密花石斛芴三酚在制备抗肿瘤药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于化工领域及医药领域，涉及密花石斛芴三酚在制备抗肿瘤药物中的应 用。
【背景技术】
[0002] 肿瘤是机体在各种致癌因素作用下，局部组织的某一个细胞在基因水平上失去对 其生长的正常调控，导致其克隆性异常增生而形成的异常病变。我国的肿瘤病例数相当庞 大，有资料显示占全世界病例数的55%。
[0003] 良性肿瘤对机体的影响较小，主要表现为局部压迫和阻塞症状。恶性肿瘤由于分 化不成熟、生长较快，浸润破坏器官的结构和功能，并可发生转移，因而对机体影响严重。恶 性肿瘤除可引起与上述良性肿瘤相似的局部压迫和阻塞症状外，还可有发热、顽固性疼痛， 晚期可出现严重消瘦、乏力、贫血和全身衰竭的状态。
[0004] 中医认为，癌症的起因首先是人体内阴阳平衡，组织细胞在不同的致癌因素长期 作用下，细胞突变而引起的。其实癌组织也是人体的一部分，只有在人本阴阳平衡失调，五 行生克乘侮发生变化的前提下，人体的免疫监控系统才会对其失去监控，任其发展。中草药 能够以调理气血、调整阴阳平衡、维持正常生命体征而保命；以培补正气、产生抗体，清理〃 毒源〃而治本。因而，中草药提取物成为治疗肿瘤一个重要方向。
[0005] 密花石斛芴三酚是中草药密花石斛的提取物。密花石斛（Dendrobium densiflorumISndl.)为兰科石斛属植物，在我国主要分布在广东、海南、广西和西藏东南 部。
[0006] 石斛又名石斛兰，属名Dendrobium。石斛兰属是兰科植物中最大的一个属，原产地 主要分布于亚洲热带和亚热带，澳大利亚和太平洋岛屿，全世界约有1000多种。中国约有 76种其中大部分分布于西南、华南、台湾等地。中药石斛味甘，性微寒，具有滋阴清热、益胃 生津之功效，用于治疗热病津伤、口干烦渴、胃阴不足、食少干呕、病后虚热不退，阴虚火旺、 骨蒸劳热、目暗不明、筋骨痿软等。
[0007] 密花石斛别名黄草石斛、黄草，花朵密集，花色娇艳美丽，观赏价值很高，适宜分栽 或作吊挂植物，供室内装饰。现代研究表明，其酸性多糖具有一定的免疫促进和抗肿瘤作 用，已成为石斛的主要代用品之一，被《贵州省中药材标准》（1988版）和《江苏省中药材标 准》（1998版）收载。
[0008] 密花石斛芴三酚是天然产物，生物利用度高、性质比较稳定，具有临床使用价值。 随着人们对其的化学和生物学研究的深入，其分子作用机制将逐步明确，这将进一步推动 此类化合物的化学结构修饰和构效关系研究，并有助于提高石斛的药用价值。
【发明内容】
[0009] 本发明的目的是提供密花石斛芴三酚的新的药物用途。
[0010] 一方面，本发明提供了密花石斛芴三酚在制备抗肿瘤药物中的应用。其中，密花石 斛莉三酚的英文全称为dendroflorin，其结构如式I所示。
[0011]
[0012] 所述的抗肿瘤药物可以是抗肝癌药物，抗前列腺癌药物、抗胃癌药物，也可以是抗 血癌药物。
[0013] 实验结果表明，密花石斛芴三酚能够抑制多种癌细胞生长。其中部分的IC5tl达到 了微摩（Umol/L或者iiM)级。
[0014] 该抗肿瘤药物可以为针剂或者片剂。
[0015] 另一方面，本发明提供了一种抑制体外肿瘤细胞增殖的方法，即将密花石斛芴三 酚加入肿瘤细胞的培养液中。
[0016] 所述的肿瘤细胞可以是肝癌细胞、血癌细胞、宫颈癌细胞、乳腺癌细胞或者胰腺癌 细胞。在本发明的优选例中，上述方法中，所述的肿瘤细胞可以是肝癌细胞、胃癌细胞、宫颈 癌细胞或者血癌细胞。
[0017] 更好的，所述的肿瘤细胞是5丽07721、1(562、邪(：或者]\0 7-7。
[0018] 加入密花石斛芴三酚的终浓度为I-IOOiiM。例如，l-5iiM，I-IOiiM，2-12iiM， 2-20iiM，2-30iiM，2-60iiM，14-28iiM，15-30iiM，10-50iiM，5-60iiM，等等。
[0019] 另一方面，本发明提供了一种抗肿瘤药物，所述的抗肿瘤药物的活性成分是密花 石斛芴三酚。
[0020] 在本发明的优选例中，上述抗肿瘤药针对的肿瘤是肝癌细胞、胃癌细胞、或者白血 病细胞。
[0021] 本发明提供了密花石斛芴三酚在制备抗肿瘤药物中的应用。密花石斛芴三酚是天 然产物，能够明显抑制肿瘤细胞的增殖。本发明的小分子化合物作为新的抗肿瘤药物或者 其辅助成分进行开发，抑瘤效果明显，绿色环保，将为治疗和治愈肿瘤提供了一种新的途径 和手段。
【附图说明】 图1:密花石斛芴三酚的结构。
【具体实施方式】
[0022] 实验方法：
[0023] 1?细胞复苏
[0024] 1)从液氮罐中取出冻存管，直接投入37°C温水中，并不时摇动令其尽快融化。
[0025] 2)从37°C水浴中取出冻存管，用吸管吸出细胞悬液，注入离心管并加入10倍以上 培养液，混合后低速离心，弃上清，再重复用培养液洗一次。
[0026] 3)用培养液适当稀释后，接种培养瓶，放在37°C培养箱静置培养，次日更换培养 液，继续培养。培养至一定浓度时进行传代。PANC-I细胞培养在含10%Gibico胎牛血清的DMEM高糖培养基中；K562、HGC、QGY、MCF-7、PC-3等细胞培养在含10%胎牛血清的1640培 养基中，SK-hepl、HeLa、H印G2、等细胞培养在含10%胎牛血清的DMEM高糖培养基中，培养 基中含100U/ml青霉素和100iig/ml链霉素。
[0027] 2.细胞传代培养
[0028] 每天观察细胞生长的情况，当细胞在培养瓶中长至约90%汇合时传代，约每隔2-4 天传代一次。一瓶传代成三瓶，或一个25cm2传代于一个75cm2的培养瓶中。方法：
[0029] 1)用IX磷酸缓冲液洗涤细胞一次。
[0030]2)加入2-3ml胰酶消化液消化，置于37°C培养箱中数分钟。用手拍打细胞培养瓶， 使细胞分离。
[0031] 3)用含10-15%的Gibico胎牛血清的合适培养基终止胰酶消化。将细胞分装于新 的培养瓶中，继续培养。
[0032] 悬浮细胞传代时，直接收集于离心管中离心，弃旧培养基。一般一瓶传代成三瓶的 比例分装于新的培养瓶中，加入新鲜培养基继续培养。
[0033] 3?细胞冻存
[0034] 1)取培养至对数生长期的细胞胰蛋白酶消化，收集于离心管中并计数，离心。
[0035] 2)弃除胰蛋白酶及旧的培养液，加入配置好的冻存培养液（含10%DMS0,40%DMEM 和50%Gibico胎牛血清），冻存液中细胞的最终浓度为0. 5-1X107/ml。用吸管轻轻吹打使 细胞均匀，然后分装入无菌冻存管中，每管加1-1. 5ml。
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