抗SARS-CoV-2或突变体mRNA疫苗和重组蛋白亚单位疫苗制备及应用的制作方法

本发明涉及抗sars-cov-2或其突变体感染的药物以及联合用药给药方式，特别包含一种抗sars-cov-2或其突变体感染mrna疫苗和/或重组蛋白疫苗及其给药方式，属于医药领域。

背景技术：

1、sars-cov-2是由世界卫生组织命名的一种新型的β属的冠状病毒。该病毒有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm。其基因特征与sars-cov和mers-cov有明显区别，是一种以前尚未在人类中发现的新冠状病毒分支。目前，变异新冠病毒主要有五大种类：alpha、beta、gamma、delta、omicron，omicron变异株又分为ba.1、ba.2、ba.2.12.1、ba4和ba5等多种亚系。

2、sars-cov-2的主要结构蛋白包括刺突蛋白(spike，s)、信使蛋白(envelop，e)、膜蛋白(membrane，m)和核衣壳蛋白(nucleocapsid，n)，其中，s蛋白在病毒的感染和毒力中起着关键作用，常被用来作为疫苗的抗原。由于sars-cov-2变异株含有多个突变位点，病毒的s蛋白也含有多个突变位点，导致变异株一定程度上能够逃逸新冠原型株(即“新冠病毒野生株”)疫苗激发的抗体，导致新冠疫苗失效或保护力降低。因此，开发针对各种变异的sars-cov-2病毒的疫苗，特别对各种变异的sars-cov-2病毒的广谱疫苗，对于新型冠状病毒的防治非常重要。

3、目前，基于腺病毒载体、mrna、重组蛋白亚单位等10余种疫苗已在全球获得批准。其中，辉瑞-生物科技公司的bnt162b2(mrna)、阿斯利康公司的chadox1 ncov-19(腺病毒载体)、moderna公司的mrna-1273(mrna)、novavax公司的nvx-cov2373(蛋白亚单位)和阿斯利康公司的azd1222(病毒载体)是一些具有代表性的疫苗。这些covid-19疫苗有效地预防了由sars-cov-2及其突变体引起的疾病和致命后果。

4、然而，随着sars-cov-2的持续进化，新的变种的不断出现给疫苗的开发带来了新的挑战。值得注意的是，显性变异omicron(如b.1.1.529)具有大量刺突蛋白突变，具有高度的传染性，并削弱了目前上市的疫苗所赋予的人群保护作用。例如，接种bnt162b2疫苗2-4周后，与wa1/2020菌株相比，对omicron变种的中和能力降低了30倍。此外，另一项研究显示，wa1/2020菌株和omicron变种之间50％中和抗体的几何平均滴度(gmt)相差22倍(1953vs 89)。最近，又出现了一系列的omicron新变种，如ba.2,ba.3,ba.2.12.1,ba.4和ba.5(ba.4/5)。其中，omicron ba.4/5在南非和美国占据主导地位。虽然ba.4/5的刺突蛋白突变与ba.2的刺突蛋白突变相当，但ba.4/5的中和逃逸能力明显增强，这对疫苗的开发是一个更重要的障碍。

5、鉴于sars-cov-2的持续流行和不断突变，接种第三剂加强剂或研发新一代疫苗是抗击新冠病毒的重要策略。现有研究者发现，三剂bnt162b2可以显著增加对omicron的中和能力。同样，同源的mrna-1273增强剂也可以提高两剂针对omicron变种的mrna-1273疫苗的效果。尽管第三剂加强剂可以增强它的中和能力，但它对抗ba.4/5型omicron变种的效能仍然大大降低。

技术实现思路

1、本发明旨在解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的目的在于提供抗sars-cov-2或其突变体感染的重组蛋白疫苗和mrna疫苗及其联合给药方式。

2、本发明首先提供了预防和/或治疗sars-cov-2或其突变体感染的mrna疫苗和重组蛋白疫苗，两种疫苗是分别含有以抗sars-cov-2或其突变体感染的mrna或重组蛋白疫苗为活性成分的制剂。

