芬戈莫德在治疗根尖周炎中的用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于根尖周炎的防治技术领域，具体涉及芬戈莫德（Fingolimod)在治疗 根尖周炎中的用途。
【背景技术】
[0002] 根尖周炎为口腔的常见病、多发病，通常由龋病或牙髓病发展而来，病理特征主要 表现为根尖周牙槽骨的破坏与吸收。根尖周炎通常被认为是根管内微生物混合感染的结 果，因此其主要的临床治疗手段为通过根管治疗以去除感染物质。但对以往X线片的调查 表明，根管治疗后的患牙中有25%仍存在根尖周骨破坏；通过CT检测发现约63%的患牙尽 管经过完善的根管治疗，其根尖周骨缺损仍无法痊愈，最后可能需要采取根尖切除或将患 牙拔除。近来研宄表明，感染并非为根尖周炎骨破坏的唯一原因，根尖周炎的病理过程事实 上是机体对根管系统内抗原物质免疫反应。因此，寻找潜在免疫调节药物以治疗根尖周炎 已成为根管治疗的重要辅助策略。
[0003]鞘氨醇-1-磷酸I型受体（Sphingosine-1-phosphatereceptor 1，SlPl)广泛表达于绝大多数免疫细胞的表面，通过与其配体鞘氨醇-1-磷酸 (Sphingosine-l-phosphate,S1P)相结合，影响免疫反应的程度和发展，包括趋化炎性细胞 的浸润、影响淋巴细胞的增殖及炎性因子的释放、调控T细胞的分化方向等。由于SlPl在 多种疾病的发生发展中起着重要作用，SlPl的调节成为相关疾病的治疗靶点。新型免疫调 节剂芬戈莫德（Fingolimod)为SlP受体调节剂，是子囊菌冬虫夏草提取物的衍生物，化学 结构为2-氨基-2-[2 (4-辛基苯基）乙基]-1，3-丙二醇盐酸盐，相对分子质量为343. 94。 其药理学研宄发现，Fingolimod在体内经磷酸化后能竞争性结合SlP的受体，并能促进细 胞膜上SlPl由胞外转移至胞内，从而下调S1P/S1P1信号轴。
[0004] Fingolimod以其突出的优点越来越受到人们的关注。目前，涉及到Fingolimod 的报道有治疗多发性硬化、炎症性结肠炎、自身免疫性葡萄膜炎、骨质疏松等。但是，迄今为 止，Fingolimod在治疗根尖周炎中的应用没有被公开或使用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供Fingolimod在治疗根尖周炎中的应用。
[0006] 为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：
[0007] Fingolimod可通过改善根尖周炎病损区骨质破坏，达到治疗根尖周炎的作用。
[0008]Fingolimod可通过减缓根尖周炎病损区炎症细胞浸润，达到治疗根尖周炎的作 用。
[0009] Fingolimod可通过降低根尖周炎病损区SlPl表达水平，达到治疗根尖周炎的作 用。
[0010] Fingolimod可通过降低根尖周炎病损区核因子kappaB受体激活剂配体 (ReceptoractivatorofnuclearfactorkappaBligand,RANKL)表达水平，达到治疗根 尖周炎的作用。
[0011] Fingolimod的上述作用表明其可用于制备治疗根尖周炎的药物，具体为 Fingolimod可用于制备改善根尖周炎病损区骨质破坏、减缓根尖周炎病损区炎症细胞浸 润、降低根尖周炎病损区SlPl表达水平或降低根尖周炎病损区RANKL表达水平的药物。
[0012] 本发明的有益效果主要体现在：提供了Fingolimod用于治疗根尖周炎中的新用 途。该用途表明Fingolimod可用于制备治疗根尖周炎的药物。
【附图说明】
[0013] 图1是HE染色观察Fingolimod(3mg/kg)对开髓7天、21天和35天导致大鼠下颁 第一磨牙远中根根尖区骨破坏的干预效果图。
[0014] 图2是TRAP染色观察Fingolimod(3mg/kg)对开髓7天、21天和35天导致大鼠下 颁第一磨牙远中根根尖区破骨细胞的影响图。
[0015] 图3是免疫组织化学染色观察Fingolimod(3mg/kg)对开髓导致大鼠下颁第一磨 牙远中根根尖区SlPl表达的影响图。
