专利名称：治疗抗性瘤的方法
与外科手术和放射疗法配合，化学疗法仍然是治疗多种癌症的有效疗法。事实上，目前认为几种类型的癌症可通过化疗治愈，包括何杰金病、巨细胞淋巴瘤、急性淋巴细胞白血病、睾丸癌和早期乳腺癌。其他癌症如卵巢癌、小细胞肺癌和晚期乳腺癌尽管不能治愈，但是对结合化疗表现出阳性应答。在癌症治疗中最重要的尚未解决的问题之一是耐药性。耐药性既包括采用化疗治疗时的内在抗性，也包括所获得药物的抗性。这一问题是结合化疗另一重要性的原因，因为该治疗必须避免突发抗性细胞同时还必须杀死预先存在的已经对药物产生抗性的细胞。
蒽环类药物是一类重要的癌细胞溶解剂。阿霉素(一种蒽环类药物，本领域中公知为AdriamyeinTM)是乳腺癌临床治疗中选择的药物。用蒽环类药物如阿霉素治疗伴有蒽环类药物抗性表型出现，它限制或消除了阿霉素的癌细胞溶解活性。
局部异构酶(topoisomerase)抑制剂是另一类癌细胞溶解剂。表鬼臼毒素如Etoposide 和Teniposide 是局部异构酶抑制剂，它们适用于治疗睾丸瘤、小细胞肺癌和其他肺癌、乳腺癌、何杰金病、非何杰金淋巴瘤、急性粒细胞白血病和Karposi′s肉瘤。用表鬼臼毒素进行治疗受到表鬼臼毒素进行治疗受到表鬼臼毒素抗性表型出现的限制。
一种形式的多药物抗性(MDR)是由膜结合的称为P-糖蛋白(P-gp)的170-180KD能量依赖性流出泵介导的。已表明P-gp在多种人类肿瘤对疏水性、天然产物药物的固有和获得性抗性中扮演了主要角色。用作底物以及随后被P-gp脱毒的药物包括长春花属生物碱(长春新碱和长春碱)、蒽环类药物(阿霉素)和表鬼臼毒素(鬼臼乙叉甙)。虽然与MDR有关的P-gp是肿瘤细胞对化疗药物抗性的主要决定因素，但已清楚MDR现象是多因素的并且包括许多不同的机理。对蒽环类药物产生抗性的另一种途径包括突发了190kd蛋白，而非P-gp。参见McGrathT.LatoudC.，ArroldS.T.、SafaA.R.、FelstedR.S.和CenterM.S.的Biochem.Pharmacol.，383611，(1989)。在原生质膜中未发现P190，但是P190表现为主要定位于内质网中。参见MarquardtD.和CenterM.S.的CancerRes.，523157，(1992)。
P190具有核苷酸结合区，它与P-gp的ATP结合位点同源，参见MarquardtD.McCroneS.和CenterM.S.的CancerRes.，50∶1426，(1990)。P190所利用的对阿霉素产生抗性的机理尚未十分清楚，但是其机理可能包括阿霉素离开细胞核，在细胞内再分配。参见MarquardtD.和CenterM.S.的文章(上文)。阿霉素是局部异构酶Ⅱ抑制剂(BeckW.T.，Bull.Cancer，77∶1131，(1990))，局部异构酶Ⅱ是DNA复制中所涉及的酶。因此阿霉素脱离细胞核的再分配可能是细胞对该药物产生抗性的重要原因。迄今为止关于P190的研究采用了体外选择的对阿霉素有抗性的细胞系(McGrathT.、LatoudC.、ArroldS.T.、SafaA.R.、FelstedR.S.和CenterM.S.的上文；MarquardtD.和CenterM.S.的上文以及MarquardtD.、McCroneS.和CenterM.S.的CancerRes.，上文)。从用8-叠氨基-α[32P]ATP标记的抗阿霉素HL60/Adr人白血病细胞制备放射活性提取物，经过该提取物的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)得到P190与药物抗性的关系。参见McGrath T.、Latoud C.、Arnold S.T.、Safa A.R.、Felsted R.S.和Center M.S.的上文。P190带来的药物抗性表型不仅仅限于蒽环类药物。表鬼臼毒素抗性与P190表达有关。用阿霉素和鬼臼乙叉甙处理的HL60/S细胞的IC50值分别为0.011μg/ml和0.39μg/ml。用阿霉素和鬼臼乙叉甙处理的HL60/Adr细胞(HL60衍生的细胞系，它对阿霉素具有抗性)的IC50值分别为2.2μg/ml和＞10μg/ml。HL60/S和HL60/Adr细胞系不表达P-糖蛋白。HL60/Adr表达P190。因此，对蒽环类药物和表鬼臼毒素的抗性是P190表达的结果。
因此，希望提供适用于治疗抗性瘤的化合物，其抗性途径包括P190、P-糖蛋白或上述两者。
