用靶向性4-1BB(CD137)激动剂的组合疗法的制作方法

发明领域本发明涉及采用肿瘤靶向性抗cd3双特异性抗体和4-1bb(cd137)激动剂,特别是含有4-1bbl三聚体的抗原结合分子的组合疗法,这些组合疗法用于治疗癌症的用途和使用该组合疗法的方法。还包括的是采用包含至少一个能够特异性结合肿瘤相关抗原的抗原结合域的4-1bb激动剂,特别是含有4-1bbl三聚体的抗原结合分子,与阻断pd-l1/pd-1相互作用的药剂,特别是pd-l1抗体和/或与肿瘤靶向性抗cd3双特异性抗体的组合疗法。

背景技术：

0、发明背景

1、癌症是全世界首要死因之一。尽管有治疗选项的进步,具有晚期癌症的患者的预后仍然较差。因此,对在不引起不可接受的毒性的情况下延长癌症患者的存活的最佳疗法存在持久且迫切的医学需要。最近来自临床试验的结果已经显示免疫疗法,特别是免疫检查点抑制剂能延长癌症患者的总体存活及引起持久的响应。尽管有这些有希望的结果,当前基于免疫的疗法仅仅在一部分患者中有效,而且需要组合策略来改善治疗益处。

2、募集患者自己的免疫系统来抗击癌症的一种方式是t细胞双特异性抗体(tcb)。抗cea/抗cd3双特异性抗体是靶向在肿瘤细胞上表达的cea和t细胞上存在的cd3厄普西隆链(cd3ε)的分子。同时结合导致t细胞活化和t细胞介导的b细胞杀伤。在cea阳性癌细胞存在下,无论正在循环或者驻留组织,药理学活性剂量会触发t细胞活化和相关的细胞因子释放。与肿瘤细胞消减平行,抗cea/抗cd3双特异性抗体导致在第一次施用后24小时内外周血中的t细胞的瞬时减少和细胞因子释放的峰,继以在72小时内快速t细胞恢复和细胞因子水平回到基线。如此,为了实现肿瘤细胞的完全消除,需要保留t细胞活化和针对癌细胞的免疫应答的另外的药剂。

3、tnf受体超家族的一个成员,4-1bb(cd137)最初被鉴定为由通过t细胞活化表达的可诱导分子(kwon and weissman,1989,proc natl acad sci usa 86,1963-1967)。后续研究证明许多其它免疫细胞也表达4-1bb,包括nk细胞,b细胞,nkt细胞,单核细胞,嗜中性细胞,肥大细胞,树突细胞(dc)和非造血起源的细胞诸如内皮和平滑肌细胞(vinay andkwon,2011,cell mol immunol 8,281-284)。4-1bb在不同细胞类型中的表达大多通过各种刺激性信号,诸如t细胞受体(tcr)或b细胞受体触发,以及经由共刺激性分子或促炎性细胞因子的受体诱导的信号传导而可诱导和驱动(diehl et al.,2002,jimmunol 168,3755-3762；zhang et al.,2010,clin cancer res 13,2758-2767)。

4、4-1bb配体(4-1bbl或cd137l)在1993年鉴定(goodwin et al.,1993,eurjimmunol 23,2631-2641)。已经显示4-1bbl的表达在专职抗原呈递细胞(apc)诸如b细胞,dc和巨噬细胞上受到限制。4-1bbl的可诱导表达对于包括αβ和γδt细胞子集二者在内的t细胞,和内皮细胞是特征性的(shao and schwarz,2011,j leukoc biol 89,21-29)。

5、经由4-1bb受体(例如通过4-1bbl接合)的共刺激活化t细胞(cd4+和cd8+子集二者)内的多种信号传导级联,强力提升t细胞活化(bartkowiak and curran,2015)。与tcr触发组合,激动性4-1bb特异性抗体增强t细胞增殖,刺激淋巴因子分泌并降低t淋巴细胞对活化诱导的细胞死亡的敏感性(snell et al.,2011,immunol rev 244,197-217)。这种机制作为癌症免疫疗法中的第一个概念证据得到进一步发展。在一种临床前模型中针对4-1bb的激动性抗体在荷瘤小鼠中的施用导致有力的抗肿瘤效果(melero et al.,1997,nat med3,682-685)。后来,越来越多的证据指示4-1bb通常只在与其它免疫调控性化合物,化疗试剂,肿瘤特异性疫苗接种或放疗组合施用时展现它作为抗肿瘤药剂的效力(bartkowiakand curran,2015,front oncol 5,117)。