3、本发明还提供抗sars-cov-2或其突变体感染的组合物，其含有以mrna疫苗和重组蛋白疫苗为活性成分的制剂；其中，所述的mrna疫苗含有如seq id no.1或seq id no.2所示的核苷酸序列构成的mrna；所述的重组蛋白疫苗含有基于seq id no.4所示氨基酸序列构建的蛋白。

4、本发明还提供了预防和/或治疗sars-cov-2或其突变体感染的联合用药物，其含有分别、同时或序贯给药的抗sars-cov-2或其突变体感染的mrna疫苗和重组蛋白疫苗；其中，所述的mrna疫苗含有如seq id no.1所示的核苷酸序列构成的mrna；所述的重组蛋白疫苗含有基于seq id no.4所示氨基酸序列构建的蛋白。

5、mrna疫苗含有如seq id no.1或seq id no.2所示的核苷酸序列；或所述核苷酸序列是与seq id no.1或seq id no.2具有同源性且相同或相似的生物学活性，且在seq idno.1和seq id no.2序列经取代和/或缺失和/或插入至少一个氨基酸获得的变体；优选地，所述突变体序列是在seq id no.1和seq id no.2序列经取代和/或缺失和/或插入1～400个氨基酸获得的变体；优选地，所述突变体序列是在seq id no.1和seq id no.2序列经取代和/或缺失和/或插入5～30个氨基酸获得的变体。

6、重组蛋白疫苗的蛋白前体氨基酸序列如seq id no.4所示；或是与seq id no.4具有同源性且相同或相似的生物学活性，且在seq id no.4序列经取代和/或缺失和/或插入至少一个氨基酸获得的变体；优选地，所述rbd序列是在seq id no.4序列经取代和/或缺失和/或插入1～400个氨基酸获得的变体；优选地，所述rbd序列是在seq id no.4序列经取代和/或缺失和/或插入5～30个氨基酸获得的变体。

7、进一步地，所述mrna疫苗、重组蛋白疫苗或联合用药物为肌肉注射剂、滴鼻剂、喷雾剂、鼻喷给药剂或吸入剂。优选地，所述的mrna疫苗为肌肉注射剂，所述的重组蛋白疫苗为肌肉注射剂鼻喷给药剂。

8、进一步地，所述重组蛋白疫苗中，含有抗sars-cov-2或其突变体感染的蛋白和/或蛋白前体。

9、进一步地，所述蛋白和/或蛋白前体含有sars-cov-2的s蛋白中至少一种rbd序列与至少一种hr序列；其蛋白和/或蛋白前体序列如seq id no.4所示；

10、或所述序列是与seq id no.4具有同源性且相同或相似的生物学活性，且在seqid no.4序列经取代和/或缺失和/或插入至少一个氨基酸获得的变体；优选地，所述rbd序列是在seq id no.4序列经取代和/或缺失和/或插入1～400个氨基酸获得的变体；优选地，所述rbd序列是在seq id no.1序列经取代和/或缺失和/或插入5～30个氨基酸获得的变体。

11、进一步地，所述s蛋白中rbd序列与hr序列形成的蛋白能够自发形成三聚体。

12、进一步地，所述同源性氨基酸序列选取alpha、beta、gamma、delta、omicron，omicron的rbd序列中的至少一种。

13、进一步地，所述蛋白前体，是在所述抗sars-cov-2或其突变体感染的蛋白上连接了信号肽和/或蛋白标签；优选地，所述信号肽包括s蛋白或其突变体自身的信号肽和/或在自身信号肽前额外添加的人tpa信号肽；优选地，所述的蛋白标签选自如下至少一种：组氨酸标签、硫氧还蛋白标签、谷胱甘肽转移酶标签、泛素样修饰蛋白标签、麦芽糖结合蛋白标签、c-myc蛋白标签、avi tag蛋白标签；更优选地，所述蛋白标签为trx标签和/或6his标签。

14、进一步地，在所述抗sars-cov-2或其突变体感染的蛋白上还连接了切除蛋白标签的蛋白酶识别区；优选地，所述的蛋白酶选自如下至少一种：肠激酶、tev蛋白酶、凝血酶、凝血因子xa、羧肽酶a、鼻病毒3c蛋白酶。