本发明提供治疗抗性瘤的方法，该方法包括给需要治疗的人或其他哺乳动物施用有效量的式Ⅰ化合物及其可药用盐和溶剂化物
其中R1和R3独立地为氢、-CH3、 (C1-C6烷基)或 ，其中Ar是任意取代的苯基；R2选自吡咯烷基、六亚甲基亚氨基和哌啶子基。
本发明涉及下述发现选自2-苯基-3-芳酰基苯并噻吩(各种苯并噻吩)的式Ⅰ化合物可用于治疗抗性瘤。本发明提供的治疗方法是给需要治疗的人或其他哺乳动物服用有效降低肿瘤对化疗抗性剂量的式Ⅰ化合物或其药学上适用的盐或溶剂化物。在降低肿瘤对化疗的抗性时，可以对具有内在和/或获得性抗性的肿瘤使用本发明的化合物。所述肿瘤包括具有抗性途径(包括蛋白质P190)的那些。对药物如表鬼臼毒素和蒽环类药物的抗性与P190有关。治疗抗性和敏感肿瘤将导致抗性逆转或抑制，换句话说，这将使肿瘤对合适的化疗更敏感。
本发明化合物可用于多种抗性瘤，包括结肠癌、间皮瘤、黑素瘤、前列腺癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、子宫内膜癌、白血病、睾丸癌、乳腺癌和巨细胞淋巴瘤。尤其特别的癌是何杰金病、Karposi′s肉瘤和急性粒细胞白血病。
一般来讲，可以将本发明化合物与普通的赋形剂、稀释剂或载体一起进行配制并压成片剂，或者配制成常用的口服给药的酏剂或溶液剂；或者配制成肌内或静脉途径给药的注射剂。本发明化合物可以经皮给药，也可以将其配制成持续释放等剂型。
用于本发明方法的化合物可以按既定的方法制备，如美国专利4，133，814，4，418，068和4，380，635所述的方法，将它们收编在本申请中作为参考。一般，该方法用具有6-羟基和2-(4-羟苯基)的苯并[b]噻吩作为起始物。将起始化合物保护、酰基化并脱保护，形成式Ⅰ化合物。上述美国专利中提供了制备此类化合物的实例。取代苯基包括由C1-C5烷基、C1-C4烷氧基、羟基、硝基、氯、氟或三(氯或氟)甲基单取代或双取代的苯基。
用于本发明方法的化合物与许多种类的有机和无机酸和碱反应生成药学上适用的酸和碱加成盐，药学上适用的酸和碱加成盐包括通常用于制药化学的生理上适用的盐。所述的盐也是本发明的一部分。生成所述盐的常用无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、硫酸、磷酸、连二磷酸等。盐也可由有机酸得到，可以应用的有机酸有例如脂族一元和二元羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸和羟基链烷二酸、芳族酸、脂族和芳族磺酸。所述药学上适用的盐包括乙酸盐、苯基乙酸盐、三氟乙酸盐、丙烯酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、邻-乙酰氧基苯甲酸盐、萘-2-苯甲酸盐、溴化物、异丁酸盐、苯基丁酸盐、β-羟基丁酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，4-二酸盐、癸酸盐、辛酸盐、氯化物、肉桂酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、富马酸盐、羟基乙酸盐、庚酸盐、马尿酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、羟基马来酸盐、丙二酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐、烟酸盐、异烟酸盐、硝酸盐、草酸盐、邻苯二甲酸盐、四邻苯二甲酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、丙炔酸盐、丙酸盐、苯基丙酸盐、水扬酸盐、癸二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、焦硫酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磺酸盐、苯磺酸盐、对溴苯磺酸盐、氯苯磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟基乙磺酸盐、甲磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、对甲苯磺酸盐、二甲苯磺酸盐、酒石酸盐等。优选的盐是盐酸盐。
