专利名称：用作抗病毒药的噻吩并 嗪酮类衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及可用作抗病毒药物的化合物。
现已发现某些噻吩并噁嗪酮可能用于治疗疱疹病毒，特别是单纯疱疹病毒1和2(HSV-1和HSV-2)，巨细胞病毒及带状疱疹水痘病毒引起的感染。
因此，本发明提供疱疹病毒蛋白酶抑制剂4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮类衍生物，其2位由X(Y)NH-CHR1取代，其中X是氢或阻断基团，Y是一个可任选存在的氨基酸，R1是氢或一个氨基酸侧链，这类衍生物以后称作式(I)化合物。
此4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮环系编号如下
除2-取代基之外，5、6位也可有取代基(分别指定为R3，R2)。取代基可选自卤素，C1-6烷基或C1-6烷氧基，C1-6烷硫基，氨基(可任选地被一或两个C1-6烷基或任意取代的苄基取代)，羟烷基，烷羰基，烷氧羰基，任意取代的苯基或R4ZCONH，其中Z是一个键，O、NH或NCOCH3，R4CO为一酰基，R4包括芳基、烷基或芳烷基，或者R2和R3可连接形成C2、C3、C4、C5、C6、C7或C8聚亚甲基。
烷基或含烷基的基团实例可包括C1、C2、C3、C4、C5、C6的支链、直链或环烷基。C1-4烷基包括甲基、乙基、正或异丙基、正、异、仲或叔丁基。环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
芳基包括苯基和萘基，两者可任选地被一个或多个下列基团取代卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基和C1-6烷氧羰基。
卤素包括氟、氯、溴和碘。
适当的X基团是肽化学中熟知的基团。特别有用的包括芳基、烷酰基、(芳)烷氧羰基、(芳)烷氨基羰基、芳酰基或芳磺酰基。X基团的例子有苄氧羰基、叔丁氧羰基及任意取代的苯基。
氨基酸侧链可以是一个或多个氨基酸。合适的氨基酸例子在有关合成肽的文献中已作描述。氨基酸可为D或L构型，优选L-型。Y的氨基酸的具体例子包括丙氨酸、天冬氨酸、缬氨酸及类似氨基酸。具体氨基酰基团-NH-CHR1-CO-，其在式(I)化合物中形成NHCHR1，包括丙氨酸(R1＝CH3)、天冬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、丝氨酸(R1＝CH2OH)、缬氨酸和α-氨基丁酸(R1＝CH2CH3)。
式(I)化合物适当的可药用盐亦包括在本发明中。
式(I)化合物包括其可药用盐可形成溶剂化物如水合物，在提及式I化合物及其盐时亦包括这些溶剂化物。
这些化合物的制备是按标准肽的合成方法，通过激活含R1的氨基酸或二肽来实现的，例如i)由碳二亚胺或其它偶联试剂和一个如1-羟基苯并三唑基团形成活化酯，或ii)由如氯甲酸异丁酯的试剂形成混合酸酐，再与2-氨基噻吩-3-羧酸或酯反应。
中间体酰胺可分离出来或直接由反应粗产物进行环化。适于噻吩酸衍生物环化的试剂包括偶联剂或脱水剂如碳二亚胺，乙酸酐或磺酰氯。适于噻吩酯衍生物环化的试剂包括三苯膦/四氯化碳。如氨基酸具有带保护基的官能化的侧链，则最后一步要除去保护基，如用三氟乙酸除去遇酸易变基团。可以理解的是根据所需产物5，6位取代基的性质，环化反应可以在引入/修饰相应取代基团之前或之后进行。
可药用的盐可按常规方法制备，例如加在酸成盐的情形，可将化合物与适当的有机或无机酸反应。
本发明化合物可能用于治疗疱疹病毒引起的感染，如单纯疱疹病毒类型1和2，带状疱疹水痘病毒，和非洲淋巴细胞瘤病毒和巨细胞病毒也有可能用于其他疱疹病毒，如疱疹病毒-6。
本发明化合物可制剂成药用组合物。因此，本发明进一步提供了药用组合物，它包括式(I)化合物或其可药用盐及可药用的载体或赋形剂。
经口服入人体的组合物可制成糖浆、片剂或胶囊。当组合物为片剂时，可使用任何适于制剂成固体组合物的药用载体，如硬脂酸镁、淀粉、乳糖、葡萄糖、大米、面粉和白垩。该组合物亦可制成可食性胶囊，如明胶胶囊，以便包含该化合物，或制成糖浆、溶液或悬浮液。合适的液态药用载体包括乙醇、甘油、盐水和水，在这些载体中可加入调味剂或着色剂以形成糖浆。该化合物亦可溶于无菌液态载体用于注射。
该组合物亦可制剂成皮肤用或眼用的局部用药。
对于皮肤局部用药，可将组合物制成乳油、洗剂或软膏。这些剂型是该领域中所熟知的常规剂型，如已在药剂和化妆品标准丛书中所记载的，如由Leonard Hill丛书出版社出版的Harry化妆品学和大英药典。
眼用组合物可为本领域中常规的滴眼剂或软膏组合物。
优选本发明组合物为单位剂型式或可单剂量施用的其他剂型。合适的剂量单位可含活性成分50mg至1g，例如100至500mg。
每天可按此剂量施用1-4次，一般为每天2-3次。该化合物有效剂量范围一般在每日每公斤体重1.0-20mg/kg，一般为每日2.0至10mg/kg。
在上述剂量水平无不可接受的毒性作用。
本发明还提供了用以治疗人或非人动物病毒感染的方法，它包括给动物施用有效无毒剂量的式(I)化合物或其可药用的盐。
本发明还提供了式(I)化合物或其可药用的盐，作为用于活性治疗物质，特别是用于治疗病毒感染。
下面的实例阐明了本发明。氨基酸标准缩写法为单一字母代号
图1实例1的合成
i.Et3N，甲醇；ii.NaOH/H2O；iii.N-甲基吗啡啉，氯甲酸异丁酯，THF，DMF，Cbz-L-丙氨酸；iv.DEC，DMF。图2实例2、3、4的合成及实例2，方法2
实例1(步骤1)2-氨基噻吩-3-羧酸钠盐向2-氨基噻吩-3-羧酸甲酯(K.Gewald，化学报道1965，98，3571-7；2.5g，0.016mol)的二噁烷溶液(20ml)中加入氢氧化钠(0.64g，7.5ml，2.13M溶液，0.016mol)并将此混合物于60℃搅拌6h，然后加热回流1.5h。减压除去溶剂，残余物溶于水中，用二氯甲烷(3×50ml)萃取未反应的起始原料。除去产物中水，然后于60℃用五氧化二磷干燥(1.56g，59％)。δH[(CD3)2SO]5.95(1H，d，J 5.5Hz，噻吩质子)，6.75(3H，m，噻吩质子和NH2)。实例1(步骤2)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮于-10℃向N-苄氧羰基-L-丙氨酸(1.68g，7.51mmol)的四氢呋喃(50ml)溶液中加入N-甲基吗啡啉(0.82ml，0.76g，7.51mmol)和氯甲酸异丁酯(0.974ml，1.025g，7.51mmol)并将混合物搅拌0.5h。然后滴加2-氨基噻吩-3-羧酸钠(1.25g，7.51mmol)的N，N-二甲基甲酰胺液(30ml)并将混合物再搅拌18h。减压除去多余的溶剂，残余物用柱色谱纯化(用含0.5％乙酸的10％甲醇/二氯甲烷溶液洗脱)，得到2-[(N-苄氧羰基-L-丙氨酰基)氨基]噻吩-3-羧酸(1.77g)。于0℃向此物质的DMF溶液(50ml)加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(0.979g，5.07mmol)并将混合物于室温搅拌2.5h。减压除去过量溶剂并用柱色谱纯化残余物(用5％的乙酸乙酯/二氯甲烷溶液洗脱)。得到的不纯产物再次纯化(用10％异丙醇己烷溶液洗脱)，得到(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮(23mg)，mp 140-144℃；ν最大(KBr)3286，1758和1686cm-1；δH[(CD3)2SO]1.44(3H，d，J 7Hz，CH3)，4.6(1H，m，CH)，5.05(2H，m，CH2)，7.3(5H，m，C6H5)，7.45(1H，d，J 5Hz，噻吩质子)，7.7(1H，d，J 5Hz，噻吩质子)，及8.04(1H，d，J 7Hz，NH) (实测值C，57.84；H，4.47；N，8.57％。C16H14N2O4S要求C，58.17；H，4.27；N，8.48％)。实例2和3(步骤1的一般步骤)2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰]氨基噻吩-3-羧酸酯的制备于-5℃向N-(苄氧羰基)丙氨酸(3mmol)的无水四氢呋喃溶液(25ml)中先加入4-甲基吗啡啉(3mmol)，再加入氯甲酸异丁酯(3mmol)。5分钟后，加入合适的氨基噻吩酯(3mmol)，反应混合物于-5℃搅拌30分钟，再于室温搅拌52-60h。滤除沉淀，用无水四氢呋喃洗(2×10ml)，合并的滤液及洗涤液蒸至干，并将残留物与甲苯共蒸(2×50ml)。产物经柱色谱硅胶纯化用乙酸乙酯-己烷混合液洗脱。实例2(步骤1)2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯。产率73％；ν最大(KBr) 3305，1696，1670，1551，1521和1452cm-1；δH[(CD3)2SO]1.17(6H，m，2×CH3)，2.32(3H，d，J＝1.1Hz，CH3)，4.29(3H，m，CH和CH2)，5.08(2H，m，CH2Ph)，6.71(1H，d，J＝1.1Hz，5H)，7.36(5H，m，芳环质子)，8.15(H，d，J＝6.32Hz，可重水交换，NH)，及11.58(H，s，可重水交换，NH)(实测值C，58.34；H，5.67；N，7.65％。