6、tnfr超家族的信号传导需要三聚化配体的交联来与受体啮合,因此需要野生型fc结合的4-1bb激动性抗体也如此(li and ravetch,2011,science333,1030-1034)。然而,在小鼠中,具有功能性活性fc域的4-1bb特异性激动性抗体的系统施用导致与肝毒性相关的cd8+ t细胞流入(dubrot et al.,2010,cancer immunol immunother 59,1223-1233),这在功能性fc受体缺失下减弱或显著减轻。在临床中,一种fc胜任的4-1bb激动性抗体(bms-663513)(nct00612664)引起4级肝炎,导致试验终止(simeone and ascierto,2012,jimmunotoxicol 9,241-247)。因此,需要有效且更安全的4-1bb激动剂。

7、已经生成了由4-1bb配体的一个细胞外结构域和单链抗体片段(hornig et al.,2012,j immunother 35,418-429；müller et al.,2008,j immunother 31,714-722)或与重链的c端融合的单个4-1bb配体(zhang et al.,2007,clin cancer res 13,2758-2767)构成的融合蛋白。wo 2010/010051公开了由彼此连接且与抗体部分融合的三个tnf配体外域组成的融合蛋白的生成。在本发明中,由三聚且因而生物学活性的4-1bb配体和对肿瘤相关抗原fap特异性的抗原结合域和fc无活性域构成的抗原结合分子显示为特别稳定且强健(在本文中称作fap-4-1bbl)。通过fap靶向性特异性交联,fap抗原结合域替换对fc介导的毒性(特别是在肝中)负有责任的非特异性fcγr介导的交联。通过肿瘤(基质)抗原的交联使之有可能施用4-1bb激动剂。

8、已经发现在将靶向性4-1bbl抗原结合分子与抗cea/抗cd3双特异性抗体,即ceatcb组合时实现4-1bb激动作用的更好抗肿瘤功效。t细胞双特异性抗体对t细胞提供初始tcr活化性信号传导,然后与fap-4-1bbl的组合导致抗肿瘤t细胞免疫力的进一步加强。如此,我们在本文中描述用于表达cea的肿瘤(cea阳性癌症)的一种新颖组合疗法。而且,已经显示靶向性4-1bb激动剂fap-4-1bbl与阻断pd-l1/pd-1相互作用的药剂的组合诱导强烈的肿瘤消退,是用单独的阻断pd-l1/pd-1相互作用的药剂观察不到的。

技术实现思路

0、发明概述

1、本发明涉及抗cd3双特异性抗体和它们与4-1bb(cd137)激动剂,特别是含有4-1bbl三聚体的抗原结合分子组合的用途,特别是它们在一种用于治疗癌症或延迟癌症进展,更加特别是用于治疗晚期和/或转移性实体瘤或延迟晚期和/或转移性实体瘤进展的方法中的用途。已经发现本文中描述的组合疗法在抑制肿瘤生长和消除肿瘤细胞方面比单独用该抗cea/抗cd3双特异性抗体的治疗更加有效。

2、在一个方面,本发明提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,其中该对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体与4-1bb(cd137)激动剂组合使用。在一个方面,该对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体是抗cea/抗cd3双特异性抗体或抗folr1/抗cd3双特异性抗体或抗mcsp/抗cd3双特异性抗体。特别地,该对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体是抗cea/抗cd3双特异性抗体或抗folr1/抗cd3双特异性抗体。在又一个方面,该对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体是抗cea/抗cd3双特异性抗体。如此,本发明提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该抗cea/抗cd3双特异性抗体与4-1bb(cd137)激动剂组合使用。

3、特别地,该4-1bb激动剂是包含肿瘤相关抗原的抗原结合分子。在一个方面,该4-1bb激动剂是包含fc域的抗原结合分子。在一个特定方面,该4-1bb激动剂是包含有降低fcγ受体结合和/或效应器功能的修饰的fc域的抗原结合分子。通过肿瘤相关抗原的交联使之有可能避免非特异性fcγr介导的交联和如此可以施用与常用4-1bb抗体相比更高和更加有效剂量的该4-1bb激动剂。

4、在又一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体和该4-1bb激动剂在单一组合物中一起施用或在两种或更多种不同组合物中分开施用。

5、在又一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体与4-1bb(cd137)激动剂组合使用,且其中该4-1bb激动剂与该t细胞活化性抗cd3双特异性抗体协同作用。

