)，用生理盐水配制成1.6mg/mL备用；注射用重组人粒细胞巨隧 细胞刺激因子(riiGM-CSF)(国药准字S10980037，厦口特宝生物工程股份有限公司），用生理 盐水配制成0.35yg/mL备用。
[0027] 3、给药方案：
[0028] 正常对照组:腹腔注射生理盐水0.5血;第二天开始每天注射生理盐水0.4mL-次， 连续注射5天；
[00巧]MTX组:腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0. SmL第二天开始每天注射生理盐水0.4mL 一次，连续注射5天；
[0030] riiGM-CSF组:腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0.5mL第二天开始每天皮下注射注射 0.35iig/mLrhGM-CSF 注射液 0.4mL-次，连续 5天；
[0031] 乌司他下高剂量组:腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0.5mL第二天开始每天尾静脉 注射5万单位/mL乌司他下注射液0.4mL-次，连续5天；
[0032] 乌司他下中剂量组:腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0.5mL第二天开始每天尾静脉 注射2.5万单位/mL乌司他下注射液0.4mL-次，连续5天；
[0033] 乌司他下低剂量组:腹腔注射1.6mg/mLMTX注射液0.5mL第二天开始每天尾静脉 注射1.25万单位/mL乌司他下注射液0.4mL-次，连续5天。
[0034] 4、实验方法：乌司他下组和rhGM-CSF组于小鼠第一次注射乌司他下或rhGM-CSF24h后开始处死小鼠，正常对照组于小鼠注射生理盐水2地后开始处死小鼠，MTX组于小 鼠注射MTX注射液后开始处死小鼠；每天断颈处死2只小鼠，第10天后将全部小鼠处死，仔细 解剖取下舌、口腔颊部及唇部粘膜，用10%福尔马林固定备检。
[0035] 5、观察方法及口腔粘膜损伤判定标准
[0036] 5.1肉眼观察
[0037] 口腔粘膜溃瘍出现的时间、范围、颜色。
[003引 5.2光学显微镜
[0039] 取下小鼠口腔粘膜组织后，在滤纸上铺平，借助放大镜取典型病变处组织，10%福 尔马林固定，石蜡包埋，5~化切片，皿染色，观察粘膜上皮炎性细胞的多少、有无变性、坏 死、溃瘍形成W及成纤维细胞、新生血管等肉芽组织的增生。
[0040] 5.3光学显微镜下口腔粘膜损伤程度评分标准
[0041] 0分：口腔粘膜无炎细胞、坏死、溃瘍等病变；
[0042] 1分：口腔粘膜有少数炎细胞，无坏死及溃瘍；
[0043] 2分：口腔粘膜有较多炎细胞，无坏死及溃瘍；
[0044] 3分：口腔粘膜上皮固有层有大量炎细胞浸润，部分有坏死，但无溃瘍，浸润的炎细 胞W中性粒细胞为主，也有淋己细胞、浆细胞及单核细胞，中性粒细胞胞浆内颗粒丰富；
[0045] 4分：口腔粘膜溃瘍已形成，有坏死组织，其周围有成纤维细胞、新生毛细血管等。
[0046] 6、病变率、积分率的定义
[0047] 口腔粘膜损伤病变率=(口腔粘膜炎症+溃瘍）只数/取材只数*100%
[004引 口腔粘膜损伤积分率=口腔粘膜损伤积分/(取材只数*4)*100%
[0049] 7、试验结果:见表1。
[0050] 表1乌司他下对MTX致小鼠口腔粘膜损伤的作用
[0化2]由表1可知，rhGM-CSF组和乌司他下组小鼠的口腔粘膜损伤的病变率和积分率均 较MTX组降低，且乌司他下组的效果优于riiGM-CSF组;乌司他下组口腔粘膜溃瘍病变例数较 MTX组大大降低，说明本发明提供的乌司他下对化疗引起的口腔粘膜损伤具有显著的防治 作用。
[0053]试验例二、乌司他下对急性放射性粘膜炎的防治作用试验
[0化4] 1、试验对象:SPF级SD大鼠，由中山大学实验动物中屯、提供，雄性，体重250~280g， 常规饲养2周，挑选体重增长正常、体质良好者进入实验，共80只大鼠。