药学上适用的酸加成盐通常由式Ⅰ化合物与等摩尔或过量的酸反应而制得。通常使反应物于互溶剂如乙醚或苯中进行化合。盐通常约在1小时至10天内从溶液中沉淀出，经过滤分离，或按常规方法除去溶剂。
通常用于形成盐的碱包括氢氧化铵、碱金属和碱土金属氢氧化物、碳酸盐和碳酸氢盐，以及脂族和芳族胺，脂族二胺和羟基烷胺。在制备加成盐中尤其适用的碱包括氢氧化铵、碳酸钾、碳酸氢钠、氢氧化钙、甲胺、二乙胺、1，2-乙二胺、环己胺和乙醇胺。
与衍生它的化合物比较，药学上适用的盐通常可提高溶解性能，在此常常更适用于配制如液体剂或乳剂。
药用制剂可按本技术领域已知的方法制备。例如，将该化合物与普通的赋形剂、稀释剂或载体进行配制，并制成片剂、胶囊、悬浮液、粉剂等。适用于上述制剂的赋形剂、稀释剂和载体的实例包括如下填充剂和增量剂如淀粉、糖、甘露糖醇和硅衍生物；粘合剂如羧甲基纤维素和其他纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；溶解阻滞剂如石蜡；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如鲸蜡醇、单硬脂酸甘油脂；吸附载体如高岭土和膨润土；润滑剂如滑石、硬脂酸钙和硬脂酸镁，以及固态聚乙基乙二醇。
该化合物也可配制成便于口服的酏剂或溶液剂，或适于非肠道给药的溶液剂，例如经肌内、皮下或静脉内途径给药。此外，该化合物也非常适合配制成持续释放等剂型。该制剂也可这样构成，使他们仅仅或最好在肠道的特定部位，可能在一定的时间内释放有效成分。包衣、包膜和保护基质可以由例如聚合物质或蜡制成。
根据本发明，治疗抗性瘤所需要的式Ⅰ化合物的具体剂量取决于疾病的严重程度、给药途径和有关因素，这些将由主治医生确定。一般来讲，每天可接受和有效剂量为约0.1～2000mg/天(尽管主治医生可根据上述因素增加剂量)。需治疗的患者服用的上述剂量可为每天1次～约3次，或为了有效地治疗抗性瘤需要更经常地服用。
如同服用带有碱基(如哌啶子基环)的药物的通常做法一样，通常最好服用酸加成盐形式的式Ⅰ化合物。口服本发明化合物也是有利的。为此目的，以下口服剂量形式是适用的。
本发明另一方面是用本发明化合物与化疗剂结合治疗。这种结合治疗包括首先用本发明化合物治疗，然后用化疗剂治疗；同时用本发明化合物和化疗剂治疗；或者用化疗剂治疗后用本发明化合物治疗。
制剂在以下制剂中，“活性成分”是指式Ⅰ化合物，制剂1明胶胶囊用下列成分制备硬明胶胶囊成分量(mg/胶囊)活性成分0.1～2000淀粉，NF0～650可流动的粉末状淀粉0～650硅氧烷流体(350厘沲)0～15
将各成分混合，通过美国45号筛，装填入硬明胶胶囊。
已制备的其中R2是1-哌啶子基的式Ⅰ化合物(raloxifene)具体的胶囊制剂实例包括如下所示那些制剂2Raloxifene胶囊成份量(mg/胶囊)Raloxifene1淀粉，NF112可流动的淀粉粉末225.3硅氧烷流体(350厘沲)1.7制剂3Raloxifene胶囊成分量(mg/胶囊)Raloxifene5淀粉，NF108可流动的淀粉粉末225.3硅氧烷流体(350厘沲)1.7制剂4Raloxifene胶囊成分量(mg/胶囊)Raloxifene10淀粉，NF103可流动的淀粉粉末225.3硅氧烷流体(350厘沲)1.7
制剂5Raloxifene胶囊成分量(mg/胶囊)Raloxifene50淀粉，NF150可流动的淀粉粉末397硅氧烷流体(350厘沲)3.0可以对上述具体的制剂进行合理的改变。
用下列成分制备片剂制剂6片剂成分量(mg/片)活性成分0.1-2000微晶纤维素0-650雾化二氧化硅0-650硬脂酸0-15将各成分混合，压成片剂。
或者，每片含0.1-2000mg活性成分的片剂按以下方法制备
制剂7片剂成分量(mg/片)活性成分0.1-2000淀粉45微晶纤维素35聚乙烯吡咯烷酮(10%水溶液)4羧甲基纤维素钠4.5硬脂酸镁0.5滑石1将活性成分、淀粉和纤维素通过美国45号筛并充分混合。聚乙烯吡咯烷酮溶液与所得的粉末混合，然后通过美国45号筛。将制备的颗粒于50°-60℃干燥，并通过美国18号筛。然后将预先通过美国60号筛的羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁和滑石加入此颗粒中，混合后将颗粒在压片机上压片，得到片剂。
