜橙提取物三种成分组合，发现复配后各组分协同增效，能够提升促进成纤维细胞的增殖能力，具有显著的抗氧化能力和提升皮肤弹性的作用，并且具有低刺激性，可以使皮肤恢复平滑柔软的手感，重新恢复弹性肌肤，使皮肤皱纹大大减少。另外，该组合物不仅功效性优越，而且价格低廉，稳定性更好，生产操作工艺较为简单，大大提升了生产效率并降低了成本，无论在工业生产还是消费市场都有着巨大优势。
附图说明
19.图1为实施例1抗衰组合物精华液与空白对照组斑马鱼胚胎拍照图示；
20.图2为实施例1抗衰组合物精华液与空白对照组ros信号强度测试结果柱状图。
具体实施方式
21.为了更好的说明本发明的技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作以进一步说明，需要说明的是，本发明未详尽说明的工艺参数及工艺步骤等均按照本领域常规技术手段进行。
22.本发明抗衰组合物包含聚谷氨酸及其盐、透明质酸及其盐和甜橙提取物。
23.进一步的，所述抗衰组合物包含以下重量份的组分：聚谷氨酸及其盐0.01-1.0份，透明质酸及其盐0.01-1.0份，甜橙提取物0.0015-1.35份。
24.进一步的，所述抗衰组合物包含以下重量份的组分：聚谷氨酸及其盐0.01-0.3份，透明质酸及其盐0.01-0.3份，甜橙提取物0.015-0.9份。
25.例如，所述抗衰组合物包含聚谷氨酸及其盐的重量份可以为0.01份、0.02份、0.03份、0.04份、0.05份、0.06份、0.07份、0.08份、0.09份、0.1份、0.15份、0.2份、0.25份、0.3份、0.35份、0.4份、0.45份、0.5份、0.55份、0.6份、0.65份、0.7份、0.75份、0.8份、0.85份、0.9份、0.95份、1.0份。
26.所述组合物包含透明质酸及其盐的重量份可以为0.01份、0.02份、0.03份、0.04份、0.05份、0.06份、0.07份、0.08份、0.09份、0.1份、0.15份、0.2份、0.25份、0.3份、0.35份、0.4份、0.45份、0.5份、0.55份、0.6份、0.65份、0.7份、0.75份、0.8份、0.85份、0.9份、0.95份、1.0份等。
27.所述组合物包含甜橙提取物的重量份可以为0.0015份、0.002份、0.003份、0.004份、0.005份、0.006份、0.007份、0.008份、0.009份、0.01份、0.015份、0.02份、0.025份、0.03份、0.035份、0.04份、0.045份、0.05份、0.055份、0.06份、0.065份、0.07份、0.075份、0.08份、0.085份、0.09份、0.095份、0.1份、0.2份、0.3份、0.4份、0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1.0份、1.1份、1.2份、1.3份、1.35份等。
28.在一个具体实施方式中，按重量百分比计，所述组合物包含聚谷氨酸及其盐0.01-1.0％、透明质酸及其盐0.01-1.0％、甜橙提取物0.0015-1.35％。例如，所述聚谷氨酸及其盐可以为0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％等；所述透明质酸及其盐可以为0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％等；所述甜橙提取物可以为0.0015％、0.002％、0.003％、0.004％、0.005％、0.006％、0.007％、0.008％、0.009％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％、0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.35％等。
29.进一步的，所述聚谷氨酸及其盐在化妆品领域中常作为保湿剂，可以在市场上直接购买得到。所述聚谷氨酸(γ-聚谷氨酸，英文：poly-γ-glutamic acid，简称γ-pga)由d-谷氨酸和l-谷氨酸通过γ-谷氨酰键聚合而成，进而形成一种多肽大分子，一般分子量为10～2000kda。本技术中的所述聚谷氨酸及其盐可以是任何聚谷氨酸、其盐或者它们的组合，包括但不限于，聚谷氨酸(γ-pga，h形式)、na