6、在另一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该抗cea/抗cd3双特异性抗体与该4-1bb激动剂并行,在该4-1bb激动剂前,或在该4-1bb激动剂后施用。

7、在一个方面,本发明提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂包含三个4-1bbl外域或其片段。在又一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含三个4-1bbl外域或其片段的分子且其中该4-1bbl外域包含选自由seq id no:1,seq id no:2,seq id no:3,seq id no:4,seq id no:5,seq id no:6,seq id no:7和seq id no:8组成的组的氨基酸序列,特别是seq id no:1或seq id no:5的氨基酸序列。更加特别地,该4-1bbl外域包含seq id no:5的氨基酸序列。

8、在另一个方面,本发明提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含至少一个能够特异性结合肿瘤相关抗原的抗原结合域的抗原结合分子。在一个方面,该4-1bb激动剂是包含三个4-1bbl外域或其片段和至少一个能够特异性结合肿瘤相关抗原的抗原结合域的抗原结合分子。在又一个方面,该4-1bb激动剂是包含igg fc域,具体是igg1 fc域或igg4 fc域的抗原结合分子。

9、在又一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含三个4-1bbl外域或其片段和至少一个能够特异性结合肿瘤相关抗原,特别是fap的抗原结合域的抗原结合分子。在一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含三个4-1bbl外域或其片段和至少一个能够特异性结合fap的模块的抗原结合分子,其中该能够特异性结合fap的抗原结合域包含(a)重链可变区(vhfap),其包含(i)包含seq id no:9的氨基酸序列的cdr-h1,(ii)包含seq id no:10的氨基酸序列的cdr-h2,和(iii)包含seq idno:11的氨基酸序列的cdr-h3,和轻链可变区(vlfap),其包含(iv)包含seq id no:12的氨基酸序列的cdr-l1,(v)包含seq id no:13的氨基酸序列的cdr-l2,和(vi)包含seq id no:14的氨基酸序列的cdr-l3,或(b)重链可变区(vhfap),其包含(i)包含seq id no:15的氨基酸序列的cdr-h1,(ii)包含seq id no:16的氨基酸序列的cdr-h2,和(iii)包含seq id no:17的氨基酸序列的cdr-h3,和轻链可变区(vlfap),其包含(iv)包含seq id no:18的氨基酸序列的cdr-l1,(v)包含seq id no:19的氨基酸序列的cdr-l2,和(vi)包含seq id no:20的氨基酸序列的cdr-l3。

10、在一个特定方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含三个4-1bbl外域或其片段和至少一个能够特异性结合fap的抗原结合域的抗原结合分子,其中该能够特异性结合fap的抗原结合域包含包含seq id no:21的氨基酸序列的重链可变区(vhfap)和包含seq id no:22的氨基酸序列的轻链可变区(vlfap)或其中该能够特异性结合fap的抗原结合域包含包含seq id no:23的氨基酸序列的重链可变区(vhfap)和包含seq id no:24的氨基酸序列的轻链可变区(vlfap)。

11、在一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是进一步包含由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的fc域的抗原结合分子。特别地,该4-1bb激动剂是包含igg fc域,具体是igg1 fc域或igg4 fc域的抗原结合分子。更加特别地,该4-1bb激动剂是包含包含一处或多处降低对fc受体的结合和/或效应器功能的氨基酸替代的fc域的抗原结合分子。在一个特定方面,该4-1bb激动剂包含包含氨基酸替代l234a,l235a和p329g的igg1 fc域。

12、在本发明的另一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含下述各项的抗原结合分子:

13、(a)至少一个能够特异性结合fap的抗原结合域,和

14、(b)通过二硫键彼此连接的第一和第二多肽,

15、其中该第一多肽包含通过肽接头彼此连接的两个4-1bbl外域或其片段且该第二多肽包含一个4-1bbl外域或其片段。

16、在另一个方面,本发明提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含下述各项的抗原结合分子:

17、(a)至少一个能够特异性结合fap的fab域,和

18、(b)通过二硫键彼此连接的第一和第二多肽,

19、其中该抗原结合分子特征在于

20、(i)分别地,该第一多肽含有ch1或cl域且该第二多肽含有cl或ch1域,其中该第二多肽与该第一多肽通过该ch1和cl域之间的二硫键连接,且其中该第一多肽包含通过肽接头彼此且与该ch1或cl域连接的两个4-1bbl外域或其片段且其中该第二多肽包含经由肽接头与所述多肽的该cl或ch1域连接的一个4-1bbl外域或其片段,或

