用于制备压缩水凝胶皮肤移植物的组织培养容器以及相关方法和系统与流程

发明领域本发明的各种所描述的实施方案属于组织培养实验室器皿领域。

背景技术：

0、发明背景

1、人体皮肤由三个主要层组成：表皮(最外层)、真皮(中间层)和皮下组织(最深层)。

2、当产生较深的伤口(全层皮肤伤口)时，例如在烧伤事故之后，表皮和整个真皮(在某些情况下还有皮下组织)受损，需要进行手术干预。

3、小的全层皮肤伤口通常通过全层皮肤自体移植物的手段来治疗，其中从身体的健康部位获取表皮和整个真皮并移植到伤口上。

4、大的全层皮肤伤口通常通过分层皮肤自体移植物来治疗。分层皮肤自体移植物由表皮和薄且不完整的真皮层组成。分层皮肤自体移植物并不代表对大的全层皮肤伤口问题的令人满意的临床解决方案。大的全层皮肤伤口通常愈合不良并产生毁容和疤痕。

5、全层皮肤自体移植物比分层皮肤自体移植物更好地治愈深层伤口的原因之一是，全层皮肤自体移植物具有分层皮肤自体移植物不具备的特征，例如血管结构。血管结构(血液和/或淋巴管)提供氧气和营养物以及免疫细胞运输，并有助于完整的功能性和组织存活。全层皮肤移植物中的毛细血管只需与创面的毛细血管连接，而在分层皮肤移植物的情况下，毛细血管需要从创面生长到移植物中以灌注组织。

6、全层自体皮肤移植物比分层自体移植物更好地治愈深层伤口的其他原因是，将分层自体移植物移植到全层伤口上可导致组织收缩，其导致疤痕和/或纤维化和/或其他外观毁损。或者或另外地，疤痕可能导致移植的皮肤替代物无法与患者(例如儿童)一起生长，从而导致皮肤进一步恶化。因此，分层自体移植物的使用可能需要在几年时间的跨度内进行多次连续手术才能缓解这些问题。这些额外的手术给患者带来了巨大的经济和心理负担。

7、最近，皮肤的组织工程化已被用来制造全层皮肤自体移植物的替代品。组织工程化采用水凝胶作为支架材料来提供3d细胞基质。水凝胶具有生物相容性和仿生性，具有低免疫原性(跨物种保守)，并且可以通过细胞自然重塑，这些细胞可以很容易地播种在原纤维网络的间隙中。然而，水凝胶较差的机械性能限制了其作为用于组织工程化应用的支架的临床使用。由于皮肤移植物的相对较大的面积和较薄的特性(皮肤移植物的临床相关的尺寸为50cm2或更大，厚度为2mm或更小)，机械稳定性对于基于水凝胶的工程化皮肤组织的临床应用非常重要。

8、机械稳定性允许在培养期间和之后以及手术应用和/或测试期间和之后处理和加工基于水凝胶的组织工程化皮肤移植物。水凝胶的机械稳定性可以通过压实来提高。

技术实现思路

0、发明概述

1、本发明的广义方面涉及在无菌条件下在单个容器中生产和运输压缩的水凝胶皮肤移植物。

2、本发明的一些实施方案的一个方面涉及一种密封的组织培养容器，其包括在具有盖子和底座的盒子中的移植物支撑框架。根据这些实施方案，框架具有两种操作状态：第一操作状态，其中框架相对于其位于其中的底座的底板稍微升高；以及第二操作状态，其中框架下降以接触其位于其中的底座的底板。在一些实施方案中，盖子包括可移动柱塞，当被压下时，该可移动柱塞将框架从第一操作状态移动到第二操作状态。在一些实施方案中，盖子包括一个或多个缓冲室(surge compartment)以容纳当柱塞下降时从框架移位的培养基。在一些实施方案中，缓冲室包括在其上表面上的气体渗透膜。这些气体渗透膜允许空气在柱塞下降时从容器中逸出，并在柱塞上升时进入容器。气体渗透膜允许周围环境和容器内部之间进行气体交换，同时保持无菌。在一些实施方案中，气体渗透膜促成维持组织培养罩外部的容器的内容物的无菌性。气体渗透膜还支持细胞培养过程中的气体交换，例如被放置在具有这种受控气体环境的培养箱中时富含(5％co2)。

