[0041 ] SPF级雄性ICR种小鼠，体重18~22g，购自南京中医药大学实验动物中屯、，合格证 号：SCXK(苏)2015-0001。
[0042] 二、实验方法
[0043] 1.小鼠悬尾实验
[0044] 小鼠给W阳性药与中药组合提取物7天后，于末次灌胃给药30min后，用悬尾箱顶 板中屯、绳连着的小夹子夹住小鼠尾尖，使小鼠成倒挂状态，其头部离箱底约5cm。小鼠悬挂 2min后，立即开始观察，观察持续4min，累计此4min内小鼠的不动时间。
[0045] 2.小鼠强迫游泳实验
[0046] 小鼠给W阳性药与中药组合提取物7天后，于末次给药30min后，将小鼠放入高 20cm，直径14cm的圆柱形玻璃缸中，每缸1只，缸中水深1 Ocm，水溫25 °C。小鼠游泳2min后，立 即开始观察，观察持续4min，累计此4min内的不动（小鼠在水中停止挣扎，或动物呈漂浮状 态，仅有细小的肢体运动)时间。
[0047] 3.统计学处理
[004引所有实验数据均采用SPSS18.0统计处理软件进行统计学处理，结果化g'±s表示， 组间差异采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
[0049] =、实验结果
[0050] 1.小鼠悬尾实验测试结果
[0051] 给药7天后，进行小鼠悬尾实验测试。由图1可W看出，小鼠经灌胃中药提取物7天 后，小鼠悬尾过程中的不动时间显著减少，与生理盐水组相比有显著性差异(P<〇.05)，其趋 势与阳性药氣西汀作用相当，显示出明显的抗抑郁作用。
[0052] 2.小鼠强迫游泳实验测试结果
[0053] 给药7天后，进行小鼠强迫游泳实验。由图2可W看出，小鼠经灌胃7天后，本发明提 供的中药提取物可减少小鼠强迫游泳的不动时间，与生理盐水组相比有显著性差异（P< 0.05)，其趋势与阳性药氣西汀作用相当，显示出明显的抗抑郁作用。
[0054] 实施例3中药提取物对抑郁动物脑内神经递质影响实验研究
[0055] 一、实验材料与药物
[0化6] 1.实验仪器
[0化7] Agilent 1290 Series高效液相色谱仪;Agilent QQQ 6410AS重四级杆质谱仪； 分析色谱柱:ACE C18-AR，1.8皿，2.1x100 mm;BT125型电子天平(赛多利斯科学仪器有限公 司）；超纯水制备仪(南京易普易达公司）。
[0化引2.药物:标准品多己胺，去甲肾上腺素，5-径色胺均购自Sigma-Al化ich公司；受试 药物:本发明实施例1制备得到的中药提取物（低剂量、中剂量、高剂量分别为1、3、1 Oug/ mL)。
[0化9] 二、实验方法
[0060] 1.样品处理
[0061] 将完成行为学测试的小鼠处死后解剖取全脑组织，按5g/mL的浓度值加入一定体 积的甲酸(0.5M)，高速分散制成匀浆液，13200转/分离屯、5分钟后取上清液。
[0062] 2.液相色谱分离
[0063] 条件如下：
[0064] ②层析条件:流动相:0.1%甲酸(4)，乙腊+0.1%甲酸。流速:0.21111/111111。梯度条 件：0.Omin:99%A;2.Omin:99%A;6.Omin:90%A; IOmin:90%A。
[00化]3.质谱检测
[0066] 干燥气溫度化lying gas temperature): 325°C ;干燥气流速（D;rying gas flow): lOL/min;毛细管电压(Vcap) :4000V;雾化电压(Nebulizer) :35psig;检测极性(Polarity): Positive;扫描模式（Scan mode):多离子检测模式（MRM);检测离子对（Ion pairs detection) :154.1〉137.1，154.1〉91.1(多己胺）；170.1〉153.1，170.1〉107.1(去甲肾上腺 素）；170.1〉153.1，170.1〉107.1(去甲肾上腺素）；177.1〉160.1，177.1〉115.1(5-径色胺）；
[0067] 4.统计学处理
[0068] 所有实验数据均采用SPSS18.0统计处理软件进行统计学处理，结果表示， 组间差异采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