15、进一步地，所述蛋白和/或蛋白前体的氨基酸序列选自seq id no.4。

16、进一步地，编码所述氨基酸序列的核苷酸序列如seq id no.5所示。

17、进一步地，所述重组蛋白疫苗和/或mrna疫苗中，含有抗sars-cov-2或其突变体感染的核酸。

18、进一步地，所述核酸的核苷酸序列如seq id no.1、seq id no.2、seq id no.5所示。

19、本发明还提供了重组载体，含有多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自seq idno.1、seq id no.5中至少一种。

20、进一步地，重组载体，所述重组载体采用昆虫杆状病毒表达载体、哺乳动物细胞表达载体、大肠杆菌表达载体、酵母表达载体中至少一种；优选地，所述的昆虫杆状病毒表达载体为pfastbac1；优选地，所述的哺乳动物细胞表达载体为cho细胞表达载体；进一步优选地，所述的cho细胞表达载体为ptt5或ftp-002；优选地，所述的大肠杆菌表达载体为pet32a；优选地，所述的酵母表达载体为ppiczaa。

21、本发明还提供了宿主细胞，其含有上述的重组载体。

22、进一步地，所述宿主细胞采用昆虫细胞、哺乳动物细胞、大肠杆菌、酵母中至少一种；优选地，所述的昆虫细胞选自sf9细胞、sf21细胞、hi5细胞中至少一种；优选地，所述的哺乳动物细胞为cho细胞或hek293细胞。

23、进一步地，所述重组蛋白疫苗和/或mrna疫苗，还包括药学上可接受的辅料或者辅助性成分。

24、进一步地，所述的辅助性成分为免疫佐剂；优选地，所述的免疫佐剂选自如下至少一种：鲨烯水包油乳剂、铝盐、钙盐、植物皂苷、植物多糖、单磷酸脂质a、胞壁酰二肽、胞壁酰三肽、细菌毒素、gm-csf细胞因子、脂质、阳离子脂质体材料；

25、进一步地，所述免疫佐剂满足以下至少一项：所述的鲨烯水包油乳剂为mf59；所述的铝盐选自氢氧化铝、明矾中至少一种；所述的钙盐为磷酸三钙；所述的植物皂苷为qs–21或iscom；所述的植物多糖为黄芪多糖；所述的细菌毒素选自重组霍乱毒素、白喉毒素中至少一种；所述的脂质选自如下至少一种：磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、胆固醇、二油酰基磷脂酰乙醇胺；所述的阳离子脂质体材料选自如下至少一种：(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵、n-[1-(2,3-二油酰氯)丙基]-n,n,n-氯化三甲胺、阳离子胆固醇、三氟乙酸二甲基-2,3-二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基)乙基铵、溴化三甲基十二烷基铵、溴化三甲基十四烷基铵、溴化三甲基十六烷基铵、溴化二甲基双十八烷基铵、cpg odn。

26、本发明还提供了上述药物单独或联合用药物制备预防和/或治疗sars-cov-2或其突变体感染的药物中的用途。

27、进一步地。所述新冠病毒变异株包括：alpha、beta、gamma、delta、omicron，omicron中的至少一种。

28、本发明还提供了上述蛋白的制备方法，包括如下步骤：培养上述的宿主细胞，使其表达所需的蛋白或前体，然后回收所需的蛋白，即得。

29、本发明还提供了所述重组蛋白的制备方法，包括如下步骤：构建含有所述多核苷酸的重组载体，对人体进行免疫，产生所述的蛋白。

30、进一步地，所述的载体选自如下至少一种：mrna、dna疫苗、腺病毒、安卡拉痘苗病毒vaccinia ankara virus、腺相关病毒。

31、有益效果：本发明提供了抗sars-cov-2或突变体感染的蛋白及其疫苗，具体提供了抗sars-cov-2或其突变体感染的mrna疫苗和重组蛋白疫苗，编码两种疫苗的核苷酸序列均选自seq id no.1、seq id no.2、seq id no.5中的至少一种。本发明通过实验发现，将两者疫苗结合，即将重组蛋白疫苗作为第三异源增强剂与两种mrna疫苗结合可以增强体液和细胞免疫反应，表现为更高的抗rbd igg水平，更强的中和抗体和ifn-γ-分泌t细胞。为异源增强策略对抗covid-19提供了坚实的指示，第三种异源蛋白亚基增强剂(rbd-hr/三聚体疫苗)在两剂mrna疫苗后成为合适的加强剂候选疫苗。

