专利名称：PEG-干扰素λ1结合物的制作方法
技术领域：
在一个实施方式中，本申请公开了重组人干扰素λ I的PEG化衍生物(PEG-干扰素λ I结合物或PEG-1FNX I )，其制备方法，包含这些结合物的药物组合物以及制备其的方法。
背景技术：
丙型肝炎病毒(HCV)是主要的健康问题和全世界慢性肝病的主要原因。据估计，全球至少有180百万人慢性感染HCV。在越南，在人口中感染HCV的个体比例占4%-9%，大约55%-85%的急性感染HCV个体将转化为慢性感染，5%-25%的这些慢性携带者具有在25-30年后发展为肝硬化和患有肝硬化人群的风险，30%在10年内具有肝代偿失调的风险，而每年1%-3%将发展为肝癌。根据流行病学研究，HCV是40%晚期肝硬化(final stagecirrhosis)和60%肝癌的病因。目前，α -干扰素(Al)是治疗慢性HCV感染选择的治疗方法。Al可以在约70%的病例中对HCV提供持久响应，然 而，这些干扰素会产生很多副作用，甚至在PEG-干扰素α的情况下也是如此。这些副作用有时可能限制治疗，使患者的治疗不完整。副作用包括流感样体征和诸如地中海贫血及贫血等血液效应。干扰素目前用于治疗许多病毒性疾病，如乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、尖锐湿疣、瘤型麻风、慢性白血病和AIDS。Al也有效减少恶性肿瘤以及治疗卡波西氏肉瘤、黑色素瘤和肾细胞癌。此外，Al适用于牛等家畜的疾病的预防和治疗。例如，Al增强手足口病、猪生殖和呼吸系统综合症的预防和治疗中所使用的疫苗的活性。Al已由在组织培养基中培养的人类细胞系或捐赠者的白细胞产生。然而，这些方法是费时的、劳动密集的、昂贵的，且不适合于大规模生产。此外，存在由来自细胞系的传染性病原体引起败血病的风险。随着重组DNA技术的发展，现在我们可以将Al基因引入能够产生大量干扰素的微生物中。然而，这些方法，主要在表达和大规模蛋白生产的步骤中，也存在一定的优势和困难。IL-29是螺旋细胞因子家族的成员，是III型干扰素。它也被称为干扰素入I(IFNλ I)，高度类似于IL-28(其它III型干扰素)的氨基酸序列。IL-28和IL-29(IFNA I)最近被描述为与I型干扰素(IFN)共有的新型细胞因子家族的成员，相同Jak/Stat信号通路促使共同基因组的表达。因此，他们命名为IFNX。IFNX表现出与I型IFN的几个共同特征:抗病毒活性、抗增殖活性和体内抗肿瘤活性。然而，更重要的是，IFN λ结合至IFNLRl和IL10R2构成的独特膜受体。
大多数生物制剂治疗用途的主要缺点在于它们经胃肠外给予，例如静脉注射(1.V.)、皮下(s.c.)、肌肉注射(1.m.)等。这意味着向患者的递送与疼痛和不适是分不开的。此外，因为他们通常半衰期很短，生物制品需要频繁向患者给予，才能保持药物的治疗血清或血浆水平。不能自我给予的注射需要经常去往诊所和找寻训练有素的医务人员，致使这种治疗不便和昂贵。干扰素a-2a干扰素(Roferon, Roche)和干扰素a-2b (IntronA, Schering A G)，治疗慢性乙型和丙型肝炎中使用的人干扰素α的两种重组形式，具有低于 12h 的血清半衰期(McHutchison, et al., Engl.J.Med.1998, 339, 1485-1492; Glue, etal.，Clin.Pharmacol.Ther.2000, 68，556-567)因此需要每周3次给予。也需要重复注射干扰素β-lb (倍泰龙)以治疗多发性硬化症(MS)的患者。一种克服上述频繁高剂量注射以保持体内药物阈值水平的非常成功且广为接受的方法是使其与聚合物，如聚乙二醇(PEG或Peg)连接以增加治疗性蛋白质的体内半衰期。具有其长链的PEG分子不仅在含水溶液中在PEG化药物分子周围产生保护屏障，从而降低蛋白药物的免疫原性，同时也保护其免受蛋白酶的作用，但通过提高其流体动力学体积它们进一步有助于提高药物的循环半衰期，从而降低其由肾脏肾小球网络过滤机制的损失。在其与蛋白分子分离后，PEG部分清除而没有任何结构上的变化，且其清除正比于其分子量。通常PEG部分连接到蛋白质，通过首先激活PEG部分随后使活化的PEG试剂与蛋白质的氨基酸侧链，如赖氨酸残基和/或该蛋白N端氨基反应。最频繁使用的PEG是单官能的PEG，因为这部分抗交联和团聚。一个这种实例已经由Davis等在美国专利号4，179, 337中公开。
发明内容
PEG-干扰素λ I (PEG-1FNλ I)是人重组IFNX I的PEG化衍生物(其中聚乙二醇连接至IFNX 1，也称之为“结合物”)，这用于治疗成年患者中的慢性肝炎C。PEG-1FNA I在注入患者体内之后避开了胞外酶的作用并防止肾脏中的过滤；因此其半衰期在循环中延长。也就是说，相比于相应非P EG连接的IFNX 1，结合物具有显著改善的稳定性、较好的溶解性和提高的循环半衰期和血浆停留时间。干扰素入1 (IFNX 1，Zcyto21或IL-28A)在本领域内是已知的，例如，根据美国专利号 7, 038，032,6, 927，040,7, 135，170,7, 157，559 和 7，351，689 ;以及 PCT
发明者何南 申请人:纳诺亘医药生物科技公司