专利名称:苷的制备方法
本发明涉及具有优良免疫活性的苷及其制备方法，特别是关于含在苷中的N-乙酰神经氨酸衍生物及其制备方法。
到目前为止，据已所知的文献中，关于N-取代的乙酰神经氨酸如N-乙酰神经氨酸类物质存在于许多动物体内和一些细菌的细胞表面，它是以如糖蛋白类、糖脂类、寡糖类、或多糖类那样的唾液酸的复合物存在的。近来，在关于神经功能、癌症、炎症、免疫力、病毒传染、病症的鉴别、激素受体等方面，N-取代的神经氨酸类物质已成为一种医药方面的重要物质，与此同时，这类物质已被认为是位于细胞表面上的独特的活性分子，但是在唾液酸的复合体中，N-取代神经氨酸类物质的作用尚未搞清楚。
再者，已经有很多有机化学家对N-取代神经氨酸进行了研究，而且已得到多种简单衍生物，可是具有优良免疫作用的衍生物尚未得到。
一方面由于科学界对如人血器官恶性肿瘤、多种癌症和胶原疾病等的医疗的进展，使人类寿命的平均年龄大大提高，但另一方面，由于药物使用的大大增加，例如使用肾上腺皮质激素或者免疫抑制剂的药物，使用中产生某些不希望的副作用，同时还降低和减少了免疫力。
在上述情况下，本发明人对生物固有的成分一唾液酸予以特别重视，进行了一系列的研究，研究的目标是通过化学方法改性找到副作用小的调节剂，和搞清免疫监督上的调节作用。研究结果表明，本发明人已成功地找到了具有免疫调节作用的新型化合物，它能使抑制剂T细胞受到激活，而B细胞的免疫球蛋白的产生受到抑制。
本发明的主要目的是提供具有优良免疫活性，特别具有免疫调节作用的新型化合物。本发明的另一个目的是提供制备新型化合物的有效方法。
下面就本发明的上述两方面目的及其它目的作说明按照本发明，新型苷类化合物具有如下通式(Ⅰ)
式中R1是从
基烷氧羰基，羧基，羧酸盐类中选取，当R1是
基时，R2是烷氧基羰基、羧基、或羧酸盐类。当R1选的是烷氧基羰基、羧基、和羧酸盐类时，R2为
基R3是氢原子或乙酰基。
本发明的烷氧基羰基可用甲氧基羰基，乙氧基羰基等来举例。羰基盐可用金属盐或碱土金属盐，如羰基的钠盐，钾盐，钙盐等来举例。
本发明的化合物(Ⅰ)包括β构型衍生物(β-衍生物)，R1是
和α构型衍生物(α-衍生物)其中R2是
本发明通式(Ⅰ)表示的化合物可用下列连续的化学式从甲基-2-氯-4，7，8，9-四-O-乙酰基-β-D-N-乙酰神经氨酸酯(下文为化合物(Ⅱ)和5氟-1-[(2-羟乙氧基)甲基]尿嘧啶(下文为化合物(Ⅲ)来制备，制得化合物(Ⅳ)到(Ⅺ)。
化合物(Ⅳ)到(Ⅺ)的命名如下。
化合物(Ⅳ)1-0-[甲基(5-N-乙酰基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-O-乙酰基-β-D丙三基-D-半乳糖基-2-无癍吡喃糖基)酸酯]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4-四氢嘧啶-1-基)甲基]-乙二醇。
化合物(Ⅴ)1-0-[甲基(5-N-乙酰基-3，5-二脱氧-4，7，8，9-四-0-乙酰基-α-D-丙三基-D-半乳糖-2-无癍吡喃糖基)酸酯]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4四氢嘧啶-1-基)甲基乙二醇。
化合物(Ⅵ)1-0-[甲基(5-N-乙酰基-3，5，-二脱氧-β-D-丙三基-D-半乳糖基-无斑吡喃糖基)酸酯]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4-四氢嘧啶-1-基)甲基]-乙二醇。
化合物(Ⅶ)1-0-[甲基(5-N-乙酰基-3，5-二脱氧-α-D-丙三基-D-半乳糖基-2-无癍吡喃糖基)酸酯]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4-四氢嘧啶-1-基)甲基]-乙二醇。