每5ml含0.1-2000mg药物的悬浮液剂按下法制备制剂8悬浮液剂成分量(mg/5ml)活性成分0.1-2000mg羧甲基纤维素钠50mg糖浆1.25mg苯甲酸溶液0.10ml调味剂适量着色剂适量加纯水至5ml
将药物通过美国45号筛，并与羧甲基纤维素钠和糖浆混合制成调匀的糊状物。苯甲酸溶液、调味剂和着色剂用一部分水稀释，并在搅拌下加入糊状物中。然后加入足够的水到所需体积。
试验方法用于分析逆转抗药性的细胞是人白血病细胞系HL60/S、HL60/Vinc和HL60/ADR。由于药物抗性而不选择HL60/S细胞，因此该细胞对药物治疗敏感(McGrath，等人，“MachanismsofMultidrugResistanceinHL60Cells.AnalysisofResistanceAssociatedMembraneProteinsandLevelsofMDRGeneExpression，BiochemicalPhermacology，38∶3611-3619，1989)。HL60/Vinc肿瘤细胞是因对长春新碱的抗性而被选择的，它表达与多药物抗性有关的高水平蛋白质(P-糖蛋白)。HL60/ADR细胞是因对阿霉素的抗性而被选择的，但是它不含有可检测量的P-糖蛋白。可是HL60/ADR细胞却含有高含量的称之为P190或MRP的另一种与抗性相关蛋白质(Cole等人，“OverexpressionofTransporterGeneinaMultidrug-ResistantHumanLungCancerCellLine.Science(WashintonDC)，258∶1650-1654，1992；Krishnamachary等人，“TheMRPGeneAssociatedwithaNon-P-glycoProteinMultidrugResistanceEncodesa190-kDaMembraneBoundGlycoprotein，CancerResearch，53∶3658-3661，1993.)。含P-糖蛋白的细胞系HL60/Vinc不表达P190。
将靶细胞悬浮于含25%正常亮氨酸浓度和10%透析过的胎牛血清的最低基本Eagle′s培养基(MEM)中进行体外细胞毒性分析。在96孔微滴板的每一孔中接种2×104个细胞，并于37℃、在5%CO2中培养过夜。将用于测定逆转活性的试剂于培养基中序列稀释(100μM，50μM，…，0.2μM)，并加至细胞中。向靶细胞中加入逆转剂后48小时，向每孔中加入4μCi3H-亮氨酸，并于37℃再培养16小时。收集细胞，测定所结合的3H-亮氨酸含量。计算50%抑制3H-亮氨酸结合所需的逆转剂浓度(IC50)。随后在细胞毒性药物(即阿霉素)存在下用逆转剂进行的研究使用了最大浓度的逆转剂，逆转剂本身无细胞毒性。通过向对数稀释的阿霉素(10，1，0.1，…0.001μg/ml)中加入最大浓度的非细胞毒性试验化合物，并且计算阿霉素在上述体外细胞毒性分析中对HL60/S、HL60/Vinc和HL60/ADR细胞系所表现出的IC50值的变化，完成了抗药性由各种试验化合物的逆转。
上述分析中的活性表明本发明化合物能够用于治疗抗性和敏感肿瘤。
浓度μm逆转系数HL60/ADRHL60/VINC化合物A*12 5.7 3.8RaloxifeneHCL67.1未实验17α雌二醇31未实验Tamoxefine41.44.6*化合物A是其中R1和R3均为氢且R2为1-吡咯烷基的式Ⅰ化合物。
权利要求
1.适用于治疗抗性瘤的药物组合物，所述药物组合物含有式(Ⅰ)化合物或其可药用盐或溶剂化物作为活性成分 其中R1和R3独立地为氢、-CH3、 (C1-C6烷基)或 ，其中Ar是任意取代的苯基；R2选自吡咯烷基和哌啶子基。
2.按权利要求1的药物组合物，其中所述化合物是其盐酸盐。
3.按权利要求1的药物组合物，其中所述药物组合物适用于预防性给药。
4.按权利要求1的药物组合物，其中所述化合物是下式化合物或其盐酸盐。
全文摘要
治疗抗性瘤的方法，包括给需要治疗的人或哺乳动物服用有效量的上述式(I)化合物或其药学上适用的盐或溶剂化物，其中各代号详见说明书。
文档编号A61K31/445GK1108094SQ9411712
公开日1995年9月13日 申请日期1994年10月13日 优先权日1993年10月15日
发明者S·钱德拉塞克哈, A·H·登齐格, R·L·谢帕德, J·J·施塔林, M·A·温特 申请人:伊莱利利公司