胞作为研宄对象，将复方柿单宁芦荟 胶作为受试药物，通过细胞形态观察、CCK-8检测细胞活力、H 〇echst33258染色检测细胞凋 亡、流式细胞仪检测细胞凋亡来验证复方柿单宁芦荟胶对辐射损伤的保护作用。实验表明， 随着辐射剂量的增大，细胞的活性逐渐降低。在辐射总剂量为8Gy，辐射后培养12h，在辐射 前添加不同浓度的复方柿单宁芦荟胶对细胞都具有一定的防护作用，柿单宁浓度在2mg/ml 时具有最明显的防护作用。
[0040] 本发明具有下列优点和特性：
[0041] 1、品质好。以柿子粉中的柿单宁为主要活性成分，采用柿子粉，枸杞提取物、脱色 凝胶芦荟冷冻干燥粉，金银花提取物，茶多酚进行复方，制成外用凝胶，具有明显的抗辐射 作用。尤其在辐射总剂量为8Gy时，控制产品中功效成分含量为：每100g产品中，柿单宁含 量为150-250mg，0-乙酰基大于300mg时，具有良好的抗电离辐射效果。按照配方复配，浓 缩了各种活性物质精华，品质好。
[0042] 2、多种组分同时使用，既能充分发挥每个组分的独特效果，又能保证整体产品的 最佳抗电离辐射效果，共同作用凸显柿单宁和芦荟的抗电离辐射作用，并且副作用低。
【具体实施方式】
[0043] 以下所述实例详细地说明了本发明。在实例中，除另有说明外，所有份数和百分比 均按质量计。
[0044] 实施例1
[0045] 1、按照配方，将符合要求的各种提取物原料准备好，备用。
[0046] 2、按10kg具有抗电离辐射作用的复方柿单宁芦荟胶成品称取各种成分：
[0047] 脱色芦荟凝胶冻干粉200g ;柿子粉400g ;金银花提取物50g ;枸杞提取物50g ;茶 多酷20g ;甘油500g，1，3-丁二醇1000g ;高分子透明质酸钠50g ;尿囊素20g ;卡波姆150g ; 香精100g;碘代丙炔基氨甲酸丁醋防腐剂100g ;5%氢氧化钾溶液500g;去离子水6860g; 备用；
[0048] 3、首先将高分子透明质酸钠、去离子水、尿囊素、卡波姆分别投入乳化锅中，抽真 空，以30转/分-50转/分，混合搅拌，同时加热至70°C后，控制加热，继续搅拌直至完全 溶解后，冷却至温度50°C，加入步骤2所述的各种植物提取物，抽真空，以30转/分搅拌， 继续冷却到温度下降到45°C以下；再将甘油、1，3- 丁二醇、防腐剂、香精混合均匀并溶解后 投入乳化锅，搅拌5分钟，直至完全溶解并混合均匀；然后加入浓度为5 %的碱液，搅拌冷却 至40°C以下；出料。即得具有抗电离辐射作用的复方柿单宁芦荟胶。经检测，每100g产品 中，柿单宁含量为205g，0-乙酰基含量为420mg。
[0049] 抗电离辐射实验。采用CCK-8法检测细胞活性；
[0050] (1)选取对数生长期的293T细胞，制成1 X 104个/ml的单细胞悬液，然后将细胞 接种到96孔板中，每个孔加入100 y 1含10%新生牛血清的DMEM新鲜培养液，96孔板的边 缘用无菌的PBS填充，然后置于37 °C、C02含量为5 %恒温密闭的细胞培养箱中培养至细胞 单层铺满孔底。
[0051] (2)细胞培养24h至贴壁后，倒去旧的培养液，然后加入100 y 1含10%新生牛血 清的DMEM新鲜培养液，培养12h，使293T细胞同步化。
[0052] (3)待细胞同步化后，弃旧培养液。每孔加入90yl含10%新生牛血清的DMEM培 养液和10 y 1药液。药物组按每孔柿单宁浓度分设6个浓度亚组（0mg/ml、0. 5mg/ml、lmg/ ml、2mg/ml、4mg/ml、8mg/ml)，同时设置空白组，空白组为无细胞的培养基，每亚组设4个平 行，培养24小时后，293T细胞接受不同剂量的X射线（4GY、8GY、12GY、16GY、20GY)照射。同 时设置不接收X射线照射的对照组。
[0053] (4)辐射后，分别于12h、24后，将96孔培养板中的旧液弃除，用无菌的PBS溶液洗 涤3次，然后每孔分别加入90 y 1新鲜的DMEM培养基及10 y 1 CCK-8液继续培养4h。
[0054] (5) 4h后将96孔细胞培养板置于多功能酶标仪下（490nm，IS)测定各孔的吸光度 (OD)值。
[0055] (6)计算细胞活力值，结果见表1、表2。
[0056] 表1.辐射后12h不同辐射剂量及不同柿单宁药物浓度的细胞活力值（％ )
[0057]
【主权项】
1. 一种具有抗电离辐射作用的复方柿单宁芦荟胶，其特征在于：按质量％计，其配方 为： 脱色芦荟凝胶冻干粉1. 6-3. 0% ; 柿子粉〇. 5-5% ; 金银花提取物0. 5-1. 0% ; 枸杞提取物0. 5-1. 0% ; 茶多酚0. 2-0. 5% ; 甘油 2. 0-5. 0% ; 1，3- 丁二醇 1. 0-15. 0% ; 高分子透明质酸钠〇. 0-1. 〇% ; 尿囊素〇?〇_〇? 4% ; 卡波姆 〇? 1%-2. 0% ; 香精 0?0-0? 2% ; 防腐剂〇. 〇_〇. 2% ; 喊液 0? 1_8. 0% ; 去离子水50. 0-90. 0% ; 每l〇〇g复方柿单宁芦荟胶产品中，柿单宁含量为150_250mg，0-乙酰基大于300mg。
【专利摘要】一种具有抗电离辐射作用的复方柿单宁芦荟胶，质量%计，其配方为：脱色芦荟凝胶冻干粉1.6-3.0%；柿子粉0.5-5%；金银花提取物 0.5-1.0%；枸杞提取物 0.5-1.0%；茶多酚 0.2-0.55；甘油2.0-5.0%；1,3-丁二醇1.0-15.0%；高分子透明质酸钠0.0-1.0%；尿囊素 0.0-0.4%；卡波姆 0.10%-2.00%；香精 0.0-0.2%；防腐剂 0.0-0.2%；碱液0.1-8.0%；去离子水 50.0-90.0%。每100g复方柿单宁芦荟胶产品中，柿单宁含量为150-250mg，O-乙酰基大于300mg。将该产品做抗电离辐射实验，采用CCK-8法检测细胞活性，选用293T细胞作为研究对象，在辐射总剂量为8Gy，辐射后培养12h，复方柿单宁芦荟胶中柿单宁的浓度在2mg/ml时具有最明显的抗电离辐射作用。
【IPC分类】A61K8-04, A61K8-97, A61Q17-04
【公开号】CN104523523
【申请号】CN201410813962
【发明人】李桂银, 周治德, 吴媛燕, 陈真诚, 莫伟志
【申请人】桂林电子科技大学
【公开日】2015年4月22日
【申请日】2014年12月23日