3、本发明的一些实施方案的另一方面涉及移植物支撑托盘，其具有培养基可渗透的膜底板和外部第一正常延伸的弹簧，所述弹簧在没有外力的情况下将膜底板支撑在升高的位置。在一些实施方案中，沿相反方向的第二组正常延伸的弹簧附接到第一弹簧。在一些实施方案中，第一组弹簧和/或第二组弹簧是叶片弹簧。在一些实施方案中，第一组弹簧和/或第二组弹簧附接到框架的两个相对侧。在一些实施方案中，框架包括与底座和/或盖子中的对应销/孔配合的引导孔/销。

4、本发明的一些实施方案的又一个方面涉及组织培养容器的底座，其被配置成容纳移植物支撑框架。在一些实施方案中，底座包括压缩结构，该压缩结构在框架完全下降时支撑框架的膜底板，但在框架下降时仍然允许培养基向外流动。在一些实施方案中，底座包括凹口以容纳位于底座中的框架的第一组弹簧和/或第二组弹簧。在一些实施方案中，底座包括与提供在框架上的类似孔或销配合的销或孔。在一些实施方案中，这些销/孔帮助框架在底座内定向。替代地或另外地，在一些实施方案中，底座包括与提供在盖子的柱塞上的类似孔或销配合的销或孔。在一些实施方案中，当框架坐落在底座中时，这些销/孔有助于相对于框架定向柱塞。在一些实施方案中，盖子或底座包括o形环或其他垫圈。根据本发明的各种示例性实施方案，该垫圈一体地形成为盖子或底座的一部分。在一些实施方案中，o形环有助于形成气密密封。根据本发明的各个示例性实施方案，底座包括废物排放口和/或样品取出口。在一些实施方案中，这些端口被提供为带倒钩的连接器。替代地或另外地，在一些实施方案中，底座包括用于附接至盖子的卡扣配合连接器。替代地或另外地，在一些实施方案中，底座包括用于运输锁的配合卡扣插件。在一些实施方案中，运输锁将柱塞保持在部分下降位置。

5、本发明的一些实施方案的又一个方面涉及组织培养容器的盖子。在一些实施方案中，盖子包括刚性框架，该刚性框架具有柔性波纹管，该柔性波纹管将柱塞保持在相对于框架的固定定向上。在一些实施方案中，波纹管通常是打开的，使得其在没有外力的情况下将柱塞保持在升高的位置。在一些实施方案中，盖子包括一个或多个升高的缓冲室。在一些实施方案中，缓冲室在其上表面上装配有气体渗透膜。根据本发明的各种示例性实施方案，膜被放置在缓冲室的内部或外部。

6、在一些实施方案中，刚性框架提供有与底座上的相应结构接合的弹簧钩。在一些实施方案中，盖子包括附接至相关位置的内部出口端口的一系列外部带倒钩的连接器。例如，提供了用于进入co2/空气和/或成纤维细胞(fb)和/或培养基和/或角质形成细胞和/或胶原水凝胶的带倒钩的连接器。替代地或另外地，在一些实施方案中，提供额外的带倒钩的端口用于排出co2/空气。替代地或另外地，在一些实施方案中，co2/空气经由缓冲室的气体渗透膜离开组织培养容器。

7、本发明的一些实施方案的另一方面涉及组织培养方法，其中将负载有成纤维细胞的水凝胶引入密封的组织培养容器中并孵育以允许成纤维细胞填充凝胶基质。水凝胶形成后，然后在同一密封的组织培养容器中对其进行压缩。然后将角质形成细胞(kc)接种在同一密封的组织培养容器中，并进行额外的孵育，直到移植物准备好用于移植。在本发明的一些示例性实施方案中，水凝胶形成包括通过升高ph(将胶原蛋白/细胞混合物与缓冲液混合)来进行交联。该过程有时被称为聚合，尽管它不是真正的聚合。

8、本发明的一些实施方案的另一方面涉及用于压缩水凝胶皮肤移植物的运输方法，其中移植物在密封的组织培养容器中生长，移除生长培养基并引入运输培养基，密封的组织培养容器的盖子的集成柱塞被部分降低并锁定就位。

9、本发明的一些实施方案的另一方面涉及用于同时管理和操作组织培养容器的系统。在一些实施方案中，组织培养容器是移植物培养容器。在本发明的一些示例性实施方案中，移植物培养容器如上所述。在本发明的一些示例性实施方案中，系统依赖于计算机化控制器来将细胞和/或培养基和/或基质材料通过导管分配至容器。在一些实施方案中，系统控制间充质细胞(即成纤维细胞)与细胞外基质分子(例如胶原)的混合并以协调的方式将所得的细胞/基质混合物分配至培养容器。在一些实施方案中，系统的各个隔室被加热和/或冷却。在一些实施方案中，细胞基质的冷却有助于减少过早胶凝。替代或另外地，在一些实施方案中，在至少一个系统隔室中控制co2水平和/或湿度。

