比对，下载部分菌株序列用于系统 发育分析。用CLUSTAL X软件进行序列比对分析；用MEGA 4. 0软件的最大似然法（maximum likelihood，ML)构建系统发育树，选用錯蚁轮枝菌Lecanicillium lecanii F J515771的 同源序列作为外群，进行1000次重复。
[0044] 请配合参阅图1和图6所示，该菌在PDA培养基培养表现为：菌落直径为20mm到 30mm，近似圆形，中间有粒状凸起，边缘呈一定圆弧状，表面密生绒毛，绒毛高1mm到2mm，培 养后期绒毛倒伏呈毛毡状，并且常有水滴形成，表面呈沟脊放射状，正面呈乳白色，背面淡 黄色。
[0045] 白僵菌显微观察形态表现为菌丝无色，细长，有隔，光滑，粗2. 5 μ m到3. 5 μ m，产 孢细胞常簇生于菌丝或泡囊上，少数单生，产孢细胞基部膨大，多为瓶形，近球形。产孢细胞 颈部明显延长成产孢轴，呈弯曲状，轴上具有小齿突，分生孢子位于小齿突上，培养后期，在 底倍镜下可见球形的密集孢子头。分生孢子透明，光滑，多为球形和近球形，个别为长柱形， 孢子半径约为4. 5 μ m。请配合参阅图5所示，根据对培养菌株的观察总结，参照康曼等人的 研究和《真菌鉴定手册》进行鉴定，初步确定该菌株属于：
[0046] 半知菌亚门（Deuteromycotina)
[0047] 丝抱纲（Hyphomycetales)
[0048] 丛梗抱目（Moniliales)
[0049] 丛梗抱科（Moniliaceae)
[0050] 白僵菌属（Beauveria)
[0051] 球抱白僵菌（Beauveria bassiana)
[0052] 本发明中，根据菌落特征、产孢细胞的形态、产孢轴的发育过程以及孢子的形态等 形态指标，鉴定菌株属于白僵菌属中的球孢白僵菌。
[0053] 本发明的菌株的ITS rDNA序列分子鉴定和系统发育树的构建，PCR扩增获得供试 白僵菌菌株的rRNA ITS序列长度为607bp，通过NCBI数据库在线比对后发现该菌株rRNA ITS序列与家蚕来源的球孢白僵菌Cordyceps bassiana(AJ564812)的序列相似度高达 99%以上。
[0054] 选取6株rRNA ITS序列相似度99 %以上的球孢白僵菌和1株布氏白僵菌，采 用ML法构建系统发育树，可见供试菌株与家蚕来源的Cordyceps bassiana (AJ564812)和 Beauveria bassiana Bbl6 以及 Cordyceps bassiana AB079608 聚为一类，亲缘关系最近。 6株球孢白僵菌聚在一个较大的分支上，和布氏白僵菌Beauveria brongniartiiCCRC32838 分属于白僵菌的不同进化支，錯蚁轮枝菌Lecanicillium lecanii F J515771作为外群处 于一个单独的分支，与白僵菌的亲缘关系最远。结合对供试菌株分生孢子和菌落形态的观 察结果，确定该菌株为球孢白僵菌（Beauveria bassiana)。
[0055] 实施例1白僵菌液体发酵最佳时间的确定
[0056] 白僵菌孢子悬浮液的制备，取培养了 7d的成熟白僵菌斜面菌种，在无菌操作环境 下加入灭菌的〇. 1 %吐温-80溶液，进行表面孢子洗脱，经无菌纱布过滤，使得最终孢子含 量约为1.0 X 101°个/L。
[0057] 液体培养基配制，按照前面液体深层发酵最佳时间培养基配方配制相关培养基， 在250ml规格的三角瓶中装49mL培养液，设置三个重复，包装灭菌，冷却后接入lmL上面制 备的孢子悬浮液，置于27°C，150r/min条件下培养，每隔12h取样，用血球计数板进行液生 分生孢子和芽生孢子计数。
[0058] 表1液生分生孢子的形成描述
[0059]
[0061] 请配合参阅图4和图5所示，在接入孢子悬浮液36h后孢子数增加很快，呈现指数 增长，在36h~84h是对数生长期，84h后孢子数量变化不明显，为稳定期，120h时达到最大 值，之后菌丝自溶，孢子数逐渐减少且活力减弱，为衰退期，这时培养基中生物量逐渐减少， 不适合做栽培种子液。芽生分生孢子在24h开始萌发，并逐渐增长，在培养了 84h后达到最 大值，之后便逐渐减少。
