料与安慰剂饮料比较，BB-1胶囊与安慰 剂胶囊比较，使得每个参数有两个比较。有6个主要功效终点（血浆中的特异性IgG、IgGl 和IgG3以及唾液中的特异性IgA、IgG和IgM)，和比较数加起来达到12个用于主要功效评 价。
[0197] 在Holm-Bonferroni法中，首先在不调整的条件下进行所有12种比较，并且将 P-值从最小至最大进行排序。最小的P-值与经调整的显著性水平比较，经调整的显著性 水平等于〇4=5%/12(〇/比较数目）=0.004。如果最小的？-值大于<14，则得出结 论，所有比较是不显著的。如果最小的P-值小于aad]，则相应比较的结论是在5%的水平 上是统计学显著的。在下一步骤，使用如上所述的相同方法将第二小的P-值与aad]= 5% /11比较。继续此过程直至发现大于aad]的p-值，并且剩余的比较被认为是不显著的。
[0198] 对于次要目的终点的统计学分析不对多重检验进行调整。
[0199] 功效分析
[0200] 主要目的的分析
[0201] 统计学分析的主要功效变量是从基线的变化，即，第42天和第0天评估之间的差 异。使用单变量方差分析来鉴定研究效应。
[0202] 在基线内，第42天内和对于平均倍数增加（MFI)还进行组间的统计学分析。MFI 定义为（第42天-第0天）/第0天。
[0203] 另外，从基线至第42天至少2倍的特异性抗体增加被认为是实质性的，并且定义 为差值（第42天-第0天）^2x第0天（Stephanova等2002, Kurstak 1985)，并且计 算疫苗特异性抗体实质性增加的每组中受试者的数目。
[0204] 仅相同产品内的各组进行比较，即，干酪乳杆菌43 Γ'饮料VS.安慰剂饮料，以及 BB-丨21"胶囊vs.安慰剂胶囊。
[0205] 所有AN0VA模型包含治疗、性别、年龄和基线的项目，例外是对于基线内的分析， 其中模型包含治疗、性别和年龄的项目。由于BMI在组间具有显著性差异，因此使用BMI作 为AN0VA模型中的附加协变量进行事后分析。
[0206] 计算几何平均数评价并且描述性地报告。通过取对数值的算术平均数的逆对数来 计算几何平均数。
[0207] 次要目的的分析
[0208] 这些分析遵循与对主要目的所概述的相同方法学策略。
[0209] 数据和描述统计学的概述
[0210] 使用均数、标准差（SD)、中位数、95 %置信区间（CI)、5 %和95%-分位数以及最小 值和最大值总结治疗组的连续变量如人口统计学和基线变量以及免疫球蛋白值。对于按类 别的变量如性别和其抗体值达到实质性增加的受试者的比例依赖于每个治疗组内的计数 和频次。
[0211] 分布假设验证
[0212] 对于连续结果量度，焦点集中于确定数据的正态性（高斯分布）。这使用Wilk和 Shapiro (1965)技术以及QQ图来评估。
[0213] 对于一些参数，不遵守正态分布假设。在这些情况下，也进行非参数法，即， Mann-Whitney检验作为替代分析。这些替代分析的所有结果与来自参数分析的结果一致。
[0214] 随机化方案的验证
[0215] 这些分析的目标是为了确定就"已知的"预测协变量如年龄、性别和基线免疫球蛋 白值而言在研究组间是否存在显著性差异（不平衡）。这些分析依赖于AN0VA或非参数检 验以评价相关组（即，干酪乳杆菌431?饮料vs.安慰剂饮料和BB42?胶囊vs.安慰剂胶 囊）内的平均值的相等性。
[0216] 分析的数据组
[0217] 总体来说，211名受试者的数据包含在ITT分析组内，并且196名受试者的数据包 含在PP分析组内。
[0218] 在此仅报告来自ITT分析的结果。
[0219] 人口统计学和其他基线特征
[0220] 在表中，显示了 ITT分析组中受试者的人口统计学和基线特征。总平均（SD)年龄 为33.2岁（13. 1岁），且范围为从19至60岁。总体来说，女性多于男性：118名（55.9%) 女性，和93名（44. 1% )男性。
[0221 ] 表5頂PRESS-研究（ITT分析组）的受试者的人口统计学和基线特征
[0222]
[0224] *p〈0. 05与安慰剂饮料组相比较的差异，采用Kruskal-Wallis检验分析
[0225] 功效结果
[0226] 主要目的
[0227] 血浆中的疫苗特异性IgG、IgGl和IgG3
[0228] 在对从基线的变化的主要分析中证明对于所有三种参数在益生菌和安慰剂组之 间均存在显著性差异。当比较第42天和基线之间的差异时，组中的疫苗特异性抗 体值与安慰剂组相比，从基线至第42天显著增加更多（对于所有参数p〈0. 001)。同样，干 酪乳杆菌431#组中的特异性抗体值与相应的安慰剂组相比增加显著更多（对于1姊，p = 0· 010,且对于 IgGl 和 IgG3, ρ〈0· 001)。
