小，因此决定通过电话进行最后一次访问，并且询问受试者关于流感症状、 ΑΕ和伴随用药的使用的情况。
[0089] 实施例2 [0090] 给予的干预
[0091] 给两组提供安慰剂或研究的饮料（参见表1)。饮料递送约57kcal/100ml。在研 究期间以5个不同的批次制备饮料，并且从Chr. Hansen送至研究场所。由于饮料的保质期 有限（从生产日起4周），饮料以较小的批次分批分配给受试者。在访问2,在研究期间受 试者接收部分瓶子并且返回至研究场所两次以接收新批次的饮料。
[0092] 每个饮料上的标签包含下列信息：'含有益生菌或不含益生菌的頂PRESS-酸化 乳'，'仅用于临床用途'，受试者编号，'要摇动并且与午餐一起食用'，'含110mL'，有 效期，储存条件，发起人名称，试验代码，和研究人员姓名。
[0093] 表1对用于頂PRESS-研究的饮料的描述
[0094]
[0095] 其他两组提供安慰剂胶囊或含有的胶囊以口服施用（参见表2)。
[0096] 每个铝管上的标签含有下列信息：'含有益生菌或不含益生菌的頂PRESS-胶 囊'，'仅用于临床用途'，受试者编号，'随午餐一起每天服用1个胶囊'，'含30个胶 囊'，有效期（从生产日起24个月），储存条件，'避免儿童接触'，发起人名称，试验编 号，和研究人员姓名。
[0097] 表2对用于頂PRESS-研究的胶囊的描述
[0098]
[0099] 由Sacco医院的研究人员指导受试者在午餐时间一天饮用一个饮料或一天服用 一个胶囊持续6周（42天）。对瓶子和含有胶囊的铝管进行编码以保持盲态。顺应性基于 受试者在日记中对遗漏剂量的记录。
[0100] 在研究中使用的流感疫苗为用于2008/2009季的来自Novartis Vaccines and Diagnostics,西耶那，意大利的FluacT疫苗，有效期至2009年6月10日。存在于该疫 苗中的菌株为：
[0101] A/Brisbane/59/2007(HlNl)_ 样菌株（A/Brisbane/59/2007, IVR-148),A/ Brisbane/10/2007AH3N2) -样菌株（A/Uruguay/716/2007,NYMCX-175C)和 B/ Florida/4/2006-样菌株（B/Florida/4/2006)。该疫苗在医院药房中在4°C保存。在访问 3,所有受试者接受0. 5mL疫苗接种的肌内注射。
[0102] 将受试者分派至各治疗组的方法
[0103] 使用SAS计算机程序来生成由年龄和性别分层的置换区组随机化分派，区组大小 为6。年龄分层为20-39岁和40-60岁。由Sprim的统计学团队将随机化列表提供给发起 人以依照独特研究ID系统标记胶囊产品。由不知情的研究协调员依照随机化列表在分配 前标记饮料。
[0104] 对于每名受试者的随机化编号的分派基于每个年龄-性别层内按时间前后顺序 排列的受试者的递增次序。
[0105] 对所有产品均设盲。
[0106] 研究中剂量的选择
[0107] 选择最小1x109CFU/天ΒΒ-Π ?或干酪乳杆菌431?的剂量，因为这是调节免疫系 统通常所需的日剂量（Minelli和Benini 2008)。
[0108] 用于每名受试者的剂量的选择和时间安排
[0109] 由研究人员指导受试者在午餐时间饮用饮料或服用胶囊。对于摄入的指导也书写 在研究产品的包装上。选择在午餐时间摄入产品是因为，在意大利，在午餐时间摄入乳制品 比在早餐时摄入更常见。
[0110] 设盲法
[0111] 分别在安慰剂和益生菌饮料以及在安慰剂和益生菌胶囊之间，外观、形状、气味和 味道是不能区分的。受试者、支持人员和研究者对专用产品（活性物质VS.安慰剂）的身 份不知情。研究场所药房收到一组包含每个随机化编号的产品身份的密封信封，其在紧急 情况下可以揭盲。在研究期间不进行编码揭盲。
[0112] 功效变量
[0113] 功效测量评价和流程图
[0114] 研究措施和程序的时间表的概况在表3中提供。
[0115] 表3頂PRESS-研究的研究时间表
[0116]
[0117] 1 用于分析总 IgG、IgA、IgM、IgGl 和 IgG3 ;疫苗特异性 IgG、IgGl 和 IgG3 ;IL-2、 INF-γ和IL-10 ;NK活性、⑶4+T细胞、吞噬作用；破伤风特异性IgG
[0118] 2用于分析总的和疫苗特异性唾液IgA、IgG和IgM
[0119] 3在V2和V4,临床检查包括身高和体重、生命体征（心率、血压、体温和呼吸频率） 和感染状态；在V3,检查仅用于感染状态
[0120] 主要功效变量
[0121] 抗原特异性免疫应答
[0122] 疫苗特异性IgG、IgGl和IgG3的血浆水平