[0062] 实施例2不同碳源对白僵菌液体深层发酵的影响
[0063] 按照系统研究促进液生分生孢子培养基配方，配制成以黄豆粉为氮源，不同碳源 的培养基，同时在各不同碳源培养基中加入基础盐、微量元素、复合维生素 B和吐温-80。在 250mL规格的三角瓶中装49mL培养液，每个碳源培养基设置三个重复，包装灭菌，冷却后接 入lmL孢子悬浮液，置于27°C，150r/min条件下培养120h后用血球计数板测液生分生孢子 数和芽生孢子数。
[0064] 请配合参阅图7所示，不同碳源对白僵菌液生分生孢子的产生有不同影响，当以 马铃薯淀粉作为唯一碳源时，对液生分生孢子的产生有明显的促进作用，产生的分生孢子 大小均匀，整齐度高。其次是葡萄糖，也能产生较多的分生孢子，但数量不及马铃薯，最差是 蔗糖。
[0065] 请配合参阅图8所示，不同碳源对白僵菌芽生孢子的产生有不同影响，当以马铃 薯淀粉作为唯一碳源时，对芽生孢子的产生有明显的促进作用，其次是蔗糖，最差是葡萄 糖。
[0066] 实施例3不同氮源对白僵菌液体深层发酵的影响
[0067] 按照系统研究促进液生分生孢子培养基配方，配制成以蔗糖为碳源，不同氮源的 培养基，同时在各不同氮源培养基中加入基础盐、微量元素、复合维生素 B和吐温-80。在 250mL规格的三角瓶中装49mL培养液，每个氮源培养基设置三个重复，包装灭菌，冷却后接 入lmL孢子悬浮液，置于27°C，150r/min条件下培养120h后用血球计数板测液生分生孢子 数和芽生孢子数。
[0068] 请配合参阅图9所示，不同氮源对白僵菌液生分生孢子的产生有不同的影响，当 以黄豆粉最为唯一氮源时发酵获得分生孢子数最大，且产生的孢子大小均匀，性状稳定。以 (NH4)2S(Mt为供试氮源时，发酵产生的液生分生孢子虽然数量仅次于黄豆粉发酵得到的孢 子数，但是产生的孢子大小不均匀，多畸形孢子。以玉米粉作为供试氮源时，产生的液生分 生孢子大小不均勾，个体微小者占大多数。以麸皮作为供试氮源时产生的液生分生孢子大 小均匀，但是数量稀少，不适合用作发酵氮源。
[0069] 请配合参阅图10所示，当以黄豆粉作为唯一供试氮源时，对白僵菌芽生孢子的产 生有明显的促进作用，其次是（NH4)2S04和麸皮，两种情况下产生的芽生孢子数大致相等，最 差是玉米粉，产生的芽生孢子数远远小于其他供试氮源。
[0070] 实施例4不同微量元素对白僵菌液体深层发酵的影响
[0071] 按照系统研究促进液生分生孢子培养基配方，配制成以黄豆粉为氮源，以蔗糖为 碳源的培养基设置只添加单一微量元素（CuS04, FeCl3, MnS04, ZnS04)和不同的微量元素组 合（CuS04+FeCl3, CuS04+MnS04, CuS04+ZnS04, CuS04+FeCl3+MnS04)，以及加入全部四种微量元 素和不添加任何一种微量元素的不同处理。同时在各处理培养基中加入基础盐、复合维生 素 B和吐温-80。在250mL规格的三角瓶中装49mL培养液。每个处理设置三个重复，包装 灭菌，冷却后接入lmL孢子悬浮液，置于27°C，150r/min条件下培养120h后用血球计数板 测液生分生孢子数和芽生孢子数。
[0072] 种子液的制备，以黄豆粉为氮源，蔗糖为碳源，并加入其他基础成分，在规格为 250mL的三角瓶中分装39mL培养液，灭菌冷却后接入lmL孢子悬浮液（这里孢子悬浮液的 浓度约为1 X 101°个/L)，置于27°C，150r/min条件下培养120h后取出待用。
[0073] 请配合参阅图11所示，加入适量的微量元素有助于液生分生孢子的形成。在只 加入四种微量元素其中一种的情况下，加入CuS04能产生更多的液生分生孢子，往后依次是 MnS04、FeCl3、ZnS04。在加入两种微量元素和三种微量元素的培养基中获得的液生分生孢子 浓度相近，彼此差异不大。四种微量元素全部加入能获得最大的产孢量。
[0074] 请配合参阅图12所示，只加入CuS04对芽生孢子的生成有重要影响，其次加入 ZnSOjP微量元素组合 CuS04+MnS04、CuS04+FeCl3、CuS04+FeCl 3+MnS04以及四种元素全部加 入均能获得较高的芽