[0016] 图4是免疫组织化学染色观察Fingolimod(3mg/kg)对开髓导致大鼠下颁第一磨 牙远中根根尖区RANKL表达的影响图。
[0017] 图5是免疫组织化学染色观察Fingolimod(3mg/kg)对开髓导致大鼠下颁第一磨 牙远中根根尖区骨保护素（〇steoprotegrin，OPG)表达的影响图。
【具体实施方式】
[0018] 下面结合实施例，对本发明作进一步详细的说明。以下实施例用于进一步说明本 发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发 明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
[0019] 实施例1
[0020] 1 ?实验动物和材料：
[0021] 1.1实验动物
[0022] 所有的实验程序符合武汉大学口腔医学院伦理委员会的指导原则。SPF级雌性 Wistar大鼠48只，体重200~220克，购于湖北省实验动物中心，分笼饲养。
[0023] 1. 2实验材料
[0024] Fingolimod购置于美国LClaboratories公司，参考药物说明书，用生理盐水制 备成药物工作浓度0. 4mg/mL。
[0025] 2.动物分组及大鼠根尖周炎动物模型的建立：
[0026] 2. 1动物分组
[0027] 随机分成7天模型对照组、7天Fingolimod给药组、21天模型对照组、21天 Fingolimod给药组、35天模型对照组、35天Fingolimod给药组，每组8只。常规饲养、称体 重并做标记。
[0028] 2. 1大鼠根尖周炎动物模型的建立
[0029] 腹腔注射16. 7%的乌拉坦溶液（0. 8mg/g)使大鼠麻醉后，用1/4号球钻（瑞士登 士柏公司）在大鼠双侧下颁第一磨牙的远中窝处开髓，开髓深度约为球钻直径，注意避免 穿通髓室底，以能用K挫探穿髓点为开髓成功的标准；将髓腔直接暴露于口腔环境中，常规 饲养7天、21天或35天。
[0030] 3?实验方法：
[0031] 3.1给药方案
[0032]Fingolimod给药组于模型建立后第 1、2、5、8、11、13、15、16、19、22、23、25、28、31、 33天分别用灌胃方式给药（3mg/kg);模型对照组进行生理盐水灌胃处理。所有大鼠预定时 间颈椎脱白处死并分离下颁骨组织。
[0033] 3. 2标本的采集和切片制备
[0034] 分离的下颁骨用4%多聚甲醛4°C固定24h，所有标本流水冲洗24h后转入10%的 乙二胺四乙酸（EDTA)中，隔天换液，室温脱钙1个半月，以ImL注射器无阻力通过第三磨牙 牙冠为标准，终止脱钙。修整标本，保留下颁第一磨牙周围l_2mm组织。标本流水冲洗24h， 50%、60%、70% (可过夜）、80%、90%、95%1(可过夜）、95%11上行梯度酒精脱水，每个 梯度2h，正丁醇继续脱水透明3d。随后置入含正丁醇：石蜡（比例为1:1，v/v)的蜡缸中 浸蜡3h，再置入含纯低熔点石蜡的蜡缸中浸蜡3h，再用高熔点石蜡进行包埋，使下颁骨颊 面朝下。行4ym近远中向连续切片，展片后用表面黏附有多聚赖氨酸的载玻片捞片，倾斜 控水后，将切片编号装入烤片架，60°C烤箱烤片2-3h后取出常温保存。
[0035] 3. 3HE染色
[0036] 选取标本中部可明显显示下颁第一磨牙远中根根管、根尖孔的切片，放入染缸中。 将染缸放入60°C烤箱中烤片lh。在通风橱中快速将二甲苯I倒入染缸脱蜡20min，换二甲 苯II脱蜡 15min。标本 100%I、100%II、95%I、95%11、90%、80%、70%下行梯度酒精入 水，每个梯度2-3min，细水流自来水冲洗5min。苏木素染液染色l-2min，流水冲洗3min， PBS溶液浸泡IOmin返蓝；伊红染液染色l-2min，流水冲洗3min。70%、80%、90%、95%I、 95%II、100%I、100%II上行梯度酒精脱水，每个梯度倒进倒出，放入通风橱中干燥。玻片 放入二甲苯中透明约15s后取出，滴加液态中性树胶，用合适长度的盖玻片封片，在通风橱 的摊片板上，待中性树胶凝固后即可镜下观察拍照。
[0037] 3. 4 抗酒石酸酸性磷酸酶（Tartrate-resistant