LT、大肠 杆菌ST和绿脓杆菌（铜绿假单胞菌，Pseudomonasaeruginosa)外毒素A。还可以使用细 菌外膜蛋白如外膜复合体C(OMPC)、孔蛋白、转铁结合蛋白、肺炎球菌溶血素、肺炎球菌表面 蛋白A(PspA)、肺炎球菌粘附蛋白（PsaA)、组A或组B链球菌的C5a肽酶或流感嗜血杆菌 (Haemophilusinfluenzae)蛋白D。也可以将其它蛋白如卵清蛋白、钥孔血蓝蛋白（keyhole limpethemocyanin，KLH)、牛血清白蛋白（BSA)或纯化的结核菌素的蛋白衍生物（PPD)用 作载体蛋白。可以将白喉毒素变体如CRM173、CRM228、和0^45用作载体蛋白。
[0023] 为了制备用于与载体蛋白反应的多糖，化学活化纯化的多糖。一旦活化，将每种荚 膜多糖单独结合至载体蛋白，以形成糖结合物（glycoconjugate)。在一个实施方式中，将 每种荚膜多糖结合至相同的载体蛋白。通过常规的方法（例如，美国专利号4, 673, 574和 4, 902, 506)实现多糖的化学活化和随后结合至载体蛋白。通过氧化剂如高碘酸盐（包括高 碘酸钠、高碘酸钾、高碘酸钙或高碘酸）将多糖中的羟基基团氧化为醛基团。化学活化导致 相邻的羟基基团的不规则氧化降解。通过还原氨化实现结合。例如，使活化的荚膜多糖和 载体蛋白与还原剂如氰基硼氢化钠反应。通过添加强氧化剂可以除去未反应的醛基团。
[0024] 在将荚膜多糖结合至载体蛋白之后，通过多种技术纯化多糖-蛋白质结合物（富 集多糖-蛋白质结合物的量）。这些技术包括浓缩/渗滤（透析，dialfiltration)、柱色 谱法和深层过滤。混合纯化的多糖-蛋白质结合物以配制本发明的可被用作疫苗的免疫原 性组合物。可以使用本领域公认的方法实现本发明的免疫原性组合物的配制。例如，可以 配制15种不同的肺炎球菌结合物与生理用载体来制备组合物。这种载体的实例包括但不 限于水、缓冲盐水、多元醇（例如，丙三醇、丙二醇、液态聚乙二醇）和葡萄糖溶液。
[0025] 在一个实施方式中，本发明的免疫原性组合物可以包含一种或多种佐剂。本文所 定义的"佐剂"是用于增强本发明的免疫原性组合物的免疫原性的物质。因此，通常给出佐 剂以加强免疫应答，并且佐剂是本技术领域熟知的。增强组合物的有效性的合适佐剂包括 但不限于：
[0026] (1)错盐（错基盐（alum))，如氣氧化错、憐酸错、硫酸错等；
[0027] (2)水包油乳液制剂（具有或不具有其他特定的免疫刺激剂如胞壁酰肽（以下定 义）或细菌细胞壁组分，如例如，（a)MF59 (W0 90/14837)，包含5%角鲨烯、0.5%吐温80和 0. 5%斯盘85 (可选地包含不同量的MTP-PE(见下文），尽管不是所需的），使用微流化器如 型号IlOY微流化器（Microfluidics，Newton，MA)配制成亚微米颗粒；（b)SAF，包含10% 角鲨烯、0. 4%吐温80、5%普朗尼克（pluronic)嵌段的聚合物L121和thr-MDP(见下文）， 被微流化成亚微米乳剂或者被涡旋生成大颗粒尺寸的乳剂；和（c)Ribi?佐剂体系（RAS) (Corixa，Hamilton，MT)，包含2%角鲨烯、0. 2%吐温80和来自由以下组成的组中的一种 或多种细菌细胞壁组分：美国专利号4, 912, 094中描述的3-0-脱酰化的单磷酰脂A(MPLtm) (Corixa)、海藻糖二霉菌酸酯（TDM)、和细胞壁骨架（CWS)，优选MPL+CWS(Detox?);
[0028] (3)皂苷佐齐IJ、如QuilA或STMUL0N?QS-21 (Antigenics，Framingham，MA)(美国 专利号5, 057, 540)或由其生成的颗粒如ISCOM(免疫刺激复合物）；
[0029] (4)细菌脂多糖，合成的脂A类似物如氨基烷基葡糖胺磷酸酯化合物（AGP)、或其 衍生物或类似物，其可以从Corixa得到，并且在美国专利号6, 113, 918中描述；一种这种 AGP是2- [ (R) -3-十四酰氧基十四酰基氨基]乙基2-脱氧-4-0-磷酰基-3-0- [ (R) -3-十四 酰氧基十四酰基]-2-[(R)_3-十四酰氧基十四酰基氨基]-b-D-吡喃葡萄糖苷，其也称作 529 (以前称作RC529)，其被配制为水性形式或稳定的乳剂，
[0030] (5)合成的多核苷酸，如包含CpG基序的寡核苷酸（美国专利号6, 207, 646);
[0031] (6)细胞因子，如白介素（例如，IL-1、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15、 IL-18等）、干扰素（例如，Y干扰素）、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF)、巨噬细 胞集落刺激因子（M-CSF)、肿瘤坏死因子（TNF)、共刺激（协同刺激，costimulatory)分子 B7-1 和B7-2 等；
