专利名称：一种稳定的重组人干扰素制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及生产一种不含人白蛋白的可相溶的、贮存稳定的基因工程重组蛋白(重组人干扰素IFN)制剂及其制备方法。
干扰素(Interferon，IFN)是一组多功能细胞因子，根据其结构和来源可分为α、β和γ型。干扰素α和β分别主要由白细胞和纤维母细胞产生，在细胞表面与特殊的受体结合，发挥其抑制细胞生长和抑制病毒复制的分子机制，同时还能增强巨噬细胞的吞噬活性和淋巴细胞对靶细胞的特殊毒性，起到免疫调节作用。临床上已广泛应用于抗病毒感染、治疗肿瘤和活化免疫细胞，发挥免疫调节作用。使用的剂型通常为含人白蛋白的冻干制品。
由于人白蛋白为人血液制品，有潜在的血源污染性(如传染肝炎病毒、艾滋病毒等)。在注射制剂中取代人白蛋白，将为安全使用注射制剂提供条件同时应用水针剂可减少冻干生产工序，方便临床应用等。
据此，本发明提供一种不含人白蛋白的可相溶的、贮存稳定的基因工程重组蛋白(重组人α-干扰素，IFN-α)制剂及其制备方法，其技术方案要点是采用pH5.0-7.5生理可相溶的缓冲液系统，如柠檬酸盐缓冲液，磷酸盐缓冲液。
采用一定浓度配比的保护剂，如对羟基苯甲酸甲酯(浓度为0.5-1.8‰)与对羟基苯甲酸丙酯(浓度为0.05-0.18‰)。
采用一定浓度的等渗剂，如浓度为0.4-1.0％的氯化钠或葡萄糖。
采用的络合剂为EDTA，浓度为0.1-1‰。
采用Tween80作为蛋白稳定化剂，浓度在1-20μl/100ml。
采用超纯水作为配制溶液的溶剂。
最终的基因工程重组蛋白(IFN-α)含量为每毫升1-6百万单位。
本发明的特点是应用本发明提供的方法，可生产一种不含人白蛋白的可相溶的、贮存期长且贮存稳定的基因工程重组人干扰素IFN-α。本发明还具有制备方法简单应用效果好等优点。
以下具体实施例用以说明本发明实施例1.
配制1000支1百万单位的IFN-α量取0.7升超纯水，通以无菌过滤的氮气，使溶液中氧气含量低于0.25ppm，再水浴加热至70℃。
称取对羟基苯甲酸甲酯1.20克、对羟基苯甲酸丙酯0.12克，溶于0.7升70℃的超纯水中，充分溶解后，制成A液，然后逐步降低温度至20-25℃。
准确称取柠檬酸三钠0.06克、柠檬酸5.80克、氯化钠8.77克，溶于A液中，保持溶液温度在20-25℃，同时通以无菌过滤的氮气，使溶液中氧气含量低于0.25ppm。测定溶液pH值在6.9-7.0之间。此为B液。
称取EDTA 0.10克，加入B液中，充分混合溶解，保持溶液温度在20-25℃，同时通以无菌过滤的氮气，使溶液中氧气含量低于0.25ppm。此为C液。
称取Tween80 90μl溶于0.25升超纯水中，充分溶解后，制成D液，保持溶液温度在20-25℃。
充分混合C、D两种液体，同时通以无菌过滤的氮气，使溶液中氧气含量低于0.25ppm，混合溶液中加入1×109单位的IFN-α蛋白，用超纯水定容至1升。配制IFN-α的成品制剂。
将成品制剂无菌过滤到灭菌的容器中。将小药瓶通以无菌氮气以排除瓶中空气，再每瓶加入1毫升成品制剂，最后轧盖制成1百万单位的IFN-α注射液。实施例2.
配制1000支3百万单位的IFN-α量取0.7升超纯水，通以无菌过滤的氮气，使溶液中氧气含量低于0.25ppm，再水浴加热至70℃。
称取对羟基苯甲酸甲酯1.20克、对羟基苯甲酸丙酯0.12克，溶于0.7升70℃的超纯水中，充分溶解后，制成A液，然后逐步降低温度至20-25℃。
准确称取柠檬酸三钠0.06克、柠檬酸5.80克、氯化钠8.77克，溶于A液中，保持溶液温度在20-25℃，同时通以无菌过滤的氮气，使溶液中氧气含量低于0.25ppm。测定溶液pH值在6.9-7.0之间。此为B液。
称取EDTA 0.10克，加入B液中，充分混合溶解，保持溶液温度在20-25℃，同时通以无菌过滤的氮气，使溶液中氧气含量低于0.25ppm。此为C液。
称取Tween80 90μl溶于0.25升超纯水中，充分溶解后，制成D液，保持溶液温度在20-25℃。
充分混合C、D两种液体，同时通以无菌过滤的氮气，使溶液中氧气含量低于0.25ppm，混合溶液中加入3×109单位的IFN-α蛋白，用超纯水定容至1升，配制IFN-α的成品制剂。
将成品制剂无菌过滤到灭菌的容器中。将小药瓶通以无菌氮气以排除瓶中空气，再每瓶加入1毫升成品制剂，最后轧盖制成3百万单位的IFN-α注射液。实施例3.
