一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤活性成分物质的提取纯化方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及植物有效成分提取纯化工艺，尤其涉及一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤 活性成分物质的提取纯化方法，属于植物加工提取领域。
【背景技术】
[0002] 亚麻籽（Linum ustitatissimum L)又称胡麻，属亚麻科、亚麻属，是世界十大油料 作物之一，主要出于加拿大、阿根廷、印度、美国、中国等国家。亚麻籽中主要含有脂肪、蛋 白、糖类等功能性成分，更为重要的是亚麻籽富含α -亚麻酸含量的亚麻籽油，亚麻籽油是 目前η-3脂肪酸含量最高的已知植物油脂之一。近年来研宄发现，亚麻籽油具有预防高脂 血症、动脉粥样硬化、降低血压、增强胰岛素降低血糖的作用。
[0003] 癌症是威胁人类健康的一大凶手，是仅次于心脑血管疾病的第二大致死性疾病 (如果将心血管疾病和脑血管疾病分开统计，癌症则位于第一位），严重地威胁人类健康和 生命。现在临床上应用的抗癌药物虽然种类不少，但价格昂贵，毒副作用严重，且尚没有治 疗某些癌症的特效药。植物在漫长的进化过程中合成了许许多多结构各异的次生代谢产 物，这些次生代谢产物不仅具有不同的生物活性，还常常被发现有新的作用机制，从植物在 内的自然界中寻找发现高效低毒的抗癌活性成分或先导化合物一直是国内外药物学家十 分关注的课题和研宄的热点。
[0004] 目前，专利号CN101945888A公开了一种从油回收疏水性肽的方法，采用从植物材 料中提取油类物质，并将提取的油分离成非极性和极性馏分，从不同馏分中分离回收疏水 性肽类物质。该方法在实施过程中大量采用了多种有机溶剂如烃、酮、酯、醚、芳香物质等， 这些有机溶剂的使用，造成了产品中溶剂残留，通过此方法得到的成分无法应用于国内日 常的保健食品中，且实验过程条件要求比较苛刻，对工作人员身体造成了一定的伤害，该方 法的工艺比较繁琐，未来实现大规模生产的可能性较低。
【发明内容】
[0005] 本发明针对上述现有技术存在的不足，提供一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤活性成 分物质的提取纯化方法。
[0006] 本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种从亚麻籽油中获得抗肿瘤活性成 分物质的提取纯化方法，包括以下步骤：
[0007] (1)萃取：将乙醇溶液与亚麻籽油置于混合仪中混合，调节pH，搅拌，静置待分层 界面形成后，旋转浓缩，形成浸膏；
[0008] (2)亚临界水提取：将步骤（1)的浸膏放置于提取罐中，加入亚临界水，将得到的 提取液旋转浓缩，真空冷冻干燥得到粗提物；
[0009] (3)高速逆流色谱纯化：称取步骤（2)得到的粗提物，利用高速逆流色谱纯化溶剂 系统，将正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水加入分液漏斗中，震荡使溶液充分混合，放置lh，分相 平衡后分出上相和下相；以溶剂系统的下相为固定相，上相为流动相，调整转速，泵入流动 相，减压回收试剂，得到纯化提取物。
[0010] 在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。
[0011] 进一步，步骤（1)中所述的乙醇溶液和亚麻籽油的体积比为（1~5) :1，所述乙醇 溶液的体积浓度为90~100 %。
[0012] 进一步，步骤（1)中调节pH为4. 5~6,搅拌0· 5~lh。
[0013] 进一步，步骤（2)中所述浸膏和亚临界水的重量比为1: (10~50)
[0014] 进一步，步骤（2)中所述冷冻温度为-20~-40°C。
[0015] 进一步，步骤（2)中所述的旋转浓缩是指在52~68°C条件下旋出提取液3/5~ 4/5的液体。
[0016] 进一步，步骤（2)中所述的提取罐中提取温度为50~120°C，提取压力为3~ 5MPa，提取时间为10~40min，加压1~3次。
[0017] 进一步，步骤（3)中所述正己烷、乙酸乙酯、甲醇和水的体积比为（1~3) : (2~ 4) : (3 ~5) : (1 ~3) 〇
[0018] 进一步，步骤⑶中所述的转速为600~800rpm，泵入流动相的流速为2~4ml/ min〇
[0019] 本发明的有益效果是：本发明采用乙醇溶液萃取和超高压偶联亚临界水提取技术 获得可用于保健食品行业的亚麻籽油粗提物，并通过高速逆流色谱技术对粗提物纯化。在 提取纯化过程中，采用了可用于食品生产的溶剂，符合国家相关的法规规定，避免大量的有 机溶剂使用造成的残留风险。将上述方法得到的粗提物和纯化物通过质谱进行物质方面的 鉴定，确定该提取物含有文献中提到的环肽类成分，且含量较高。将粗提物和纯化物通过肿 瘤细胞增殖实验验证，均具有抑制肿瘤细胞生长的细胞学功效，可用于辅助抑制肿瘤保健 食品方面的应用。
【附图说明】
[0020] 图1为本发明实施例1制得特征物质的质谱图；
[0021] 图2为本发明实施例1制得特征物质的总离子色谱图。
【具体实施方式】
[0022] 以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并 非用于限定本发明的范围。
[0023] 实施例1
[0024] 将1000 ml亚麻籽油注入混合搅拌容器中，并按照1:1比例加入90% (v/v)乙醇 溶液，调节PH值至4. 5,搅拌时间0. 5h，静置，待分层界面形成后，分离醇相液体，旋转浓缩 成浸膏；将所得浸膏放置于亚临界提取罐中，注入亚临界水，浸提比例为1:20,提取温度为 50°C，提取压力为3MPa，提取时间为lOmin，加压1次，得到提取液旋转浓缩，真空冷冻-20°C 干燥得到富含环肽类成分的粗提物15g ;称取粗提物200mg，高速逆流色谱溶剂系统是正己 烷一乙酸乙酯一甲醇一水为溶剂系统，溶剂比例为1:3:3:1，上相为流动相，下相为固定相， 调整转速600rpm，以3. Oml/min流速泵入流动相纯化粗提物，通过高校液相色谱法，得到环 肽类成分二次富集物约62mg。
[0025] 将得到的环肽二次富集物进行UPLC-MS分析，如图1、图2所示。
[0026] 质谱技术是一种鉴定技术，它