一种倍半萜化合物在制备抑制急性炎症药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种倍半祗化合物在制备抑制急性炎症药物中的应用，属于医药技术 领域。
【背景技术】
[0002] 炎症是机体对各种炎性刺激引起组织损害而产生的一种基本病理过程，也是移除 有害刺激、修复受损组织的一种保护性反应。但是，当炎症的蔓延与过度反应将导致许多非 感染性疾病的发生，并且过度炎症反应还能引起炎症性疾病的发生，甚至导致机体死亡。细 菌感染、组织损伤、血栓等因素均可W引起炎症反应，在一些病例中甚至可引起感染性休 克。目前的抗炎药物可分为糖皮质激素（如可的松、地塞米松、泼尼松等）和非幽体抗炎药 (NSAID)(如阿司匹林、布洛芬、吗I噪美辛等)两大类，运两类药物都有明显的副作用，如肾功 能衰竭、胃肠溃瘍等。因此，研制和发现新的安全有效的抗炎药物具有重要的临床意义。
[0003] 香鱗毛藤[Diyopteris fragrans(L. )Schott]是鱗毛藤科（Diropterideceae)鱗 毛藤属植物，多年生草本，生于高寒地区的滑石坡或碎石坡上，由于其叶片表面密被腺毛， 且揉之有挥发性香味，故称之为香鱗毛藤。我国的黑龙江省五大连池市为香鱗毛藤主要分 布区，当地人民很早就已经认识到使用香鱗毛藤的水煎液或揉汁能够治疗多种皮肤病及类 风湿性关节炎，并发展出多种民间验方，运些实例反映出香鱗毛藤是一种极具开发潜力和 应用前景的天然药用植物资源，并在近年来吸引了人们的广泛关注。
[0004] 腺毛是植物表皮细胞具有分泌功能的特化结构，在植物病虫害防御、抵抗逆境胁 迫、减少水分蒸腾等方面起重要作用。祗类代谢是植物分泌型腺毛中最为活跃的代谢途径 之一。单祗化合物和倍半祗化合物是构成叶面挥发性化学成分的重要组分，在赋予植物重 要商业价值的同时，也构成了植物的化学防御体系。
[0005] 祗类是重要的植物次生代谢物，其结果多变、种类繁多，构成了次生代谢物种最大 的一类，而且具有多种生理功能。祗类化合物已广泛应用于工农业生产和医药领域中。如青 葛素对恶性追疾有速效作用，紫杉醇是公认的良好抗癌药物。由于祗类具有广泛的生物活 性和药理作用，因此也是天然药物的主要资源库。
【发明内容】
[0006] 为解决现有技术的不足，本发明提供了一种倍半祗化合物的制备和抑制急性炎症 药物的应用，采用的技术方案如下：
[0007] 本发明从香鱗毛藤腺毛中提取并鉴定了一种倍半祗化合物，其化学名为 A化icanol，暂无中文名，目前此种倍半祗除香鱗毛藤中发现外，仅在隐孔菌(Cryptoporus volvatus)、大花地抱菌（A化atrellus conf Iuens)和水寥（Polygonum hy化opiper)个别物 种中发现。此外，在植物腺毛中发现尚属首次。
[000引本发明的目的在于提供一种倍半祗化合物的制备和抑制急性炎症药物的应用，具 体是应用于抑制急性炎症的蔓延与康复，此化合物的抑制急性炎症效果为首次报道，所述 倍半祗化合物为Albicanol，IUPAC化学名为[(15,4日5,8日5)-5,5,8日-1'11116让71-2-methyl idene-3,4,4a, 6,7,8-hexahydro-lH-naphthalen-1-yl ]methanol，其化学式为 Cl5出6〇,其结构式如下：
[0010] 优选地，所述倍半祗化合物从植物中提取或者化学合成得到的。
[0011] 优选地，所述倍半祗化合物提取自香鱗毛藤。
[0012] 优选地，所述倍半祗化合物提取自香鱗毛藤的腺毛。
[0013] 优选地所述的应用，所述倍半祗化合物的提取方法为：
[0014] 用丙酬溶解香鱗毛藤叶片的腺毛代谢产物，过滤后旋蒸，用四氨巧喃溶解浓缩的 香鱗毛藤腺毛挥发油，然后过MCI柱，调整甲醇和水的体积比进行梯度洗脱，浓缩后转移至 硅胶粉中，四氨巧喃溶解后室溫过夜，利用层析柱进行分离，旋转蒸发仪浓缩得到单一的白 色结晶，获得A化icanol。
[0015] 更优选地，所述倍半祗化合物的提取方法为：
[0016] 用丙酬溶解香鱗毛藤叶片的腺毛代谢产物，过滤后在42°C水浴下进行减压旋蒸， 将丙酬蒸干后用四氨巧喃溶解浓缩的香鱗毛藤腺毛挥发油，然后过MCI柱，用50%甲醇-水 洗脱，逐渐增加甲醇浓度至80%进行梯度洗脱，浓缩后将浓缩物转移至硅胶粉中，然后用四 氨巧喃溶解，不断揽拌，室溫过夜，使用干柱法装填层析柱，依次将体积比为20:1、18:1、16: 1和12:1的丙酬-石油酸溶剂依次加压通过层析柱，旋转蒸发仪浓缩后得到单一的白色结 晶，获得A化icanol。
[0017] 本发明有益效果：
[0018] 1、本发明提供的香鱗毛藤腺毛中提取的倍半祗A化icanol对急性炎症具有显著的 抑制致死率、抑制炎症因子的表达和促进机体恢复的显著作用。是能够抑制NF-KB信号通路 并提升抑炎因子的抗炎天然产物类药物，对治疗急性炎症有明显的效果，具有广阔的临床 应用前景。
[0019] 2、倍半祗A化icanol作为植物合成分泌的一种具有一定挥发性的物质，对植物有 化学防护作用，也具有药物活性。发明人通过实验研究发现，A化icanol处理急性炎症小鼠 可显著降低小鼠死亡率，而且存活率随浓度的增加呈现剂量依赖性。对处理组小鼠的肺脏 切片进行观察，与LPS模型组相比，A化icanol处理的小鼠肺脏肿胀程度明显减弱，细胞浸润 降低，当达到25mg/kg剂量时肺脏肿胀基本消失，肺泡清晰，恢复到正常肺脏状态，说明此化 合物在低浓度时可W有效抑制炎症的恶化和蔓延，而且在剂量增加时对机体有恢复作用。
[0020] 3、在分子机制方面，发明人对小鼠的免疫器官脾脏进行RNA提取W检测相关炎症 因子的基因表达情况。在炎症反应过程中包括促炎因子与抑炎因子。促炎因子包括IL-I， IL-6和TNF-a，其都是受NF-KB信号通路调控；抑炎因子有IL-10。在实验中，发明人通过 Real-time PCR对W上因子进行检测。结果说明倍半祗A化icanol能随剂量增加抑制NF-KB 的表达，同时也抑制了此通路中比-I，化-6和了^-〇的表达;与此同时，在LPS的刺激下，抑炎 因子IL-IO则有显著上升，表明此化合物有助于机体抵抗炎症及恢复健康。
【附图说明】
[0021] 图1为实施例1的不同浓度A化icanol处理急性炎症小鼠存活率.