[0055] 2、试验材料：实施例4制备的乌司他下注射液，用生理盐水配制成5万单位/mL备 用;醋酸地塞米松注射液（国药准字册1020514,成都天台山制药有限公司），用生理盐水配 置成50yg/mL备用。
[0化6] 3、试验方法：
[0057]随机挑选其中20只大鼠设为正常对照组，其余60只大鼠腹腔注射戊己比妥钢 40mg/kg，逐只麻醉后仰邸固定在照射板上，完全暴露胸部，使用6MV直线加速器照射，照射 野W胸部正中线为中屯、，上界至咽喉水平，下届至胃底，照射条件为：照射源与大鼠皮肤的 距离SSD为98.5畑1，照射深度1.5畑1，照射野2畑1*5畑1，照射剂量为35Gy。60只大鼠造模照射后 次日随机分为3组，每组20只，分别为模型对照组，阳性对照组和乌司他下组。正常对照组和 模型对照组每日每只尾静脉注射生理盐水0.2mL，阳性对照组每只每日尾静脉注射醋酸地 塞米松注射液0.2mL，乌司他下组每只每日尾静脉注射乌司他下注射液0.2mL，连续给药2 周。末次给药2地后，各组大鼠分别称重、采血，测定超氧化物歧化酶(SOD)值和丙二醒(MDA) 值，最后腹腔注射戊己比妥钢麻醉后将其处死，取出食道和脾脏，食道用10%的福尔马林固 定1周后，石蜡包埋、切片，肥染色，做病理观察，脾脏称重，计算脾指数。
[0化引 4、试验结果:见表2。
[0059]表2乌司他下对急性放射性粘膜炎的作用
[0061 ] 注:与正常对照组相比/?<〇.〇5/&?<〇.〇1;与模型对照组相比，吁<〇.〇5，*吁< 0.0 l;与阳性对照组相比，咕<0.05。
[0062]由表2可知，与模型对照组相比，阳性对照组和乌司他下组大鼠的体重均明显提高 (P<0.01)，而乌司他下组大鼠体重的提高与阳性对照组相比具有显著性差异(P<0.05); 阳性对照组和乌司他下组均可显著提高大鼠的脾指数和改善大鼠的MDA水平(P<0.05，P< 0.01)，且乌司他下组的效果要显著优于阳性对照组(P<〇.05)，说明乌司他下具有提高免 疫力和抗脂质过氧化作用；病理观察显示，乌司他下组食道粘膜损伤程度与模型对照组和 阳性对照组的食道粘膜损伤程度相比，明显减轻；W上结果均说明本发明提供的乌司他下 对放疗引起的粘膜损伤具有显著的治疗效果。
【主权项】
1. 乌司他丁在制备防治放/化疗引起的粘膜损伤药物中的用途。2. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药物是由乌司他丁和医学上可接受的 药用辅料组成的药物组合物。3. 如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物为冻干粉针剂或注射液。4. 如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述冻干粉针剂的药用辅料选自甘露醇、山 梨醇、乳糖、右旋糖酐、甘氨酸、水解明胶、氯化钠和葡萄糖中的一种或多种。5. 如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述注射液的药用辅料选自注射用水、甘露 醇、氯化钠、醋酸钠、醋酸和葡萄糖中的一种或多种。
【专利摘要】本发明属于医药领域，具体涉及乌司他丁在制备防治放/化疗引起的粘膜损伤药物中的用途。本发明提供的乌司他丁在制备防治放/化疗引起的粘膜损伤药物中的用途，经试验证明乌司他丁对化疗常用药物MTX引起的口腔粘膜损伤及放疗引起的急性放射性粘膜炎均具有显著的防治效果。
【IPC分类】A61P1/02, A61P43/00, A61K38/17
【公开号】CN105597084
【申请号】CN201610102646
【发明人】宋建东, 叶晓春, 孙明晖, 侯维静, 赵菁
【申请人】广东天普生化医药股份有限公司
【公开日】2016年5月25日
【申请日】2016年2月24日