+
形式的聚谷氨酸盐、k
+
形式的聚谷氨酸盐、nh4
+
形式的聚谷氨酸盐、mg
2+
形式的γ-聚谷氨酸盐和/或ca
2+
形式的聚谷氨酸盐和/或交联的γ-聚谷氨酸盐水凝胶(由na
+
形式的聚谷氨酸盐、k
+
形式的聚谷氨酸盐、nh4
+
形式的聚谷氨酸盐、mg
2+
形式的聚谷氨酸盐和/或ca
2+
形式的聚谷氨酸盐制备的)，在本技术一种优选的实施方式中，所述聚谷氨酸盐为na
+
形式的聚谷氨酸盐，即聚谷氨酸钠。
30.进一步的，本技术的聚谷氨酸及其盐的分子量为可以是能起到本技术组合物提高皮肤弹性作用的任意一种分子量，一种优选的实施方式中，所述分子量为1.0
×
104da-2.0
×
106da，例如可以为1.0
×
104da、5.0
×
104da、1.0
×
105da、1.5
×
105da、2.0
×
105da、2.5
×
105da、3.0
×
105da、4.0
×
105da、5.0
×
105da、6.0
×
105da、7.0
×
105da、8.0
×
105da、9.0
×
105da、1.0
×
106da、1.1
×
106da、1.2
×
106da、1.3
×
106da、1.4
×
106da、1.5
×
106da、1.6
×
106da、1.7
×
106da、1.8
×
106da、1.9
×
106da、2.0
×
106da等，在一个具体的实施方式中，分子量为1.0
×
106da-1.8
×
106da。
31.进一步的，所述透明质酸及其盐是指由成线性连接的重复单元n-乙酰-d-葡糖胺和d-葡糖醛酸组成的生物聚合物材料。所述透明质酸及其盐包括透明质酸本身、其盐或其组合。透明质酸盐包括但不限于：无机盐，诸如透明质酸钠、透明质酸钾、透明质酸钙、透明质酸镁、透明质酸锌、透明质酸金、透明质酸钴；以及有机盐，诸如透明质酸四丁铵。在本技术中，可以单独使用透明质酸本身或其盐，或者可以使用两种或更多种透明质酸或其盐的组合。
32.本技术中所述透明质酸及其盐不受限制，在一个优选的实施方式中，所述透明质酸盐为透明质酸水溶性盐，进一步优选为透明质酸钠、透明质酸锌、透明质酸镁或透明质酸钾中的任意一种。在一个具体的实施方式中，所述透明质酸盐为透明质酸钠。所述透明质酸钠作为天然保湿因子，不仅具有保湿补水的功效，还可以清除自由基促进表皮细胞的增殖和分裂，促进受伤部位皮肤的再生。
33.进一步的，所述透明质酸及其盐的分子量范围一般指的是1.5
×
106da以下，例如5.0
×
103da、1.0
×
104da、5.0
×
104da、1.0
×
105da、2.0
×
105da、3.0
×
105da、4.0
×
105da、5.0
×
105da、6.0
×
105da、7.0
×
105da、8.0
×
105da、9.0
×
105da、1.0
×
106da、1.1
×
106da、
1.2
×
106da、1.3
×
106da、1.4
×
106da、1.5
×
106da，优选1.0
×
106da以下，在此范围内的透明质酸及其盐减轻炎症、缓解敏感、清除自由基、重塑肌肤屏障功能相似，均能用于本发明。
34.在本技术的一些实施方式中，所述甜橙提取物可以通过市售购买，也可以自行提取。市售品包括但不限于logicos甜橙提取物，provital,s.a.u.甜橙提取物。自行提取的方式为甜橙提取常用的方式，该提取方式只要能够使甜橙提取物具有常规的功效就没有特别的限制，例如，利用溶剂对橙子的果实、叶、茎或根进行提取，所述溶剂可以是水和/或醇类；也可以利用橙子的植体(果实、叶、茎或根)的愈伤组织得到甜橙提取物。
35.在本技术的一个具体的实施方式中，将橙子的果实、叶、茎或根阴干，粉碎，溶于乙醇中，匀浆机中混合匀浆，将匀浆好的物料置于超声波装置中，加入适当的乙醇溶液，进行超声萃取，得浓缩液；将所得浓缩液洗脱，收集洗脱液，浓缩、干燥，获得甜橙提取物。
36.在本技术的一个具体的实施方式中，可以诱导橙子的植体(果实、叶、茎或根)进行细胞分化，获得愈伤组织，通过细胞破碎获得甜橙提取物。
37.在本技术的一个具体的实施方式中，所述甜橙提取物为购自provital,s.a.u.的72800-citrustem