根据前述实施例1、2的方法，配制IFN-α单支剂量为5百万单位和6百万单位的成品制剂。
为了测定不同配制的成品制剂的贮存稳定性，进行了制剂贮存对照实验。采用相同批次的IFN半成品(符合《生物制品检定规程》，纯度大于98％)，进行不同规格制剂的配制实验，其中的对照组作成含有0.5％人白蛋白的制剂。按照不同的温度条件分成如下各组0-4℃组、20-25℃组和35-37℃组，观察期2年，定期检测制剂中IFN-α的活性。(每2周检测1次，半年后为每2-3个月检测1次)。结果表明，在0-4℃和20-25℃条件下，2年内含人白蛋白对照组与不含人白蛋白实验组的活性均无明显的丧失，两者无明显差异；35-37℃条件下，含人白蛋白对照组与不含人白蛋白实验组的活性有不同程度的降低，具体为半年内小于5％，一年内小于10％，两者无明显差异。35-37℃条件下贮存2年的检测结果显示，各组活性降低的幅度达到30-50％，其中不含白蛋白的制剂活性降低40-50％。
结果显示，应用本发明提供的方法，生产一种不含人白蛋白的可相溶的、贮存稳定的基因工程重组人干扰素IFN-α，制剂贮存在0-4℃和20-25℃时有效期为2年，在35-37℃时有效期缩短为1年。
权利要求
1.生产一种不含人白蛋白的可相溶的、贮存稳定的基因工程重组蛋白制剂，该制剂含有一种生理上可相溶的缓冲液等渗调节剂及其它常用的注射用物质、保护剂，其特征在于该制剂含有一种基因工程重组蛋白的重组人α-干扰素蛋白，先制备pH为5.0-7.5的柠檬酸盐缓冲液，氯化钠浓度为0.4-1.0％，然后加入助剂物质，即浓度为0.1-1‰的EDTA、制剂中含浓度为1-20μl/100ml的Tween80、制剂中含保护剂浓度为0.5-1.8‰的对羟基苯甲酸甲酯和浓度为0.05-0.18‰的对羟基苯甲酸丙酯，同时通以无菌过滤的氮气，使溶液中氧气含量低于0.25ppm，最后加入重组人α-干扰素蛋白100-600万单位/毫升，配制成品水针制剂。
2.根据权利要求1的蛋白制剂，其特征在于，其中的重组人α-干扰素蛋白制剂规格为100、300、500、600万单位/毫升。
3.根据权利要求1的蛋白制剂，其特征在于，其中氯的柠檬酸盐缓冲液的pH为6.8-7.0，氯化钠浓度为0.87％。
4.根据权利要求1和3的蛋白制剂，其特征在于。制剂中所含Tween80的浓度为9μl/100ml，以及浓度为0.1‰的EDTA。
5.根据权利要求1-4的蛋白制剂，其特征在于，制剂中所含保护剂浓度为1.2‰的对羟基苯甲酸甲酯和浓度为0.21‰的对羟基苯甲酸丙酯。
6.根据权利要求1蛋白制剂的方法，其特征在于，配制制剂的过程中，通以无菌过滤的氮气，使溶液中氧气含量低于0.25ppm。
7.根据权利要求1所述的蛋白制剂，其特征在于，该制剂是以可注射的液体形式生产的，不含人白蛋白的水针制剂。
8.根据权利要求1-8的蛋白制剂及其方法，其特征在于应用其中的任何一种方法制备的可相溶的、贮存稳定的基因工程重组蛋白。
全文摘要
本发明提供了生产一种不含人白蛋白的可相溶的、贮存稳定的基因重组蛋白(重组人α－干扰素IFN)制剂的方法。该制剂含有:基因工程重组蛋白(IFN－α)、一种生理上可相溶的缓冲液,也可含有等渗调节剂、络合剂、保护剂及其它常用的注射用物质。制备方法包括先配制柠檬酸盐缓冲液,再加入等渗调节剂、络合剂、保护剂等助剂物质,同时通以无菌过滤的氮气,使溶液中氧气含量低于0.25ppm,最后加入IFN－α蛋白,配制成成品水针制剂。
文档编号A61K38/21GK1255377SQ9911339
公开日2000年6月7日 申请日期1999年11月2日 优先权日1999年11月2日
发明者邹钟诚, 苏冬梅, 娄丹, 高军 申请人:沈阳三生制药股份有限公司