C19H22N2O5S要求C，58.45；H，5.68；N，7.17％)。实例3(步骤1)2-[(N-苄氧羰基)-L-丙氨酰]氨基-4，5-二甲基噻吩-3-羧酸乙酯产率48％；ν最大(KBr)3276，2985，1687，1565，1529，和1452cm-1；δH[(CD3)2SO]1.32(6H，m，2×CH3)，2.21(3H，s，CH3)，2.24(3H，s，CH3)，4.26(3H，m，CH和CH2)，5.08(2H，m，CH2Ph)，7.36(5H，m，芳环质子)，8.12(1H，d，J＝6.6Hz，D2O可交换，NH)，和11.5(1H，s，可D2O交换，NH)(实测值C，59.40，H，5.91，N，7.05％。C20H24N2O5S要求C，59.39， H，5.98，N，6.93％)。实例4(步骤1)2-[(N-苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-环戊二烯并[b]噻吩-3-羧酸乙酯向2-氨基环戊二烯并[b]噻吩-3-羧酸乙酯(1g，4.8mmol)的无水N，N-二甲基甲酰胺(20ml)溶液中加入1-羟基-7-氮杂苯并三唑(5.7mmol，0.77g)，N-(苄氧羰基)丙氨酸(5.7mmol，1.27g)及1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(5.7mmol，1.1g)。将得到的反应混合物于室温搅拌52h。除去溶剂并将残留物溶于二氯甲烷(200ml)此液。用10％柠檬酸水溶液(2×50ml)，饱和碳酸氢钠水溶液(2×50ml)，盐水(1×50ml)洗并干燥(MgSO4)。除去溶剂，产物用硅胶柱色谱纯化(用5-10％乙酸乙酯氯仿液洗脱)得到2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-环戊二烯并[b]噻吩-3-羧酸乙酯，为无色固体(0.61g，31％)；ν最大(KBr)3286，2976，2934，1700，1670，1559，1527，和1453cm-1；δH[(CD3)2SO]1.33(6H，m，2×CH3)，2.32(2H，m，CH2)，2.83(4H，m，2×CH2)，4.26(3H，m，CH2和CH)，5.09(2H，m，CH2Ph)，7.36(5H，m，芳环原子)，8.14(1H，d，J＝6.04Hz，可D2O交换，NH)，和11.36(1H，br s，可D2O交换，NH)(实测值C，59.92；H，5.79；N，6.62％。C21H24N2O5S.0.2H2O要求C，59.99；H，5.85；N，6.67％)。实例2，3和4(步骤2的一般方法)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮的制备向适当的氨基噻吩酯(0.5mmol)的无水CH2Cl2(10ml)溶液中加入三苯基膦(2mmol)和CCl4(3mmol)。于70℃将所得混合物回流3.0-3.5h，再将混合物用CH2Cl2(100ml)稀释，用饱和NaHCO3(2×20ml)水溶液洗并干燥(MgSO4)。除去溶剂并将产物经硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯-己烷混合液洗脱。实例2(步骤2)(S)-2-[N-(苄氧羰基-1-氨乙基]-5-甲基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮产率41％，mp 145-150℃；V最大(KBr)3425，3289，1756，1691，1604，1553，1540，和1453cm-1；δH[(CD3)2SO]1.43(3H，d，J＝7.15Hz，CH3)，2.42(3H，d，J＝0.82 Hz，CH3)，4.56(1H，m，CH)，5.06(2H，m，CH2Ph)，7.32(1H，d，J＝1.1Hz，6-H)，7.36(5H，m，芳环质子)，和8.02(1H，d，J＝7.15Hz，可D2O交换，NH)，(实测值C，59.20，H，4.69，N，8.19％。C17H16N2O4S要求C，59.29，H，4.68，N，8.13％)。实例3(步骤2)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5，6-二甲基]-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮产率90％，mp 122-125℃；ν最大(KBr) 3413，3302，1757，1724，1685，1601，1539，和1455cm-1；δH[(CD3)2SO]1.42，(3H，d，J＝7.15Hz，CH3)，2.33(3H，s，CH3)，2.40(3H，s，CH3)，4.56(1H，m，CH)，5.06(2H，m，CH2Ph)，7.36(5H，m，芳香质子)，和8.01(1H，d，J＝743Hz，可D2O交换，NH)(实测值C，60.61，H，5.29，N，7.62％。C18H18N2O4S要求C，60.32，H，5.06，N，7.82％)。实例4(步骤2)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-6，7-二氢-4H，5H-环戊二烯并[4，5]噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮产率28％；ν最大(KBr)3414，3295，2986，1775，1687，1600，1537，和1453cm-1。δH[(CD3)2SO]1.42(3H，d，J＝6.87Hz，CH3)，2.43(2H，m，CH2)，3.1(4H，m，2×CH2)，4.57(1H，m，CH)，5.06(2H，m，CH2Ph)，7.36(5H，m，芳环质子)，和8.01(1H，d，J＝7.43Hz，可D2O交换，NH)(实测值C，60.00，H，4.91，N，7.36％。C19H18O4N2S要求C，61.61，H，4.90，N，7.56％)。实例2，(步骤2-方法2)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮向2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯(0.51mmol，0.2g)的二噁烷溶液(2ml)中加入1M氢氧化钠水溶液(0.52ml)。于室温将所得混合物搅拌8h，再加入1M氢氧化钠水溶液(0.3ml)，继续搅拌12h。用稀盐酸中和溶液，除去溶剂并将残留物与甲苯共蒸发(2×20ml)。用无水N，N-二甲基甲酰胺(10ml)溶解残留物，并向所得溶液中加入1-(3-二甲氨丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1mmol，0.19g)，于室温搅拌此液60h。除去溶剂，残留物溶于二氯甲烷(100ml)，用10％柠檬酸水溶液1×10ml，饱和NaHCO3水溶液(1×10ml)，盐水(1×10ml)洗并干燥(MgSO4)。产物经硅胶柱色谱纯化(用20-25％乙酸乙酯-己烷液洗脱)，得到(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基]-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮(15mg，8％)；V最大(KBr)3417，3288，1756，1691，1604，1553，1539，和1453cm-1。δH[(CD3)2SO]1.43(3H，d，J＝7.15Hz，CH3)，2.42(3H，d，J＝1.1Hz，CH3)，4.56(1H，m，CH)，5.05(2H，m，CH2Ph)，7.32(1H，d，J＝1.1Hz，6-H)，7.36(5H，m，芳环质子)，和8.02(1H，d，J＝7.42Hz，可D2O交换，NH)(实测值C，59.41，H，4.76，N，8.08％。C17H16N2O4S要求C，59.29，H，4.68，N，8.13％)。下列化合物用类似实例2和3的方法制备。实例5(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5，6，7，8-四氢-4H-[1]苯并噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮m.p.131-133℃实例6(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-6-乙氧羰基-5-甲基噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮m.p.100-102℃实例7(步骤1)2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基-5-硝基噻吩-3-羧酸乙酯于45℃向搅拌着的2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯(1g，2.56mmol)和硝酸铜(0.1g)的醋酐液(20ml)加入硝酸铜(0.5g)，历时2h。