32、seq id no.1sars-cov-2delta mrna疫苗s抗原的核苷酸序列：

33、atgttcgtgttcctggtgctgctgcccctggtgagcagccaatgcgtgaacctgagaacaagaacacagctgccccccgcctacaccaacagcttcacaagaggggtctactaccccgacaaggtgttcagaagcagcgtgctgcacagcacccaagacctgttcctgcccttcttctccaacgtgacctggttccacgccatccacgtgagcggcaccaacggcaccaagagattcgacaaccccgtgctgcccttcaacgacggcgtgtacttcgctagcaccgagaagagcaacatcatcagaggctggatcttcggcaccaccctggacagcaagacacagagcctgctgattgtgaacaacgctaccaacgtggtgatcaaggtgtgcgagtttcagttctgcaacgaccccttcctgggggtgtactaccacaaaaacaacaagagctggatggagagcggcgtgtacagcagcgccaacaactgcaccttcgagtacgtgagccaacccttcctgatggacctggagggcaagcaaggcaacttcaagaacctcagagagttcgtgttcaagaacatcgacggctacttcaagatctacagcaagcacacccccatcaacctggtgagagacctgccccaaggcttcagcgccctggagcccctggtggacctgcccatcggcatcaacatcacaagatttcagaccctgctggccctgcacagaagctacctgacacccggcgacagcagcagcgggtggacagccggcgctgccgcttactacgtgggctacctgcagcctagaaccttcctgctgaagtacaacgagaacggcaccattaccgacgccgtcgactgcgccctggaccccctgagcgagaccaagtgcaccctgaagagcttcaccgtggagaagggcatctatcagacaagcaacttcagagtgcagcccaccgagagcatcgtgagattccccaacatcaccaacctgtgccccttcggcgaggtgttcaacgccacaagattcgctagcgtgtacgcctggaacagaaagagaatcagcaactgcgtggccgactacagcgtgctgtacaacagcgctagcttcagcaccttcaaatgctacggggtcagccccaccaagctgaacgacctgtgcttcaccaacgtgtacgccgacagcttcgtgatcagaggcgacgaggtgagacagatcgcccccgggcagaccggcaagatcgccgactacaactacaagctgcccgacgacttcaccggctgcgtgatcgcctggaactccaacaacctggatagcaaggtgggcggcaactacaactatagatacagactgttcagaaagagcaacctgaagcccttcgagagagacatcagcaccgagatctaccaagccggcagcaagccctgcaacggcgtggagggcttcaactgctacttccccctgcagagctacggctttcagcccaccaacggcgtgggctatcagccctacagagtggtcgtgctgagcttcgagctgctgcacgcccctgccaccgtgtgcggccccaagaagagcaccaacctggtgaagaacaagtgcgtgaacttcaacttcaacggcctgaccggcaccggcgtgctgaccgagagcaacaagaagttcctcccttttcagcagttcggcagagacatcgccgacaccaccgatgccgtgagagaccctcagaccctggagatcctggacatcaccccctgcagctttggcggcgtgagcgtgatcacccccggcaccaacacaagcaaccaagtggccgtgctgtaccaaggcgtgaactgcaccgaggtgcccgtggccatccacgccgatcagctgacccccacctggagagtgtacagcaccggcagcaacgtgtttcagacaagagccggctgcctgatcggcgccgagcacgtgaacaacagctacgagtgcgacatccccatcggcgccggcatctgcgctagctatcagacacagaccaacagcagacggagagctagaagcgtggctagccaaagcatcatcgcctacaccatgagcctgggcgccgagaacagcgtggcctacagcaacaacagcatcgccatccccaccaacttcaccatcagcgtgaccaccgagatcctgcccgtctccatgaccaagacaagcgtggactgcaccatgtacatctgcggcgacagcaccgagtgcagcaacctgctcctgcagtacggcagcttctgcacacagctgaacagagccctgaccggcatcgccgtggagcaagacaagaacacccaagaggtgttcgcccaagtgaagcagatctacaagaccccccccatcaaggacttcggcggcttcaacttcagccaaatcctgcccgaccctagcaagcctagcaagagaagcttcatcgaggacctgctgttcaacaaggtgaccctggccgacgccggcttcatcaagcagtacggcgactgcctgggcgacatcgccgctagagacctgatctgcgctcagaagttcaatggcctgaccgtcctgccccccctgctgaccgacgagatgatcgctcagtacacaagcgccctgctggccggcacaattacaagcggctggacattcggcgctggcgccgccctgcaaatccccttcgccatgcagatggcctacagattcaacggcatcggcgtgacacagaacgtgctgtacgagaatcagaagctgatcgccaatcagttcaacagcgccatcggcaagatccaagacagcctgagcagcaccgctagcgccctgggcaagctgcagaacgtggtgaatcagaacgcccaagccctgaacaccctggtgaagcagctgagcagcaacttcggcgccatcagctccgtgctgaacgatatcctgagcagactggacccccccgaggccgaggtgcagatcgaccggctgatcaccggcagactgcagagcctgcagacctacgtgacacagcagctgatcagagccgccgagatcagagctagcgccaacctggccgccaccaagatgagcgagtgcgtgctggggcagagcaagagagtggacttctgcggcaagggctaccacctgatgagcttccctcagagcgccccccacggcgtggtgttcctgcacgtgacctacgtgcccgcccaagagaagaacttcaccaccgcccccgccatctgccacgacggcaaggcccacttccctagagagggcgtgttcgtgagcaacggcacccactggttcgtgacacagagaaacttctacgagcctcagatcatcaccaccgacaacaccttcgtgagcggcaactgcgacgtggtgatcggcattgtgaacaatacagtctacgaccctctgcagcccgagctggacagcttcaaggaggagctggacaagtacttcaagaatcacacaagccccgacgtggacctgggggacatcagcggcatcaacgctagcgtggtgaacattcagaaggagatcgacagactgaacgaggtggccaagaacctgaacgagagcctgatcgacctgcaagagctgggcaagtacgagcagtacatcaagtggccctggtacatctggctgggcttcatcgccggcctgatcgccatcgtgatggtgaccatcatgctgtgctgcatgacaagctgctgcagctgcctgaagggctgctgctcctgcggcagctgctgcaagttcgacgaggacgacagcgagcccgtgctgaagggcgtgaagctgcactacacctga