[0229] 另外的分析显示疫苗特异性IgG、IgGl和IgG3的基线值在所有研究组之间时相似 的。第42天值的横截面分析显示对于BB-12?姐相比于安慰剂组和干酪乳杆菌431φ组相 比于安慰剂组所有参数均具有显著较高的值（对于所有三个参数，Ρ〈〇. 001)(图1、图2和 图3)。
[0230] 流感疫苗-特异性IgG、IgGl和IgG3的值也评价平均倍数增加（MFI)。对于 组相比于安慰剂组的IgG观察到MFI的显著组间差异（p = 0. 016)，对于BB-12? 组相比于安慰剂组以及干酪乳杆菌431 组相比于安慰剂组的IgGl和IgG3的显著组间差 异（对于所有，Ρ〈〇·〇〇1)(表6)。
[0231 ] 表6研究组的流感疫苗-特异性血浆IgG、IgGl和IgG3的平均倍数增加
[0232]
[0233] *:对于采用AN0VA分析的MFI组间差异，使用性别、年龄和基线作为协变量来源： 附录 16. 1. 9 表 3. 1，3. 2, 3. 3, 8. 1，8. 2 和 8. 3
[0234] 疫苗特异性IgG、IgGl和IgG3的至少2倍的平均倍数增加被定义为实质性增加， 并且对每组计算达到实质性增加的受试者的比例。与相关的安慰剂组相比，在每个益生菌 组中具有特异性抗体值实质性增加的受试者的数目均相当大（表7)。
[0235] 表7研究组的具有IgG、IgGl和IgG3值实质性增加的受试者的数目
[0236]
[0237] 唾液中的疫苗特异性IgG、IgA和IgM
[0238] 对于疫苗特异性唾液IgG、IgA或IgM，对从基线的变化的组间差异的主要分析显 示无显著性差异。然而，对于IgA，在BB-. 12κ胶囊组和相应的安慰剂组之间显示有趋于显 著性差异的趋势（经调整的Ρ = 〇. 084)。
[0239] IgG和IgA的基线值在组间是相似的，而与安慰剂组相比，在基线处在ΒΒ-丨2_'组 中IgM值稍高（ρ = 0. 007)(图4、图5和图6)。
[0240] 第42天值的横截面分析显示与安慰剂组相比，在:BB-12K组中IgA值较高（P = 0. 014)且与安慰剂组相比，在干酪乳杆菌43 P组中IgA值较高（P = 〇. 047)(图4、图5和 图6)。同样，平均倍数增加的分析表明与相关的安慰剂组相比，在每个益生菌组中疫苗特异 性IgA的MFI均较高（表8)。
[0241] 在第42天时和在MFI方面组间均未观察到IgM或IgG的显著性差异（图4和图 6) 〇
[0242] 表8研究组的流感疫苗-特异性唾液IgA、IgG和IgM的平均倍数增加
[0243]
[0244] *:对于采用AN0VA分析的MFI组间差异，使用性别、年龄和基线作为协变量。
【主权项】
1. 保藏号为ATCC55544的益生细菌菌株副干酪乳杆菌副干酪亚种（Lactobacillus paracaseissp.paracasei)(千路乳杆菌43Γ?)在用于制备与流感疫苗联合的用于增加 疫苗特异的IgG的免疫加强组合物中的用途。2. 根据权利要求1所述的用途，其中所述组合物在疫苗接种前施用至少2周。3. 根据权利要求1的用途，其中疫苗特异性的IgGl增加。4. 根据权利要求1的用途，其中疫苗特异性的IgG3增加。5. 根据权利要求1的用途，其中流感疫苗中的病毒是正粘病毒。6. 根据权利要求5的用途，其中所述正粘病毒为A型流感病毒。7. 根据权利要求5的用途，其中所述正粘病毒为B型流感病毒。8. 根据权利要求5的用途，其中所述正粘病毒为C型流感病毒。9. 根据权利要求1所述的用途，其中所述益生细菌菌株与其他种的其他乳酸菌联合使 用。10. 根据权利要求9所述的用途，其中所述益生细菌菌株与酸奶发酵物联合使用。11. 根据权利要求10所述的用途，其中所述酸奶发酵物是保加利亚乳杆菌 (Lactobacillusbulgaricus)或嗜热链球菌（Streptococcusthermophilus) 〇12. 根据权利要求1所述的用途，其中所述组合物在6周期间施用。13. 根据权利要求1所述的用途，其中所述组合物是乳制饮料或胶囊。
【专利摘要】一种免疫佐剂。本发明因此涉及一种用于通过共同施用益生菌诸如干酪乳杆菌431或BB-12与流感疫苗来加强疫苗的效率的方法。本发明还涉及用于这种治疗中的组合物。
【IPC分类】A61K39/145, A61K35/747, A61P31/16, A61K39/39, A23C9/137
【公开号】CN105288616
【申请号】CN201510845386
【发明人】多尔特·埃丝科森
【申请人】科.汉森有限公司
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2011年10月14日
【公告号】CN103220921A, CN103220921B, EP2627198A1, EP2627198B1, US20130195917, WO2012049301A1