将反应混合物冷至室温，倾入冰中(500g)并用CH2Cl2(3×100ml)萃取。蒸发溶剂，残留物与甲苯共蒸发(2×50ml)，并将产物经硅胶柱层析纯化，用乙酸乙酯-CH2Cl2(2∶98)洗脱，(0.61g，55％，产率)；δH(DMSO-d6)1.35(6H，m，2×CH3)，2.78(3H，s，CH3)，4.37(3H，m，CH和CH2)，5.08(2H，m，CH2Ph)，7.14-7.38(5H，m，芳环质子)，8.18(1H，br. d，J＝6.6Hz，可D2O交换，NH)，和11.86(1H，br. s，可D2O交换，NH)(实测值C，52.59；H，4.80；N，9.65％。C19H21N3O7S要求C，52.41；H，4.86；N，9.65％)。实例7(步骤2)2-[(N-苄氧羰基-L-丙氨酰基)氨基]-4-甲基-5-氨基噻吩-3-羧酸乙酯于40℃将5-硝基噻吩衍生物(0.43g，1mmol)，铁(0.3g)和1MNH4Cl(5ml)在二噁烷-乙醇(20ml，1∶1)中的混合物超声振荡1小时40分钟。滤除铁并用二噁烷-乙醇(1∶1，2×20ml)洗。合并滤液及洗涤液并将之浓缩至小体积溶液。向此混合物中加水(50ml)，产物用CH2Cl2(5×15ml)萃取。蒸发合并的萃取液并将残留物与甲苯(3×20ml)共蒸发，将得到的产物(0.40g)未经纯化直接用于下一步反应。δH(DMSO-d6)1.31(6H，m，2×CH3)，2.07(3H，s，CH3)，4.22(3H，m，CH和CH2)，4.88(2H，br. s，NH2)，5.08(2H，m，CH2Ph)，7.14-7.39(5H，m，芳环质子)，8.08(1H，d，J＝6.6Hz，NH)，和11.35(1H，s，NH)。实例7(步骤3)2-[(N-苄氧羰基-L-丙氨酰基)氨基]-4-甲基-5-氨基噻吩-3-羧酸乙酯和2-[(N-苄氧羰基-L-丙氨酰基)氨基]-4-甲基-5-乙酰胺基噻吩-3-羧酸乙酯5-硝酰噻吩衍生物(0.53mmol，0.230g)和铁(100mg)在乙酸液(15ml)中的混合物于30-40℃超声振荡30分钟。再加入铁(100mg)，在30-40℃继续超声1小时。向此混合物中加入水(50ml)并在室温静置30分钟。用CH2Cl2(5×50ml)萃取产物，蒸发合并的萃取液，并将残留物与甲苯共蒸发(3×50ml)。产物经硅胶柱色谱分离，用乙酸乙酯-己烷(2∶8)洗脱得5-氨基噻吩衍生物(50mg，23％产率)，然后用乙酸乙酯-己烷(1∶1)洗脱得到5-乙酰胺基噻吩衍生物(40mg，17％，产率)；1H NMR(DMSO-d6)δ1.30(6H，m，2×CH3)，2.06(3H，s，CH3)，4.23(3H，m，CH2和CH)，4.88(2H，br.s，可D2O交换，NH2)，5.08(2H，m，CH2Ph)，7.22-7.39(5H，m，芳环质子)，8.08(1H，d，J＝6.32Hz，可D2O交换，NH)，11.34(1H，br s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C19H23N3O5S405.1358，实测值405.1359。1H NMR(DMSO-d6)δ1.32(6H，m，2×CH3)，2.09(3H，s，CH3)，2.24(3H，s，CH3CO)，4.26(3H，m，CH2和CH)，5.08(2H，m，CH2Ph)，7.34-7.39(5H，m，芳环质子)，8.12(1H，d，J＝6.32Hz，可D2O交换，NH)，9.98(1H，br.s，可D2O交换，NH)，11.49(1H，br.s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C21H25N3O6S447.1436，实测值447.1464。实例7(步骤4)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-乙酰氨基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例2，步骤2，产率16％；δH(DMSO-d6)1.41(3H，d，J＝7.15Hz，CH3)，2.18(3H，s，CH3)，2.49(3H，s，CH3CO)，4.53(1H，m，CH)，5.06(2H，m，CH2Ph)，7.31-7.36(5H，m，芳环质子)，8.00(1H，d，J＝7.69Hz，可D2O交换，NH)，10.67(1H，br.s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C19H19N3O5S401.1046，实测值401.1048。实例8(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-(N-异丁酰氨基)-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例9的方法；δH(DMSO-d6)1.13(6H，d，J＝6.87Hz，2×CH3)，1.42(3H，d，J＝7.15Hz，CH3)，243(3H，s，CH3)，2.86(1H，q，J＝6.87Hz，CH)，4.56(1H，m.CH)，5.06(2H，m，CH2Ph)，7.13-7.41(5H，m，芳环质子)，8.0(1H，d，J＝7.43Hz，可D2O交换，NH)，10.56(1H，s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C21H23N3O5S429.1359，实测值429.1359。实例9(步骤1)2-[(N-苄氧羰基-L-丙氨酰基)氨基]-4-甲基-5-(N-乙酰基氨基)噻吩-3-羧酸乙酯2-[(N-苄氧羰基-L-丙氨酰基)氨基]-4-甲基-5-氨基噻吩-3-羧酸乙酯(0.4g，1mmo1)，己酰氯(0.17ml，1.2mmol)和4-甲基吗啡啉(0.13ml，1.2mmol)的四氢呋喃液(8ml)于0-5℃搅拌1.5小时。滤除沉淀，用四氢呋喃洗(2×20ml)。合并的滤液及洗涤液蒸发至干，残留物溶于CH2Cl2(80ml)，用饱和NaHCO3(2×20ml)水溶液洗并干燥(MgSO4)。除去溶剂并将残留物与甲苯共蒸发(1×20ml)。产物经硅胶柱层析用乙酸乙酯-CH2Cl2洗脱(5∶95)(0.264g，53％)；δH(DMSO-d6)0.88(3H，t，J＝6.6Hz，CH3)，1.22-1.39(10H，m，2×CH3，2×CH2)，1.57(2H，m，CH2)，2.23(3H，s，CH3)，2.36(2H，t，J＝7.15Hz，CH2)，4.20-4.32(3H，m，CH和CH2)，5.08(2H，m，CH2Ph)，7.30-7.39(5H，m，芳环质子)，8.12(1H，d，J＝6.33Hz，可D2O交换，NH)，9.89(1H，s，可D2O交换，NH)，和11.49(1H，s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C25H33N3O6S 503.209，实测值503.2104。实例9(步骤2)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-(N-己酰氨基)-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例2，步骤2，产率50％；δH(DMSO-d6)0.88(3H，t，J＝6.6Hz，CH3)，1.30(4H，m，2×CH2)，1.41(3H，d，J＝7.15Hz，CH3)，1.61(2H，t，J＝7.7Hz，CH2)，2.42(3H，s，CH3)，2.45(2H，m，CH2)，4.55(1H，m，CH)，5.05(2H，m，CH2Ph)，7.13-7.43(5H，m，芳环质子)，8.00(1H，d，J＝7.7Hz)，可D20交换，NH)，10.6(1H，s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C23H27N3O5S 457.1672，实测值457.1670。实例10(步骤1)2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基-5-[N-(苄氧羰基)-β-丙氨酰基)]噻吩-3-羧酸乙酯于0℃向搅拌着的N-(苄氧羰基)β-丙氨酸(0.27g，1.15mmol)和4-甲基吗啉(0.13ml，1.15mmol)的四氢呋喃溶液(10ml)中加入氯甲酸异丁酯(0.15ml，1.15mmol)。15分钟后，于0℃向所得混合物在10分钟内滴加2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基-5-氨基噻吩-3-羧酸乙酯(1mmol，粗原料)的四氢呋喃(10ml)溶液并将反应混合物于0-5℃搅拌1小时。然后向再此混合物加入按上述制备的混合酸酐(1.15mmol溶于6ml四氢呋喃)。搅拌1小时后，滤除沉淀，用四氢呋喃(20ml)洗。