一种含有浮游生物的精华素及其在化妆品中的应用_2

文档序号:9675484阅读:来源:国知局
微循环障碍、 消除水肿及缓解腿部疲劳和沉重感,从而达到显著的瘦身及局部瘦身的效果。本发明精华 素即可以单独涂布在皮肤上使用或用带状包裹材料包裹于皮肤表面使用或先使瘦身部位 温度升高,再在相应部位皮肤上涂布该精华素,然后用带状包裹材料包裹于皮肤表面使用 等,也可以作为有效成分添加于瘦身化妆品中使用,或是作为具有促进脂肪分解、消除水 月中、缓解腿部疲劳作用的有效成分添加在瘦腿化妆品中使用。 具体实施例
[0062] 以下将结合具体实施例对本发明做进一步说明。
[0063] 下述实施例中所述的"环五聚二甲基硅氧烷、环己硅氧烧"是指环五聚二甲基硅氧 烷和环己硅氧烷的混合物,;所述的"细小裸藻多糖、水解胶原"是指细小裸藻多糖和水解胶 原的混合物,。
[0064] 实施例1
[0065] 本实施例一种精华素 a,其活性成分包括下述重量的原料:
[0066]浮游生物提取物3g、啤酒花提取物2g、小米椒果提取物2g、假叶树根提取物lg、毛 果一枝黄花提取物lg,将以上活性成分加入适量辛酸/癸酸甘油三酯溶解即得,所述浮游生 物提取物提取自等边金藻及叉鞭金藻。
[0067] 实施例2
[0068] 本实施例一种精华素 b,其活性成分包括下述重量的原料:
[0069]浮游生物提取物5g、啤酒花提取物4g、小米椒果提取物3g、假叶树根提取物2g、毛 果一枝黄花提取物2g,将以上活性成分加入适量辛酸/癸酸甘油三酯溶解即得,所述浮游生 物提取物提取自定边金藻。
[0070] 实施例3
[0071] 本实施例一种精华素 c,其活性成分包括下述重量的原料:
[0072]浮游生物提取物9g、啤酒花提取物6g、小米椒果提取物5g、假叶树根提取物3g、毛 果一枝黄花提取物3g,将以上活性成分加入适量辛酸/癸酸甘油三酯溶解即得,所述浮游生 物提取物提取自三毛金藻、钙板金藻及绿色巴夫藻。
[0073] 对比例1
[0074]本对比例一种精华素 d,其活性成分包括下述重量的原料:
[0075]浮游生物提取物5g、啤酒花提取物lg、小米椒果提取物6g、假叶树根提取物4g、毛 果一枝黄花提取物〇.5g,将以上活性成分加入适量辛酸/癸酸甘油三酯溶解即得,所述浮游 生物提取物提取自定鞭金藻及等边金藻。
[0076] 实施例4本发明精华素对前脂肪细胞凋亡作用评价
[0077] -、实验目的:测定实施例1~3及对比例1所得的精华素对前脂肪细胞凋亡作用。 [00 78] 二、实验材料
[0079] 1、实验样品及试剂:实施例1~3及对比例1所得的精华素 a、b、c、d;I型胶原酶、牛 血清蛋白、MTT(四唑盐)、DMS0(二甲基亚砜)、DMEM/F12培养基等,均购于上海优思生物技术 有限公司;本发明精华素溶液:将实施例1~3及对比例1所得的精华素分别取Ig溶于四蒸 水,定容至IOOmU配成母液,过滤除菌分装于-20°C储存,临用时用10%血清DMEM/F12培养 液稀释为所需浓度的实验处理培养液。将精华素 b分别配置成10mg/L、50mg/L、100mg/L、 200mg/L四种不同浓度的实验处理培养液,精华素 a、c、d分别配制成lOOmg/1浓度的实验处 理培养液。
[0080] PBS溶液:8 · OOg NaCl,0 · 20g KCl,0 · 20g KH2P04,3 · 96g Na2HPO4 · 12H20,用四蒸 水定容至1L;
[0081 ] 无血清DMEM/F12培养液:10g/L DMEM/F12培养基,四蒸水,100u/mL青霉素,IOOu/ HiL链霉素,3.7g/L NaHCO3;
[0082] I型胶原酶消化液:无血清DMEM/F12培养液,20g/L牛血清蛋白,lg/L I型胶原酶;
[0083] 1〇%血清〇1^]\0712培养液:1(^/〇)1^]\0712培养基,四蒸水,1〇〇11/11^青霉素,1〇〇11/ HiL 链霉素,3.7g/LNaHC03;
