3LX3次）萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁 醇萃取物212g ; (c)正丁醇萃取物用I. 5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂（2kg， 柱体积I. 5L)富集活性成分，先用8 %乙醇冲洗12个柱体积（18L)除去大极性成分，再用 70%乙醇洗脱10个柱体积（15L)，收集70 %洗脱液，减压浓缩，即得竹节参提取物约120g。
[0037] 实施例6 :液相色谱分析
[0038] 供试品溶液配制：取实施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加 30mL 10%乙腈水溶液超声溶解，冷却至室温后，继续加10%乙腈水溶液定容。
[0039] 分析方法：
[0040] 高效液相色谱仪：Agilent 1260,二元栗；
[0041] 色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18 柱（4. 6mmX 250mm，5 μ m);
[0042] 流动相：A为乙腈，B为0· 4%磷酸溶液；
[0043] 梯度洗脱程序：0· 01 ~5min，A 10%- 15% ;5 ~15min，A 15%-48% ;15 ~ 25min，A48% - 78% ;25 ~40min，A 78%- 10% ;
[0044] 流动相流速：1. OmL · min S
[0045] 检测波长：260nm ;柱温：30°C ;进样量：10 μ L。
[0046] 用制备的10批次的竹节参提取物进行分析，进行色谱峰匹配，结果1~11号峰在 10批样品色谱图中均出现，且均与周围色谱峰达到基线分离。因此标定11个峰为共有色谱 峰，据此建立该提取物的HPLC质量控制图谱，结果见图1。
[0047] 实施例7 :提取物药理试验
[0048] 一、实验材料
[0049] 1、受试物：竹节参提取物①~⑤，自制，制备方法见实施例1~5。
[0050] 2、其他试剂及主要仪器：阳性药采用厄贝沙坦（厄贝沙坦片，法国生产，杭州赛诺 菲安万特民生制药有限公司分装。分装批号=1306193,产品批号：1797,生产日期：2013年 2月）。美国Kent公司的无创血压仪（C0DATM2)。
[0051] 3、实验动物：采用自发高血压大鼠（SHR)，购自北京维通实验动物有限公司，合格 证号：SCXK (京）2013-0009。饲养条件：在有空调的动物室饲养，温度20~25°C，相对湿度 40%~60%，每笼5只，定时定量添加饲料，食用大鼠专用饲料，自由饮水，每日更换垫料。
[0052] 二、实验方法
[0053] 1、分组：实验动物按基础血压随机分为6组：模型组、阳性药组（厄贝沙坦， 15. 5mg/kg)，竹节参提取物①-0. 25、0. 5、1. 0、2. Og/kg组，竹节参提取物②-0. 25、0. 5、 I. 0、2. Og/kg组，竹节参提取物③-0. 25、0. 5、1. 0、2. Og/kg组，竹节参提取物④-0. 25、0. 5、 1. 0、2. Og/kg组，竹节参提取物⑤-0. 25、0. 5、I. 0、2. Og/kg组。各组均为SHR大鼠，每组10 只。
[0054] 2、实验方案：动物到达实验室后，预饲养1周，测定基础血压（基础血压需要测定 1~2周，确保动物已经适应仪器，测到的血压为真值）。按照基础血压随机分组。分组后， 次日开始实验，各给药组按10mL/kg灌胃，连续给予4周。期间每周测定血压1次，保证动 物基本在同一个时间测定，避免日间自身血压波动的影响。
[0055] 3、观察指标：动物血压（包括收缩压、舒张压、平均动脉压）、体重、心率。
[0056] 三、实验结果
[0057] 1、竹节参提取物对动物平均动脉压的影响
[0058] 根据实验结果（表1，注：与同时刻的模型组比较:Ρ〈0·05 :Ρ〈0·01 ;*** : Ρ〈0. 001 ;下同），在连续给药的4周内，给药1周后，阳性药组和提取物①~③1.0 g/kg和 2. Og/kg组大鼠的平均动脉压显著降低，较模型组均有显著降低（P〈0. 05)，其降低的显著 性差异持续4周。竹节参提取物①~③0. 25、0. 5g/kg组的检测值和模型组相比，均未见显 著性差异。提取物④~⑤〇. 25、0. 5g/kg、1.0 g/kg和2. Og/kg组的检测值和模型组相比，均 未见显著性差异。
[0059] 表1竹节参提取物给药4周对各组动物平均动脉压的影响（mmHg)
[0062] 2、竹节参提取物对动物收缩压的影响
[0063] 根据实验结果（表2)，在连续灌胃4周内，阳性药组和提取物①~③1. 0、2. Og/kg 组大鼠的收缩压均有降低，且较模型组有显著性差异（P〈〇. 05)，提取物①~③0. 25、0. 5g/ kg组的检测值和模型组相比，均未见显著性差异；提取物④~⑤0. 25、0. 5g/kg、1.0 g/kg和 2. Og/kg组的检测值和模型组相比，均未见显著性差异。
[0064] 表2竹节参提取物给药4周对各组动物收缩压的影响（mmHg)