蒸发合并的洗涤液和滤液至干并将产物经硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯-二氯甲烷(1∶1)洗脱(0.370g，53％两步后产率)；1H NMR(DMSO-d6)δ1.33(6H，m，2×CH3)，2.23(3H，s，CH3)，2.58(2H，t，J＝6.9Hz，CH2)，3.39(2H，t，J＝6.9Hz，D2O交换后，C2H)，4.27(3H，m，CH2和CH)，5.05(4H，m，2×CH2Ph)，7.17-7.39(11H，m，芳环质子和可D2O交换NH)，8.12(1H，br.d，J＝5.78Hz，可D2O交换，NH)，9.99(1H，宽单峰，可D2O交换，NH)，11.50(1H，br. s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C30H34N4O8S611.2175，实测值611.2175。实例10(步骤2)2-[N-(苄氧羰基)-(1S)-1-(氨乙基)]-5-甲基-6-[(N-苄氧羰基-β-丙氨酰基)氨基]-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例2，步骤，产率22％；1H NMR(DMSO-d6)δ1.41(3H，d，J＝6.9Hz，CH3)，2.49(3H，s，CH3)，2.68(2H，t，J＝6.9Hz，CH2)，3.32(2H，m，CH2)，4.55(1H，m，CH)，5.02(2H，s，CH2Ph)，5.05(2H，m，CH2Ph)，7.33(10H，m，芳环质子)，7.43(1H，m，可D2O交换，NH)，8.01(1H，br.d，可D2O交换，NH)，10.7(1H，s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C28H28N4O7S564.168，实测值564.1678。实例112-[N-(苄氧羰基)-(1S)-1-(氨乙基)]-5-甲基-6-[[6-N-(苄氧羰基)氨基己酰基]氨基]-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例10，产率5％；δH(DMSO-d6)1.23-1.38(2H，m，CH2)，1.41(3H，d，J＝6.88Hz，CH3)，1.46-1.63(2H，m，CH2)，2.42(3H，s，CH3)，2.49(2H，m，CH2)，3.01(2H，m，CH2)，4.55(1H，m，CH)，5.00(2H，s，CH2Ph)，5.05(2H，m，CH2Ph)，7.25-7.42(6H，m，可D2O交换NH和芳环质子)，8.01(1H，d，J＝7.7Hz，可D2O交换，NH)，10.6(1H，s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C31H34N4O7S607.2227，实测值607.2230。实例12(步骤1)2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基-5-N-(苄氧羰基氨基)噻吩-3-羧酸乙酯于0℃向搅拌着的2-[(N-苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基-5-氨基噻吩-3-羧酸乙酯(110mg，0.27mmol)和4-甲基吗啉(0.038ml，0.35mmol)的四氢呋喃溶液(4ml)中加入氯甲酸苄酯(0.1ml，0.35M四氢呋喃溶液)。反应混合物于0-5℃搅拌1小时，滤除沉淀，用四氢呋喃(2×5ml)洗。合并滤液和洗涤液，除去溶剂。将产物经硅胶柱色谱纯化用乙酸乙酯-二氯甲烷(11∶89)洗脱(85mg，57％两步后产率)；1H NMR(DMSO-d6)δ1.32(6H，m，2×CH3)，2.16(3H，s，CH3)，4.26(3H，m，CH和CH3)，5.08(2H，s，CH2Ph)，7.12-7.51(10H，m，芳环质子)，8.13(1H，d，J＝6.32Hz，NH)，9.57(1H，s，NH)，11.55(1H，br.s，NH)。(实测值C，59.96，H，5.30，N，7.52％。C27H29N3O7S要求C，60.10，H，5.42，N，7.79％)。实例12(步骤2)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-(三苯基亚正膦基氨基)-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮噻吩5-苄基氨基甲酸酯(70mg，0.13mmol)，三苯膦(68mg，0.26mmol)和四氯化碳(0.05ml，0.5mmol)的二氯甲烷溶液(5ml)于60-70℃加热回流1小时，然后再加入三苯膦(30mg，0.11mmol)，于60-70℃再加热回流1小时。用二氯甲烷(50ml)稀释此溶液，用饱和碳酸氢钠水溶液(2×20ml)洗并干燥(MsSO4)。将产物硅胶柱色谱纯化用乙酸乙酯-二氯甲烷(1∶9)洗脱(58.8mg，产率73％)；1H NMR(DMSO-d6)δ1.33(3H，d，J＝6.88Hz，CH3)，2.33(3H，d，J＝1.1Hz，CH3)，4.44(1H，m，CH)，5.02(2H，m，CH2Ph)，7.08-7.31(5H，m，芳环质子)，7.59-7.80(15H，m，芳环质子)，7.86(1H，d，J＝7.70Hz，NH)。(实测值C，67.12，H，4.71，N，6.50％。C35H30N3O4PS要求C，67.84，H，4.88，N，6.78％)。实例12(步骤3)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-(N-苯甲酰氨基)-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮亚氨基正膦衍生物(0.230g，0.37mmol)，苯甲酰氯(0.05ml，0.45mmol)和三乙胺(0.1ml，0.74mmol)的二氯甲烷溶液(5ml)于室温搅拌3天，用二氯甲烷(80ml)稀释此反应混合物，用饱和碳酸氢钠水溶液(2×10ml)洗并干燥(MgSO4)。除去溶剂并将残留物经硅胶柱色谱纯化用乙酸乙酯-二氯甲烷(35∶65)洗脱得到产物(45mg，产率26％)1H NMR(DMSO-d6)δ1.44(3H，d，J＝6.87Hz，CH3)，2.51(3H，s，CH3)，4.58(1H，m，CH)，5.07(2H，m，CH2Ph)，7.30-7.42(5H，m，芳环质子)，7.54-7.69(3H，m，芳环质子)，7.98-8.04(3H，m，可D2O交换，NH和芳环质子)，10.93(1H，s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C24H21N3O5S463.1202，实测值463.1202。实例13(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-[(N-异丙氧羰基)氨基]-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰]氨基-4-甲基-5-(N-异丙氧羰基氨基)-噻吩-3-羧酸乙酯的制备类似实例12，步骤1，环化类似实例2，步骤；产率48％；1H NMR(DMSO-d6)δ1.28(6H，d，J＝6.05Hz，2×CH3)，1.41(3H，d，J＝7.15Hz，CH3)，2.33(3H，s，CH3)，4.54(1H，m，CH)，4.95(1H，q，J＝6.05Hz，CH)，5.05(2H，m，CH2Ph)，7.14-7.63(5H，芳环质子)，8.00(1H，d，J＝7.42Hz，可D2O交换，NH)，10.34(1H，s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C21H23N3O6S445.1308，实测值445.1310。实例14(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-[(N-异丁氧羰基)氨基]-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例13，产率48％；δH(DMSO-d6)0.94(6H，d，J＝6.6Hz，2×CH3)，1.41(3H，d，J＝6.88Hz，CH3)，1.96(1H，m，CH)，2.34(3H，s，CH3)，3.94(2H，d，J＝6.7Hz，CH2)，4.55(1H，m，CH)，5.05(2H，m，CH2Ph)，7.30-7.36(5H，m，芳环质子)，8.0(1H，d，J＝7.69Hz，可D2O交换，NH)，10.32(1H，br.s，可D2O交换，NH)；HRMS计算值C22H25N3O6S459.1464，实测值459.1474。实例15至22的通法(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-(三苯基亚正膦基氨基)-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮(0.16mmol)和合适的异氰酸酯(5.0-6.0当量)的二氯甲烷溶液(3ml)或二氯甲烷-乙腈(1∶1，5ml)溶液于室温搅拌3-64小时。a)烷基脲除去溶剂，残留物与甲苯(2×5ml)共蒸发，然后于室温用二噁烷-10％柠檬酸水溶液(2∶1，5ml)处理6小时。浓缩此混合物至小体积，产物用二氯甲烷萃取(4×15ml)。