分析天平、洁净工作台、二氧化碳培养箱、离屯、机、722分光光度计;无菌 手术器械、游标卡尺(精密度0.02mm)、微量注射器(2扣L)、绵羊红细胞(SRBC)、生理盐水、印 度墨汁、fe2C〇3等。
[0035] 1.4实验方法
[0036] 1.4.1小鼠负重游泳实验
[0037] 选健康雄性小鼠90只，体重1?~22g，分为9组，每组10只，进行小鼠负重游泳实 验。每日给药一次，连续15天，第15天灌胃给药1小后记录鼠体重，随后将小鼠负重体重的 10%，放入水深30cm、水溫(28±irC的水中，记录小鼠自投入水中至力竭时间（小鼠沉入水 中10秒未浮出水面）。
[003引1.4.2迟发型变态反应(足巧增厚法DTH)
[0039] 选健康雄性小鼠90只，体重1始~22g，分为9组，每组10只，进行迟发型变态反应实 验。取羊血，生理盐水洗涂，小鼠用2 % (V/V) SRBC腹腔免疫，每只鼠注射0.2mL/只。免疫后4 天，测量左后足巧部厚度，测量部位皮下注射20 % (V/V)SRBC，20化/只，注射后2地测量左后 足巧部厚度Ξ次，计算平均值。
[0040] 1.4.3小鼠碳廓清实验
[0041 ] 选健康雄性小鼠90只，体重1地~22g，分为9组，每组10只，进行碳廓清实验；小鼠 尾静脉注射1:4倍稀释的印度墨汁，立即计时，注入墨汁后2、10min，分别从内赃静脉丛取血 2化L，并立刻将其加到2mL 0.1 %化2〇)3溶液中，W化2(X)3为对照，测定ODsoonm。处死小鼠，取 肝脏和脾脏，称重。计算吞隧指数a:
[00创 k= (lg0Dl-lg0D2V(t2-tl) a=体重+(fP重+赌重)x [00创 2、结果
[0044] 2.1受试物对小鼠负重游泳实验的影响
[0045] 表1受试物对小鼠负重游泳实验的影响
[0046]
[0047] 各实验组与阴性对照组比较 冲<0.05 *冲<0.01
[0048] 由表1可知，本发明组合物能明显延长小鼠的游泳时间，增加小鼠的耐力。相同剂 量下，本发明组合物较单一人参总皂巧、蛹虫草提取物、显齿蛇葡萄总黄酬、辣木叶提取物、 针叶樓桃提取物活性更强。
[0049 ] 2.2受试物对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
[0050]表2受试物对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响
[0化1 ]
[0化2] 各实验组与阴性对照组比较 冲<0.05 *冲<0.01
[0053]由表2可见，经统计学处理，经口给予受试物30天，低剂量组足巧肿胀度与阴性对 照组比较差异无显著性(P>〇.05)，中、高剂量组与阴性对照组间比较差异有显著性(P< 0.05)，即中、高剂量的受试物能增强小鼠的迟发型变态反应。相同剂量下，本发明组合物较 单一人参总皂巧、蛹虫草提取物、显齿蛇葡萄总黄酬、辣木叶提取物、针叶樓桃提取物活性 更强。
[0054] 2.3受试物对小鼠单核-巨隧细胞碳廓清功能的影响
[0055] 表3受试物对小鼠单核-巨隧细胞碳廓清功能的影响
[0化6]
[0化引各实验组与阴性对照组比较 冲<0.05 *冲<0.01
[0059] 由表3可见，经口给予小鼠不同剂量的受试物30天，经统计学处理，低剂量组碳廓 清功能与阴性对照组比较差异无显著性(P>〇.05)，中、高剂量组与阴性对照组比较差异有 显著性(P<0.01)，即中、高剂量组受试物能提高小鼠单核-巨隧细胞的碳廓清能力。相同剂 量下，本发明组合物较单一人参总皂巧、蛹虫草提取物、显齿蛇葡萄总黄酬、辣木叶提取物 及针叶樓桃提取物活性更强。
[0060] 3、小结