10、本发明的一些实施方案的又一方面涉及自动更换多个组织培养容器中的培养基的系统。在一些实施方案中，组织培养容器是移植物培养容器。在本发明的一些示例性实施方案中，移植物培养容器如上所述。在一些实施方案中，系统采用倾斜机构。

11、本发明的一些实施方案的又一方面涉及自动压缩多个组织培养容器中的细胞外基质材料(例如水凝胶)的系统。根据本发明的各种示例性实施方案，压缩是并行和/或串行进行的。

12、本发明的一些实施方案的又一方面涉及一种系统，该系统提供远程位置处的细胞培养物(例如移植培养物)的视觉图像并允许通过远程位置处的用户界面远程操纵一个或多个培养参数。在一些实施方案中，视觉图像由照相机捕获并通过网络传输到智能设备(例如，手机或平板电脑)。替代地或另外地，在一些实施方案中，用户界面是智能设备的图形用户界面(gui)。

13、为了本说明书和所附权利要求的目的，术语“照相机”包括传统的光学照相机以及oct(光学相干分层扫描仪)装置。在本发明的一些示例性实施方案中，照相机不放大。在本发明中，照相机将获取的图像放大2x、5x、10x、50x、100x、250x、500x、1000x或中间倍数或更多倍。在一些实施方案中，通过将照相机附接至显微镜或将照相机与显微镜集成来实现放大。

14、在一些附图中，根据本发明的一些实施方案的示例性组织培养容器被指示为“移植盒”(例如图8i或图8j)或“过程盒”(例如图12c)。

15、应当理解，上述各个方面涉及与皮肤移植物在从一个位置运输到另一位置期间的折叠和/或撕裂相关的技术问题的解决方案。

16、替代地或另外地，应当理解，上述的各个方面涉及与减少对用于生产皮肤移植物的复杂组织培养设施的需求相关的技术问题的解决方案。

17、替代地或另外地，应当理解，上述各个方面涉及与生产大量移植材料(例如1000cm2；1500cm2；2000cm2；2500cm2；3000cm2；3500cm2；4000cm2；4500cm2；5000cm2；5500cm2或中间面积或更大的面积)相关的技术问题的解决方案。根据本发明的各种示例性实施方案，移植物面积是活检面积的100倍、150倍、200倍、250倍或中间倍数或更大的倍数。

18、替代地或另外地，应当理解，上述各个方面涉及与组织培养物的远程管理相关的技术问题的解决方案。

19、替代地或另外地，应当理解，上述各个方面涉及与减少组织培养技术人员的工作量相关的技术问题的解决方案。

20、替代地或另外地，应当理解，上述的各个方面涉及与改进移植物制造过程的稳健性和再现性和/或减少批次间变异性相关的技术问题的解决方案。

21、替代地或另外地，应当理解，上述的各个技术方面有助于总体制造成本的降低。

22、替代地或另外地，应当理解，上述各个方面涉及与在封闭的自动化盒中制造组织移植物相关的技术问题的解决方案。这种方法不需要重型制造套件和/或洁净室，同时保持无菌条件。因此，同源移植物可以在多个地点(例如患者所在的医院)制造。

23、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种组织培养容器，其包括：(a)移植物支撑托盘；(b)具有盖子和底座的盒子，该盒子接合并保持托盘；其中，托盘具有两种操作状态：第一操作状态，其中托盘的底板相对于底座的底板略微升高；以及第二操作状态，其中托盘的底板下降以接触底座的底板。在一些实施方案中，容器包括附接至盖子的可移动柱塞。替代地或另外地，在一些实施方案中，容器包括一个或多个缓冲室。替代地或另外地，在一些实施方案中，容器包括在缓冲室的上表面上的气体渗透膜。替代地或另外地，在一些实施方案中，容器被灭菌并包装以保持无菌。

24、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种移植物支撑托盘，其包括：(a)刚性框架；(b)附接到框架的下边缘的液体渗透膜底板；(c)第一组正常延伸的弹簧，其在外部附接到框架的两个相对侧。在一些实施方案中，托盘包括以相反方向附接到第一弹簧的第二组正常延伸的弹簧。替代地或另外地，在一些实施方案中，托盘包括与安装有框架的底座中的对应销/孔配合的引导孔/销。替代地或另外地，在一些实施方案中，托盘包括与位于在支撑框架上方的盖子的相应销/孔配合的引导孔/销。