合并萃取液，干燥(MgSO4)，浓缩，残留物经硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯-二氯甲烷混合液洗脱。某些情况下，浓缩反应混合物，残留物与甲苯(2×5ml)共蒸发，经硅胶柱色谱纯化得到噻吩二酰亚胺和/或噻吩脲。于室温将此二酰亚胺用冰醋酸/二氯甲烷处理(1∶9，2ml)45至130分钟。除去溶剂并将残留物与甲苯(2×5ml)共蒸发。烷基脲经硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯-二氯甲烷或乙酸乙酯-己烷混合物洗脱。b)芳基脲除去溶剂并将残留物与甲苯(2×5ml)共蒸发得到粗产物。某些情况下，反应混合物用二氯甲烷稀释(50ml)，用10％柠檬橼酸水溶液(2×10ml)，饱和碳酸氢钠水溶液(1×10ml)洗并干燥(MgSO4)或浓缩反应混合物，残留物与甲苯(2×5ml)共蒸发，溶于二氯甲烷(50ml)中再按上述方法后处理。除去溶剂并将每一残留物经硅胶柱色谱纯化，用乙酸乙酯-二氯甲烷混合液洗脱。实例15(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-(3-异丙基脲基)-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮产率42％；δH[(CD3)SO]1.12(6H，d，J＝6.6Hz，2×CH3)，1.41(3H，d，J＝7.15Hz，CH3)，2.31(3H，s，CH3)，3.77(1H，m，CH)，4.54(1H，m，CH)，5.05(2H，m，CH2Ph)，6.49(1H，d，J＝7.42Hz，可D2O交换，NH)，7.30-7.39(5H，m，芳环质子)，7.98(1H，d，J＝7.7Hz，可D2O交换)，和9.04(1H，s，可D2O交换，NH)。FABMS(正离子，)445(MH+)，467(MNa+)。实例16(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-(3-丁基脲基)-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮产率44％；δH[(CD3)SO]0.9(3H，t，J＝7.3Hz，CH3)，1.27-1.36(4H，m，2×CH2)，1.40(3H，d，J＝6.88Hz，3H)，2.31(3H，s，CH3)，3.13(2H，m，CH2)，4.54(1H，m，CH)，5.05(2H，m，CH2Ph)，6.56(1H，t，J＝5.4Hz，可D2O交换，NH)，7.30-7.40(5H，m，芳环质子)，7.98(1H，d，J＝7.14Hz，可D2O交换，NH)，和9.14(1H，s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C22H26N4O5S459.1702，实测值459.1722。实例17(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-(3-苄基脲基)-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮产率19％；δH(CDCl3)1.52(3H，d，J＝6.87Hz，CH3)，2.20(3H，br.s，CH3)，4.45(2H，br.s，CH2Ph)，4.65(1H，m，CH)，5.10(2H，m，CH2Ph)，5.51-5.56(2H，m，2×NH)，6.92-7.19(1H，v.br.s，NH)，和7.26-7.43(10H，m，芳环质子)，HRMS计算值C25H24N4O5S493.1546，实测值493.1544。实例18(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-(3-苯基脲基)-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮产率40％；δH[(CD3)SO]1.41(3H，d，J＝6.87Hz，CH3)，2.39(3H，s，CH3)，4.56(1H，m，CH)，5.05(2H，m，CH2Ph)，7.03(1H，t，J＝7.7Hz，芳环质子)，7.29-7.36(7H，m，芳环质子)，7.47(2H，d，J＝7.7Hz，芳环质子)，8.01(1H，d，J＝7.15Hz，可D2O交换，NH)，9.02(1H，s，可D2O交换，NH)，9.40(1H，s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C24H22N4O5S478.1311，实测值478.1316。实例19(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-[3-(4-氯苯基)脲基]-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮产率30％；δH[(CD3)SO]1.42(3H，d，J＝6.87Hz，CH3)，2.38(3H，s，CH3)，4.56(1H，m，CH)，5.06(2H，m，CH2Ph)，7.17-7.48(7H，m，芳环质子)，7.51(2H，d，J＝8.80Hz，芳环质子)，8.01(1H，d，J＝7.15Hz，NH)，9.15(1H，s，NH)，9.45(1H，s，NH)。HRMS计算值C24H21N4O5SCl 512.0922，实测值512.0928。实例20(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-[3-(4-甲氧基苯基)脲基]-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮产率18％；δH[(CD3)SO]1.42(3H，d，J＝7.15Hz)，2.38(3H，s，CH3)，3.73(3H，s，CH3O)，4.55(1H，m，CH)，5.06(2H，m，CH2Ph)，6.91(2H，d，J＝9.07Hz，芳环质子)，7.17-741(7H，m，芳环质子)，8.00(1H，d，J＝7.4Hz，可D2O交换，NH)，8.84(1H，s，可D2O交换，NH)，9.34(1H，s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C25H24N4O6S 508.1417，实测值508.1416。实例21(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-[3-(2-甲氧羰基苯基)脲基]-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮产率14％；δH[(CD3)SO]1.42(3H，d，J＝7.15Hz，CH3)，2.44(3H，s，CH3)，3.90(3H，s，CH3O)，4.55(1H，m，CH)，5.06(2H，m，CH2Ph)，7.15(1H，dt，芳环质子)，7.36(5H，m，芳环质子)，7.61(1H，dt，芳环质子)，7.96(1H，dd，芳环质子)，8.01(1H，d，J＝7.7Hz)，可D2O交换，NH)，8.25(1H，dd，芳环质子)，10.18(1H，s，可D2O交换，NH)，10.53(1H，s，可D2O交换，NH)。FABMS(正离子)537(MH+)，559(MNa+)。实例22(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-(3-乙酰基，3-苄基脲基)-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮产率42％；δH[(CD3)SO]1.41(3H，d，J＝7.15Hz，CH3)，2.18(3H，s，CH3CO)，2.43(3H，s，CH3)，4.55(1H，m，CH)，4.59(2H，s，CH2Ph)，5.05(2H，m，CH2Ph)，7.28-7.43(10H，m，芳环质子)，7.99(1H，d，J＝5.91Hz，NH)，10.68(1H，s，NH)。HRMS计算值C27H26N4O6S535.1652，实测值535.1652。实例23(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-氨基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮于60-70℃将2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基-5-[N-(苄氧羰基)-3-氨基丁酰基)]噻吩-3-羧酸乙酯(制备类似实例10，步骤1)；(0.35g，0.56mmol)、三苯膦(0.32g，1.23mmol)和四氯化碳(0.3ml，3.1mmol)的二氯甲烷溶液(10ml)回流加热3小时。再加入三苯膦(0.16g，0.6mmol)和四氯化碳(0.15ml，1.5mmol)，再继续回流2小时。