[0022] 图2为实施例1的不同处理组小鼠肺脏切片肥染色结果；
[0023] (A，CK对照组;B，25mg/kg A化icanol组；C，LPS急性炎症组;D，5mg/kg A化icanol+ LI^组；E，10mg/kg A化icanol+LI^组；F，25mg/kg A化icanol+LI^组）。
[0024] 图3为实施例1中的NF-KB在不同浓度处理下的变化。
[0025] 图4为实施例1中TNF-a在不同浓度处理下的变化。
[00%]图5为实施例1中IL-I在不同浓度处理下的变化；
[0027] (A，A化icanol处理对小鼠的IL-Ia抑制结果；B，A化icanol处理对小鼠的IL-I巧审 制结果）。
[0028] 图6为实施例1中IL-6在不同浓度处理下的变化。
[0029] 图7为实施例1中IL-IO在不同浓度处理下的变化。
【具体实施方式】
[0030] 下面结合具体实施例对本发明做进一步说明，但本发明不受实施例的限制。
[0031] 下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试 验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。
[0032] W下实验设及的材料及仪器：
[0033] 1)倍半祗 Albicanol
[0034] 提取自采集于黑龙江五大连池二、=池的香鱗毛藤叶片，实验室内保存。
[0035] 2)药物与试剂
[0036] LPS(脂多糖），购自Sigma公司，W灭菌的生理盐水溶解。
[0037] De xame thas one (地塞米松)购自河南郑州乐峰制药有限公司。
[0038] Trizol,用于提取mRNA细胞裂解试剂，购自Life I'echnologies公司。
[0039] SYBR reagent，qRT-PCR反应试剂，购自全式金（TransGene)公司。
[0040] 反转录试剂盒，用于反转录mRNA,购自全式金(TransGene)公司。
[0041] 3)实验动物
[0042] 昆明小鼠（雌性,10-11周周龄），购自北京维通利华实验动物技术有限公司。
[0043] 4)实验仪器
[0044] 旋转蒸发仪，江苏予华有限公司生产
[0045] AB]；7500 Thermal Cycler qRT-PCR仪器，澳大利亚Applied Biosystems公司。
[0046] 酶标仪，美国Molecular Devices公司，SpectraMax Microplate Reader系列。
[0047] 实施例1、香鱗毛藤腺毛中A化icanol的提取分离与鉴定 [004引实验方法：
[0049]用綴子夹取一小块用丙酬薩湿的医用脱脂棉，用手指按住香鱗毛藤的一端，缓慢 且用力擦拭整根香鱗毛藤叶片，尽量将擦涂的腺毛最大化，在此过程中注意勤更换丙酬和 棉花，把溶有腺毛代谢产物的丙酬过滤W除杂质。过滤后的丙酬溶液存于旋转蒸发瓶中，安 装在旋转蒸发仪之后于42°C水浴减压旋蒸，当丙酬蒸干后关掉旋转开关和水浴开关，保存 旋蒸瓶内的腺毛挥发油，称重。将浓缩的香鱗毛藤腺毛挥发油用四氨巧喃溶解后过MCI柱 上，使用化蒸馈水冲洗，弃冲洗废液，而后使用50 %甲醇-水化洗脱，收集洗脱液，再不断增 加甲醇浓度进行梯度洗脱，直至80 %甲醇-水，收集洗脱液，使用化C板鉴定洗脱液所含的化 学成分，而后使用旋转蒸发仪进行浓缩，洗脱成分为黄色油状浓稠液体，称量低溫保存。 [0050]将浓缩物小屯、转移至硅胶粉中，四氨巧喃溶解，不断揽拌，室溫过夜W挥发溶剂， 使用干柱法装填层析柱，硅胶与样品体积比为30:1，依次将体积比为20:1、18:1、16:1和12: 1的丙酬-石油酸溶剂依次加压通过层析柱，加压通过层析柱，回收液体，TLC鉴定其成分后， 在旋转蒸发仪上浓缩，最终得到单一的白色结晶，获得A化icanol。
[0化1 ] 实施例2、A化icanol