tm
，其中，有效成分甜橙提取物的含量为18％-22％。
38.在本技术的一些实施方式中，所述抗衰组合物还包括化妆品领域常用的辅料和/或功效成分。
39.在本技术的一些实施方式中，所述抗衰组合物还包括辅料，所述辅料包含溶剂、保湿剂、螯合剂、润肤剂、皮肤调理剂、乳化剂、芳香剂、防腐剂、增稠剂、ph调节剂中的一种或两种以上。
40.在本技术的一些实施方式中，所述抗衰组合物还包含功效成分。所述功效成分是本领域常用的功效成分，例如，保湿成分、抗皱成分、美白成分、祛痘成分等，本领域技术人员可以自由选择。
41.进一步的，在本技术中，所述功效成分可以包括透明质酸或其衍生物、维生素c或其衍生物、维生素a或其衍生物、叶酸或其衍生物、维生素e或其衍生物、维生素d或其衍生物、氨基酸、类胡萝卜素或胡萝卜素、尿酸或其衍生物、α-羟基酸、芪及其衍生物、传明酸、四氢甲基嘧啶羧酸、甘草酸二钾、甘草亭酸硬脂酸酯、维生素e醋酸酯、维生素b3、维生素c、抗坏血酸葡糖苷、维生素c磷酸钠、尿囊素、牡丹酚甙、积雪甙、红没药醇、甜菜碱、山梨醇、吡咯烷酮羧酸钠、赤藓醇、水解蛋白以及水溶性提取物人参茎叶提取物、人参籽提取物、人参提取物、白芨提取物、白蔹提取物、黄芪提取物、黄精提取物、枸杞提取物、牡丹提取物、肉苁蓉提取物、黑豆芽提取物、鹰嘴豆芽提取物、黑芝麻提取物、黑米提取物、芦荟提取物、海草提取物、藻类提取物、雪莲提取液、桃花提取液、绿茶提取物、海藻提取物、杏仁提取液、珍珠水解液、桂花提取液、姜黄根提取物、莲花提取液、灵芝提取物、酒曲发酵物相关、植物发酵产物相关、豆类发酵产物相关、菌类相关中的一种或两种以上。
42.本发明还提供了上述抗衰组合物在制备促进成纤维细胞增殖的产品中的应用。
43.本发明还提供了上述抗衰组合物在制备化妆品中的应用，进一步优选为在提高皮肤弹性化妆品、抗衰化妆品中的应用。上述抗衰组合物添加到化妆品中，能提高皮肤弹性，具有提高化妆品去皱、紧致、抗衰效果的功效。
44.在本技术的一些实施方式中，所述化妆品包括但不限于护肤水、护肤精华、护肤乳液、护肤膏霜、彩妆、香皂、洗面奶、沐浴露、护肤啫喱、精华液、眼霜、面膜的任一种。
45.在本技术的一些实施方式中，可以将组合物溶解于水相中，混合均匀，得到精华液，为了增加溶解速度，可以先将聚谷氨酸及其盐、透明质酸及其盐和其它辅料和/或功效成分加热溶解后，再加入甜橙提取物，对于加热的温度没有具体限制，只要能保证加入的物质溶解即可。
46.在本技术的一些实施方式中，可以将组合物溶解于水相中，再与油相混合，均质，得到乳液。
47.对于化妆品的制备方法，本技术不做具体限制，本领域技术人员可在化妆品常用的制备方法中进行选择。
48.为了更好的说明本发明的技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作以进一步说明，需要说明的是，本发明未详尽说明的工艺参数及工艺步骤等均按照本领域常规技术手段进行。
49.下述实施例中，所用的聚谷氨酸及其盐、透明质酸及其盐购自华熙生物科技股份有限公司，甜橙提取物购自provital,s.a.u.(72800-citrustem
tm
，甜橙提取物的含量18％-22％)。
50.实施例1
51.一种抗衰组合物，由以下重量份的成分组成：聚谷氨酸钠0.1份(分子量1.8
×
106da)，透明质酸钠0.1份，透明质酸钠分子量5.0
×
103da，甜橙提取物0.036～0.044份。
52.下表1示出了实施例1至实施例16、对比例1至对比例7的抗衰组合物组成，根据下表1的配方得到一系列抗衰组合物。
53.表1
54.[0055][0056]
对比例8
[0057]
一种抗衰组合物，由以下重量份的成分组成：聚谷氨酸钠0.1份(分子量1.8
×
106da)，透明质酸钠0.1份，透明质酸钠分子量5.0
×
103da，72800-citrustem
tm
除去有效成分外的基质成分0.2份。
[0058]
应用例1
[0059]
上述实施例与对比例制备的组合物可应用于化妆品中。化妆品的种类包括但不限于膏霜、水乳、化妆水、精华液、面膜、喷雾等。在制备时，化妆品除了聚谷氨酸及其盐、透明质酸及其盐和甜橙提取物的组合物外，还包括制成各种剂型所必需的基质，基质可以根据现有技术选择不同类型的化妆品所常用的基质，化妆品制备方法按照现有技术常规方法制备即可。