反应混合物室温静置53小时，用二氯甲烷(80ml)稀释，用饱和碳酸氢钠水溶液(2×15ml)、水(15ml)洗并干燥(MgSO4)，除去溶剂残留物，经硅胶柱色谱纯化，用6-9％乙酸乙酯-二氯甲烷液洗脱得到产物(0.10g，50％产率)δH(DMSO-d6)1.38(3H，d，J＝6.88Hz，CH3)，2.16(3H，s，CH3)，4.51(1H，m，CH)，5.06(2H，m，CH2Ph)，5.95(2H，s，可D2O交换，NH2)，7.31-7.41(5H，m，芳环质子)，7.93(1H，d，J＝7.7Hz，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C17H17N3O4S 359.094，实测值359.0941。实例24(步骤1)2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基-5-(N，N-二甲氨基)]噻吩-3-羧酸乙酯于室温向搅拌着的2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基-5-氨基噻吩-3-羧酸乙酯(0.2g，0.5mmol)和37％甲醛水溶液(0.2ml)在乙腈中的溶液(5ml)中加入氰基硼氢化钠(50mg，0.8mmol)的乙腈溶液(2ml)。反应混合物搅拌15分钟然后用冰醋酸中和。继续在室温搅拌45分钟。将混合物倾入乙醚(50ml)中，然后用1N氢氧化钾水溶液(3×10ml)，盐水(1×10ml)和水(1×10ml)洗。蒸发溶剂得到产物(0.2g)，未经纯化直接用于下一步反应；δH(DMSO-d6)1.31(6H，m，2×CH3)，2.20(3H，s，CH3)，2.61(6H，s，(CH3)2N，4.27(3H，m，CH和CH2)，5.07(2H，m，CH2Ph)，7.33-7.39(5H，m，芳环质子)，8.12(1H，极宽双峰，可D2O交换，NH)，11.58(1H，宽单峰，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C21H27N3O5S434.1750，实测值434.1758。实例24(步骤2)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-(N，N-二甲氨基)-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例2，步骤2，产率36％；(DMSO-d6)1.39(3H，d，J＝7.15Hz，CH3)，2.28(3H，s，CH3)，2.69(6H，s，(CH3)2N)，4.50(1H，m，CH)，5.07(2H，m，CH2Ph)，7.10-7.39(5H，m，芳环质子)，8.00(1H，宽双峰，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C19H21N3O4S 387.1253，实测值387.1253。实例25(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-(N，N-二丙氨基)-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例24，产率50％；δH(DMSO-d6)0.86(3H，t，J＝7.15Hz，2×CH3)，1.40(7H，m，2×CH2和CH3)，2.30(3H，s，CH3)，2.86(3H，t，J＝7.15Hz，2×CH2)，4.52(1H，m，CH)，5.07(2H，m，CH2Ph)，7.11-7.41(5H，m，芳环质子)，8.03(1H，d，J＝7.42Hz，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C23H29N3O4S 443.1879，实测值443.1881。实例26(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-(N-苄基-N-甲氨基)-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例24，产率40％；1H NMR(DMSO-d6)δ1.39(3H，d，J＝6.87Hz，CH3)，2.31(3H，s，CH3)，2.70(3H，s，CH3)，4.09(2H，s，CH2Ph)，4.51(1H，m，CH)，5.04(2H，m，CH2Ph)，7.26-7.40(10H，m，芳环质子)，7.98(1H，d，J＝7.42Hz，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C25H25N3O4S464.1644，实测值464.1661。实例27(步骤1)2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基-5-溴噻吩-3-羧酸乙酯于55℃向2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯(0.61g，1.56mmol)的二噁烷-水(1 ml，5∶1)溶液滴加溴(0.25g)的二噁烷溶液(30ml)，历时2.5小时。用AmberliteIR-45(OH)将溶液中和至pH7.0，滤除树脂，用二噁烷(3×50ml)洗。合并滤液和洗涤液蒸发至干得到产物，(0.71g，产率97％)，δH(DMSO-d6)1.33(6H，m，2×CH3)，2.30(3H，s，CH3)，4.31(3H，m，CH，CH2)，5.09(2H，m，CH2Ph)，7.35-7.39(5H，m，芳环质子)，8.15(1H，d，J＝6.32Hz，NH)，11.62(1H，s，NH)。元素分析计算C19H21N2O5SBr C，48.62；H，4.51；N，5.97。实测值C，49.23；H，4.51；N，5.88。HRMS计算值C19H21N2O5SBr 468.0355，实测值468.0357。实例27(步骤2)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氧乙基]-5-甲基-6-溴-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例2，步骤2，产率47％；δH(DMSO-d6)1.42(3H，d，J＝7.15Hz，CH3)，2.38(3H，s，CH3)，4.56(1H，m，CH)，5.05(2H，m，CH2Ph)，7.14-7.41(5H，m，芳环质子)，8.04(1H，d，J＝7.42Hz，可D2O交换，NH)。元素分析计数值C17H15N2O4SBr C，48.24；H，3.57；N，6.62。实测值C，48.59；H，3.57；N，6.23。实例28(步骤1)2-[N-苄氧羰基-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基-5-苯基噻吩-3-羧酸乙酯的制备2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基-5-溴噻吩-3-羧酸乙酯(0.150g，0.320g)，苯基硼酸(70mg，0.57mmol)和氯化双(三苯基膦)钯(10mg)的四氢呋喃-2M碳酸钠(2ml-0.3ml)溶液搅拌2小时15分钟。该混合物用二氯甲烷(50ml)稀释，用饱和氯化钠水溶液(20ml)洗并干燥(MgSO4)，除去溶剂产物经硅胶柱色谱纯化(用乙酸乙酯-二氯甲烷(2∶98)洗脱)(74.5mg，产率50％)；δH(DMSO-d6) 1.34(6H，m，2×CH3)，2.34(3H，s，CH3)，443(3H，m，CH2和CH)，5.10(2H，m，CH2Ph)，7.30-7.51(10H，m，芳环质子)，8.17(1H，d，J＝5.22Hz，可D2O交换，NH)，11.63(1H，s，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C25H26N2O5S 466.1563，实测值466.1565。实例28(步骤2)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-苯基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例2，步骤2，产率43％；δH(DMSO-d6)1.47(3H，d，J＝7.06Hz，CH3)，2.49(3H，s，CH3)，4.58(1H，m，CH)，5.07(2H，m，CH2Ph)，7.13-7.39(5H，m，芳环质子)，746-7.55(5H，m，芳环质子)，8.04(1H，d，J＝6.61Hz，可D2O交换，NH)。HRMS计算值C23H20N2O4S 420.1144，实测值420.1148。实例29(步骤1)2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基-5-碘噻吩-3-羧酸乙酯2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基噻吩-3-羧酸乙酯采用Y.Kobayashi，I.Kumadaki和T.Yoshida的方法碘化[化学研究(S)，1977，215]，mp 104-105℃；δH(CDCl3)1.35(3H，t，J＝7Hz，CH2CH3)，1.5(3H，d，J＝7Hz，CH3CH)，2.35(3H，s，CH3)，4.3(2H，q，j＝7Hz，CH2CH3)，4.5(1H，m，CH3CH)，5.15(2H，s，CH2Ph)，5.5(1H，br，NH)，和7.3(5H，br，C6H5)，11.8(1H，br，NH)(实测值C，44.35；H，3.87；N，5.21％。