21、(ii)分别地,该第一多肽含有ch3域且该第二多肽含有ch3域,且其中该第一多肽包含通过肽接头彼此且与该ch3域的c端连接的两个4-1bbl外域或其片段且其中该第二多肽包含经由肽接头与所述多肽的该ch3域的c端连接的一个4-1bbl外域或其片段,或

22、(iii)分别地,该第一多肽含有vh-cl或vl-ch1域且该第二多肽含有vl-ch1域或vh-cl域,其中该第二多肽与该第一多肽通过该ch1和cl域之间的二硫键连接,且其中该第一多肽包含通过肽接头彼此且与vh或vl连接的两个4-1bbl外域或其片段且其中该第二多肽包含经由肽接头与所述多肽的vl或vh连接的一个4-1bbl外域或其片段。

23、在一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含下述各项的抗原结合分子:

24、(a)至少一个能够特异性结合fap的fab域,其包含包含seq id no:21的氨基酸序列的重链可变区(vhfap)和包含seq id no:22的氨基酸序列的轻链可变区(vlfap)或包含seq id no:23的氨基酸序列的重链可变区(vhfap)和包含seq id no:24的氨基酸序列的轻链可变区(vlfap),和

25、(b)通过二硫键彼此连接的第一和第二多肽,

26、其中该抗原结合分子特征在于该第一多肽包含选自由seq id no:25,seq id no:26,seq id no:27,seq id no:28,seq id no:29,seq id no:30,seq id no:31和seq idno:32组成的组的氨基酸序列且在于该第二多肽包含选自由seq id no:1,seq id no:2,seq id no:3,seq id no:4,seq id no:5,seq id no:6,seq id no:7和seq id no:8组成的组的氨基酸序列。

27、在一个特定方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含包含seq id no:65的氨基酸序列的第一重链,包含seq id no:66的氨基酸序列的第一轻链,包含seq id no:67的氨基酸序列的第二重链和包含seq idno:68的氨基酸序列的第二轻链的抗原结合分子。

28、在另一个方面,本发明提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含下述各项的抗原结合分子:

29、(a)至少一个能够特异性结合fap的抗原结合域,和

30、(b)包含通过肽接头彼此连接的三个4-1bbl外域或其片段的多肽。

31、在一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含下述各项的抗原结合分子:(a)至少一个能够特异性结合fap的抗原结合域,

32、(b)包含通过肽接头彼此连接的三个4-1bbl外域或其片段的多肽,和

33、(c)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的fc域,其中该包含通过肽接头彼此连接的三个4-1bbl外域或其片段的多肽与该fc域的两个亚基之一的n或c端氨基酸融合,任选经由肽接头。

34、在另一个方面,本发明提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是抗fap/抗4-1bb双特异性抗体。

35、在又一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含三个4-1bbl外域或其片段和至少一个能够特异性结合cea的抗原结合域的抗原结合分子。在一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含三个4-1bbl外域或其片段和至少一个能够特异性结合cea的抗原结合域的抗原结合分子,其中该能够特异性结合cea的抗原结合域包含重链可变区(vhcea),其包含(i)包含seq id no:49的氨基酸序列的cdr-h1,(ii)包含seq id no:50的氨基酸序列的cdr-h2,和(iii)包含seq id no:51的氨基酸序列的cdr-h3,和轻链可变区(vlcea),其包含(iv)包含seq id no:52的氨基酸序列的cdr-l1,(v)包含seq id no:53的氨基酸序列的cdr-l2,和(vi)包含seq id no:54的氨基酸序列的cdr-l3。

36、在一个特定方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含三个4-1bbl外域或其片段和至少一个能够特异性结合cea的抗原结合域的抗原结合分子,其中该能够特异性结合cea的抗原结合域包含包含seq id no:55的氨基酸序列的重链可变区(vhcea)和包含seq id no:56的氨基酸序列的轻链可变区(vlcea)。

37、在一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是进一步包含由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的fc域的抗原结合分子。特别地,该4-1bb激动剂是包含igg fc域,具体是igg1 fc域或igg4 fc域的抗原结合分子。更加特别地,该4-1bb激动剂是包含包含一处或多处降低对fc受体的结合和/或效应器功能的氨基酸替代的fc域的抗原结合分子。在一个特定方面,该4-1bb激动剂包含包含氨基酸替代l234a,l235a和p329g的igg1 fc域。