[0060]
应用例2
[0061]
为了验证本发明聚谷氨酸及其盐、透明质酸及其盐和甜橙提取物的组合物的卓越效果，将上述实施例和对比例的组合物加入辅料制备成精华液，方法如下：
[0062]
表2精华液配方
[0063][0064]
表3各实施例和对比例中的成分在精华液中的占比
[0065]
[0066][0067]
[0068]
精华液制备方法如下：
[0069]
(1)将a相原料混合均匀后，开启搅拌后升温至85℃左右。
[0070]
(2)待溶解均匀后，开启降温。
[0071]
(3)降温至55℃左右时，加入b相原料，混合均匀，即得精华液。
[0072]
测试1：对成纤维细胞的增殖作用
[0073]
测试样品：将应用例2的精华液用超纯水按照2:98的质量比稀释，得到2％的测试溶液。
[0074]
测试方法：将制备好的成纤维细胞悬液以2
×
104个细胞/ml的浓度接种于96孔板中，每孔100μl，待细胞贴壁后，用微量加样器在各孔中添加上述测试溶液20μl，对照组加入相同体积的pbs(0.01m)，移入培养箱中(37℃、5％二氧化碳、饱和湿度条件下)培养24h，然后加入1mg/mlmtt液20μl，继续在相同条件下培养4h。小心吸去每孔内的培养液，然后每孔加入100μl dmso置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解，在酶联免疫检测仪0d490nm处测量各孔的吸光度a值，同时设置调零孔(培养基、mtt、dmso)，按以下公式计算细胞存活率，细胞存活率＝(测试样品a值/对照组a值)
×
100％，以没有添加抗衰组合物的基础精华液配方作为对照组，其细胞存活率为100％。测试结果如表4所示。
[0075]
表4对成纤维细胞的增殖作用
[0076]
[0077][0078]
从表4实验结果可得，当细胞用实施例1-16的抗衰组合物处理过后较对比例成纤维细胞增殖作用有明显提升，特别是用实施例1-14、16的抗衰组合物对成纤维细胞的增殖的增值效果明显高于对比例，实施例15的组合物对成纤维细胞的增殖效果明显高于对比例1、4-7，并且实施例15在使用更少量的抗衰组合物活性成分下，能够获得与对比例2-3相似的效果。二列酵母本身虽然具有抗氧化、抗衰功效，但是通过对比例7可以看出，二列酵母与聚谷氨酸钠和透明质酸钠组合后对成纤维细胞没有明显的增殖作用。对比例8与实施例1相比，不含有甜橙提取物但含有72800-citrustem
tm
中的基质成分，对比例8对成纤维细胞的增殖作用明显减弱，说明发挥协同抗衰作用的是甜橙提取物、聚谷氨酸及其盐和透明质酸及其盐，而非基质成分。
[0079]
测试2：斑马鱼胚胎活性氧(ros)清除测试
[0080]
受试物处理组：受试物处理组使用实施例1按照表2的精华液配方配制得到的精华液产品；
[0081]
空白对照组：不添加本发明抗衰组合物的基础精华液配方。
[0082]
测试方法：将24尾48h大斑马鱼胚胎暴露于1g/l实施例1组合物精华液溶液中，同时设置空白对照组，暴露24h后对鱼胚胎进行h2dcfda染色，荧光拍照测量ros信号强度并进行统计分析。人体皮肤正常新陈代谢过程中细胞内的活性氧(ros)的产生和清除保持相对衡，但随着年龄增长，ros清除能力减弱。ros堆积会加速令蛋白质，核酸，脂质及其他分子被氧化而失活，令皮肤变得松弛，产生皱纹。斑马鱼体内的ros调控机制与人体相同，而且某些荧光探针，例如h2dcfda，可通过活体染色监测斑马鱼胚胎中的ros。斑马鱼胚胎个体小，方便于显微镜下拍照，并应用软件分析定量读取斑马鱼胚胎中随着ros增加而增强的绿色荧光信号，测试受试物处理组和空白对照组的鱼胚胎ros水平变化，计算ros清除率以评价组合物的抗皱和紧致功效。
[0083]
计算活性氧(ros)清除率：清除率＝(c-t)/c
×
100％
[0084]
式中：
[0085]
t—受试物处理组鱼胚胎ros“平均信号强度”的平均值；
[0086]
c—空白对照组鱼胚胎ros“平均信号强度”的平均值。
[0087]