化合物(Ⅷ)1-0-[钠(5-N-乙酰基-3，5-二脱氧-β-D-丙三基-D-半乳糖基-2-无斑吡喃糖基)酸盐]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4四氢嘧啶-1-基)甲基]-乙二醇。
化合物(Ⅳ)1-0-[钠(5-N-乙酰基-3，5-二脱氧-α-D-丙三基-D-半乳糖基-2-无斑吡喃糖基酸盐)]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4，-四氢嘧啶-1-基)甲基]乙二醇。
化合物(Ⅹ)1-0-[(5-N-乙酰基-3，5-二脱氧-β-D-丙三基-D-半乳糖-2-无斑吡喃糖基)酸]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4-四氢嘧啶-1-基)甲基]乙二醇。
化合物(Ⅺ)1-0-[5-N-乙酰基-3，5-二脱氧-α-D-丙三基-D-半乳糖-2-无斑吡喃糖基)酸]-2-0-[(2，4-二氧-5-氟-1，2，3，4-四氢嘧啶-1-基)甲基]乙二醇。
上面提到的化合物(Ⅱ)和(Ⅲ)是已知的化合物，化合物(Ⅱ)的合成方法例如有Kuhu发表于chem Ber，99.611(1966年)的方法。另一方面化合物(Ⅲ)的制备，例如见Morris.J.Robins Can.J.Chem.，60，547(1982)。
新化合物(Ⅳ)(β-衍生物)和(Ⅴ)(α-衍生物)的混合物可由化合物(Ⅱ)和(Ⅲ)进行Koenigs Knorr(即柯尼希-诺尔)反应制得。
进行柯尼希-诺尔反应能在Hg Br2，Hg(CN)2或其混合物，或在CF3SO3Ag(三氟甲烷磺酸银)存在下进行。最好在CF3SO3Ag存在下进行，因为CF3SO3Ag比HgBr2等制取化合物(Ⅳ)和(Ⅴ)的总收率更高，另外，除有CF3SO3Ag存在外，还最好在溶剂中进行，溶剂有四氢呋喃、乙腈、二氯甲烷等。反应温度可以在室温和-50℃之间。反应时间为5到60分钟。最常用的反应时间约为20分，溶剂为四氢呋喃。
本发明的化合物(Ⅳ)和(Ⅴ)可用硅胶柱色谱法从上述产物中进行分离和提纯。
新型化合物(Ⅵ)(β-衍生物)还可将化合物(Ⅳ)用甲醇钠的甲醇溶液使其酯基转移而制得。
相仿的，本发明的新型化合物(Ⅶ)(α-衍生物)也可由化合物(Ⅴ)制得。
进而，可将化合物(Ⅵ)和(Ⅶ)在氢氧化钠溶液中水解而制得化合物(Ⅷ)(β-衍生物)和(Ⅸ)(α-衍生物)。游离酸型的化合物(Ⅹ)(β)衍生物)和(Ⅺ)(α-衍生物)的制备，可由化合物(Ⅷ)和(Ⅸ)的水溶液进行酸化处理制得，也可将化合物(Ⅵ)和(Ⅶ)溶于氢氧化钠溶液中接着再酸化来制取。
用所有这些连续的化学式表示的化合物，其制备方法，将在下面的实施例中具体说明。
按照本发明，通式(Ⅰ)的化合物，具有优良的调节免疫系统强度的活性，这种活性通过下面的方法得以确证。
ConA抗鼠脾淋巴细胞激活的功能由于T细胞不被ConA特异性激活，所以将本发明的苷加入到反应中，研究其功能。将ConA和通式(Ⅰ)的化合物(通式(Ⅰ)化合物将在下文说明)分别地加入到从BALB/C鼠取得的脾脏淋巴细胞(SPC)中，混合物培养20小时左右。并在小平皿上于37℃混入5%CO2，接着用以氚示踪标记的胸苷加入所得混合物中。进一步将混合物于37℃培养10小时左右。用闪烁计数器测定吸收在SPC中的3H-胸苷量。
结论是，对于具有通式(Ⅰ)的化合物，观察到它促进和增强了3H-胸苷的吸收，同时也观察到Con-A对阻止T-细胞的活化功能。
阻止鼠脾脏淋巴细胞的免疫球蛋白生成功能本发明N-取代神经氨酸，在前面的实验中已经表明能使T-细胞活化。