25、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种组织培养容器的底座，包括：压缩结构，其被设计和构造成支撑完全下降到底座中的移植物支撑框架的膜底板；压缩结构被构造成允许在框架下降时培养基向外流动。在一些实施方案中，容器包括尺寸和位置被设置成容纳位于底座中的移植物支撑托盘的一组弹簧的凹口。替代地或另外地，在一些实施方案中，容器包括尺寸和位置被设置成容纳位于底座中的移植物支撑托盘的两组弹簧的凹口。替代地或另外地，在一些实施方案中，容器包括尺寸和位置被设置成接合在位于所述底座中的移植物支撑托盘上提供的相应孔或销的销或孔。替代地或另外地，在一些实施方案中，容器包括销或孔，其尺寸和位置被设置成接合在安装到底座的盖子的柱塞上提供的相应孔或销。替代地或另外地，在一些实施方案中，容器包括o形环或其他垫圈或包覆成型的弹性体。替代地或另外地，在一些实施方案中，容器包括至少一个液体排出端口。替代地或另外地，在一些实施方案中，至少一个端口中的至少一个包括有倒钩的连接器。替代地或另外地，在一些实施方案中，容器包括用于附接至盖子的卡扣安装连接器。替代地或另外地，在一些实施方案中，容器包括用于运输锁的配合卡扣插件。

26、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种组织培养容器的盖子，其包括：(a)刚性框架；(b)部署在框架内的柔性波纹管，该波纹管将柱塞保持在相对于框架的固定方向。在一些实施方案中，波纹管通常是打开的，使得其在没有外力的情况下将柱塞保持在升高的位置。替代地或另外地，在一些实施方案中，盖子包括在框架的上边缘的平面上方延伸的一个或多个缓冲室。替代地或另外地，在一些实施方案中，盖子包括在缓冲室的上表面上的气体渗透膜。替代地或另外地，在一些实施方案中，盖子包括位于刚性框架上的弹簧钩，其尺寸和位置被设置成接合由盖子覆盖的底座。替代地或另外地，在一些实施方案中，盖子包括与内部出口端口流体连通的一个或多个外部带倒钩的连接器。替代地或另外地，在一些实施方案中，盖子包括用于排出co2/空气的带倒钩的端口。替代地或另外地，在一些实施方案中，盖子包括在盖子的一侧的弹性体密封件，当容器被组装时该弹性体密封件接触底座。

27、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种皮肤移植物生产方法，包括：(a)将含有成纤维细胞(fb)的水凝胶引入密封的组织培养容器中；(b)孵育直至fb填充凝胶基质；(c)压缩同一密封组织培养容器中的凝胶基质；(d)将角质形成细胞(kc)接种到同一密封组织培养容器中的压缩基质上；(e)进一步培养直至移植物形成并准备好用于移植。在一些实施方案中，该方法包括使用显微镜视觉监测组织培养容器内的fb和/或kc的生长。替代地或另外地，在一些实施方案中，该方法包括交换培养基，其中该交换包括：将密封的组织培养容器沿一个方向倾斜以使培养基流入缓冲室；以及将密封的组织培养容器沿第二方向倾斜以通过重力流将培养基移至废物容器。

28、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种皮肤移植物生产方法，包括：(a)在第一位置处的密封组织培养容器中制备压缩的水凝胶皮肤移植物：(b)移除生长培养基并将运输培养基引入到密封的组织培养容器中；(c)部分降低密封的组织培养容器的盖子中的集成柱塞并将其锁定就位；和(d)运输到第二地点。在一些实施方案中，移除包括：将密封的组织培养容器沿一个方向倾斜以使培养基流入缓冲室；以及将密封的组织培养容器沿第二方向倾斜以通过重力流将培养基移至废物容器。

29、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种运输锁，包括：(a)跨接构件，其尺寸被设置成符合如上所述的组织培养容器的尺寸，并且具有：(i)在其下边缘上的被配置成符合盖子的框架的轮廓的两个凹口；(ii)凹口之间的向下延伸部；以及扣环，其尺寸被设置为在每个凹口的外边缘处接合并保持底座上的卡扣安装连接器；(iii)在其上边缘上的一系列插槽，这些插槽的尺寸和位置被设置成接合并保持位于位于上方的如上所述的第二组织培养容器的底座的下表面上的相应肋部。