实验结果如图1、2所示，从图1实验结果可以得出，经过实施例1抗衰组合物精华液处理的受试物处理组较空白对照组亮度区域明显的减少，即本发明抗衰组合物精华液可显著清除斑马鱼胚胎中的ros，按照上述清除率计算公式计算本发明受试物处理组可达到15％的斑马鱼胚胎活性氧(ros)清除率，具体对比可见图2，即该抗衰组合物精华液具有抗氧化的作用，可使肌肤恢复弹性，使皮肤得到紧致的效果，改善皮肤干燥、粗糙、皱纹增多的情况。
[0088]
测试3：人体功效测试评价
[0089]
测试样品：实施例1按照表2的精华液配方配制得到的精华液产品；
[0090]
空白对照组样品：不添加本发明抗衰组合物的基础精华液配方。
[0091]
测试方法：招募健康志愿者30名，男女不限，年龄20-65岁。
[0092]
具有下列情况者应被排除：
[0093]
a近一周使用抗组胺药或近一个月内使用免疫抑制剂者；
[0094]
b近两个月内受试部位应用任何抗炎药物者；
[0095]
c受试者患有炎症性皮肤病临床未愈者；
[0096]
d胰岛素依赖性糖尿病患者；
[0097]
e正在接受治疗的哮喘或其它慢性呼吸系统疾病患者；
[0098]
f在近6个月内接受抗癌化疗者；
[0099]
g免疫缺陷或自身免疫性疾病患者；
[0100]
h哺乳期或妊娠妇女；
[0101]
i双侧乳房切除及双侧腋下淋巴结切除者；
[0102]
j在皮肤待试部位由于瘢痕、色素、萎缩、鲜红斑痣或其它瑕疵而影响试验结果的判定者；
[0103]
k参加其它的临床试验研究者；
[0104]
l体质高度敏感者；
[0105]
m非志愿参加者或不能按实验要求完成规定内容者。
[0106]
招募符合要求的志愿者，采用半脸对照的方法，受试者左半脸使用测试样品，每周3次，右半脸使用空白对照组样品。分别于使用后1周、2周检测皮肤弹性。
[0107]
皮肤弹性检测方法：在垂直方向上对皮肤施以恒定负压，再消除负压，测量规定时间段皮肤的位移变化，得皮肤弹性表征值r。
[0108]
皮肤弹性表征值r的计算公式：
[0109]
式中：
[0110]
ua——消除负压后皮肤的回弹位移，单位为毫米(mm)。
[0111]
uf——加载负压时皮肤的最大拉伸位移，单位为毫米(mm)。
[0112]
测试中该r值由仪器(cutometer皮肤弹性测试仪)直接测试计算并得出。
[0113]
r值相对值tx vs.t0意思为：第x周后r值与第0周(即使用前)r值的比值，该值可直观准确的表达皮肤弹性随时间的变化。r值相对值tx vs.t0数值越大，表示皮肤弹性增加效果越好。
[0114]
结果见下表5。
[0115]
表5对皮肤弹性的影响
[0116][0117]
根据结果可得出，志愿者经过使用测试样品后，皮肤弹性明显增加，在使用第二周左右时可达到峰值即105.94％，组间差异极为显著，即经科学复配得到的实施例1抗衰组合物精华液可使人体实现增加皮肤弹性的效果。
[0118]
测试4：人体皮肤斑贴试验
[0119]
测试样品：实施例1按照表2的精华液配方配制得到的精华液产品。
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测试方法：招募符合要求的志愿者，志愿者条件见测试3，志愿者人数共30人。测试样品用纯化水稀释100倍使用，纯化水作为对照。撕开斑试器的包装，量取样品0.020ml，加入小室内。将斑试器贴敷于受试者的前臂屈侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24h。去除斑试器后30min、24h和48h按表6观察记录反应结果。
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表6皮肤封闭性斑贴试验皮肤反应分级标准
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受试者去除斑试器后30min，24h和48h观察皮肤反应。结果接触了实施例1抗衰组合物精华液的30位受试者均为阴性反应。具体见表7。
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表7皮肤反应统计
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人体皮肤封闭型斑贴试验结果显示，30人中0例出现阳性反应，即可得该抗衰的组合物精华液不会引起不良的反应，非常温和，对人体无刺激。