治疗糖尿病脑病的玉液汤药物及其制法与检测方法及用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及一种治疗糖尿病脑病的药物组合物。
【背景技术】
[0002] -、糖尿病（diabetes mellitus，简称DM) 糖尿病(diabetes mellitus，简称DM)是由于胰岛素分泌和(或)胰岛素作用不足引起 的以高血糖为主要特征的代谢性综合征，流行病学研究显示，随着社会的发展和生活方式 的改变，DM的发病率在全球范围内呈上升趋势。目前，全球共有1.5亿DM患者，到2025年，这 个数字将会上升到3.3亿。我国目前患病人数约4000万，占全球约1/5。糖尿病是一种系统性 代谢疾病，可引起多系统损害导致心脑血管疾病、视网膜病变、肾病、糖尿病足、周围神经病 变等并发症，目前大量糖尿病动物与临床研究均证实，持续高血糖还可导致中枢神经系统 (Central nervous system，CNS)认知功能障碍（mild cognitive impairment，MCI)--糖 尿病脑病，即中枢神经系统造成脑组织结构和功能的损害，MCI认知功能障碍又称认知功能 衰退、认知功能缺损或认知残疾，泛指各种程度的认知功能受损，从MCI直到痴呆。多项研 究均表明，Π 型糖尿病认知功能障碍与性别、年龄、受教育程度、生活方式、血糖水平、代谢 紊乱、胰岛素抵抗、下丘脑-垂体 -肾上腺(hypothalamic-pituitary-adrenal，HPA)轴功 能失调、炎性介质等有关，对糖尿病认知功能障碍的研究为目前研究热点之一。
[0003] 二、中枢胆碱能系统 中枢胆碱能系统被认为是构成学习记忆的重要通路，乙酰胆碱(acetylch〇line，ACh) 是其中重要的神经递质，胆碱乙酰转移酶(Chol ine acety 1-transferase，ChAT)作为Ach合 成的限速酶，常作为研究胆碱能神经元的标志或估计Ach含量(释放量)的间接标志。脑内胆 碱能神经递质Ach含量和ChAT活性的变化，均可反映胆碱能神经的活动，已作为当前研究人 类脑功能衰老的主要指标之一。随着"胆碱能损伤学说"的提出，胆碱能系统在糖尿病脑病 发病中的作用日益受到人们重视。多项研究证实STZ所致糖尿病大鼠的纹状体和海马区内 乙酰胆碱代谢异常，也有发现糖尿病大鼠脑组织(隔阂、杏仁核、海马等)胆碱能神经系统酶 活性下降，胆碱能神经传导降低。因此有学者认为，糖尿病脑病早期为认知功能有关的基底 前脑、海马和皮层等胆碱能神经元退行性病变。
[0004] 研究表明，葡萄糖与蛋白质或脂质的游离基发生非酶糖基化反应及氧化反应所形 成的产物，即晚期糖基化终末产物(AGEs)，晚期糖基化终末产物(AGEs)可引起体内组织一 系列病理生理改变，是导致糖尿病慢性并发症的重要致病因素。AGE受体(RAGE)存在于很 多细胞表面，其与AGE的结合可导致细胞内氧化应激和NF-kB通路的激活。30岁以后，人 脑内海马及神经胶质细胞中AGEs开始积聚。AGEs在细胞外与β淀粉样斑块共沉积，在细胞内 则积聚在神经元和星形胶质细胞中。AGEs与其受体RAGE结合，可激活氧化应激，引起一系列 损伤，并最终激活如NF-kB等对氧化还原反应敏感的转录因子，导致细胞因子的上调，如IL-1β和TNF-α。本实验评估了玉液汤对AGE诱导的认知损伤的保护作用，包括行为学测试及潜 在的机制探究。
[0005] 三、玉液汤的相关介绍 中医药治疗糖尿病已有几千年的历史，六味地黄丸、补中益气汤、逍遥散、玉液汤、复方 丹参、石斛合剂等中药复方有预防、治疗糖尿病或减轻慢性并发症的作用。其中玉液汤出自 张锡纯的《医学衷中参西录》，为中医治疗消渴名方，原书中即记载"治消渴。消渴，即西医所 谓糖尿病，忌食甜物。" 本发明在玉液汤的基础上，提供了一种药物组合物及其制备方法，该药物在防治T2DM 及改善认知功能方面，疗效确切，本发明的药物不仅可改善糖尿病的症状，还可改善胰岛素 抵抗，并具有一定的改善认知功能作用。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种治疗糖尿病脑病的药物组合物。
[0007] 本发明的另一目的是提供该药物组合物的制备方法。
[0008] 本发明的目的是通过以下方式实现的。