34、seq id no.2sars-cov-2delta mrna疫苗s抗原的的mrna序列：

35、auguucguguuccuggugcugcugccccuggugagcagccaaugcgugaaccugagaacaagaacacagcugccccccgccuacaccaacagcuucacaagaggggucuacuaccccgacaagguguucagaagcagcgugcugcacagcacccaagaccuguuccugcccuucuucuccaacgugaccugguuccacgccauccacgugagcggcaccaacggcaccaagagauucgacaaccccgugcugcccuucaacgacggcguguacuucgcuagcaccgagaagagcaacaucaucagaggcuggaucuucggcaccacccuggacagcaagacacagagccugcugauugugaacaacgcuaccaacguggugaucaaggugugcgaguuucaguucugcaacgaccccuuccuggggguguacuaccacaaaaacaacaagagcuggauggagagcggcguguacagcagcgccaacaacugcaccuucgaguacgugagccaacccuuccugauggaccuggagggcaagcaaggcaacuucaagaaccucagagaguucguguucaagaacaucgacggcuacuucaagaucuacagcaagcacacccccaucaaccuggugagagaccugccccaaggcuucagcgcccuggagccccugguggaccugcccaucggcaucaacaucacaagauuucagacccugcuggcccugcacagaagcuaccugacacccggcgacagcagcagcggguggacagccggcgcugccgcuuacuacgugggcuaccugcagccuagaaccuuccugcugaaguacaacgagaacggcaccauuaccgacgccgucgacugcgcccuggacccccugagcgagaccaagugcacccugaagagcuucaccguggagaagggcaucuaucagacaagcaacuucagagugcagcccaccgagagcaucgugagauuccccaacaucaccaaccugugccccuucggcgagguguucaacgccacaagauucgcuagcguguacgccuggaacagaaagagaaucagcaacugcguggccgacuacagcgugcuguacaacagcgcuagcuucagcaccuucaaaugcuacggggucagccccaccaagcugaacgaccugugcuucaccaacguguacgccgacagcuucgugaucagaggcgacgaggugagacagaucgcccccgggcagaccggcaagaucgccgacuacaacuacaagcugcccgacgacuucaccggcugcgugaucgccuggaacuccaacaaccuggauagcaaggugggcggcaacuacaacuauagauacagacuguucagaaagagcaaccugaagcccuucgagagagacaucagcaccgagaucuaccaagccggcagcaagcccugcaacggcguggagggcuucaacugcuacuucccccugcagagcuacggcuuucagcccaccaacggcgugggcuaucagcccuacagaguggucgugcugagcuucgagcugcugcacgccccugccaccgugugcggccccaagaagagcaccaaccuggugaagaacaagugcgugaacuucaacuucaacggccugaccggcaccggcgugcugaccgagagcaacaagaaguuccucccuuuucagcaguucggcagagacaucgccgacaccaccgaugccgugagagacccucagacccuggagauccuggacaucacccccugcagcuuuggcggcgugagcgugaucacccccggcaccaacacaagcaaccaaguggccgugcuguaccaaggcgugaacugcaccgaggugcccguggccauccacgccgaucagcugacccccaccuggagaguguacagcaccggcagcaacguguuucagacaagagccggcugccugaucggcgccgagcacgugaacaacagcuacgagugcgacauccccaucggcgccggcaucugcgcuagcuaucagacacagaccaacagcagacggagagcuagaagcguggcuagccaaagcaucaucgccuacaccaugagccugggcgccgagaacagcguggccuacagcaacaacagcaucgccauccccaccaacuucaccaucagcgugaccaccgagauccugcccgucuccaugaccaagacaagcguggacugcaccauguacaucugcggcgacagcaccgagugcagcaaccugcuccugcaguacggcagcuucugcacacagcugaacagagcccugaccggcaucgccguggagcaagacaagaacacccaagagguguucgcccaagugaagcagaucuacaagaccccccccaucaaggacuucggcggcuucaacuucagccaaauccugcccgacccuagcaagccuagcaagagaagcuucaucgaggaccugcuguucaacaaggugacccuggccgacgccggcuucaucaagcaguacggcgacugccugggcgacaucgccgcuagagaccugaucugcgcucagaaguucaauggccugaccguccugcccccccugcugaccgacgagaugaucgcucaguacacaagcgcccugcuggccggcacaauuacaagcggcuggacauucggcgcuggcgccgcccugcaaauccccuucgccaugcagauggccuacagauucaacggcaucggcgugacacagaacgugcuguacgagaaucagaagcugaucgccaaucaguucaacagcgccaucggcaagauccaagacagccugagcagcaccgcuagcgcccugggcaagcugcagaacguggugaaucagaacgcccaagcccugaacacccuggugaagcagcugagcagcaacuucggcgccaucagcuccgugcugaacgauauccugagcagacuggacccccccgaggccgaggugcagaucgaccggcugaucaccggcagacugcagagccugcagaccuacgugacacagcagcugaucagagccgccgagaucagagcuagcgccaaccuggccgccaccaagaugagcgagugcgugcuggggcagagcaagagaguggacuucugcggcaagggcuaccaccugaugagcuucccucagagcgccccccacggcgugguguuccugcacgugaccuacgugcccgcccaagagaagaacuucaccaccgcccccgccaucugccacgacggcaaggcccacuucccuagagagggcguguucgugagcaacggcacccacugguucgugacacagagaaacuucuacgagccucagaucaucaccaccgacaacaccuucgugagcggcaacugcgacguggugaucggcauugugaacaauacagucuacgacccucugcagcccgagcuggacagcuucaaggaggagcuggacaaguacuucaagaaucacacaagccccgacguggaccugggggacaucagcggcaucaacgcuagcguggugaacauucagaaggagaucgacagacugaacgagguggccaagaaccugaacgagagccugaucgaccugcaagagcugggcaaguacgagcaguacaucaaguggcccugguacaucuggcugggcuucaucgccggccugaucgccaucgugauggugaccaucaugcugugcugcaugacaagcugcugcagcugccugaagggcugcugcuccugcggcagcugcugcaaguucgacgaggacgacagcgagcccgugcugaagggcgugaagcugcacuacaccuga