[0069] =、实验结果
[0070] 由图3可W看出，本发明提供的中药提取物中剂量与高剂量均可显著提升小鼠脑 内与抑郁症发病密切相关的多己胺，去甲肾上腺素与5-径色胺的含量，与生理盐水组相比 有显著性差异(P<〇.05)。与之相比，阳性药氣西汀仅对5-径色胺具有显著的上调作用，本发 明提供的中药提取物的作用祀点则更为全面广泛。
[0071 ]实施例4中药提取物对抑郁动物脑内神经营养因子影响实验研究
[0072] -、实验材料与药物
[0073] 1.实验仪器
[0074] 化no化op(DS1 Ispectro地Otometer，DeNovix公司），ABUSOO巧光实时定量PCR仪 (Invitrogen公司），高速离屯、机（Allegra X-12R Centrifuge和Microfuge 22R Centrifuge ,Backman公司），恒溫水浴锅(Bluepard公司）。
[00对 2.试剂与药物
[0076] TRIzol RNA提取试剂盒（15596-026，Invitrogen) eRT-PCR反转录试剂盒 (PrimeScript? RT reagent Kit with 曲NA 化aser，RR047A，TAKARA);SY服巧光定量PCR 试剂（FastSta;rt Universal SYBR Green Master(ROX),04913914001 ,Roche)。化日壯ord 试 剂盒(T93IOA，TAKARA)。受试药物:本发明实施例1制备得到的中药提取物(低剂量、中剂量、 高剂量分别为l、3、10ug/mL)。
[0077] 二、实验方法
[007引 1. RNA提取
[00巧]取-8(TC保存的小鼠海马组织50mg，加入50化L的TRIzol，按TRIzol RNA提取试剂 盒所列步骤进行操作。所提取RNA于-80°C保存。
[0080] 2. CDNA制备：用化nodrop测试RNA的浓度和纯度，根据TaKaRa逆转录试剂盒的说 明，总计取用化g的RNA来进行逆转录操作，制备cDNA。
[0081 ] 3.实时定量巧光PCR仪测定神经营养因子转录水平表达
[0082]依照SYBR巧光实时定量试剂盒操作步骤，利用巧光实时定量PCR仪测定神经营养 因子的基因转录水平表达。所用引物序列如下：
[0085] 3.统计学处理
[00化]所有实验数据均采用SPSS18.0统计处理软件进行统计学处理，结果表示， 组间差异采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
[0087] =、实验结果
[0088] 由图4可W看出，小鼠经灌胃7天后，本发明提供的中药提取物中剂量与高剂量均 可显著提升脑组织内与抑郁症发病密切相关的NGF、抓NF与GDNF的含量，与生理盐水组相比 有显著性差异(P<〇.05)。与之相比，作用趋势与阳性药氣西汀相似。
[0089] 实施例5中药提取物对神经递质合成酶与降解酶表达的实验研究
[0090] -、实验材料与药物
[0091] 1.实验仪器
[0092] 二氧化碳培养箱（Forma series n water jacket C02 incubator Jhermo公 司），1300series A2超净工作台（Thermo公司），Auto Vert Al倒置巧光显微镜（ZEISS公 司），恒溫水浴锅(Bluepard公司），多功能酶标仪化nspire,Perkin Elmer公司），细胞培养 器皿(CORNING公司）。
[0093] 2.试剂与药物
[0094] TRIzol RNA提取试剂盒（15596-026，Invitrogen) eRT-PCR反转录试剂盒 (PrimeScript? RT reagent Kit with 曲NA 化aser，RR047A，TAKARA);SY服巧光定量PCR 试剂（FastSta;rt Universal SYBR Green Master(ROX),04913914001 ,Roche)。化日壯ord 试 剂盒(T931OA，TAKARA)。NGF(Almone lab)。受试药物:本发明实施例1制备得到的中药提取 物(低剂量、中剂量、高剂量分别为1、3、lOug/mU。
[0095] 3.细胞株
[0096] 大鼠肾上腺嗜铭瘤细胞(