38、在本发明的另一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含下述各项的抗原结合分子:

39、(a)至少一个能够特异性结合cea的抗原结合域,和

40、(b)通过二硫键彼此连接的第一和第二多肽,

41、其中该第一多肽包含通过肽接头彼此连接的两个4-1bbl外域或其片段且该第二多肽包含一个4-1bbl外域或其片段。

42、在另一个方面,本发明提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含下述各项的抗原结合分子:

43、(a)至少一个能够特异性结合cea的fab域,和

44、(b)通过二硫键彼此连接的第一和第二多肽,

45、其中该抗原结合分子特征在于

46、(i)分别地,该第一多肽含有ch1或cl域且该第二多肽含有cl或ch1域,其中该第二多肽与该第一多肽通过该ch1和cl域之间的二硫键连接,且其中该第一多肽包含通过肽接头彼此且与该ch1或cl域连接的两个4-1bbl外域或其片段且其中该第二多肽包含经由肽接头与所述多肽的该cl或ch1域连接的一个4-1bbl外域或其片段,或

47、(ii)分别地,该第一多肽含有ch3域且该第二多肽含有ch3域,且其中该第一多肽包含通过肽接头彼此且与该ch3域的c端连接的两个4-1bbl外域或其片段且其中该第二多肽包含经由肽接头与所述多肽的该ch3域的c端连接的一个4-1bbl外域或其片段,或

48、(iii)分别地,该第一多肽含有vh-cl或vl-ch1域且该第二多肽含有vl-ch1域或vh-cl域,其中该第二多肽与该第一多肽通过该ch1和cl域之间的二硫键连接,且其中该第一多肽包含通过肽接头彼此且与vh或vl连接的两个4-1bbl外域或其片段且其中该第二多肽包含经由肽接头与所述多肽的vl或vh连接的一个4-1bbl外域或其片段。

49、在一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含下述各项的抗原结合分子:

50、(a)至少一个能够特异性结合cea的fab域,其包含包含seq id no:55的氨基酸序列的重链可变区(vhcea)和包含seq id no:56的氨基酸序列的轻链可变区(vlcea),和

51、(b)通过二硫键彼此连接的第一和第二多肽,

52、其中该抗原结合分子特征在于该第一多肽包含选自由seq id no:25,seq id no:26,seq id no:27,seq id no:28,seq id no:29,seq id no:30,seq id no:31和seq idno:32组成的组的氨基酸序列且在于该第二多肽包含选自由seq id no:1,seq id no:2,seq id no:3,seq id no:4,seq id no:5,seq id no:6,seq id no:7和seq id no:8组成的组的氨基酸序列。

53、在另一个方面,本发明提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含下述各项的抗原结合分子:

54、(a)至少一个能够特异性结合cea的抗原结合域,和

55、(b)包含通过肽接头彼此连接的三个4-1bbl外域或其片段的多肽。

56、在一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是包含下述各项的抗原结合分子:

57、(a)至少一个能够特异性结合cea的抗原结合域,

58、(b)包含通过肽接头彼此连接的三个4-1bbl外域或其片段的多肽,和

59、(c)由能够稳定联合的第一和第二亚基构成的fc域,其中该包含通过肽接头彼此连接的三个4-1bbl外域或其片段的多肽与该fc域的两个亚基之一的n或c端氨基酸融合,任选经由肽接头。

60、在另一个方面,本发明提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该4-1bb激动剂是抗cea/抗4-1bb双特异性抗体。

61、在所有这些方面,本发明进一步提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该抗cea/抗cd3双特异性抗体包含结合cd3的第一抗原结合域,和结合cea的第二抗原结合域。特别地,该抗cea/抗cd3双特异性抗体包含包含重链可变区(vhcd3)和轻链可变区(vlcd3)的第一抗原结合域,和包含重链可变区(vhcea)和轻链可变区(vlcea)的第二抗原结合域。在一个方面,该第一抗原结合域包含包含seq id no:33的cdr-h1序列,seq id no:34的cdr-h2序列,和seq id no:35的cdr-h3序列的重链可变区(vhcd3)；和/或包含seq id no:36的cdr-l1序列,seq id no:37的cdr-l2序列,和seq idno:38的cdr-l3序列的轻链可变区(vlcd3)。更加特别地,该第一抗原结合域包含包含seqid no:39的氨基酸序列的重链可变区(vhcd3)和/或包含seq id no:40的氨基酸序列的轻链可变区(vlcd3)。在另一个方面,该第二抗原结合域包含包含seq id no:41的cdr-h1序列,seq id no:42的cdr-h2序列,和seq id no:43的cdr-h3序列的重链可变区(vhcea),和/或包含seq id no:44的cdr-l1序列,seq id no:45的cdr-l2序列,和seq id no:46的cdr-l3序列的轻链可变区(vlcea)。在另一个方面,该第二抗原结合域包含包含seq id no:49的cdr-h1序列,seq id no:50的cdr-h2序列,和seq id no:51的cdr-h3序列的重链可变区(vhcea),和/或包含seq id no:52的cdr-l1序列,seq id no:53的cdr-l2序列,和seq idno:54的cdr-l3序列的轻链可变区(vlcea)。