C19H21N2O5SI要求C，44.20；H，4.10；N，5.43％)。实例29(步骤2)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-6-碘-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲基-5-碘噻吩-3-羧酸乙酯环化类似实例2，步骤2，mp 142-144℃；δH(CDCl3)1.55(3H，d，J＝7Hz，CH3CH)，2.5(3H，s，CH3)，4.75(1H，m，CH3CH)，5.1(2H，s，CH2Ph)，5.45(1H，br，NH)和7.35(5H，br s，C6H5)(实测值M+469.9797。C17H15N2O4SI要求469.9798)。实例30(步骤1)2-氨基-4-乙基-5-甲基噻吩-3-羧酸甲酯用K.Gewald，E.Schinke和H.Bottcher的方法制备[化学报告1966，99，94-100]实例30(步骤2)2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-乙基-5-甲基噻吩-3-羧酸甲酯于0--5℃向N-(苄氧羰基)-L-丙氨酸(1.12g，5mmol)的无水DMF溶液(10ml)加入N-甲基吗啉(0.5ml，5mmol)，随后边搅拌边滴加氯甲酸异丁酯(0.65ml，5mmol)。然后搅拌此反应混合物15分钟。于0--5℃加入2-氨基-4-乙基-5-甲基噻吩-3-羧酸甲酯(1.0g，5mmol)，反应液至室温后搅拌18小时。减压除去溶剂并将残留物在乙酸乙酯(50ml)和水(3×20ml)中两相分配，有机相干燥(MgSO4)，过滤，减压蒸发。残留物经硅胶柱色谱纯化，用20％乙醚/己烷洗脱，然后用丙酮/己烷结晶得无色产物(1.1g，55％)。实例30(步骤3)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-乙基-6-甲基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-乙基-5-甲基噻吩-3-羧酸甲酯环化类似实例2，步骤2，mp 90-2℃；δH(DMSO-d6)1.08(3H，t，J＝7.4Hz，CH3CH2)，1.42(3H，d，J＝7.2Hz，CH3CH)，2.42(3H，s，CH3)，2.79(2H，q，J＝7.4Hz，CH3CH2)，4.55(1H，五重峰，J＝7.2Hz，CH3CHNH)，5.06(2H，m，CH2Ph)，7.25-7.40(5H，m，C6H5)，和8.01(1H，d，J＝7.4HzNH)(实测值C，61.53；H，5.52；N，7.45％。C19H20N2O4S要求C，61.27；H，5.41；N，7.52％)。实例31(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-异丙基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例30。mp139-41℃；δH(DMSO-d6)1.24(6H，d，J＝6.9Hz，(CH3)2CH)，1.43(3H，d，J＝7.2Hz，CH3CH)，3.41(1H，七重峰，J＝6.6Hz，(CH3)2CH)，4.57(1H，五重峰，J＝7.2Hz，CH3CHNH)，5.00-5.20(2H，m，CH2Ph)，7.25-7.50(6H，m，C6H5和6-H)，和8.03(1H，d，J＝7.1Hz，NH)(实测值C，61.19；H，5.29；N，6.99％。C19H20N2O4S要求C，61.27；H，5.41；N，7.52％)。实例32(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-异丁基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例30。mp 137-9℃；δH(DMSO-d6)0.88(6H，d，J＝6.6Hz，(CH3)2CH)，1.43(3H，d，J＝7.2Hz，CH3CH)，1.90(1H，七重峰，J＝6.6Hz，(CH3)2CH)，2.70(2H，d，J＝6.2Hz，CH2CH)，4.56(1H，五重峰，J＝7.2Hz，CH3CHNH)，5.00-5.15(2H，m，CH2Ph)，7.25-7.50(6H，m，C6H5和6-H)，和8.02(1H，d，J＝7.15Hz，NH)(实测值C，62.08；H，5.82；N，7.35％。C20H22N2O4S要求C，62.16；H，5.74；N，7.25％)。实例33(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-环丙基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例30。mp 138-40℃；δH(DMSO-d6)0.70(2H，m，CH2)，0.95(2H，m，CH2)，143(3H，d，J＝7.1Hz，CH3CH)，2.41(1H，m，CH)，4.56(1H，五重峰，J＝6.0Hz，CH3CHNH)，5.06(2H，d，J＝2.5Hz，CH2Ph)，7.12(1H，s，6-H)，7.35(5H，m，C6H5)，和8.03(1H，d，J＝7.2Hz，NH)(实测值C，61.46；H，4.86；N，7.50％。C19H18N2O4S要求C，61.61；H，4.90；N，7.56％)。实例34(步骤1)2-氨基-4-甲氧基噻吩-3-羧酸乙酯2-氨基-4-羟基噻吩-3-羧酸乙酯(750mg，4.0mmol)的无水二氯甲烷溶液用四氟硼酸三甲基锌盐(882mg，6.0mmol)处理，室温搅拌1小时。减压除去溶剂并将残留物经硅胶柱色谱纯化，用2％甲醇/二氯甲烷洗脱，然后用丙酮结晶得到，产物为黄色结晶mp 103-5℃；δH(DMSO-d6)1.22(3h，t，J＝7.1Hz，CH3CH2)，3.64(3H，s，OCH3)，4.15(2H，q，J＝6.8Hz，CH2CH3)，5.29(1H，s，5-H)，7.34(2H，s，NH2)(实测值C，47.43；H，5.42；N，6.90％。C8H11NO3S要求C，47.75；H，5.51；N，6.96％)。实例34(步骤2)2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲氧基噻吩-3-羧酸乙酯2-氨基-4-羟基噻吩-3-羧酸乙酯按照类似实例30，步骤2的方式酰化。实例34(步骤3)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲氧基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮2-[N-(苄氧羰基)-L-丙氨酰基]氨基-4-甲氧基噻吩-3-羧酸乙酯按照类似实例2，步骤2的方式环化。mp 173-5℃；δH(DMSO-d6)1.42(3H，d，J＝7.2Hz，CH3CH)，3.85(3H，s，OCH3)，(1H，m，CH3CHNH)，5.05(2H，m，CH2Ph)，6.72(1H，s，6-H)，7.25-7.50(5H，m，C6H5)，和8.04(1H，d，J＝7.4Hz，NH)(实测值C，56.67；H，4.32；N，7.69％。C17H16N2O5S要求C，56.66；H，448；N，7.77％)。实例35(S)-2-[N-(苄氧羰基)氨甲基]-5-甲基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮于0--5℃将N-(苄氧羰基)甘氨酸(209mg，1mmol)的无水DMF(10ml)溶液用1-羟基苯并三唑(148mg，1.1mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(210mg，1.1mmol)处理，搅拌15分钟。然后加入2-氨基-4-甲基噻吩-3-羧酸(157mg，1mmol)，反应液放至室温，并于室温搅拌18小时。然后再加入DEC(210mg，1.1mmol)，反应混合物于室温搅拌18小时。减压除去溶剂并将残留物在乙酸乙酯(50ml)和水(3×20ml)中两相分配，将有机层干燥(MgSO4)，过滤并减压蒸发。残留物经硅胶柱色谱纯化，用50％乙酸乙酯/己烷洗脱，然后用丙酮/己烷结晶得产物，为无色针晶(130mg，39％)，mp 120-122℃；δH(DMSO-d6)2.42(3H，d，J＝1.1Hz，CH3)，4.22(2H，d，J＝6.05Hz，CH2NH)，5.08(2H，s，CH2Ph)，7.25-7.50(6H，m，C6H5和6-H)，7.97(1H，t，J＝6.1Hz，NH)(实测值C，58.19；H，4.26；N，8.50％。C16H14N2O4S要求C，58.17；H，4.27；N，8.48％)。实例36(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨丙基]-5-甲基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例35。