36、seq id no.3sars-cov-2delta mrna疫苗s抗原的氨基酸序列：

37、mfvflvllplvssqcvnlrtrtqlppaytnsftrgvyypdkvfrssvlhstqdlflpffsnvtwfhaihvsgtngtkrfdnpvlpfndgvyfasteksniirgwifgttldsktqsllivnnatnvvikvcefqfcndpflgvyyhknnkswmesgvyssannctfeyvsqpflmdlegkqgnfknlrefvfknidgyfkiyskhtpinlvrdlpqgfsaleplvdlpiginitrfqtllalhrsyltpgdsssgwtagaaayyvgylqprtfllkynengtitdavdcaldplsetkctlksftvekgiyqtsnfrvqptesivrfpnitnlcpfgevfnatrfasvyawnrkrisncvadysvlynsasfstfkcygvsptklndlcftnvyadsfvirgdevrqiapgqtgkiadynyklpddftgcviawnsnnldskvggnynyryrlfrksnlkpferdisteiyqagskpcngvegfncyfplqsygfqptngvgyqpyrvvvlsfellhapatvcgpkkstnlvknkcvnfnfngltgtgvltesnkkflpfqqfgrdiadttdavrdpqtleilditpcsfggvsvitpgtntsnqvavlyqgvnctevpvaihadqltptwrvystgsnvfqtragcligaehvnnsyecdipigagicasyqtqtnsrrrarsvasqsiiaytmslgaensvaysnnsiaiptnftisvtteilpvsmtktsvdctmyicgdstecsnlllqygsfctqlnraltgiaveqdkntqevfaqvkqiyktppikdfggfnfsqilpdpskpskrsfiedllfnkvtladagfikqygdclgdiaardlicaqkfngltvlpplltdemiaqytsallagtitsgwtfgagaalqipfamqmayrfngigvtqnvlyenqklianqfnsaigkiqdslsstasalgklqnvvnqnaqalntlvkqlssnfgaissvlndilsrldppeaevqidrlitgrlqslqtyvtqqliraaeirasanlaatkmsecvlgqskrvdfcgkgyhlmsfpqsaphgvvflhvtyvpaqeknfttapaichdgkahfpregvfvsngthwfvtqrnfyepqiittdntfvsgncdvvigivnntvydplqpeldsfkeeldkyfknhtspdvdlgdisginasvvniqkeidrlnevaknlneslidlqelgkyeqyikwpwyiwlgfiagliaivmvtimlccmtsccsclkgccscgscckfdeddsepvlkgvklhyt*

38、seq id no.4sars-cov-2delta rbd-hr/三聚体蛋白前体序列(信号肽-trx标签-6his标签-ek酶切位点-rbd序列-hr1序列-hr2序列)：