62、更加特别地,该第二抗原结合域包含包含seq id no:47的氨基酸序列的重链可变区(vhcea)和/或包含seq id no:48的氨基酸序列的轻链可变区(vlcea)。更加特别地,该第二抗原结合域包含包含seq id no:55的氨基酸序列的重链可变区(vhcea)和/或包含seqid no:56的氨基酸序列的轻链可变区(vlcea)。

63、在另一个方面,本发明进一步提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该抗cea/抗cd3双特异性抗体进一步包含结合cea的第三抗原结合域。特别地,该第三抗原结合域包含(a)重链可变区(vhcea),其包含seq id no:41的cdr-h1序列,seq id no:42的cdr-h2序列,和seq id no:43的cdr-h3序列,和/或轻链可变区(vlcea),其包含seq id no:44的cdr-l1序列,seq id no:45的cdr-l2序列,和seqid no:46的cdr-l3序列,或(b)重链可变区(vhcea),其包含seq id no:49的cdr-h1序列,seq id no:50的cdr-h2序列,和seq id no:51的cdr-h3序列,和/或轻链可变区(vlcea),其包含seq id no:52的cdr-l1序列,seq id no:53的cdr-l2序列,和seq id no:54的cdr-l3序列。更加特别地,该第三抗原结合域包含包含seq id no:47的氨基酸序列的重链可变区(vhcea)和/或包含seq id no:48的氨基酸序列的轻链可变区(vlcea)或其中该第二抗原结合域包含包含seq id no:55的氨基酸序列的重链可变区(vhcea)和/或包含seq id no:56的氨基酸序列的轻链可变区(vlcea)。

64、在又一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该第一抗原结合域是交叉fab分子,其中该fab重和轻链的可变域或恒定域是交换的,且该第二和第三,如果存在的话,抗原结合域是常规fab分子。

65、在又一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中(i)第二抗原结合域在fab重链的c端与第一抗原结合域的fab重链的n端融合,第一抗原结合域在fab重链的c端与fc域的第一亚基的n端融合,且第三抗原结合域在fab重链的c端与fc域的第二亚基的n端融合,或(ii)第一抗原结合域在fab重链的c端与第二抗原结合域的fab重链的n端融合,第二抗原结合域在fab重链的c端与fc域的第一亚基的n端融合,且第三抗原结合域在fab重链的c端与fc域的第二亚基的n端融合。

66、在又一个方面,本发明提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该抗cea/抗cd3双特异性抗体包含包含一处或多处降低对fc受体的结合和/或效应器功能的氨基酸替代的fc域。更加特别地,该抗cea/抗cd3双特异性抗体包含包含氨基酸替代l234a,l235a和p329g的igg1 fc域。

67、在又一个方面,本发明提供对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,其中该肿瘤相关抗原是folr1。如此,本发明提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的抗folr1/抗cd3双特异性抗体,其中该抗folr1/抗cd3双特异性抗体包含结合cd3的第一抗原结合域,和结合folr1的第二抗原结合域。

68、在一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,其中该t细胞活化性抗cd3双特异性抗体包含包含重链可变区(vhcd3)的第一抗原结合域,包含重链可变区(vhfolr1)的第二抗原结合域和共同轻链可变区。

69、在一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,其中该第一抗原结合域包含包含seq idno:121的cdr-h1序列,seq id no:122的cdr-h2序列,和seq id no:123的cdr-h3序列的重链可变区(vhcd3)；该第二抗原结合域包含包含seq id no:124的cdr-h1序列,seq id no:125的cdr-h2序列,和seq id no:126的cdr-h3序列的重链可变区(vhfolr1)；且其中该共同轻链包含seq id no:127的cdr-l1序列,seq id no:128的cdr-l2序列,和seq id no:129的cdr-l3序列。在又一个方面,该第一抗原结合域包含包含seq id no:130的序列的重链可变区(vhcd3)；该第二抗原结合域包含包含seq id no:131的序列的重链可变区(vhfolr1)；且其中该共同轻链包含seq id no:132的序列。

70、在又一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,其中该抗folr1/抗cd3双特异性抗体包含结合folr1的第三抗原结合域。特别地,提供的是抗folr1/抗cd3双特异性抗体,其包含包含seq id no:133的氨基酸序列的第一重链,包含seq id no:134的氨基酸序列的第二重链和seq id no:135的共同轻链。

71、在又一个方面,本发明提供对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,其中该肿瘤相关抗原是mcsp。如此,本发明提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的抗mcsp/抗cd3双特异性抗体,其中该抗mcsp/抗cd3双特异性抗体包含结合cd3的第一抗原结合域,和结合mcsp的第二抗原结合域。

72、特别地,该抗cea/抗cd3双特异性抗体包含包含重链可变区(vhcd3)和轻链可变区(vlcd3)的第一抗原结合域,和包含重链可变区(vhmcsp)和轻链可变区(vlmcsp)的第二抗原结合域。在一个方面,该第一抗原结合域包含包含seq id no:33的cdr-h1序列,seq id no:34的cdr-h2序列,和seq id no:35的cdr-h3序列的重链可变区(vhcd3)；和/或包含seq idno:36的cdr-l1序列,seq id no:37的cdr-l2序列,和seq id no:38的cdr-l3序列的轻链可变区(vlcd3)。更加特别地,该第一抗原结合域包含包含seq id no:39的氨基酸序列的重链可变区(vhcd3)和/或包含seq id no:40的氨基酸序列的轻链可变区(vlcd3)。在另一个方面,该第二抗原结合域包含包含seq id no:151的cdr-h1序列,seq id no:152的cdr-h2序列,和seq id no:153的cdr-h3序列的重链可变区(vhmcsp),和/或包含seq id no:154的cdr-l1序列,seq id no:155的cdr-l2序列,和seq id no:156的cdr-l3序列的轻链可变区(vlmcsp)。更加特别地,该第二抗原结合域包含包含seq id no:157的氨基酸序列的重链可变区(vhmcsp)和/或包含seq id no:158的氨基酸序列的轻链可变区(vlmcsp)。

73、在另一个方面,本发明进一步提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的抗mcsp/抗cd3双特异性抗体,其中该抗mcsp/抗cd3双特异性抗体进一步包含结合mcsp的第三抗原结合域。特别地,该第三抗原结合域包含包含seq id no:151的cdr-h1序列,seqid no:152的cdr-h2序列,和seq id no:153的cdr-h3序列的重链可变区(vhmcsp),和/或包含seq id no:154的cdr-l1序列,seq id no:155的cdr-l2序列,和seq idno:156的cdr-l3序列的轻链可变区(vlmcsp)。更加特别地,该第三抗原结合域包含包含seq id no:157的氨基酸序列的重链可变区(vhmcsp)和/或包含seq id no:158的氨基酸序列的轻链可变区(vlmcsp)。

74、在另一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体与4-1bb(cd137)激动剂组合使用且其中该组合以约一周至三周的间隔施用。

75、在还有另一个方面,本发明提供供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,其中该对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体与4-1bb(cd137)激动剂组合且与阻断pd-l1/pd-1相互作用的药剂组合使用。特别地,该阻断pd-l1/pd-1相互作用的药剂是抗pd-l1抗体或抗pd1抗体。更加特别地,该阻断pd-l1/pd-1相互作用的药剂选自由阿特珠单抗,度伐单抗,派姆单抗和纳武单抗组成的组。在一个具体的方面,该阻断pd-l1/pd-1相互作用的药剂是阿特珠单抗。

76、在又一个方面,本发明提供一种药学产品,其包含(a)包含作为活性组分的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,和药学可接受载剂的第一组合物；和(b)包含作为活性组分的4-1bb激动剂和药学可接受载剂的第二组合物,供组合,顺序或同时治疗疾病,特别是治疗癌症中使用。

