冠突散囊菌菌粉及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及微生物领域，具体地，涉及冠突散囊菌菌粉及其制备方法和应用。更具 体，本发明涉及冠突散囊菌菌粉及其制备方法，冠突散囊菌菌粉在制备药物、食品或饲料中 的用途、药物、食品以及饲料。
【背景技术】
[0002] 冠突散囊菌（Eurotiumcristatum)作为一种散囊菌属的真菌，俗称为"金花"菌， 其生物学特性与一般真菌尤其是和曲霉、青霉等霉菌有高度的相似性。该菌菌丝体富含15 种氨基酸，其中包括所有的人体必需氨基酸。
[0003] 冠突散囊菌属灰绿曲霉属，分布广泛，生长基质包括土壤、茯砖茶、冬虫夏草、中药 片和木屑。冠突散囊菌由子囊果和菌丝组成，子囊果即黄色球形或近球形闭囊壳，直径约为 150~200iim，子囊果破裂释放直径为5iim的球形、近球形或双凸镜形子囊孢子，有宽约为 0. 8~I. 0iim的冠状突起；菌丝直径约8~10iim，呈白色，属于冠突散囊菌。该菌为无性 型属曲霉属，称为小冠曲霉，为同宗配合菌。在低渗透压诱导下产有性孢子，在高渗透压诱 导下产生无性孢子，在高渗透压诱导下产生无性孢子。
[0004] 然而，目前关于冠突散囊菌的研究仍有待深入。
【发明内容】
[0005] 本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的 在于提出一种冠突散囊菌菌粉及其制备方法和应用。
[0006] 在本发明的一个方面，本发明提出了一种制备冠突散囊菌菌粉的方法。根据本发 明的实施例，该方法包括：冠突散囊菌的培养；冠突散囊菌液体培养基的制备；以及冠突散 囊菌菌粉的制备。发明人发现，利用该方法能够有效地制备冠突散囊菌菌粉。
[0007] 根据本发明的实施例，所述冠突散囊菌的培养包括以下步骤：将茯砖茶块上的黄 色闭囊壳并接种于察氏培养基上，于28°C培养72h，以便获得经过培养的黄色闭囊壳；将所 述经过培养的黄色闭囊壳平板划线分离2~3次，以便获得初步纯化的菌落；将所述初步纯 化的菌落置于无菌水中，振摇制成均匀的孢子悬液，并进行10倍递增稀释，制成1〇_ 3~1〇_5 稀释度的孢子悬液；将经过稀释的孢子悬液在空白查氏培养基上进行平板涂布，然后置于 28°C下培养，以便获得纯培养菌落。由此，获得的纯培养菌落基本无其他杂菌生长。
[0008] 根据本发明的实施例，所述冠突散囊菌液体培养基的制备包括以下步骤：将所 述纯培养菌落制备成KT1~1〇_3稀释度的孢子悬液，并将孢子浓度调整至I. 5XIO6~ 2. 0XIO6个/ml;将经过孢子浓度调整的孢子悬液接种于液体CZG培养基中，于28°C，150r/ min条件下培养96h，以便获得冠突散囊菌孢子悬液。
[0009] 根据本发明的实施例，所述冠突散囊菌菌粉的制备包括以下步骤：将所述孢子悬 液进行离心处理，以便获得菌泥；向所述菌泥中加入冻干保护剂，进行冻干处理，以便获得 冠突散囊菌菌粉。其中，冻干保护剂的成分和冻干条件不受特别限制，本领域技术人员可以 根据具体情况灵活选择。根据本发明的一个实施例，冻干保护剂由如下质量百分比浓度的 物质组成：谷氨酸钠I.O~3. 0%、乳糖2. 3~3. 5%、海藻糖4~5%、脱脂乳20~24%，其 余为水；冻干条件为将乳化后的菌悬液预冻1~2小时、冷凝温度-80~-40°C、真空度1~ 10Pa、冻干时间24~32小时。由此，能够有效制备冠突散囊菌菌粉。
[0010] 在本发明的另一个方面，本发明提出了一种冠突散囊菌菌粉。根据本发明的实施 例，所述冠突散囊菌菌粉是通过前面所述的方法制备获得的。发明人惊奇地发现，对动物提 供本发明的冠突散囊菌菌粉，能够有效增强其免疫力，预防或治疗糖尿病、高血脂或肿瘤等 疾病。
[0011] 在本发明的再一个方面，本发明提出了前面所述的冠突散囊菌菌粉在制备药物、 食品或饲料中的用途。根据本发明的实施例，所述药物、食品或饲料用于增强免疫力，预防 或治疗糖尿病、高血脂或肿瘤等疾病。
[0012] 需要说明的是，在本文中所使用的术语"动物"所指的动物种类不受特别限制。根 据本发明的实施例，该动物可以为任何生命体，优选哺乳动物，更优选大鼠、小鼠、人，最优 选人。在本文中所使用的表达方式"预防或治疗"主要是指预防或辅助治疗糖尿病、高血脂 或肿瘤等疾病。
[0013] 根据本发明的又一方面，本发明还提供了一种药物。根据本发明的实施例，该药物 包含：冠突散囊菌菌粉；以及药学上可接受的赋形剂。发明人惊奇地发现，本发明的药物能 够有效用于增强免疫力，预防或治疗糖尿病、高血脂或肿瘤等疾病。
[0014] 根据本发明的实施例，赋形剂的种类不受特别限制，只要能够使药物形成容易进 行给药的剂型即可。根据本发明的一些具体示例，所述赋形剂为选自粘合剂、填料、涂膜聚 合物、增塑剂、助流剂、崩解剂和润滑剂的至少一种。