[0009] 一种治疗糖尿病脑病的药物组合物是由以下重量份的原料制成的：山药30重量 份，黄苗15重量份、知母15重量份、葛根15重量份、五味子15重量份、天花粉15重量份、鸡内 金10重量份。
[0010] 该药物组合物采用如下方法制备：药材饮片按处方剂量称取，以5~15倍量40~ 60%乙醇回流提取3次，每次提取时间0.5~1.5h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎， 即得。
[0011] 该药物组合物优选采用如下方法制备:药材饮片按处方剂量称取，分别以10倍量、 8倍量、6倍量50%乙醇回流提取3次，每次提取时间Ih，合并提取液，回收乙醇，浓缩，干燥，粉 碎，即得。
[0012] 该药物组合物按照药学中常规的制备方法制成硬胶囊剂、片剂、颗粒剂。
[0013] 所述的药物，采用如下方法检测:采用高效液相色谱法进行薯蓣皂苷元的含量测 定： (1) 色谱条件:采用Hypersi IDs色谱柱;流动相:比例为20~40:60~80的乙腈-水;检测 波长：190~210nm;柱温：15~25°C;流速:0 · 5~1 · 5mL · min-1;进样量：5~20yL; (2) 对照品溶液制备:精密称取干燥至恒重的薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇溶解制成 对照品溶液； (3) 供试品溶液的制备:精密称取本发明药物，加甲醇，加热回流，提取液回流溶剂并浓 缩至干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，正 丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液； (4 )测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5~20yL，注入高效液相色谱 仪，进行检测。
[0014] 上述采用高效液相色谱法对薯蓣皂苷元进行含量测定的检测方法，优选的方法如 下： (1) 色谱条件：采用Hypersi IDs色谱柱；流动相：比例为30 :70的乙腈-水；检测波长： 200nm;柱温：20°C;流速：1 · OmL · min-1;进样量：IOyL; (2) 对照品溶液制备:精密称取80°C干燥至恒重的薯蓣皂苷元对照品适量，加甲醇溶解 制成每Ig含0.2mg的对照品溶液； (3) 供试品溶液的制备:精密称取本发明药物IOmU加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回 流溶剂并浓缩至干，残渣加水IOmL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正 丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并 转移至IOmL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液； (4) 测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各IOyU注入高效液相色谱仪，进 行检测。
[0015] 所述的药物采用气相色谱法对花侧柏烯、罗汉柏烯进行含量测定： (1) 色谱条件:色谱柱:ZB-WAX弹性石英毛细管柱;载气:N2，0.5~1.5mL · ml/1;氢气，30 ~50mL · mL-S空气，300~500mL · min-S分流比：5~15:1;进样口温度：240~260°C，检测 器温度:290~310°C;程序升温:初始80°C，每分钟5°C升至120°C，每分钟10°C升至180°C，保 持3.5min;内标法； (2) 内标溶液的制备:取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成溶液，摇匀，作为内标 溶液； (3) 供试品溶液的制备:精密量取本品，置容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，再精密量 取，置容量瓶中，精密加入内标溶液，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀； (4) 对照品溶液的制备:精密称取花侧柏烯对照品、罗汉柏烯对照品适量，加无水乙醇 溶解并稀释制成含花侧柏烯及罗汉柏烯的对照品储备溶液，备用； (5) 测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5~20yL，注入气相色谱仪，进 行检测。
[0016] 上述采用气相色谱法进行花侧柏烯、罗汉柏烯进行含量测定，优选采用如下方法： (1) 色谱条件:色谱柱:ZB-WAX弹性石英毛细管柱;载气:N2，1. OmL · mL-S氢气，40mL · mL-1;空气，400mL · min-1;分流比：10:1;进样口温度：250°C，检测器温度300°C ;程序升温： 初始80°C，每分钟5°C升至120°C，每分钟10°C升至180°C，保持3.5min;内标法； (2) 内标溶液的制备:取环己酮适量，加无水乙醇溶解并稀释制成每ImL含12.5mg的溶 液，摇匀，作为内标溶液； (3) 供试品溶液的制备：精密量取本品1.0 mL，置IOmL容量瓶中，加无水乙醇稀释至刻 度，再精密量取1.0 mL，置IOmL容量瓶中，精密加入内标溶液1.0 mU加无水乙醇稀释至刻度， 摇匀； (4) 对照品溶液的制备:精密称取花侧柏烯对照品、罗汉柏烯对照品适量，加无水乙醇 溶解并稀释制成含花侧柏稀〇.301mg · ml/1及罗汉柏稀0.901mg · ml/1的对照品储备溶液， 备用； (5) 测定:分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各IOyU注入气相色谱仪，进行检 测。
[0017] 所述的药物组合物在制备治疗糖尿病脑病药物中的应用。
[0018] 所述的药物组合物在制备治疗糖尿病足以及哮喘药物中的应用。
[0019] 本发明药物组合物中原料药的基源如下： 山药：为薯截科薯截属植物山药Dioscorea opposita Thunb. [D.batatas Decne.]的 块茎。
[0020] 黄苗：为豆科黄苗属植物蒙古黄苗Astragalus membranaceus Bunge var. Mongholius(Bunge)P.K.Hsiao和膜荚黄苗A. Membranaceus (Fisch.) Bunge的根。
[0021 ] 知母:为百合科知母属植物知母Ane-marrhena asphodeloides Burge的根莖。
[0022] 葛根：为豆科葛属植物野葛Pueraria lobata (Willd.) Ohwi [P.thunbergiana (Sieb. et Zucc.) Benth. ; P. hirsuta (Thunb . ) Schneid ·]或甘葛藤 P · Thomsonii Benth.的块根。
[0023] 五味子：为五味子科五味子属植物五味子Schisandra chinensis (Turca .) Baill. [Kadsura chinensis Turca.]或华中五味子S. sphenanthera Rehd. et Wils.的果 实。
[0024] 天花粉:为萌芦科栝楼属植物栝楼Trichosanthes kiriowii Maxim及中华栝楼的 根。
[0025] 鸡内金:为雉科雉属动物家鸡Gallus gallus domesticus Brisson的砂囊内膜。
[0026] 上述药材均购于药材均购自于咸阳天天乐医药超市。
[0027]通过如下实验研究验证本发明的技术效果： 实验一:本发明药物组合物对糖尿病脑病模型大鼠神经保护作用及机制研究 1.材料 1.1药品与试剂 (1)药品 本发明药物:处方：山药30g、黄苗15 g、知母15 g、葛根15 g、五味子15 g、天花粉15 g、 鸡内金10 g;制法:药材饮片按处方剂量称取，分别以10倍量、8倍量、6倍量50%乙醇回流提 取3次，每次提取时间I h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，干燥，粉碎，即得。
[0028] 对比药物A:处方：山药30g、黄苗15 g、知母15 g、葛根15 g、五味子15 g、天花粉15 g、鸡内金10 g;制法:药材饮片按处方剂量称取，分别以10倍量、8倍量、6倍量的水回流提取 3次，每次提取时间Ih，合并提取液，浓缩，干燥，粉碎，即得。
[0029] 对比药物B:处方：山药