接下进一步试验，用测定斑形成细胞(PFC)数目来研究其阻止免疫球蛋白生成的功能。
首先用羊的血红细胞和化学式(Ⅰ)中的化合物，(例如下文实施例中将说明的化合物)加到SPC中，混合物在37℃培养5天，再加入SRBC和补体到该敏化了的SPC中，该混合物再在坎宁安室中37℃温度下培养3到12小时后，对PFC进行计数。结果观察到PFC数目减少，细胞的生存与对照物相同。这样就确证对免疫球蛋白产生的抑制作用得到增强。
上面这两种鉴定检验中，本发明的化合物显示出优良的活性。根据这一事实，可以认为免疫球蛋白的产生由于抑制剂T细胞的活化而受到抑制。
到目前为止，已经观察到象胶原病那样的自动免疫疾病方面，抑制剂T细胞的功能下降，所以，根据本发明的具有活化抑制剂T细胞功能的N-取代神经氨酸衍生物，可以期望作为调节免疫系统强度的药剂有效地用于临床应用。
现在参照如下非限制性例子说明本发明。实施例1，化合物(Ⅳ)和(Ⅴ)的制备方法120毫升含2.54克(12.44毫摩尔)化合物(Ⅲ)的四氢呋喃溶液中，加入50毫升含1.12克(4.40毫摩尔)的氰化汞和2.24克(6.21毫摩尔)溴化汞的无水乙腈溶液，加入7.74克4A分子筛粉末，在室温条件下搅拌1小时，然后35毫升含4.64克(9.10毫摩尔)化合物(Ⅱ)的无水乙腈溶液加到所得混合物中，在室温下搅拌46小时。反应悬浮液用阳离子交换树脂(R)A-21中和后，过滤，所得滤液减压蒸馏，将残余液溶解在醋酸乙酯中，用10克硅胶(Wakogel C-300)吸收，再在减压下蒸出溶剂，接着用柱色谱分离出若干级分[固相∶硅胶(Wakogel C-300)100克，洗脱剂∶甲苯/甲醇＝10/1]。从第一级分回收反应的原料，其它级分中得到了目的产品，它是化合物(Ⅳ)和(Ⅴ)的混合物。此混合物用柱色谱[固相∶硅胶(Wakogel C-300′)，洗脱剂∶甲苯/甲醇＝10/1]分离。将溶剂分别自两级分中蒸出，残余物溶于水并进行冷冻干燥。于是分别得到1.82克化合物(Ⅳ)(β-衍生物)(收率29.6%)和1.87克化合物(Ⅴ)(α-衍生物)(收率30.4%)，二者都为纯的无色的无定形晶体，化合物(Ⅳ)和(Ⅴ)的总收率为60.0%。化合物(Ⅳ)的物理性质分解点 100-109℃元素分析 C27H36FN3O16·3/5H2O MW＝688.42计算值 C47.11 H5.45 N6.10实测值 C47.15 H5.41 N5.80
IRνKBrmaxcm-13400(-NH-)，1720(-CO-O-)1670(νC＝O 酰胺 Ⅰ)，1550(νC＝O 酰胺 Ⅱ)，1230(C-O-C)1H-NMRppm400MHz(CDCl3)1.894，2.027，2.035，2.063，2.149(15H，all S，CH3CO-X5)2.342(1H，dd，J＝13.1Hz，J＝4.9Hz，3＝Heq)3.802(3H，S，-COOCH3)3.539;3.656(2H，m;m，-OCH2CH2-O-)3.716;3.907(2H，m;m，-OCH2CH2-O-)4.780(1H，d，J＝10.7Hz，
5.603(1H，d，J＝10.7Hz，
5.107-5.174(1H，m，4-H)7.457(1H，d，J＝5.2Hz，嘧啶-6-H)[α]24D-5.75°(C＝1，AcOEt)