[0061] 本发明组合物能明显延长小鼠的游泳时间，增加小鼠的耐力。经口给予小鼠不同 剂量的受试物30天，能增强小鼠迟发型变态反应，即能增强细胞免疫功能；能提高小鼠单 核-巨隧细胞的碳廓清能力，即能增强单核一巨隧细胞功能;说明，本发明组合物具有增强 免疫力功能作用。
[0062] 本发明是通过下面的实施例进行详细的说明，但不意味着本发明仅限于此，具体 实施方案如下：
[0063] 实施例1、
[0064] 人参总皂巧的制备
[0065] 取人参，用70%乙醇回流提取3次，每次2小时，过滤，滤液回收乙醇，得乙醇提取 物，加水至每1ml含l.Og药材，通过预先处理好的D-101大孔树脂柱，先用去离子水洗脱5倍 柱体积，弃去洗脱液，继用70 %乙醇洗脱4倍柱体积，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得人参总 皂巧。
[0066] 蛹虫草提取物的制备
[0067] 取蛹虫草，用12倍量去离子水提取2次，每次2小时，过滤，滤液浓缩，干燥，得蛹虫 草提取物。
[0068] 显齿蛇葡萄总黄酬的制备
[0069] 取显齿蛇葡萄，用70%乙醇回流提取2次，每次3小时，过滤，滤液回收乙醇，得乙醇 提取物，加水至每1ml含1. Og药材，通过预先处理好的AB-8大孔树脂柱，先用去离子水洗脱4 倍柱体积，弃去洗脱液，再用15%乙醇洗脱3倍柱体积，弃去洗脱液，继用80%乙醇洗脱5倍 柱体积，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得显齿蛇葡萄总黄酬。
[0070] 辣木叶提取物的制备
[0071 ]取辣木叶，用8倍的去离子水提取2次，每次2小时，过滤，滤液浓缩，干燥，得辣木叶 提取物。
[0072] 针叶樓桃提取物的制备
[0073] 取针叶樓桃，用6倍的水提取2次，每次2小时，过滤，滤液浓缩，干燥，得针叶樓桃提 取物。
[0074] 咖啡粉的制备
[00巧]取咖啡豆粉碎，过筛，得咖啡豆粉。
[0076] 剂型制备
[0077] a、人参总皂巧5重量份，蛹虫草提取物10重量份，显齿蛇葡萄总黄酬30重量份，辣 木叶提取物50重量份，针叶樓桃提取物40份重量，咖啡粉50重量份。加入薦糖50重量份，甜 蜜素2重量份，牛横酸2重量份，肌醇2重量份，巧樣酸3重量份，苹果香精10重量份及适量淀 粉混合均匀，用乙醇制颗粒，干燥，整粒，压片。
[0078] b、人参总皂巧10重量份，蛹虫草提取物30重量份，显齿蛇葡萄总黄酬50重量份，辣 木叶提取物60重量份，针叶樓桃提取物2重量份，咖啡粉20重量份。加入薦糖50重量份，甜蜜 素2重量份，牛横酸2重量份，肌醇2重量份，巧樣酸3重量份，苹果香精10重量份及适量淀粉 混合均匀，用乙醇制颗粒，干燥，整粒，压片。
[0079] C、人参总皂巧30重量份，蛹虫草提取物5重量份，显齿蛇葡萄总黄酬60重量份，辣 木叶提取物2重量份，针叶樓桃提取物20重量份，咖啡粉5重量份。加入薦糖50重量份，甜蜜 素2重量份，牛横酸2重量份，肌醇2重量份，巧樣酸3重量份，苹果香精10重量份及适量淀粉 混合均匀，用乙醇制颗粒，干燥，整粒，压片。
[0080] d、人参总皂巧50重量份，蛹虫草提取物80重量份，显齿蛇葡萄总黄酬2重量份，辣 木叶提取物30重量份，针叶樓桃提取物5份，咖啡粉40重量份。加入薦糖500重量份，巧樣酸5 重量份，牛横酸2重量份，肌醇2重量份，苹果香精20重量份，苯甲酸钢2重量份，加水制成 10000重量份，分装成每瓶250ml，得口服液。
[0081] e、人参总皂巧70重量份，蛹虫草提取物40重量份，显齿蛇葡萄总黄酬10重量份，辣 木叶提取物10重量份，针叶樓桃提取物50重量份，咖啡粉2重量份加入薦糖500重量份，巧樣 酸5重量份，牛横酸2重量份，肌醇2重量份，苹果香精20重量份，苯甲酸钢2重量份，加水制成 10000重量份，分装成每瓶250ml，得口服液。