[0015] 根据本发明的实施例，本发明的药物的剂型不受特别限制，只要能够便于进行给 药即可。根据本发明的一些具体示例，所述药物呈选自胶囊剂、丸剂、片剂、颗粒剂、口服液 体、内服膏剂、气雾剂以及喷雾剂的至少一种的形式。根据本发明的一些优选实施例，所述 药物呈胶囊剂的形式。由此，易于进行给药。
[0016] 根据本发明的实施例，本发明的药物的给药剂量不受特别限制，实际应用中，可以 根据给药对象的健康状况灵活选择。根据本发明的一些实施例，所述药物的给药剂量为不 低于4XIO4CFU冠突散囊菌Akg?d)。由此，被给药动物免疫力增强，血糖、血脂以及药物 抑瘤率明显降低，。
[0017] 根据本发明的实施例，所述药物能够发挥增强免疫力、降血糖、降血脂、抗肿瘤等 功效。因而，根据本发明的另一些实施例，所述药物用于增强免疫力，预防或治疗糖尿病、高 血脂或肿瘤。
[0018] 在本发明的再一方面，本发明还提供了一种食品。根据本发明的实施例，该食品包 含：冠突散囊菌菌粉；以及食品学上可接受的添加剂。根据本发明的实施例，本发明的食品 能够有效用于增强免疫力，预防或治疗糖尿病、高血脂或肿瘤。
[0019] 需要说明的是，在本文中所使用的术语"食品"应作广义理解，其可以是任何可被 食用的形式，即除了常规的食品形式外，本发明的食品还可以为保健品、饮品等。在本文中 所使用的术语"给药"应作广义理解，除了常规的药物给药外，针对食品或饲料时可以理解 为对动物进行饲喂或提供该食品。
[0020] 在本发明的又一方面，本发明还提供了一种饲料。根据本发明的实施例，所述饲料 包含冠突散囊菌菌粉。由此,对动物提供本发明的饲料,能够有效增强其免疫力，降低其血 糖、血脂以及药物抑瘤率。
[0021] 此外，根据本发明的实施例，包含冠突散囊菌菌粉的本发明的药物、食品或饲料， 增强动物免疫力的作用优于单一成分的黄芪、低聚果糖、壳寡糖或酵母葡聚糖的作用效果。
[0022] 还需要说明的是，本发明的冠突散囊菌菌粉及其制备方法和用途，正是本发明的 发明人经过艰苦的创造性劳动和大量的实验工作才意外发现的。
[0023] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【具体实施方式】
[0024] 下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发 明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的 文献所描述的技术或条件(例如参考J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指 南》，第三版，科学出版社）或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者， 均为可以通过市购获得的常规产品，例如可以采购自Illumina公司。
[0025] 实施例1 :冠突散囊菌菌粉的制备
[0026] 冠突散囊菌的培养：
[0027] 用无菌接种针挑取茯砖茶块上的黄色闭囊壳并接种于察氏培养基上，于30°C进行 培养。待培养72h时，挑取少量黄色闭囊壳作平板划线分离，经2~3次平板划线后该菌已 得到初步纯化。待初步纯化的菌落生长处于旺盛期时，用接种环刮取黄色闭囊壳放入盛有 IOml无菌水的无菌小瓶内，振摇20min，制成均匀的孢子悬液并进行10倍递增稀释，制成 KT3~KT5稀释度的孢子悬液。
[0028] 用无菌吸管分别吸取0.Iml各稀释度的孢子悬液在空白查氏培养基上进行平板 涂布，然后置于30°C下培养。选取仅长有1~2个单菌落的平板，该平板上的单菌落就是该 菌的纯培养，观察其菌落特征，并结合显微镜检测个体形态特征。
[0029] 察氏培养基：硝酸钠2g/L，磷酸氢二钾lg/L，氯化钾0? 5g/L，硫酸镁0? 5g/L，硫酸 铁 0? 01g/L，蔗糖 30g/L，琼脂 15 ~20g/L。
[0030] 冠突散囊菌液体培养基的制备：
[0031] 将纯培养菌落制备成KT1~KT3稀释度的孢子悬液，然后对孢子悬液进行血球计 数板计数，将孢子浓度调整至I. 5XIO6~2. 0XIO6个/ml。用移液器吸取Iml孢子悬液接 种于已经制备好的装有99ml液体CZG培养基的250ml三角瓶中，置于30°C，150r/min进行 培养96h，将菌液上样于血球计数板在光学显微镜下进行孢子计数。
[0032] CZG培养基：蔗糖40g/L，磷酸氢二钾lg/L，硝酸氨3g/L，氯化钠50g/L，硫酸镁 0? 5g/L，琼脂 15 ~20g/L。
[0033] 冠突散囊菌菌粉的制备：
[0034] 将上述获得的菌液加入离心管，5