化合物(Ⅴ)的物理性质分解点 94-105℃元素分析 C27H36FN3O16·11/10H2O MW＝697.43计算值 C46.50 H5.52 N6.03实测值 C46.51 H5.24 N5.90IRνKBrmaxcm-13350(-NH-)，1720(-CO-O)，1670(νC＝O，酰胺 Ⅰ)，1550(νC＝O，酰胺 Ⅱ)，1220(C-O-C)1H-NMRppm400MHz(CDCl3)1.888，2.040，2.148，2.153(15H，all S，CH3CO-X5)2.578(1H，dd，J＝12.7Hz，J＝4.8Hz，3-Heq)3.808(3H，S，-COOCH3)3.475;3.906(2H，m;m，-OCH2CH2-O-)3.737(2H，m，-OCH2CH2-O-)5.173(1H，d，J＝10.7Hz
)5.210(1H，d，J＝10.7Hz
)4.800-4.903(1H，m，4-H)
7.530(1H，d，J＝5.2Hz，嘧啶-6-H)[α]24D-8.08°(C＝1，AcOEt)实施例2化合物(Ⅳ)和(Ⅴ)的制备方法(2)70毫升含1.54克(7.55毫摩尔)化合物(Ⅲ)和2.96克(5.81毫摩尔)化合物(Ⅱ)的无水四氢呋喃溶液中加入4.61克4A分子筛粉末，室温下搅拌30分钟，将此混合溶液冷却到-15到-20℃，加入8毫升内含2.09克(8.13毫摩尔)三氟甲烷磺酸银的无水四氢呋喃溶液搅拌20分钟。接着将所得反应悬浮液过滤，滤液在减压下蒸出溶剂，残余物溶介在200毫升醋酸乙酯中，用饱和氯化钠水和饱和碳酸氢钠水溶液洗涤该溶液，然后用Na2SO4干燥，滤去干燥剂，滤液经减压，蒸馏脱去溶剂，得4.23克残余物，将该物再次溶介在醋酸乙酯中，用硅胶色谱[固相∶硅胶(Wakogel-C-300)423克，洗脱溶剂∶甲苯/甲醇＝10/1]得到第一级分(原料和化合物(Ⅳ)的混合物)和第二组分(含化合物(Ⅴ))。蒸去溶剂后，第一组分的残余物用色谱法[固相∶硅胶(Wakogel C-300)，洗脱溶剂∶氯仿/甲醇＝40/1]分离若干级分，含有化合物(Ⅳ)的第一级分脱去溶剂后，将残余物溶介在水中，使其冷冻干燥，得到纯产品0.77克化合物(Ⅳ)(β-衍生物)(收率19.6%)第二级分脱去溶剂后，将残余物容介在水中，使其冷冻，干燥，得到纯产品2.70克化合物(Ⅴ)(α-衍生物)(收率68.7%)化合物(Ⅳ)与(Ⅴ)的总收率为88.3%实施例3.化合物(Ⅵ)的制备由实施例1和实施例2制得的化合物(Ⅳ)420毫克(0.62毫摩尔)溶介在100毫升0.01N的甲醇钠甲醇溶液;在室温下搅拌1.5小时，所得溶液加Dowex 50W-X8 H型离子交换树脂，中和，过滤，然后将所得滤液浓缩和干燥，残余物在柱色谱[固相∶硅胶(Wakogel C-200)，洗脱溶剂∶氯仿/甲醇＝5/3]处理，将分离的级分经蒸馏脱去溶剂，残余物溶介在水中，再冷冻干燥，于是就得到270毫克纯的无色无定形晶体化合物(Ⅵ)(β-衍生物)产品的物理性质分解点 138-142℃元素分析 C19H28FN3O127/2H2O MW＝572.51计算值 C39.86 H6.16 N7.34实测值 C39.62 H5.90 N7.13IRνKBrmaxcm-13400(-NH-，-OH-)，1710(-CO-O-)，1670(νC＝O 酰胺 Ⅰ)，1560(νC＝O 酰胺 Ⅱ)1H-NMRppm400MHz(CDCl3+D2O)1.758(1H，dd，J＝12.4Hz，J＝11.9Hz，3-Hax)2.035(3H，S，CH3CONH-)2.347(1H，dd，J＝12.4Hz，J＝4.8Hz，3-Heq)3.320-4.080(13H，m，唾液基-H，-CH2CH2-O-)3.823(3H，S，COOCH3)7.940(1H，d，J＝5.4Hz，嘧啶-6-H)[α]19.5D-17.9°(C＝1，DMF)实施例4，化合物(Ⅶ)的制备按实施例3的方法，但是用实施例1和2制得的化合物(Ⅴ)来替代化合物(Ⅳ)得到221毫克化合物(Ⅶ)(α-衍生物)(收率80%)
