具有防辐射及修复皮肤屏障功效的外用护肤组合物、啫喱及其制备方法_2

文档序号:9675884阅读:来源:国知局
57] (1)按照下述原料药粉碎后,按所述重量份配比称取,混匀;
[0058] 金银花20g、丹参40g、党参40g、黄芪30g、麦冬10g、仙人掌20g。
[0059] (2)体积百分比为60 %乙醇提取,原料药与乙醇质量体积比g/mL为1:20,放置于电 热恒温水浴锅中,90°C提取1小时;
[0060] (3)将步骤(2)得到的提取液从恒温水浴锅中取出,静置冷却至常温,100目粗过 滤,滤出药渣,得滤液;将该滤液再进行真空抽滤,抽滤条件:在布氏漏斗里铺两层滤纸,滤 纸中间夹〇. 6cm娃藻土真空抽滤,收集滤液;
[0061] (4)在真空度0.1,43°C条件下旋转蒸发全部乙醇得浓缩液;浓缩液中加入1,3_丁 二醇,加入量为步骤(3)所得滤液体积百分比的60%,混溶均匀。真空抽滤,抽滤条件同步骤 (3),取清液,即得。
[0062]实施例4本发明啫喱的制备 [0063I组分及用量 A相 丙烯酸(酯)类/C10-30:烷醇丙烯酸酯交联聚合物0, 30wt% 甘油 3, OO wt% 1,3-丁二醇 5. OOwt% EDTA 二钠 0· 03wt%
[0064] 去离子水 余量 B 相 NaOH 0.07wt% 实施例1制备中药提取物 10.0 Owt% Microcare* ill 0:. l.Owt%。.
[0065] 制备方法:
[0066] (1)将丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物在去离子水中浸泡完全后 搅拌均匀,加入A相其他原料,搅拌加热至80°C,搅拌速率40转/分钟,保温0.5小时,搅拌降 温,降温速率1°C每分钟;
[0067] (2)当温度降至45°C以下,加入NaOH搅拌均匀后,加入B项剩余原料继续搅拌均匀, 即得。
[0068]实施例5本发明啫喱的制备 [0069] 组分及用量
[0070] A相 丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物 O.SOwt% 甘油 Q. 50wt% 1,3-丁二醇 3, OOwt%
[0071] EDTA:二钠 0.0 lwt% 水 余量 B 相 NaOH 0.04wt°/〇 实施例2制备中药提取物 1.0 Owt% Microcare? MT! 0. 15wt%〇
[0072]制备方法:
[0073] (1)将丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物在去离子水中浸泡完全后 搅拌均匀,加入A相其他原料,搅拌加热至85°C,保温1小时,搅拌降温,降温速率2°C每分钟; [0074] (2)当温度降至45°C以下,加入NaOH搅拌均匀后,加入B项剩余原料继续搅拌均匀, 即得。
[0075]实施例6本发明啫喱的制备
[0076] 组分及用量
[0077] A相 丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物 0.20wt% 甘油 5. OOwtl 1, 3-丁二醇 0. 50wt% EDTA 二钠 0· 05wt% 水 余量 B 相 NaOH 0. 10wt% 实施例3制备中药提取物 5. OOwtI Microcare? MTI 0. 20wt%〇
[0078] 制备方法:
[0079] (1)将丙烯酸(酯)类/C10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物在去离子水中浸泡完全后 搅拌均匀,加入A相其他原料,搅拌加热至80°C,保温40分钟,搅拌降温,降温速率2°C每分 钟;
[0080] (2)当温度降至45°C以下,加入NaOH搅拌均匀后,加入B项剩余原料继续搅拌均匀, 即得。
[0081] 本发明功效实验
[0082] -、实施例1、实施例2、实施例3所得中药提取物A、B、C的防辐射功效评价
[0083] (1)研究目的
[0084] 通过观察中药提取物A、B、C (分别由实施例1、实施例2及实施例3制备得到)对手机 辐射后小鼠皮肤成纤维细胞株3T6生长的影响,评价中药组合物A、B、C对手机辐射抑制细胞 生长的保护作用。
[0085] (2)实验材料
[0086] 受试品:实施例1、实施例2、实施例3所得中药提取物A、B、C
[0087] 细胞株:小鼠皮肤成纤维细胞株3T6,购自中国科学院细胞库,本实验室传代后使 用。
[0088] 试剂:FBS(批号:1428479)、0· 25%Trypsin-EDTA(批号:1213981)购自GIBCO公司。 改良型RPMI-1640型培养基(批号:NXL0745)购自HYCL0NE公司。DMSO(批号:20121102)购自 国药集团化学试剂有限公司。细胞增值-毒性检测一CCK-8试剂盒为日本D0JIND0同仁化学 研究所广品。