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[0067] 3、竹节参提取物对动物舒张压的影响
[0068] 根据实验结果（表3)，连续灌胃4周，阳性药组和提取物①~③I. 0、2. Og/kg组 大鼠的舒张压均有降低，和模型组比较均具有显著性差异（P〈〇. 05);提取物①~③0.25、 0. 5g/kg组的检测值和模型组相比，均未见显著性差异；提取物④~⑤0. 25、0. 5g/kg、 1. Og/kg和2. Og/kg组的检测值和模型组相比，均未见显著性差异。
[0069] 表3竹节参提取物给药4周对各组动物舒张压的影响（mmHg)
CN 105125607 A 说明书 8/8 页
[0072] 上述实验结果表明，本发明提供的竹节参提取物能够显著降低小鼠的平均动脉 压、收缩压和舒张压，并且这种作用受大黄含量的影响。
[0073] 实施例8 :片剂的制备
[0074] 按实施例1方法制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:10的比例加入赋形剂，制 粒压片。
[0075] 实施例9 : 口服液的制备
[0076] 按实施例1方法先制得提取物，按常规口服液制法制成口服液。
[0077] 实施例10 :胶囊剂或颗粒剂的制备
[0078] 按实施例1方法先制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:9的比例加入赋形剂，制 成胶囊或颗粒剂。
[0079] 实施例11 :注射液的制备
[0080] 按实施例1方法制得提取物，加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。
[0081] 实施例12 :无菌粉针的制备
[0082] 按实施例1方法先制得提取物，溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗 过滤，再无菌精滤，分装于安瓿，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。
【主权项】
1. 一种竹节参提取物，其特征在于所述提取物由以下方法制备： (a)以重量计，每100份药材包含竹节参80~90份和大黄10~20份，混合粉碎，用 60 %乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；(b)将步骤 (a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压 浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶 解，过滤，用大孔树脂富集活性成分，先用8%乙醇冲洗12个柱体积除去大极性成分，再用 70%乙醇洗脱10个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩即得。2. 根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：步骤（c)中所述大孔树脂为AB-8型大 孔树脂。3. 根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：所述提取物的液相分析方法为： 色谱柱：Agilent Zorbax SB-C18 柱（4.6mmX250mm，5iim); 流动相：A为乙腈，B为0. 4%磷酸溶液； 梯度洗脱程序：〇.〇1 ~5min，A 10%- 15%;5 ~15min，A 15%-48%;15~25min， A 48%- 78% ;25 ~40min，A 78%- 10% ; 流动相流速：1. OmL ? min S 检测波长：260nm ; 柱温：30°C ; 进样量：10yL。4. 药物制剂，其特征在于：含有治疗有效量的权利要求1所述的提取物和药学上可接 受的载体。5. 权利要求1所述的提取物在制备治疗高血压的药物中的应用。6. 权利要求4所述的药物制剂在制备治疗高血压的药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种治疗高血压的竹节参提取物，提取物制备方法包括：(a)以重量计，每100份药材包含竹节参80～90份和大黄10～20份，混合粉碎，用60％乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；(b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用大孔树脂富集活性成分，先用8％乙醇冲洗12个柱体积除去大极性成分，再用70％乙醇洗脱10个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩即得。该提取物能降低自发性高血压大鼠的血压，可以开发成治疗高血压的药物。
【IPC分类】A61K36/258, A61P9/12
【公开号】CN105125607
【申请号】CN201510541379
【发明人】林天样
【申请人】林天样
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年8月28日