30、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种组件，包括：以垂直阵列布置的多个如上所述的培养容器，其间散布有如上所述的运输锁。

31、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种系统，包括：(a)多个移植物培养容器；(b)细胞悬浮液、凝胶基质材料和培养基的储存器；(c)将每个储存器连接至每个培养容器的导管；(d)控制器，其被配置为以协调的方式将细胞悬浮液、凝胶基质材料和培养基通过导管递送至培养容器以产生移植物。在一些实施方案中，用于细胞悬浮液的储存器包括至少一个成纤维细胞(fb)储存器和至少一个角质形成细胞(kc)储存器。替代地或另外地，在一些实施方案中，用于细胞悬浮液的储存器包括用于选自成纤维细胞(fb)、角质细胞(kc)、脂肪细胞、肌细胞、神经元细胞、周细胞、干细胞和诱导多能细胞(ipc)的至少两种不同细胞类型的至少两个储存器。替代地或另外地，在一些实施方案中，用于细胞悬浮液的储存器包括用于至少上皮来源的第一细胞类型和选自间充质细胞、真皮来源的细胞、脂肪细胞、肌细胞、神经元细胞、周细胞和干细胞的第二细胞类型的至少两个储存器。替代地或另外地，在一些实施方案中，系统包括在控制器控制下的导管中的阀。替代地或另外地，在一些实施方案中，用于凝胶基质的储存器包括冷却元件。替代地或另外地，在一些实施方案中，控制器包括泵以将细胞悬浮液、凝胶基质材料和培养基移动通过导管。替代地或另外地，在一些实施方案中，系统包括定位成加热培养基的加热器。替代地或另外地，在一些实施方案中，系统包括混合模块，其接收来自一个储存器的细胞和来自不同储存器的凝胶基质，并将细胞混合到基质中以产生凝胶基质细胞悬浮液。替代地或另外地，在一些实施方案中，混合模块将来自一个储存器的细胞与来自第二储存器的缓冲液混合以产生缓冲的细胞悬浮液，然后将缓冲的细胞悬浮液与来自第三储存器的凝胶基质混合以产生凝胶基质细胞悬浮液。替代地或另外地，在一些实施方案中，该系统包括被设计和配置成容纳多个移植物培养容器的孵育室。替代地或另外地，在一些实施方案中，该系统包括可由控制器操作以压缩一个或多个移植物培养容器中的凝胶基质的压缩机构。替代地或另外地，在一些实施方案中，系统包括照相机和与外部输入设备的双向数据通信链路。替代地或另外地，在一些实施方案中，控制器适用于周期性地从移植物培养容器移除培养基并从储存器之一添加新培养基。替代地或另外地，在一些实施方案中，每个移植物培养容器包括如上所述的组织培养容器。

32、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种系统，包括：(a)多个细胞培养容器；(b)用于细胞悬浮液和培养基的储存器；(c)将每个储存器连接到每个培养容器的导管；(d)控制器，其被配置为以协调的方式将细胞悬浮液和培养基通过导管递送至培养容器以在容器中产生培养物。在一些实施方案中，用于细胞悬浮液的储存器含有选自成纤维细胞(fb)、角质形成细胞(kc)、脂肪细胞、肌细胞、神经元细胞、周细胞和干细胞的至少一种细胞类型。替代地或另外地，在一些实施方案中，用于细胞悬浮液的储存器含有上皮来源的第一细胞类型和选自间充质细胞、真皮来源的细胞、脂肪细胞、肌细胞、神经元细胞、周细胞和干细胞的第二细胞类型。替代地或另外地，在一些实施方案中，用于细胞悬浮液和培养基的储存器包括温度控制机构。替代地或另外地，在一些实施方案中，控制器包括泵(932)以移动细胞悬浮液和培养基通过导管。替代地或另外地，在一些实施方案中，系统包括用于将导管附接到细胞培养容器的连接器。替代地或另外地，在一些实施方案中，系统包括被设计和配置成容纳多个细胞培养容器的孵育室。替代地或另外地，在一些实施方案中，系统包括照相机和与外部输入设备的双向数据通信链路(982)。替代地或另外地，在一些实施方案中，控制器适应于周期性地从细胞培养容器移除培养基并从储存器之一添加新培养基。

