一种用以将一群治疗细胞维持在需要接受细胞治疗个体体内的治疗位置的方法
【专利说明】一种用以将一群治疗细胞维持在需要接受细胞治疗个体体 内的治疗位置的方法
[0001] 本申请案主张2013年2月15日申请、案号为61/765, 175的美国临时案优先权， 该案在此一并引用作为参考。
技术领域
[0002] 本揭示内容是关于细胞治疗。更具体来说，本揭示内容是关于利用至少一种透明 质酸化合物来改善细胞治疗的功效。
【背景技术】
[0003] 依据美国食品药物管理局（FoodandDrugAdministration,FDA)的定义，体细胞 治疗（或细胞治疗）是指投予经离体（exvivo)处理或改造的自体（autologous)、同种异 体（allogeneic)或异种（xenogeneic)细胞来预防、治疗、治愈或减缓人类的疾病及损伤。 一般来说，上述处理及改造包含增殖、增生、筛选及/或医药治疗该些细胞。
[0004] 细胞治疗的目的主要是修复、取代或回复受伤的组织或器官。细胞治疗可广泛应 用于现代各式医学治疗中。举例来说，在2011的11月10日，美国食品药物管理局即核准 纽约血液中心的异基因脐带血产品（NewYorkBloodCenter'sallogeneiccord-blood product)HEMAC0RD的上市，该产品是第一个经美国食品药物管理局认证的造血前趋细胞治 疗（hematopoieticprogenitorcelltherapy)。HEMAC0RD可用于个体的造血前趋细胞移 植，其中该个体是罹患遗传、后天或经骨髓摧毁治疗（myeloablativetreatment)等会影响 造血功能的疾病。一旦将造血前趋细胞移植至病患体内后，细胞会转移至骨髓，进而分裂及 成熟。当成熟细胞移动至血液后，即可部分或完全回复血球细胞的数量及功能，例如免疫功 能。
[0005] 目前已知多种因素会影响细胞治疗的疗效，例如细胞的移植前制备、移植疗程及 接受细胞的活体系统。关于最后一个因素，细胞治疗面临到的问题包含无法将细胞维持于 标的位置、无法追踪转植细胞的空间分布及细胞无法于不良环境存活。该些问题往往导致 了功效不佳的细胞治疗。
[0006] 相关领域尝试以生物分解性材料，期望藉由控制细胞于活体内的停留时间来解决 上述的问题。在理想的情况下，生物分解性材料于活体内的作用时间应足以让细胞附着至 周围环境，而不会产生不良反应。一旦知道细胞附着及作用的确切时间点，即可得到较佳的 治疗功效。
[0007] 不幸的是，先前技术多是利用活体外测试来评估生物材料的分解特性，而无法适 当地仿真活体内系统的复杂机制。举例来说，生物分解性材料于活体内完整性及重量的改 变会影响其分解特性，进而影响移植细胞于标的位置的保留特性。因此，无法单以活体外试 验来评估生物分解性材料的细胞传送能力。
[0008] 有鉴于此，相关领域亟需提供一种可用以减少细胞于活体内流失的替代策略，藉 以改善细胞治疗的治疗功效。
【发明内容】
【发明内容】
[0009] 旨在提供本掲示内容的简化摘要，以使阅读者对本掲示内容具备基本的 理解。此并非本掲示内容的完整概述，且其用意并非在指出本发明实施例的重要 /关键组件或界定本发明的范围。
[0010] 在第一方面，本掲示内容是关于一种用以将一群治疗细胞维持在一个体体内的治 疗位置一段时间的方法。在另一方面，本掲示内容是关于一种用以治疗有需要进行细胞治 疗的个体的方法。
[0011] 依据本掲示内容的一种实施方式，该方法包含对该治疗位置投予治疗有效量的治 疗细胞，以及对该治疗位置投予有效量的生物分解性材料，其中该生物分解性材料包含透 明质酸化合物（hyaluronancompound)。该生物分解性材料于活体内的分解特性相似于分 子量为20千道尔顿〇^1〇(1&1如11，1^ &)到2,000千道尔顿的透明质酸于活体内的分解特 性。
[0012] 依据本掲示内容不同的实施方式，该治疗细胞可以是干细胞、诱导多功能细胞 (inducedpluripotentcell)、功能分化细胞（functionallydifferentiatedcell)、重组 细胞（recombinantcell)或其组合。
[0013]范例性的干细胞包含，但不限于，胚胎干细胞（embryonicstemcell)、造血干细 胞（hematopoieticstemcell)、神经干细胞（neuralstemcell)、血管干细胞（vascular stemcell)、间叶干细胞（mesenchymalstemcell)、心脏干细胞（cardiacstemcell)、月旨 肪干细胞（adiposestemcell)、肌肉干细胞（muscularstemcell)、牙齿干细胞（dental stemcell)、骨头干细胞（skeletalstemcells)、软骨干细胞（cartilagestemcell)、 骨膜干细胞（periostealstemcell)、乳腺干细胞（mammarystemcell)、子宫干细胞 (uterusstemcell)、内皮干细胞（endothelialstemcell)、皮肤干细胞（skinstem cell)、胎盘干细胞（placentalstemcell)、脐带血干细胞（umbilicalcordbloodstem cell)、卵黄囊干细胞（yolksacstemcell)及羊水干细胞（amnioticfluidstemcell)。 范例性的功能分化细胞包含纤维母细胞（fibroblast)、软骨细胞（chondrocyte)、成骨 细胞（osteoblast)、骨细胞（osteocyte)、脂肪细胞（adipocyte)、上皮细胞（epithelial cell)、角质细胞（keratinocyte)、视网膜细胞（retinalcell)、牙细胞（dentalcell)、肾 细胞（renalcell)、胰岛细胞（pancreaticisletcell)、肝细胞（hepatocyte)、神经细胞 (neuronalcell)、免疫细胞（immunecell)、肌肉细胞（musclecell)及血球细胞（blood cell)〇