[0123] 疫苗特异性唾液IgG、IgA和IgM的水平
[0124] 次要变量
[0125] 适应性免疫系统的应答
[0126] 总 IgG、IgA、IgM、IgGl 和 IgG3 的血浆水平
[0127] 总唾液I gG、I gA和I gM的水平
[0128] 细胞因子IFN-γ、11-2和11-10的血浆浓度
[0129] 先天免疫系统的应答
[0130] NK细胞活性
[0131] CD4阳性T淋巴细胞
[0132] 吞噬作用和吞噬细胞杀伤
[0133] 对上呼吸道感染/症状和流感样病的作用
[0134] 向受试者提供纸日记本用于补充和随访期，在此期间受试者通过每周完成症状日 记（McDowell 2006)评价URTI的症状和每4周基于症状日记完成ILI评价。日记以当地 语言提供。
[0135] 感染状态
[0136] 通过在访问1至4时的临床检查评价感染状态。通过评估发热、流感样症状（咽 喉感染和全身不适和/或身体疼痛）的存在，在临床上确定感染（是/否）率。使用的对 感染状态的评价由列举如下的7种症状的世界卫生组织（WHO)标准发展而来。
[0137] 感染的长度通过天数来记录。感染定义为影响鼻子、咽喉和支气管约7天的病毒 感染并且通过下列表征：
[0138] ?开始发高烧（是/否）
[0139] ?肌肉疼痛（是/否）
[0140] ?剧烈头痛（是/否）
[0141] ?严重不适（是/否）
[0142] ?非排痰性咳嗽（是/否）
[0143] ?咽喉痛（是/否）
[0144] ?鼻炎（是/否）
[0145] 对于持续超过7天的症状，如果有的话，记录特殊的症状和施用的治疗的类型。
[0146] 对于上面列举的事件的每个"是"反应，记录下面的细节：
[0147] ?诊断日期
[0148] 鲁症状发作的日期
[0149] 鲁症状停止的日期
[0150] ?服用的药物
[0151] ?开出的药物适用于哪种症状
[0152] 生物样品的处理和实验室分析程序
[0153] 对于每个研究目的和采用的实验室方法测量的参数的概述在下表4中提供。
[0154] 表4对于頂PRESS研究的功效和安全性变量的实验室分析
[0157] 实施例3
[0158] 生物样品的处理
[0159] 采血
[0160] 在访问2和4时由研究团队成员通过在肘前静脉中的静脉穿刺将空腹 血液样品收集在3个含有EDTA的真空采血管（vacutainer tube) (7mL) (Becton Dickinson&Co.，Rutherford, NJ)中。血液样品在离心前在环境温度下保持至多2小时。
[0161] 血浆采集
[0162] 通过将未凝固的全血（EDTA)在1400rpm和20°C离心10min获得血浆样品。离心 后，将2mL血浆转移至2个冻存管/受试者中并且立即在-80°C冷冻直至进行分析。
[0163] 外周血单核细胞（PBMC)分离
[0164] 在采集血衆后，从淋巴细胞分离培养基（Organon Teknica Corp.，Durham, NC) 上的血块黄层分离PBMC，在磷酸盐缓冲盐水（PBS) (Organon Teknica)中洗涤两次，并在 1900rpm离心10分钟。在冰上操作，将lmL冷冻液（补充85 % FBS的RPMI+15 % DMS0)加入至 PBMC片状沉淀物，并将细胞重悬。最后，将细胞悬液转移至2mL冻存瓶中，并以10 - 15xl06 活PBMC/瓶的量在-80°C冷冻直至使用（通过台盼蓝拒染测定）。
[0165] 唾液采样
[0166] 在访问2和4时依照吐痰法采集唾液。受试者处于直立位，并且被告知将积聚在 口底中的唾液吐到无菌测试管中。受试者每60秒吐出唾液，持续5分钟，并将包含唾液的 试管立即在-80°C冷冻直至进行分析。在过夜禁食后采集唾液样品。
[0167] 实施例4
[0168] 实验室分析方法
[0169] 使用市售试剂盒并且依照下面的简短描述对所有实验室样品一式两份地进行分 析。
[0170] 血浆中的疫苗特异性抗体
[0171] 使用 ELISA 技术依照制造商（IBL-America, Inc.，MN, USA)随 A 型流感 IgG ELISA 试剂盒提供的说明书分析血浆中的疫苗特异性IgG。这些测定提供的微量滴定板已经预先 包被有A型流感抗原，并且通过对人IgG特异的二级酶联抗体检测样品中的IgG抗体和固 定化抗原之间的结合。添加底物（四甲基联苯胺，TMB)诱发蓝色的显色。在底物反应后， 添加终止溶液，其将颜色转变成黄色，并且在60分钟内用分光光度计在450nm测量光密度 (0D)。显色的颜色强度与样品中IgG特异性抗体的量成正比。通过使用标准曲线确定样品 中的IgG的量。在此测定中A型流感IgG的检出限为1. 09U/