33、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种系统，包括：(a)配备有至少一个端口的细胞培养容器；(b)测量容器中的培养基参数并产生指示信号的检测器；(c)培养基交换机构，其包括控制器，该控制器被配置为通过操作泵来响应指示信号的阈值，该泵经由该至少一个端口抽出用过的培养基并且经由该至少一个端口引入新鲜培养基。在一些实施方案中，参数选自ph、co2浓度、葡萄糖浓度、乳酸浓度和非贴壁细胞(数量和/或百分比)。替代地或另外地，在一些实施方案中，检测器包括ph电极和/或照相机。替代地或另外地，在一些实施方案中，细胞培养容器包括如上所述的移植物培养容器。

34、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种系统，包括：(a)配备有至少一个气体端口的封闭细胞培养容器；(b)通过调节器连接至所述至少一个气体端口的co2罐；(c)水储存器，来自罐的co2通过该水储存器在调节器和至少一个气体端口之间穿过。在一些实施方案中，封闭细胞培养容器包括如上所述的移植物培养容器。

35、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种系统，包括：(a)用于多个移植物培养容器的支撑表面；(b)控制支撑表面的角度的倾斜机构；(c)控制器，其被配置为操作该机构以提供通过一个或多个端口从容器中受控地去除培养基。在一些实施方案中，支撑表面安装在根据权利要求41所述的孵育室中。替代地或另外地，在一些实施方案中，控制器被配置成将倾斜机构操作至+18°，然后操作至-30°以将培养基排出到废物容器中。替代地或另外地，在一些实施方案中，控制器被配置成将倾斜机构操作至-5°以有利于采样。替代地或另外地，在一些实施方案中，控制器被配置成将倾斜机构操作至+18°以将培养基从顶部隔室移至缓冲室，然后操作至-30°以排出所有培养基。

36、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种系统，包括：(a)多个移植物培养容器，每个容器在其盖子中具有可移动柱塞；(b)至少一个活塞；和(c)控制器，其被配置为操作垂直位移机构以降低和升高至少一个活塞，从而压下和释放容器的盖子中的每个柱塞。在一些实施方案中，该系统包括水平位移机构，其中控制器将至少一个活塞与柱塞对齐。替代地或另外地，在一些实施方案中，垂直位移机构能够针对不同的力和压缩模式(例如线性、逐步)进行调节。替代地或另外地，在一些实施方案中，控制器是可编程的。替代地或另外地，在一些实施方案中，系统包括压力传感器。替代地或另外地，在一些实施方案中，系统包括位于活塞上的照相机。

37、在本发明的一些示例性实施方案中，提供了一种系统，包括：(a)包括至少一个端口的组织培养容器；(b)提供容器中培养物的图像输出的照相机；和(c)对培养基交换机构进行控制的控制器。在一些实施方案中，系统包括接收图像输出并配备有用于操作控制器的用户界面的远程设备。替代地或另外地，在一些实施方案中，培养基交换机构包括至少一个泵，其经由至少一个端口抽出用过的培养基并且经由该至少一个端口引入新鲜培养基。替代地或另外地，在一些实施方案中，培养基交换机构包括控制保持组织培养容器的支撑表面的角度的倾斜机构。

38、除非另有定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。尽管下面描述了合适的方法和材料，但是与本文描述的那些类似或等同的方法和材料可以用于本发明的实践中。如有冲突，以专利说明书(包括定义)为准。所有材料、方法和实例仅是说明性的并且不旨在限制。

39、如本文所用，术语“包含”和“包括”或其语法变体应被视为指定包含所述特征、整数、动作或组件，而不排除添加一个或多个附加特征、整数、动作、组件或其组。该术语比美国专利商标局专利审查程序手册所定义的术语“由......组成”和“基本上由......组成”更宽泛，并且包括这些术语。因此，实施方案“包括”或“包含”特征的任何叙述都是子实施方案“基本上由所叙述的特征组成”和/或“由所叙述的特征组成”的具体陈述。

40、短语“基本上由......组成”或其语法变体当在本文中使用时应被视为指定所述特征、整数、步骤或组件，但不排除添加一个或多个另外的特征、整数、步骤、组件或其组但前提是附加特征、整体、步骤、组分或其组不会实质上改变所要求保护的组合物、装置或方法的基本和新颖特征。

41、本说明书和所附权利要求中使用的短语“适应于”对先前列举的组件施加了额外的结构限制。

42、术语“方法”是指用于完成给定任务的方式、手段、技术和程序，包括但不限于建筑学和/或计算机科学的从业者已知的或容易从已知方式、手段、技术和程序开发的那些方式、手段、技术和程序。