39、mllvnqshqgfnkehtskmvsaivlyvllaaaahsafaadsihikdsddlknrlaeagdklvvidfmatwcgpckmigpkldemanemsdsivvlkvdvdecediateyninsmptfvfvknskkieefsganvdklrntiiklklagsgsghmhhhhhhssgddddkvqptesivrfpnitnlcpfgevfnatrfasvyawnrkrisncvadysvlynsasfstfkcygvsptklndlcftnvyadsfvirgdevrqiapgqtgkiadynyklpddftgcviawnsnnldskvggnynyryrlfrksnlkpferdisteiyqagskpcngvegfncyfplqsygfqptngvgyqpyrvvvlsfellhapatvcgpkkstnlvknksvnfnfnglyenqklianqfnsaigkiqdslsstasalgklqdvvnqnaqalntlvkqlknhtspdvdlgdisginasvvniqkeidrlnevaknlneslidlqel

40、seq id no.5编码seq id no.4的核苷酸序列：

41、atgctactagtaaatcagtcacaccaaggcttcaataaggaacacacaagcaagatggtgagcgctatcgtgctgtacgtcctgctggccgctgctgctcacagcgctttcgctgctgactccatccacatcaaggacagcgacgacctgaagaaccgtctggccgaggccggtgacaagctggtcgtcatcgacttcatggccacttggtgcggtccttgcaagatgatcggccctaagctggacgagatggctaacgagatgtccgacagcatcgtggtcctgaaggtggacgtcgacgagtgcgaggacatcgccaccgaatacaacatcaacagcatgcccaccttcgtgttcgtgaagaacagcaagaagatcgaggaattttccggcgctaacgtcgacaagctgcgtaacaccatcatcaagctgaagctggccggctccggctccggccacatgcatcaccaccaccaccattcctccggtgacgacgacgacaaggtgcagccaaccgaatctatcgtcagattcccaaacatcactaacctgtgccctttcggagaggtgttcaacgctaccaggttcgccagcgtctacgcttggaaccgcaagcgtatcagcaactgcgtcgccgactactctgtgctgtacaactccgctagcttctctactttcaagtgctacggcgtgtcacctaccaagctgaacgacctgtgcttcactaacgtctacgccgactccttcgtgatccgcggagacgaagtccgtcagatcgctcctggacagaccggaaagatcgctgactacaactacaagctgccagacgacttcactggctgcgtgatcgcttggaactcaaacaacctggactccaaggtcggtggcaactacaactaccggtacaggctgttcagaaagtcaaacctgaagcctttcgagcgcgacatctcaaccgaaatctaccaggctggttccaagccctgcaacggtgtggagggcttcaactgctacttccccctgcagtcctacggtttccagccaaccaacggagtcggttaccagccttaccgtgtggtcgtgctgagcttcgaactgctccacgctcctgctactgtgtgcggtcccaagaagtctactaacctggtcaaaaacaaaagcgtcaacttcaacttcaacggtctgtacgagaaccagaagctgatcgctaaccagttcaacagcgccatcggcaagatccaggactcactgtcatccactgcctccgctctgggaaagctgcaggacgtcgtgaaccagaacgcccaggctctgaacaccctggtcaagcagctgaagaaccacacctctcctgacgtcgacctgggcgacatcagcggaatcaacgcttctgtcgtgaacatccagaaggagatcgaccgcctgaacgaagtggccaagaacctgaacgaatccctgattgacctccaagaactctaa

42、术语缩写：

43、单磷酸脂质a(mpl)；鲨烯水包油乳剂(mf59)、重组霍乱毒素(rctb)、黄芪多糖(aps)、磷脂酰乙醇胺(pe)、磷脂酰胆碱(pc)、胆固醇(chol)、二油酰基磷脂酰乙醇胺(dope)(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵(dotap)、n-[1-(2,3-二油酰氯)丙基]-n,n,n-氯化三甲胺(dotma)、阳离子胆固醇(dc-chol)、三氟乙酸二甲基-2,3-二油烯氧基丙基-2-(2-精胺甲酰氨基)乙基铵(dospa)、溴化三甲基十二烷基铵(dtab)、溴化三甲基十四烷基铵(ttab)、溴化三甲基十六烷基铵(ctab)、溴化二甲基双十八烷基铵(ddab)、cpg odn(含有非甲基化的胞嘧啶和鸟嘌呤二核苷酸为核心序列的核苷酸序列,人工合成的cpg)。