[0014] 依据本掲示内容某些实施方式，透明质酸化合物可以是透明质酸（hyaluronic acid)、透明质酸的部份酯类或全酯类、经己二酸二酰肼修饰的透明质酸（adipic dihydrazide-modifiedhyaluronan)、透明质酉爱酉先胺(amidesofhyaluronan)、交耳关 透明质酉爱（crosslinkedhyaluronicacid)、丁二酉爱的半酯（hemiestersofsuccinic acid)、透明质酸的重金属盐类（heavymetalsaltsofhyaluronicacid)、硫化透明质 酸（sulphatedhyaluronicacid)、N_ 硫化透明质酸（N-sulphatedhyaluronicacid)、 经氨基修饰的透明质酸（amine-modifiedhyaluronicacid)、经双氨修饰的透明质酸 (diamine-modifiedhyaluronicacid)或透明质酸与丝（silk)的组合物。
[0015] 在某些实施方式中，生物分解性材料于活体内的分解特性相似于分子量为50千 道尔顿到1，600千道尔顿的透明质酸于活体内的分解特性；较佳的情况是，生物分解性材 料于活体内的分解特性相似于分子量为200千道尔顿到800千道尔顿的透明质酸于活体内 的分解特性。
[0016] 依据本揭示内容的实施方式，治疗细胞可在治疗位置维持至少7天；较佳为至少 14天；最佳为至少28天。
[0017] 在本揭示内容某些实施方式中，生物分解性材料于活体内的半衰期为4小时到28 天；或者是，一旦投予至个体后，生物分解性材料于活体内的半衰期可为8小时到7天、12 小时到5天，或是1到3天。
[0018] 可任选地，在某些实施方式中，生物分解性材料更包含至少一种生物聚合物； 举例来说，该生物聚合物包含，但不限于，胶原（collagen)、明胶（gelatin)、藻酸盐 (alginate)、几 丁聚糖（chitosan)、纤网蛋白（fibronectin)及纤维蛋白胶（fibrin glue)〇
[0019] 依据本揭示内容的实施方式，在将治疗细胞投予至治疗位置3-10天后，治疗位置 的治疗细胞群会大致等于或大于初始投予的治疗细胞群。
[0020] 在不同实施方式中，可在投予生物分解性材料之前、同时或之后投予治疗细胞。若 要同时投予，则可将治疗细胞与生物分解性材料配制为单一组合物或个别的组合物。
[0021] 依据本揭示内容的实施方式，可分别或同时利用直接投予、以导管辅助传送、以内 视镜辅助传送、以机器辅助传送、以仪器辅助传送或以影像仪器引导传送来投予治疗细胞 及生物分解性材料。
[0022] 在某些实施方式中，治疗细胞的治疗有效量为每公斤个体体重1X104至1X108细 胞。在该些实施例中，透明质酸化合物的有效量为每公斤个体体重〇. 01至10毫克。
[0023] 在参阅下文实施方式后，本发明所属技术领域中具有通常知识者当可轻易了解本 发明的基本精神和其它发明目的，以及本发明所采用的技术手段与实施方式。
【附图说明】
[0024] 为让本发明的上述与其它目的、特征、优点与实施例能更明显易懂，所附图式的说 明如下：
[0025] 图1及图2证明AlexaFluor700卵白素（streptavidin,SA)与表达圆盘海葵红 (Discosomasp.Red,Ds-Red)的人类间叶干细胞（humanmesenchymalstemcell,hMSC)之 间荧光强度的线性关系；卵白素（图1)及人类间叶干细胞（图2)皆呈现R=0. 99。
[0026] 图3为卵白素及人类间叶干细胞的影像，其由活体影像系统（invivoimaging system,IVIS)搭配用以观察AlexaFluor700卵白素及会表达Ds-Red的人类间叶干细胞 的滤镜组进行显像；上方二张IVIS图是将卵白素及人类间叶干细胞混合前的影像，下方二 张图则是混合后的影像；图中无法显示的是，该些荧光信号为黄色至红色，且以蓝线圈选标 记特定区域；570/620 :用以观察人类间叶干细胞的激发/发散滤镜组；675/720 :用以观察 AlexaFluor700卵白素的滤镜组。
[0027]图4为卵白素（左图）及人类间叶干细胞（右图）在混合前后的荧光强度分析柱 状图；不论是AlexaFluor700卵白素，或是表达Ds-Red的人类间叶干细胞，在混合前后皆 不具有显著的荧光差异。
[0028] 图5到图7为不同分子量的透明质酸的荧光强度线性图，其中该些透明质酸分别 有（灰线）或无（黑线）与人类间叶干细胞混合。
[0029] 图8为在注射透明质酸-200(hyaluronicacid