77、在又一个方面,该对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是该抗cea/抗cd3双特异性抗体供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用,其中该对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体与4-1bb激动剂组合使用且其中在该组合治疗前实施用ii型抗cd20抗体,优选奥滨尤妥珠单抗的预治疗,其中该预治疗和该组合治疗之间的时间段足以响应该ii型抗cd20抗体,优选奥滨尤妥珠单抗减少该个体中的b细胞。在另一个方面,提供的是一种药学组合物,其包含对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,和4-1bb激动剂。在一个方面,该药学组合物供治疗癌症或延迟癌症进展,特别是治疗实体瘤中使用。在又一个方面,该药学组合物供治疗选自由结肠癌,肺癌,卵巢癌,胃癌,膀胱癌,胰腺癌,子宫内膜癌,乳腺癌,肾癌,食管癌,和前列腺癌组成的组的疾病中使用。

78、在一个另外的方面,本发明提供一种用于在受试者中治疗癌症或延迟癌症进展的试剂盒,其包含包装,包含(a)包含作为活性组分的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,和药学可接受载剂的第一组合物；(b)包含作为活性组分的4-1bb激动剂和药学可接受载剂的第二组合物,和(c)关于在组合疗法中使用该组合物的用法说明书。

79、在又一个方面,本发明涉及对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,和4-1bb激动剂的组合在制造用于治疗增殖性疾病,特别是癌症或延迟增殖性疾病,特别是癌症进展的药物中的用途。

80、特别地,提供的是对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,和4-1bb激动剂的组合在制造用于治疗选自由结肠癌,肺癌,卵巢癌,胃癌,膀胱癌,胰腺癌,子宫内膜癌,乳腺癌,肾癌,食管癌,和前列腺癌组成的组的疾病的药物中的用途。

81、在另一个方面,本发明提供一种用于在受试者中治疗癌症或延迟癌症进展的方法,其包含对该受试者施用有效量的对肿瘤相关抗原特异性的t细胞活化性抗cd3双特异性抗体,特别是抗cea/抗cd3双特异性抗体,和4-1bb激动剂。特别地,本发明涉及一种用于在受试者中治疗癌症或延迟癌症进展的方法,其中该4-1bb激动剂是抗原结合分子。在一个方面,该4-1bb激动剂是包含fc域的抗原结合分子。在一个特定方面,该4-1bb激动剂是包含有降低fcγ受体结合和/或效应器功能的修饰的fc域的抗原结合分子。在一个特定方面,该4-1bb激动剂是包含三个4-1bbl外域或其片段的抗原结合分子。在一个方面,该4-1bb激动剂是包含三个4-1bbl外域或其片段的分子且其中该4-1bbl外域包含选自由seq id no:1,seqid no:2,seq id no:3,seq id no:4,seq id no:5,seq id no:6,seq id no:7和seq idno:8组成的组的氨基酸序列,特别是seq id no:1或seq id no:5的氨基酸序列。在一个方面,该4-1bb激动剂是包含至少一个能够特异性结合肿瘤相关抗原的抗原结合域的抗原结合分子。特别地,该4-1bb激动剂是包含三个4-1bbl外域或其片段和至少一个能够特异性结合肿瘤相关抗原的抗原结合域的抗原结合分子。更加特别地,该4-1bb激动剂是包含三个4-1bbl外域或其片段和能够特异性结合fap的抗原结合域的抗原结合分子。在另一个特定方面,该4-1bb激动剂是包含三个4-1bbl外域或其片段和能够特异性结合cea的抗原结合域的抗原结合分子。

82、在又一个方面,提供的是供用于治疗癌症或延迟癌症进展的方法中使用的包含至少一个能够特异性结合肿瘤相关抗原的抗原结合域的4-1bb激动剂,其中该包含至少一个能够特异性结合肿瘤相关抗原的抗原结合域的4-1bb激动剂与阻断pd-l1/pd-1相互作用的药剂组合使用。特别地,该阻断pd-l1/pd-1相互作用的药剂是抗pd-l1抗体或抗pd1抗体。更加特别地,该阻断pd-l1/pd-1相互作用的药剂选自由阿特珠单抗,度伐单抗,pembrolizumab和nivolumab组成的组。在一个具体的方面,该阻断pd-l1/pd-1相互作用的药剂是阿特珠单抗。而且,如本文中描述的供方法中使用包含至少一个能够特异性结合肿瘤相关抗原的抗原结合域的4-1bb激动剂是如下的,其中该肿瘤相关抗原选自成纤维细胞激活蛋白(fap)或cea。更加特别地,该4-1bb激动剂是包含三个4-1bbl外域或其片段和至少一个能够特异性结合成纤维细胞激活蛋白(fap)的抗原结合域的抗原结合分子。