[0084] 红细胞裂解液:8.219g/LNH4Cl,l .0g/L KHC03,0.0292g/L EDTA;
[0085] MTT溶液:250mg MTT溶于50mL PBS溶液,搅拌30min后用0.22um微孔滤器过滤除 菌,分装于4°C保存,有效期为两周。
[0086] 2、实验动物:1 -7日龄仔猪,购自杨凌光明猪场。
[0087] 三、实验步骤
[0088] (1)处死仔猪,1-5% (v/v)新洁尔灭浸泡消毒,无菌状态下取出颈部脂肪组织,用 含高浓度双抗的PBS清洗3次,剪成Imm3大小的组织块;
[0089] (2)组织块移入青霉素小瓶,加入2倍体积的I型胶原酶消化液,恒温37°C消化60-90min,振荡频率为40r/min;
[0090] (3)加10%血清DMEM/F12培养液终止消化,然后依次过孔径70目和200目不锈钢细 胞筛;
[0091 ] (4)滤液收集到IOmL离心管,2000r/min离心10min,弃上清液;
[0092] (5)加5mL红细胞裂解液,用弯头吸管吹打均匀,室温静置10min,1000r/min离心 5min,弃上清液;
[0093] (6)加5mL无血清DMEM/F12培养液,用弯头吸管吹打均匀,1000r/min离心5min,弃 上清液。重复操作两次;
[0094] (7)加入适量10 %血清DMEM/F12培养液,吹打均匀,制成细胞悬液,吸取少量细胞 悬液滴片,在光学显微镜下计计数板四角大方格的细胞数,细胞密度以如下公式计算:细胞 数/mL=(4大格细胞数之和/4) X IO4;
[0095] (8)分别以6 X IOVcm2密度将细胞接种于96孔,各孔分别加200yL 10%血清DMEM/ Fl 2培养液,置于37°C、5% CO2培养箱培养,96孔培养板接种1天后分别更换为不同的实验处 理培养液,之后每2天换培养液。
[0096] (9)培养10天后,每孔加入IOyL MTT,37°C条件下继续培养4小时,终止培养,小心 弃去培养液,每孔加入150yL DMSO,恒温摇床上振荡IOmin,选择波长490,以经过相同处理 的空白孔为调零值,使用酶联检测仪测定各孔吸光度A值。
[0097]四、实验结果
[0098] MTT比色是一种检测细胞生长的方法,已广泛应用于检测细胞增殖,吸光度与细胞 增殖程度正相关。
[0099] 表1 MTT比色结果
[0100]
[0101] 结果分析:由以上表1可知,精华素 a、b、c、d对前脂肪细胞增殖均有一定的抑制作 用,但精华素 a、b、c对前脂肪细胞增殖的抑制作用明显优于精华素 d,且随着精华素各个活 性成分质量比的增大其对前脂肪细胞增殖的抑制作用也增强,但当浮游生物提取物、啤酒 花提取物、小米椒果提取物、假叶树根提取物、毛果一枝黄花提取物的质量比高于5:4:3:2: 2时,其对前脂肪细胞增殖的抑制作用差异不大,而同一精华素随着其添加量的增加,其对 前脂肪细胞增殖的抑制作用也增强,但当其添加浓度从l〇〇mg/L增加至200mg/L时,其对前 脂肪细胞增殖的抑制作用差异并不显著,由此可知,本发明精华素对前脂肪细胞增殖的抑 制作用依赖各个活性成分的质量比和使用时所添加的浓度,但并不是意味着其含有的活性 成分的质量比或其使用时所添加的浓度越高越好,达到本发明所规定的范围值时,可达到 一个相对饱和值,而超过或不在本发明所规定的范围值时,其对前脂肪细胞增殖的抑制作 用反而下降。
[0102] 实施例5本发明精华素对脂肪细胞脂解作用评价
[0103] 脂肪组织中的甘油三酯在一系列脂肪酶的作用下,分解生成甘油和脂肪酸,并释 放入血供其他组织利用,本实验通过测定释放到培养液中甘油的量对本发明精华素对脂肪 细胞脂解作用进行评价。
[0104] -、实验目的:测定实施例1~3及
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