[0032] (7)细菌ADP-核糖基化毒素的脱毒突变体，如野生型或者突变型的霍乱毒 素（CT)，例如，其中氨基酸位置29的谷氨酸被另一氨基酸，优选组氨酸替换（根据WO 00/18434(也见W002/098368和WO02/098369))，百日咳毒素（PT)、或者大肠杆菌不耐 热毒素（LT)、具体是LT-K63、LT-R72、CT-S109、PT-K9/⑶9(见例如TO93/13302 和WO 92/19265);和
[0033] (8)补体（complement)成分，如补体成分C3d的三聚体。
[0034] 胞壁酰肽包括但不限于N-乙酰基-胞壁酰基-L-苏氨酰-D-异谷氨酰胺 (thr-MDP)、N-乙酰基-去甲胞壁酰基-L-丙氨酸-2- (1' -2'二棕榈酰基-sn-甘油基-3-羟 基磷酰基氧基）-乙胺（MTP-PE)等。
[0035] 在一个具体的实施方式中，将铝盐用作佐剂。铝盐佐剂可以是铝盐沉淀疫苗或铝 盐吸附疫苗。铝盐包括但不限于水合氧化铝、三水合氧化铝（ATH)、氢氧化铝、三水合铝、铝 胶、31^6『；1；'〇8、纟11^110]_61、氢氧化错（111)、羟基磷酸错硫酸盐（磷酸错佐剂（纟?纟)）、和无定 形氧化铝。APA是羟基磷酸铝的悬浮液。如果将氯化铝和磷酸钠以1:1的比值混合，则羟 基磷酸铝硫酸盐沉淀。通过使用高剪切混合器和用生理盐水透析，随后灭菌，使沉淀物的大 小为2-8ym。在一个实施方式中，将商业可获得的Al(OH)3 (例如，铝胶或Superfos)用于 吸附蛋白质。每Img氢氧化铝可以吸附50-200g蛋白质，并且该比值依赖于蛋白的等电点 (Pl)和溶剂的pH。相比高pi的蛋白，低pi的蛋白被强烈地吸附。铝盐形成在2至3周内 缓慢释放抗原的抗原储存库（depot)、非特异性活化吞噬细胞、补体和先天免疫机制。
[0036] 本发明提供了用于诱导对肺炎链球菌荚膜多糖结合物的免疫应答的药物组合物 (例如，疫苗制剂），该药物组合物包含免疫学有效量的免疫原性组合物。
[0037] 通过经由全身或粘膜途径给予疫苗，本发明的疫苗制剂可以用于保护或治疗易受 肺炎球菌感染的人体。本文定义的术语"有效剂量"是指将抗体诱导至足以显著降低肺炎 链球菌感染的可能性或其严重性所需的量。这些给予可以包括通过肌内、腹膜内、皮内或皮 下途径注射；或通过粘膜给药至口腔/消化道、呼吸道或泌尿生殖道。在一个实施方式中， 由于可以更有效地防止鼻咽部携带的肺炎球菌，所以将鼻内给药用于治疗肺炎或中耳炎， 从而在早期阶段减弱感染。将每种疫苗剂量中的结合物的量选择为诱导无显著不利影响的 免疫保护性应答的量。这种量可以根据肺炎球菌血清型变化。通常，每个剂量将包含0.1 至100yg多糖，具体地0. 1至10yg，以及更具体地1至5yg。可以通过涉及观察受试者 适当的免疫应答的标准研宄确定对于特定疫苗的组分的最佳量。例如，可以通过外推的动 物测试结果确定用于人类受试者接种的量。此外，可以凭经验确定剂量。
[0038] 在本发明的一个具体的实施方式中，疫苗组合物是单独结合至CRM197的血清型1、 3、4、5、6八、68、7?、听、14、18(：、194、19?和23?的肺炎球菌荚膜多糖的无菌液体制剂。将每 0. 5mL剂量配制为包含：除了在4yg的6B，2yg的每种糖；大约34ygCRM197载体蛋白； 0. 125mg元素铝（0. 5mg磷酸铝）佐剂；和作为赋形剂的氯化钠和琥珀酸钠缓冲液。将该液 体填充至无防腐剂的单剂量注射器中。震荡之后，该疫苗是即可用于肌内给药的均匀、白色 悬浮液。
[0039] 在进一步的实施方式中，可以以单次注射给予本发明的组合物。例如，可以以适当 的时间间隔如1、2、3、4、5或6个月间隔或它们的组合给予2、3、4或更多次本发明的疫苗 组合物。免疫时间表可以遵循对于Prevnar疫苗指定的时间表。例如，婴儿和幼儿由包含 在Prevnar疫苗中的血清型抵抗由肺炎链球菌引起的侵袭性疾病的常规时间是在2、4、6和 12-15个月的年龄。因此，在该方面，给予4次该组合物，即在2、4、6和12-15个月的年龄。
[0040] 本发明的组合物还可以包含来自肺炎链球菌的一种或多种蛋白质。适用于包含的 肺炎链球菌蛋白质的实例包括国际专利申请W002/083855中识别的那些，以及国际专利申 请TO02/053761中描述的那些。
[0041] 可以通过本领域技术人员已知的一种或多种给药途径将本发明的组合物给予至 受试者，如肠胃外、透皮、或经粘膜、鼻内、肌内、腹膜内、皮内、静脉内或皮