产品的物理性质分解点 147-150℃元素分析 C19H28FN3O1219/12H2O MW＝543.69计算值 C41.97 H5.90 N7.73实测值 C41.77 H5.72 N7.59IRνKBrmaxcm-13400(-NH-，-OH-)，1710(-CO-O-)，1670(νC＝O，酰胺 Ⅰ)，1560(νC＝O 酰胺 Ⅱ)1H-NMRppm400MHz(CDCl3+D2O)1.758(1H，dd，J＝12.4Hz，J＝11.1Hz，3-Hax)2.010(3H，S，CH3CONH-)2.637(1H，dd，J＝12.4Hz，J＝4.5Hz，3-Heq)3.484-3.972(13H，m，唾液基-H，-CH2CH2-O-)3.836(3H，S，-COOCH3)7.906(1H，d，J＝5.3Hz，嘧啶-6-H)[α]19.5D-33.4°(C＝1，DMF)实施例5，化合物(Ⅷ)的制备由实施例3制得的化合物(Ⅵ)650毫克(1.28毫摩尔)中加入2毫升水，成悬浮液，接着加2毫升1N氢氧化钠水溶液，在室温下搅拌20分钟，将1N氢氧化钠水溶液试着加入到反应混合物中的PH在10和11之间为止，搅拌5分钟，加入阳离子交换树脂(Ambereite
IRC-50)，调整PH到5和6之间，过滤，使所得滤液冷冻干燥，得到无色无定形晶体化合物(Ⅷ)636毫克(收率96.1%)产品的物理性质分解点 196～201℃元素分析 C18H25FN3NaO1214/5H2O MW＝567.86计算值 C38.07 H5.43 N7.40实测值 C37.80 H5.25 N7.20IRνKBrmaxcm-13400(-NH，-OH)，1700，1670(νC＝O 酰胺 Ⅰ)，1610(-COO
)，1560(νC＝O 酰胺 Ⅱ)。
19.5D-15.5°(C＝1，H2O)1H-NMRppm400MHz(DMSO-d6，t-BuOH)1.465(1H，t，J＝11.9Hz，3-Hax)1.871(3H，S，CH3CONH-)2.083(1H，dd，J＝11.9Hz，4.5Hz，3-Heq)3.331-3.669(10H，m，唾液基-H，-O-CH2CH2-O-)3.808(1H，m，4H)5.052(1H，d，J＝10.3Hz)，
)5.090(1H，d，J＝10.3Hz，
)5.276(1H，-OH)8.113(1H，d，J＝6.6Hz，嘧啶-6′H)8.245(1H，d，J＝7.3Hz，CH3CONH-)实施例6化合物(Ⅸ)的制备按照实施例5的方法，但用实施例4制得的化合物(Ⅶ)372毫克(0.73毫摩尔)替代化合物(Ⅵ)，并用1.5毫升1N氢氧化钠水溶液得到化合物(Ⅸ)373毫克(收率98.6%)产品的物理性质分解点 178-183℃元素分析 C18H25FN3NaO124H2O MW＝589.48计算值 C36.68 H5.64 N7.13实测值 C36 69 H5.51 N6.95IRνKBrmaxcm-13400(-NH，-OH)，1700，1670(νC＝O 酰胺 Ⅰ)1610(-COO
)，1560(νC＝O，酰胺 Ⅱ)[α]19.5D-4.5°(C＝1，H2O)1H-NMRppm400Hz(DMSO-d6，t-BuOH)1.242(1H，t，J＝11.7Hz，3-Hax)1.888(3H，S，CH3CONH)2.650(1H，dd，J＝11.7Hz，4.6Hz，3-Heq)
3.18-3.58(10H，m，唾液基-H，-O-CH2CH2-O-)3.725(1H，m，4-H)4.793(1H，m，-OH)5.035(2H，S，