[0089] 实验仪器:X71型倒置显微镜为Olympus公司产品。HH CP-OlW型二氧化碳细胞培养 箱为上海博迅实业有限公司医疗设备厂产品。SW-CJ-IFD型单人单面净化工作台为苏州净 化设备有限公司产品。RT-6000型酶标仪,深圳雷杜公司产品。诺基亚手机1050型,频段为 GSM900MHz〇
[0090] (3)实验方法
[0091] 实验分为空白对照组、辐射对照组、药物不同浓度组,每组8个复孔。收集对数期细 胞,计数,按I X IO4AiL浓度接种到96孔板,每孔200yL。置37°C,5%⑶2细胞培养箱中培养24 小时,使细胞贴壁。用药组加入不同中药提取物l〇〇yL,空白对照组和辐射对照组加入IOOyL 无血清培养基,继续培养。24小时后,将细胞板置于CO2培养箱外适应1小时,除空白对照组 细胞外,其他细胞板放置在手机上方,手机保持通话状态,空白对照组细胞板于另一房间置 于手机上方,手机保持关闭状态。6小时后使用CCK法检测细胞活性,并计算增殖抑制率及增 殖抑制保护率。
[0094] (4)实验结果
[0095]结果显示,使用手机辐射6小时后,皮肤成纤维细胞增殖受到抑制,使得吸光度降 低,辐射对照组细胞OD值较空白对照组比较有显著性差异(P〈0.01),增殖抑制率达到 16.89% ;中药提取物A、B、C剂量在1000 yg · ml/1时均对辐射后细胞增殖抑制具有明显的保 护作用,可以有效的降低辐射对成纤维细胞的抑制作用,从而吸光度上升,与辐射对照组比 较有显著性差异(P〈〇. 05)。(见表3)中药提取物A的对成纤维细胞增殖抑制保护率可达 11.86%〇
[0096] 表3中药提取物A、B、C对辐射后细胞增殖/毒性的影响
[0097]
[0098]二、实施例1、实施例2、实施例3所得中药提取物A、B、C对辐射间接作用的防护功效 [0099]辐射对生物活性物质的作用有两个途径:一是直接作用于生物大分子如DNA,通过 电离和激发使其发生化学键的断裂,造成分子结构的改变和生物活性的丧失,这种作用称 为直接作用;二是射线与水分子相互作用,产生自由基等活化产物,后者再作用于生物分 子,引起其损伤,此类作用称为间接作用。在生物体内,由于水分子的大量存在,间接作用具 有更重要的意义。因此,针对辐射间接作用,可以选择清除自由基功效来评价中药提取物A、 B、C对辐射间接作用的防护功效。
[0100]将实施例1~3所得中药提取物和去离子水以3:97的质量比混匀,得到中药提取物 的水溶液;以该中药提取物的水溶液作为试验组;其中,实施例1所得中药提取物A对应样品 1;实施例2所得中药提取物B对应样品2;实施例3所得中药提取物C对应样品3;将试验组中 的中药提取物替换为维生素 C衍生物,所得水溶液作为阳性对照。
[0101]测定结果如图1。实验结果表明,各实施例所得中药提取物在其水溶液中的质量百 分含量为3.0%时,均已具有明显DPPH清除能力,具有降低羟自由基、烷自由基或氧化自由 基的有效浓度和打断脂质过氧化链反应的作用,从而具有良好的延缓皮肤辐射老化的作 用。
[0102] 三、实施例1、实施例2、实施例3所得中药提取物A、B、C的抑菌功能评价
[0103] 雾霾等空气污染,令环境中的微生物含量增加,其中常见的大肠杆菌、金黄色葡萄 球菌、痤疮丙酸杆菌接触皮肤易造成皮肤痤疮、敏感等现象。
[0104] 将实施例1~3所得中药提取物A、B、C进行大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、痤疮丙酸杆 菌抑制功效评价。
[0105] 牛津杯法:依据不同供试菌株配置相应培养基,121°C高压蒸汽灭菌20min。制作固 体培养基平板,每个培养皿约倒入20mL培养基,待培养基凝固后,用移液枪取IOOyL菌液(已 经过麦氏比浊法测定浓度的菌悬液)滴入培养皿中,采用平板涂布法,将菌悬液均匀涂布于 固体培养基上。在培养基表面直接垂直放上牛津杯(内径6mm、外径8mm、高I Omm的圆形小 管),轻轻加压,使其与培养基接触无空隙。每个培养皿放置三个牛津杯。每个牛津杯中加入 200yL待测样品,将细菌的培养皿轻置于细菌培养箱中37°C培养16个小时左右。
[0106] 其中,实施例1所得中药提取物A对应样品1;实施例2所得中药提取物B对应样品2; 实施例3所得中药提取物C对应样品3;阳性对照为0.2 %MTI (甲基异噻唑啉酮/碘丙炔基丁 基甲氨酸酯)JTI是化妆品中常用的防腐剂,建议用量为0.05 %~0.02%。对细菌、真菌均 有优异的抗菌活性。测定结果如表4。
[0107] 表4中药提取物A、B、C抑菌效果评价

[0109] 注:抑菌圈直径2 20mm为极敏感"+++"判为有抑菌作用,抑菌圈越大抑菌效果越 好;15mm <抑菌直径<20mm为高敏"++" ; IOmm <抑菌直径<15mm为中敏"+" ;抑菌直径〈10mm为 无效,判为无抑菌作用。参考陈玉萍.抗菌药物的药敏试验方法[J].畜牧兽医科技信息, 2007,(5):88-89〇
[0110] 从实验结果可以看出,样品1、样品2、样品3均具有良好
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