【主权项】
1. 一种具有增强免疫、缓解疲劳的组合物，其特征在于，它是包括下述重量份的原料： 人参总皂苷5-70份，蛹虫草去离子水提取物5-80份，显齿蛇葡萄总黄酮2-60份，辣木叶提 取物2-60份，针叶樱桃提取物2-50份，咖啡豆粉2-50份。2. 根据权利要求1所述一种具有增强免疫、缓解疲劳的组合物，其特征在于，所用原料 优选重量份比例为：人参总皂苷10-50份，蛹虫草提取物10-40份，显齿蛇葡萄总黄酮10-50 份，辣木叶提取物10-50份，针叶樱桃提取物5-40份，咖啡豆粉5-40份。3. 根据权利要求1-2所述的一种具有增强免疫、缓解疲劳的组合物，其制备方法如下： (1) 人参用50-95%乙醇回流提取2-3次，每次2-3小时，过滤，滤液回收乙醇，得乙醇提取 物，乙醇提取物通过预先处理好的D101大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱，弃去洗脱液， 继用50-90%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得人参总皂苷； (2) 蛹虫草用去离子水提取2-3次，每次2-3小时，过滤，滤液浓缩，干燥，得蛹虫草提取 物； (3) 显齿蛇葡萄用去离子水提取2-3次，每次2-3小时，过滤，滤液浓缩，得水提取物，水 提取物通过预先处理好的AB-8大孔吸附树脂柱，先用去离子水洗脱，弃去洗脱液，再用10-25%乙醇洗脱，弃去洗脱液，继用60-90%乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，得显齿蛇葡 萄总黄酮提取物； (4) 辣木叶用5-9倍的水提取2-3次，每次1-2小时，过滤，滤液浓缩，干燥，得辣木叶提取 物； (5) 针叶樱桃用4-6倍的水提取2-3次，每次1-3小时，过滤，滤液浓缩，干燥，得针叶樱桃 提取物； (6 )取咖啡豆粉碎，过筛，得咖啡豆粉； (7)取步骤（1)所得人参总皂苷5-70重量份、蛹虫草提取物5-80重量份、显齿蛇葡萄总 黄酮5-80重量份、辣木叶提取物2-60重量份、针叶樱桃提取物2-50重量份、咖啡豆粉5-40重 量份混合，加入适当的矫味剂制成片剂，胶囊剂，颗粒剂，软糖，液体饮料。4. 根据权利要求3所述的一种具有增强免疫、缓解疲劳的组合物，其特征在于，加入的 矫味剂可以为蔗糖、甜蜜素、阿斯巴甜、山梨醇、柠檬酸、苹果酸、牛磺酸、肌醇、苹果香精、甜 橙香精中的一种或多种。
【专利摘要】一种具有增强免疫、缓解疲劳的组合物，包括下述重量份数比例的原料：人参总皂苷5-70份？，蛹虫草提取物5-80份，显齿蛇葡萄总黄酮2-60份，辣木叶提取物2-60份，针叶樱桃提取物2-50份，咖啡豆粉2-50份。制备方法包括：人参用乙醇回流提取总皂苷、蛹虫草用去离子水提取、显齿蛇葡萄用去离子水提取、辣木叶水煎提取、针叶樱桃水煎提取、咖啡豆粉碎、原料混合。本发明积极效果是：六种原料合用，在改善人体的免疫力，缓解疲劳中体现了中药“多靶点、多效应”的特点，具有标本兼治的效果，以期从疗效和安全性上有显著的突破和提高。本品功能明确，质量可控，服用安全。
【IPC分类】A61K36/87, A23L33/105, A61P37/04, A61P39/00
【公开号】CN105596580
【申请号】CN201610048139
【发明人】胡铭, 赵全成, 王连萍, 邹慧, 侯宝, 南敏伦, 赫玉芳
【申请人】胡铭
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年1月25日