mp 129-130℃；δH(DMSO-d6)0.94(3H，t，J＝7.4Hz，CH3CH2)，1.70-1.90(2H，m，CH2CH3)，2.42(3H，s，CH3)，4.35(1H，m，CHCH2)，5.04(2H，m，CH2Ph)，7.25-7.50(5H，m，C6H5)，7.32(1H，s，6-H)，8.00(1H，d，J＝7.7Hz，NH)(实测值C，60.15；H，5.13；N，7.68％。C18H18N2O4S要求C，60.32；H，5.06；N，7.82％)。实例37(步骤1)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨基-2-(叔丁氧基)乙基]-4，5-二甲基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例30，步骤2。实例37(步骤2)(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨基-2-羟乙基]-4，5-二甲基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮(S)-2-[N-(苄氧羰基)-1-氨基-2-(叔丁氧基)乙基]-4，5-二甲基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮(300mg，0.69mmol)的无水二氯甲烷(5ml)溶液用三氟乙酸(1ml)处理，室温放置18小时。减压除去溶剂并将残留物与甲苯共沸(2×50ml)。残留物经硅胶柱色谱纯化，用30％乙酸乙酯/己烷洗脱，得产物，为白色胶状物；δH(DMSO-d6)2.33(3H，s，CH3)，2.40(3H，s，CH3)，3.75(2H，m，CH2)，4.50(1H，m，CH)，5.05(3H，m，CH2Ph和OH)，7.25-7.50(5H，m，C6H5)，和7.85(1H，d，J＝7.7Hz，NH)。实例38(S)-2-[N-(叔-丁氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮制备类似实例35。mp 109-111℃；δH(DMSO-d6)1.38(12H，m，(CH3)3C+CH3CH)，2.42(3H，s，CH3)，4.46(1H，m，CHCH3)，7.30(1H，s，6-H)，和7.54(1H，d，J＝7.4Hz，NH)(实测值C，53.81；H，5.74；N，8.90％。C14H18N2O4S要求C，54.18；H，5.85；N，9.03％)。实例39(S)-2-(1-氨乙基)-5-甲基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮，三氟乙酸盐(S)-2-[N-(叔-丁氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮(200mg，0.61mmol)的无水二氯甲烷(10ml)溶液用苯甲醚(0.075ml，0.73mmol)和三氟乙酸(1.0ml)处理，室温放置1小时。减压除去溶剂并将残留物与甲苯共沸(2×50ml)。残留物经硅胶柱色谱纯化，用3％甲醇/二氯甲烷洗脱，得产物，为白色胶状物；δH(DMSO-d6)1.54(3H，d，J＝6.9Hz，CH3CH)，2.45(3H，d，J＝1.4Hz，CH3)，4.52(1H，m，CHCH3)，7.42(1H，d，J＝1.1Hz，6-H)，和8.60-8.80(3H，极宽峰，NH3+)；FABMS(正离子)211(MH+)。实例40(S)-2-[N-(4-甲氧基苯氧羰基)-1-氨乙基]-5-甲基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮(S)-2-(1-氨乙基)-5-甲基-4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮，三氟乙酸盐(100mg，0.37mmol)的无水二氯甲烷溶液用N，N-二异丙基乙胺(0.065ml，0.37mmol)和氯甲酸4-甲氧基苯酯(0.56ml，0.37mmol)处理，室温搅拌2小时。减压蒸发溶剂，残留物经硅胶柱色谱纯化，用20％乙酸乙酯/己烷洗脱，然后用丙酮/己烷结晶得产物，为无色晶体，mp 173-5℃；δH(DMSO-d6)1.49(3H，d，J＝6.9Hz，CH3CH)，2.43(3H，d，J＝0.8Hz，CH3)，3.73(3H，s，OCH3)，4.61(1H，m，CHCH3)，6.90(2H，d，J＝9Hz，2×ArH)，7.02(2H，d，J＝9.1Hz，2×ArH)，7.33(1H，d，J＝1.1Hz，6-H)，和8.42(1H，d，J＝7.2Hz，NH)(实测值C，56.75；H，4.25；N，745％。C17H16N2O5S要求C，56.66；H，4.48；N，7.77％)。还制备了以下本发明化合物化合物其中R3为甲基，6-取代基R2为CbZ-Ala-NH，2-取代基为CHMeNHCbz。蛋白酶的肽解分析化合物按下法分析向经缓冲液(50mM磷酸钠，150mM NaCl，0.001mM EDTA，0.01％PEG 3400；pH8.0)稀释的酶溶液(0.5-1μM)中加入抑制剂溶液，抑制剂最终浓度为0.01-300μM，总体积25微升。经15分钟预孵育后，加入15微升14链的肽底物，Ac-HTYLQASEKFKMWG，底物最终浓度为250μM。样品于27℃孵育1小时，加入40微升5％三氟乙酸水溶液后反应，用HPLC法定量分析底物肽量以及N-末端和C-末端裂解片数量。裂解百分数计算和表示成对未抑制的对照样所得数值的分数。
用以分析HSV-2的酶由HSV-2 UL26同系蛋白(氨基酸残基1至247)的解蛋白活性区域结构和氨基末端MGHHHHHHSSA组成，WO95/06055(Smithkline Beecham公司。)描述HSV-2蛋白酶序列。
CMV分析用酶由CMVUL80蛋白(氨基酸残基1-256)的解蛋白活性区域结构和氨基末端MGHHHHHHHHSSGHIDDDK组成。多肽在A143和A144(自然UL80编号)间断裂，得到一活性异源二聚体。
VZV分析用酶由VzV基因33蛋白(氨基酸残基1-237)的解蛋白活性区域结构组成。
结果如下
实例中化合物在10μM或1μM浓度于一项或多项上述试验中显示出活性。实例1-4、7-10，12-18，21-22，24-29及35的化合物在浓度1μM时对一种或多种蛋白酶抑制率大于50％，实例10，17，18，21，27；2，3，15，21，28；及8，15，21，28的化合物分别对HSV-2；CMV和VZV有较好的活性。
权利要求
1.式(I)的疱疹病毒蛋白酶抑制剂4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮衍生物，其中2位由X(Y)NH-CHR1取代，X为H或阻断基团，Y可以是任选存在的氨基酸，R1是氢或一个氨基酸侧链。
2.根据权利要求1的化合物，其中4H-噻吩并[2，3-d][1，3]噁嗪-4-酮环系编号如下
除了2-位取代之外，5，6位也可任选地有取代基(分别指定为R3和R2)。
3.根据权利要求2的化合物，其中有R3和R2时，取代基可选自卤素，C1-6烷基或C1-6烷氧基，C1-6烷硫基，氨基(可由一或两个C1- 6烷基或任意取代的苄基取代)，羟烷基，烷羰基，烷氧羰基，任意取代的苯基或R4ZCONH，其中Z是键，O、NH或NCOCH3，R4CO为一酰基，R4包括芳基、烷基或芳烷基，或者R2R3可连接形成C2，C3，C4，C5，C6，C7或C8聚亚甲基。
4.根据权利要求1-3中任何一种化合物，权利要求1中X选自芳基，烷酰基，(芳)烷氧羰基，(芳)烷氨基羰基，芳酰基或芳磺酰基。
5.根据权利要求4中化合物，其中X选自苄氧羰基，叔丁氧羰基和任意取代苯基。
6.根据权利要求1-5中任何化合物，其中有Y时，Y可为丙氨酸，天冬氨酸，缬氨酸或类似的氨基酸。
7.根据权利要求1-6中化合物，其中氨酰基基团-NHCHR1-CO-，最终转换为式(I)化合物中NH-CHR1-，它包括丙氨酸(R1＝CH3)，天冬氨酸，蛋氨酸，苯丙氨酸，丝氨酸(R1＝CH2OH)，缬氨酸和α-氨基丁酸(R1＝CH2CH3)。
8.选自如上所述的实例1-40的化合物。
9.一种药物组合物，其中含有权利要求1-8中任一项的一种化合物和一种可药用的载体。
8.根据权利要求1-8中任一项的化合物用作活性治疗物质。
9.根据权利要求1-8中任一项的化合物用以治疗病毒性疾病。
10.在生产治疗疱疹病毒引起的病毒性疾病的药物过程中，权利要求1-8中任一项的化合物的使用
11.治疗哺乳类动物因疱疹病毒引起的病毒性疾病的方法，它包括对需治疗的哺乳动物给予有效剂量的权利要求1至6中任一项的化合物。
全文摘要
式(Ⅰ)的疱疹病毒蛋白酶抑制剂4H－噻吩并[2,3d][1,3]噁嗪－4－酮衍生物,其中2位由X(Y)NH－CHR
文档编号A61K31/535GK1175258SQ95197615
公开日1998年3月4日 申请日期1995年12月20日 优先权日1994年12月22日
发明者R·L·扎维斯特, M·J·帕列特, H·T·塞拉菲诺瓦斯卡 申请人:史密丝克莱恩比彻姆有限公司