)5.235(1H，S，-OH)6.338(1H，S，-OH)8.118(2H，d，J＝6.4Hz，嘧啶-6′H)8.439(1H，d，J＝6.1Hz，CH3CONH-)实施例7.化合物(Ⅹ)的制备(1)100毫克(1.28毫摩尔)按实施例5制得的化合物(Ⅷ)和30毫升蒸馏水组成的水溶液中，加入3毫升Dowex 50 W-X8(H型)离子交换树脂，在室温下搅拌1小时，所得溶液PH为4。反应混合物经过滤后所得的滤液冷冻干燥，得到84毫克无色无定形晶体化合物(Ⅹ)(收率为89.2%)产品的物理性质分解点 138-148℃元素分析 C18H26FN3O1211/10 H2O MW＝515.25计算值 C41.96 H5.52 N8.16实测值 C41.70 H5.20 N8.08IRνKBrmaxcm-13400(-OH，-NH-)1700(-COOH)，1680(-NHCO-)1H-NMRppm400MHz(DMSO-d6)1.620(1H，t，J＝12.5Hz，3-Hax)，1.961(3H，S，CH3CONH-)
2.257(1H，dd，J＝12.5Hz，4.5Hz，3-Heq)3.90-3.89(1H，m，4-H)，5.136(2H，S，
)7.972(1H，d，J＝6.0Hz，嘧啶-6′H)[α]19.5D-16.8°(C＝1，H2O)实施例8化合物(Ⅺ)的制备(1)按照实施例7的方法，但在此用实施例6制得的化合物(Ⅸ)102毫克(0.20毫摩尔)替代化合物(Ⅶ)，最终得90.4毫克化合物(Ⅺ)(收率92.4%)产品物理性质分解点 123～128℃元素分析 C18H26FN3O12H2O MW＝513.45计算值 C42.11 H3.70 N8.18实测值 C41.8 H3.41 N8.10IRνKBrmaxcm-13400(-OH，-NH-)，1700(-COOH)，1680(-NHCO-)，1H-NMRppm400MHz(DMSO-d6)，1.572(1H，t，J＝12.2Hz，3-Hax)，1.953(3H，S，CH3CONH-)，2.655(1H，dd，J＝12.2Hz，4.5Hz，3-Heq)，3.82-3.90(1H，m，4-H)，5.124(2H，S，
)7.975(1H，d，J＝6.0Hz，吡啶-6′H)[α]19.5D-5.8°(C＝1，H2O)
实施例9化合物(Ⅹ)的制备(2)按实施例3制得的100毫克(0.196毫摩尔)化合物(Ⅵ)溶介在2毫升水中再加入0.2毫升1N氢氧化钠水溶液，在室温下搅拌3小时以后，反应混合液内加Dowex 50 W-X8(H型)离子交换树脂，搅拌约30分钟过滤，用水洗。使滤液和洗后的溶液冷冻干燥，得到90毫克化合物(Ⅹ)(收率93%)。
实施例10化合物(Ⅺ)的制备(2)按照实施例9的方法，但用实施例4制得的化合物(Ⅶ)替代化合物(Ⅵ)，得到88毫克化合物(Ⅺ)收率(91%)。
权利要求
1.具有下列化学式的苷类的制备方法
式中R4是乙酰基，R5是甲氧基
基和R6是
基，该方法包括将
与
在三氟甲烷磺酸银存在下反应。
2.根据权利要求
1的方法，其中反应在溶剂中进行。
3.根据权利要求
2的方法，其中的溶剂选自四氢呋喃，乙腈和二氯甲烷。
4.根据权利要求
1的方法，其中反应在温度为室温到-50℃之间，时间为5到60分钟的条件下进行。
专利摘要
本发明提供具有下列化学式的新型化合物，本发明也提供这种化合物的制备方法，新型化合物具有优良的免疫活性。
文档编号C07H15/04GK86102125SQ86102125
公开日1987年1月7日 申请日期1986年3月5日
发明者柴山庄平, 松崎祐二, 吉村昌治, 伊藤正善, 志乌善保, 小川智也 申请人:美克德株式会社导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan